专利名称：因子Ⅶa用于治疗创伤的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及急性治疗创伤受害者的方法，包括预防患者中晚期并发症或最小化创伤患者中晚期并发症的严重性。
背景技术：
止血是一种复杂的生理学过程，其最终导致止血。这依赖于三个主要组分的适当的功能血管(特别地内皮衬里)、凝血因子和血小板。一旦止血栓形成，纤维蛋白溶解系统的及时活化对预防进一步不必要的止血活化同等重要。该系统的任何机能失调(由于止血组分的数量减少或分子功能障碍或纤维蛋白溶解组分的活化增加)可导致临床出血，例如，举例来说严重性不同的出血素质。
在大多数生理情况下，止血是在损伤部位暴露组织因子(TF)之后，通过循环活化的凝血因子VII(FVIIa)与TF的相互作用而被激发的。只有在与TF形成络合物后，内源性FVIIa才变得蛋白水解活性。通常，TF在血管壁的深层表达，而且在损伤之后被暴露。这保证了凝血的高度局限活化，并防止弥散性凝血。TF似乎也以无活性形式存在，即所谓的加密TF。与活性TF相比，加密TF的调节仍然是未知的。
近年来，已在多种情况下例如，创伤、脓毒症、腹部手术，在循环血液中得到证实了TF。这些研究使用了基于免疫化学的方法来测定TF(ELISA)。这样的方法测定了活性的和无活性的TF两者以及与任意其他蛋白质(例如FVIIa、TFPI等等)络合的TF，并且因此并不表明所发现的TF有或没有活性。个别受试者正经历自发性胸脊柱侧凸的手术，一种与明显组织损伤有关的广泛手术创伤。另一项研究在较大整形外科手术(完全髋置换和膝置换)后在循环中没有证实任何TF，已知该整形外科手术与高频率的术后深部静脉血栓形成(DVT)有关。
研究表明，活化的重组体人因子VII(rFVIIa)与因子VIII或因子IX的抑制剂一起用于血友病A或B受试者中出血事件的治疗。当以高(药理学的)剂量给予时，rFVIIa能独立于TF与活化血小板结合并启动局部凝血酶生成，该局部凝血酶生成对于最初止血栓的形成是重要的。
在平民创伤受害者中，未控制的出血是死亡的主要原因(39％)。65％的死亡发生在入院后并且在创伤受试者中失血是15-40％医院死亡的原因。在有复杂肝脏损伤的受试者中，死亡率超过40％。在用血液制品输注与死亡率之间存在相关性。许多危急病创伤受试者具有与损伤严重性相关的极度凝血病。
这些受试者面对的未控制的威胁生命的出血和继发于输血、低体温和其它相关原因的获得性凝血病可能进一步导致所谓的晚期并发症，它包括肺栓塞、弥漫性血管内凝血(DIC)、急性心肌梗塞、脑血栓形成、多器官衰竭(MOF)、全身炎症反应综合征(SIRS)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，这些并发症明显地促进了创伤受害者的晚期死亡。
因此，在本领域中对用于急性治疗创伤以及用于预防和减弱晚期并发症的改进方法和组合物存在需求，所述晚期并发症由创伤本身和由用于治疗创伤受害者的常规用药程式引起。
发明概述本发明提供了因子VIIa或因子VIIa等效物在生产用于治疗创伤的药物中的用途。使用该药物的典型的患者是那些正遭受凝血病性出血，包括，不限于，经历过钝性或穿透性创伤的患者。
本发明也提供了治疗创伤的方法，其是通过给患者施用用于所述预防或减弱有效量的因子VIIa或因子VIIa等效物实现的。典型的患者经历了钝性创伤或穿透性创伤。
在一些实施方案中，最初的给药步骤是在创伤性损伤发生5小时内进行。在一些实施方案中，有效量包含至少大约150μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物。在一些实施方案中，在治疗开始时施用至少大约200μg/kg的因子VIIa或相应量的VIIa等效物的首次剂量，而且在治疗开始后一个或多个小时给患者施用大约100μg/kg的因子VIIa或相应量的VIIa等效物的第二次剂量。在一些实施方案中，在以后的时间，例如，举例来说，在治疗开始后三小时施用大约100μg/kg的因子VIIa或相应的VIIa等效物的第三次剂量。
在一些实施方案中，该方法进一步包括以增加所述因子VIIa或因子VIIa等效物的治疗的量，给患者施用第二种凝血剂。优选地，第二种凝血剂是凝血因子(包括，不限于，因子VIII、因子IX、因子V、因子XI、因子XIII和其任意组合)或抗纤维蛋白溶解剂(包括，不限于，PAI-1、抑肽酶、ε-氨基己酸、氨甲环酸或其任意组合)。
本发明也提供了在大部分创伤患者中治疗创伤的方法，它是通过下列步骤进行的(i)给一组创伤患者施用对于治疗有效量的因子VIIa或因子VIIa等效物；和(ii)观察在接受因子VIIa或因子VIIa等效物的该组患者中的创伤相对于相同组的尚未接受所述因子VIIa或因子VIIa等效物的患者中预期的所述晚期并发症发生频率的减少。
图1显示在首次剂量的试验产品之后48小时观察期内RBC需要量的分布。
图2显示在首次剂量的48小时内接受＞12单位RBC(等于包含8个预剂量(pre-dose)单位的＞20单位的RBC)在48小时存活的患者百分比。
图3显示钝性和穿透性创伤群体的存活曲线。
发明详述本发明提供了可被有利地用于治疗创伤患者的方法和组合物。该方法是通过以对于治疗有效的方式，给创伤患者施用因子VIIa或因子VIIa等效物进行的。对于治疗有效的方式可以包括施用预先确定量的因子VIIa或因子VIIa等效物，和/或应用特别的剂量方案、制剂、给药方式、与其他治疗的组合等等。本发明方法在治疗创伤中的功效可以使用一个或多个常规使用的损伤的直接后果和/或晚期并发症的参数来评价(见下文)。直接后果包括，例如，失血和休克症状；而晚期并发症，包括，但不限于，肺栓塞(PE)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、弥漫性血管内凝血(DIC)、急性心肌梗塞(AMI)、脑血栓形成(CT)、全身炎症反应综合征(SIRS)、感染、多器官衰竭(MOF)和急性肺损伤(ALI)，其包括由这些症状中的一个或多个引起的死亡。
患者选择通过使用本发明的方法可以受益的患者包括，但不限于，遭受钝性创伤和/或穿透性创伤的患者。钝性创伤包括钝性损伤，例如，举例来说，由交通事故或坠落引起的那些，其可能导致肝脏损伤、多处骨折、脑挫伤，以及脾、肺或膈破裂的一种或多种损伤。当与穿透性创伤比较时，钝性创伤通常伴有更广泛的组织损害，并因此更多的小血管出血。穿透性创伤包括穿透性损伤，例如，举例来说，枪射击伤或刺伤引起的那些，其可能导致下腔静脉的穿透、肝脏损害、肺损伤、对前列腺的损伤、膀胱撕裂伤、胸撕裂伤和肝脏撕裂伤，以及对骨盆或胸的创伤。
创伤可以引起对大血管和小血管的损伤，以及随后大血管和小血管的出血。在大多数创伤病例中，过多的或大量的出血表现为需要手术治疗的血管出血(手术出血)与小血管的弥散未控制的出血(凝血病性出血)的组合。此外，尽管用手术操作、包扎和大血管的栓塞进行干预，但接受大量输血的创伤受试者经常患有凝血病并继续大量出血。
出血指的是血液从循环系统的任何组分中外渗并且包含与创伤有关的任何出血(包括，但不限于，过多的、未控制的出血，也就是，出血)。在一系列的实施方案中，过多的出血由钝性损伤引起；在另一系列的实施方案中，它由穿透性损伤引起。在一系列的实施方案中，损伤是对肝脏、脾脏、肺、膈、头，包括脑的损伤。在另一系列的实施方案中，损伤是对下腔静脉的损伤，肝脏损害、肺损伤、对前列腺的损伤、膀胱撕裂伤、胸腔撕裂伤和肝脏撕裂伤、骨盆或胸部的损伤，或头，包括脑的损伤。
在创伤中凝血病是多因素的，包括由凝血和纤维蛋白溶解的系统性活化引起的类似DIC的凝血异常；过多的纤维蛋白溶解，在一些创伤受试者中其在第一天是明显的；以及由过多的流体施用引起的稀释性凝血病。一些流体，例如羟乙基淀粉(HES)制剂可以直接损害凝血。大量输血综合征导致凝血因子的耗尽并且血小板功能的损害。低体温引起更低的凝血级联的酶活性和血小板功能不良。代谢异常，例如酸中毒同样损害凝血，特别是当与低温过低联合在一起时。
根据本发明需要治疗的患者的非限制性例子包括那些表现出下列情况中的一个或多个的患者·由凝血和纤维蛋白溶解的系统性活化引起的类似DIC的凝血异常·过多的纤维蛋白溶解·由过多的流体治疗引起的稀释性凝血病，包括，但不限于，与正常混合血液的血小板计数和血小板活性比较，有限的血小板数量和/或受损的血小板功能·羟乙基淀粉(HES)制剂的接受·低体温，包括体温低于大约37℃，例如，举例来说，低于大约36℃，低于大约35℃，低于大约34℃·代谢异常的至少一个指征，包括，但不限于，血液pH低于大约7.5的酸中毒，例如，举例来说，低于大约7.4，低于大约7.3，低于大约7.2，或低于大约7.1。
本发明的方法可被有利地应用于患有钝性和/或穿透性创伤的任何患者，该创伤如果遗留而未予治疗，将导致明显的失血，例如，举例来说，超过患者总血容量的10％(丢失超过血容量的40％立即威胁生命)。正常的血容量表现为成人理想体重的大约7％和儿童理想体重的大约8-9％。
在一系列的实施方案中，根据本发明治疗的患者是那些在他们创伤性损伤时间和施用因子VIIa或因子VIIa等效物时间之间，接受了小于大约10单位的全血(WB)，浓缩红细胞(pRBC)，或新鲜冷冻血浆(FFP)的患者。1单位的WB典型地包含大约450ml血液和63ml常规的抗凝血剂/防腐剂(有36-44％的血细胞比容)。1单位的pRBC典型地包含200-250ml红细胞、血浆和常规抗凝血剂/防腐剂(有70-80％的血细胞比容)。在其它的实施方案中，根据本发明治疗的患者接受了小于大约8单位的WB、pRBC或FFP，例如，举例来说，小于大约5单位，或小于大约2单位，或在施用因子VIIa或因子VIIa等效物之前没有接受任何血液产品和/或容量替代产品。
在一系列的实施方案中，根据本发明治疗的患者未患有出血障碍，无论是先天的还是获得性的，例如，举例来说，血友病A、B或C。
在本发明不同的实施方案中，如果患者接受了10单位或更多PRBC的输血，例如，举例来说，超过15、20、25或30单位，或如果患者被诊断患有先天性出血障碍，则可将他们排除在治疗之外。
因子VIIa和因子VIIa等效物在实践本发明中，可以使用在治疗创伤中有效的任何VIIa因子或因子VIIa等效物。在一些实施方案中，因子VIIa是人因子VIIa，如，举例来说，在美国专利No.4,784,950中所公开的(野生型因子VII)。术语“因子VII”意指包含以其未切割(酶原)形式的因子VII多肽，以及经过蛋白水解处理以产生其各自生物活性形式的那些，该生物活性形式可被命名为因子VIIa。典型地，因子VII是在152和153残基之间进行切割以产生因子VIIa。
因子VIIa等效物包括，但不限于，因子VII多肽，其相对于人因子VIIa已经过化学修饰，和/或相对于人因子VIIa包含一个或多个氨基酸序列变化。这类等效物相对于人因子VIIa可以表现出不同的特性，包括稳定性、磷脂结合、改变的比活性等等。
在一系列的实施方案中，因子VIIa等效物包括表现出至少大约10％，优选地至少大约30％，更优选地至少大约50％，和最优选地至少大约70％的人因子VIIa的特异生物学活性的多肽。为了本发明的目的，因子VIIa生物学活性可以通过使用因子VII缺乏的血浆和促凝血酶原激酶，测量制备物促进血液凝固的能力进行量化，如，例如，在美国专利No.5,997,864中所描述。在该分析中，将生物学活性表示为相对于对照样品凝血时间的减少，并且通过与含有1单位/ml因子VII活性的混合人血清标准品比较，将其转变为“因子VII单位”。可替代地，因子VIIa生物学活性可以通过下列方面进行量化(i)测量因子VIIa或因子VIIa等效物在含有包埋于脂质膜中的TF和因子X的系统中生产因子Xa的能力(Persson等人，J.Biol.Chem.27219919-19924，1997)；(ii)测量因子X在含水系统中的水解(见下面的实施例5)；(iii)使用基于表面细胞质团(plasmon)共振的仪器测量因子VIIa或因子VIIa等效物与TF的物理结合(Persson，FEBSLetts.413359-363，1997)和(iv)通过因子VIIa和/或因子VIIa等效物测量合成底物的水解。
因子VII等效物的例子包括，但不限于，野生型因子VII、L305V-FVII、L305V/M306D/D309S-FVII、L305I-FVII、L305T-FVII、F374P-FVII、V158T/M298Q-FVII、V158D/E296V/M298Q-FVII、K337A-FVII、M298Q-FVII、V158D/M298Q-FVII、L305V/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII、V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII、K157A-FVII、E296V-FVII、E296V/M298Q-FVII、V158D/E296V-FVII、V158D/M298K-FVII、和S336G-FVII、L305V/K337A-FVII、L305V/V158D-FVII、L305V/E296V-FVII、L305V/M298Q-FVII、L305V/V158T-FVII、L305V/K337A/V158T-FVII、L305V/K337A/M298Q-FVII、L305V/K337A/E296V-FVII、L305V/K337A/V158D-FVII、L305V/V158D/M298Q-FVII、L305V/V158D/E296V-FVII、L305V/V158T/M298Q-FVII、L305V/V158T/E296V-FVII、L305V/E296V/M298Q-FVII、L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII、L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII、L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII、L305V/V158T/E296V/K337A-FVII、L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII、L305V/V158D/E296V/K337A-FVII、L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII、S314E/K316H-FVII、S314E/K316Q-FVII、S314E/L305V-FVII、S314E/K337A-FVII、S314E/V158D-FVII、S314E/E296V-FVII、S314E/M298Q-FVII、S314E/V158T-FVII、K316H/L305V-FVII、K316H/K337A-FVII、K316H/V158D-FVII、K316H/E296V-FVII、K316H/M298Q-FVII、K316H/V158T-FVII、K316Q/L305V-FVII、K316Q/K337A-FVII、K316Q/V158D-FVII、K316Q/E296V-FVII、K316Q/M298Q-FVII、K316Q/V158T-FVII、S314E/L305V/K337A-FVII、S314E/L305V/V158D-FVII、S314E/L305V/E296V-FVII、S314E/L305V/M298Q-FVII、S314E/L305V/V158T-FVII、S314E/L305V/K337A/V158T-FVII、S314E/L305V/K337A/M298Q-FVII、S314E/L305V/K337A/E296V-FVII、S314E/L305V/K337A/V158D-FVII、S314E/L305V/V158D/M298Q-FVII、S314E/L305V/V158D/E296V-FVII、S314E/L305V/V158T/M298Q-FVII、S314E/L305V/V158T/E296V-FVII、S314E/L305V/E296V/M298Q-FVII、S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII、S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII、S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII、S314E/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII、S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII、S314E/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII、S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII、K316H/L305V/K337A-FVII、K316H/L305V/V158D-FVII、K316H/L305V/E296V-FVII、K316H/L305V/M298Q-FVII、K316H/L305V/V158T-FVII、K316H/L305V/K337A/V158T-FVII、K316H/L305V/K337A/M298Q-FVII、K316H/L305V/K337A/E296V-FVII、K316H/L305V/K337A/V158D-FVII、K316H/L305V/V158D/M298Q-FVII、K316H/L305V/V158D/E296V-FVII、K316H/L305V/V158T/M298Q-FVII、K316H/L305V/V158T/E296V-FVII、K316H/L305V/E296V/M298Q-FVII、K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII、K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII、K316H/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII、K316H/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII、K316H/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII、K316H/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII、K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII、K316Q/L305V/K337A-FVII、K316Q/L305V/V158D-FVII、K316Q/L305V/E296V-FVII、K316Q/L305V/M298Q-FVII、K316Q/L305V/V158T-FVII、K316Q/L305V/K337A/V158T-FVII、K316Q/L305V/K337A/M298Q-FVIIK316Q/L305V/K337A/E296V-FVII、K316Q/L305V/K337A/V158D-FVII、K316Q/L305V/V158D/M298Q-FVII、K316Q/L305V/V158D/E296V-FVII、K316Q/L305V/V158T/M298Q-FVII、K316Q/L305V/V158T/E296V-FVII、K316Q/L305V/E296V/M298Q-FVII、K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII、K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII、K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII、K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII、K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII、K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII、K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、和K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII。
在一些实施方案中，因子VII等效物是V158D/E296V/M298Q-FVII。
制备物和制剂本发明包括因子VIIa或因子VIIa等效物的治疗施用，其采用包含因子VIIa的制备物的制剂来实现。如本申请中所用的，“因子VII制备物”指的是多个因子VIIa多肽或因子VIIa等效多肽，包括变体和化学修饰的形式，其已从合成它们的细胞中被分离出来，不论是计划用于合成因子VIIa或因子VIIa等效物的起源细胞或重组细胞。
通过本领域中已知的任一方法，可实现从其来源细胞中分离多肽，所述方法包括，但不限于，从贴壁细胞培养物中取出含有所需产物的细胞培养基；离心或过滤以去掉非贴壁细胞等。
任选的是，可进一步纯化因子VII多肽。使用本领域中已知的任何方法可实现纯化，所述方法包括，但不限于，诸如在抗因子VII抗体柱上的亲和色谱法(参见，例如，Wakabayashi等，J.Biol.Chem.26111097，1986；和Thim等，Biochem.277785，1988)；疏水相互作用色谱法；离子交换色谱法；大小排阻色谱法；电泳方法(例如，制备型等电聚焦(IEF))，差别溶解度(例如，硫酸铵沉淀)，或萃取等。参见，一般地，Scopes，Protein Purification，Springer-Verlag，New York，1982；和Protein Purification，J.C.Janson和Lars Ryden，编辑，VCH出版商，New York，1989。纯化后，制备物优选含有小于约10％重量，更优选小于约5％并最优选小于约1％的来自宿主细胞的非因子VII蛋白质。
可使用因子XIIa或具有胰蛋白酶样特异性的其它蛋白酶，例如，因子IXa、激肽释放酶、因子Xa和凝血酶，通过蛋白酶剪切活化因子VII和因子VII相关多肽。参见，例如，Osterud等，Biochem.112853(1972)；Thomas，美国专利No.4,456,591；和Hedner等，J.Clin.Invest.711836(1983)。另外，因子VII可通过将其通过诸如MonoQ(Pharmacia)等的离子交换色谱柱而被活化。所得的活化因子VII可按下文所述进行配制和施用。
用于本发明中的药物组合物或制剂包含与药学上可接受的载体，优选含水载体或稀释剂结合(优选溶解在其中)的因子VIIa制备物。可使用多种含水载体，例如水、缓冲水、0.4％盐水、0.3％甘氨酸等。本发明的制备物也可配制成脂质体制剂，用于递送或者靶向到损伤的部位。例如，在美国专利No.4,837,028、4,501,728和4,975,282中一般地描述了脂质体制剂。所述组合物可按常规的、熟知的灭菌技术进行灭菌。可以包装所得到的水溶液备用或者在无菌条件下过滤并冻干，在给药前将该冻干制剂与无菌水溶液合并。
所述组合物可含有药学上可接受的辅助物质或助剂，其包括，但不限于，pH调节剂和缓冲剂和/或张力调节剂，例如乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙等。
治疗方案在实践本发明中，因子VIIa或因子VIIa等效物可以以含有对治疗创伤单一剂量有效量的单一剂量，或以含有对治疗创伤有效量的分阶段系列剂量一起给患者施用。有效量的因子VIIa或因子VIIa等效物(见下面)指的是因子VIIa或等效物的量，其当以单一剂量或多剂量的集合体，或作为任意其他类型规定的治疗制度的部分施用时，在至少一个与创伤有关的临床参数方面产生可测量的改进(见下面)。当施用因子VIIa等效物时，可以通过比较因子VIIa等效物与因子VIIa的凝血剂活性，并调节将要施用的量与预先确定的因子VIIa的有效剂量相称来确定有效量。
根据本发明，施用因子VIIa或因子VIIa等效物优选地在发生创伤性损伤之后大约6小时内启动，例如，举例来说，在大约4小时内，在大约2小时内，或在大约1小时内。
单一剂量的施用指的是在小于大约5分钟的期间以团注(bolus)施用全部剂量的因子VIIa或因子VIIa等效物。在一些具体实施方式
中，施用发生于在小于大约2.5分钟的期间，而且在一些具体实施方式
中，在小于大约1分钟期间。典型地，单一剂量有效量含有至少大约40μg/kg的人因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物，例如，至少大约50μg/kg，75μg/kg，或90μg/kg，或至少150μg/kg因子VIIa。
根据本发明，在一些具体实施方式
中，在施用单一剂量因子VIIa或因子VIIa等效物之后，患者在至少大约15分钟间隔不再接受因子VIIa或因子VIIa等效物。在一些具体实施方式
中，施用后的间隔为至少大约30分钟，例如至少大约45分钟，至少大约1小时，至少大约1.5小时，或至少大约2小时。
在一些
具体实施例方式
中，患者根据下列制度接受因子VIIa或因子VIIa等效物(i)患者接受含有至少大约40μg/kg因子VIIa或因子VIIa等效物的首次量；(ii)在至少大约30分钟期间后，施用第二次量的因子VIIa或因子VIIa等效物，该量含有至少大约40μg/kg；和(iii)从施用第二次剂量至少大约30分钟期间后，施用第三次量的因子VIIa或因子VIIa等效物，该量含有至少大约40μg/kg。在施用第三次量后至少大约30分钟期间后，那时患者可以接受进一步(第四次)量的含有至少大约40μg/kg因子VIIa或因子VIIa等效物。
在另外的具体实施方式
中，首次量的因子VIIa或因子VIIa等效物含有至少大约100μg/kg，例如至少大约150μg/kg，或至少大约200μg/kg；在另外的具体实施方式
中，第二次量的因子VIIa或因子VIIa等效物含有至少大约75μg/kg，例如至少90μg/kg；在另外的具体实施方式
中，第三次(和任选地第四次)量的因子VIIa或因子VIIa等效物含有至少大约75μg/kg，例如至少90μg/kg。
在一个
具体实施例方式
中，首次剂量含有大约200μg/kg，第二次剂量大约100μg/kg，和第三次(和任选地第四次)剂量大约100μg/kg。
在另外的具体实施方式
中，患者在从首次施用至少大约45分钟的期间后，例如至少大约1小时，至少大约1.5小时，至少大约2小时，至少大约2.5小时，或至少大约3小时，接受第二次量的因子VIIa或因子VIIa等效物。
在另外的具体实施方式
中，患者在从前次施用至少大约45分钟的期间后，例如至少大约1小时，至少大约1.5小时，至少大约2小时，至少大约2.5小时，或至少大约3小时，接受第三次(和任选地第四次)量的因子VIIa或因子VIIa等效物。
在一个
具体实施例方式
中，患者接受含有大约200μg/kg的首次剂量；在大约1小时的期间后，患者接受含有大约100μg/kg的第二次剂量，并且在首次剂量大约3小时的期间后，患者接受含有大约100μg/kg的第三次剂量。
下表阐明了本发明的不同的非限制性
具体实施例方式
可以理解有效量的因子VIIa或因子VIIa等效物，以及总的剂量方案可以根据患者的止血状况变化，其依次可以反映于一个或多个临床参数中，包括，举例来说，相对水平的循环凝血因子；失血量；出血速度；血细胞比容等等。可以进一步理解有效量可以由那些本领域普通技术人员通过常规试验，通过构建数值矩阵并测试矩阵中不同点来确定。
例如，在一系列实施方案中，本发明包括(i)施用首次剂量的因子VIIa或因子VIIa等效物；(ii)在预先确定的时间后评价患者凝血状态；和(iii)基于该评价，如果需要，施用进一步剂量的因子VIIa或因子VIIa等效物。步骤(ii)和(iii)可以重复直到获得满意的止血。
根据本发明，因子VIIa或因子VIIa等效物可以通过任意有效途径施用，包括，不限于，静脉内、肌肉内、皮下、粘膜和肺施用途径。优选地，通过静脉内途径施用。
联合治疗本发明包括与因子VIIa或因子VIIa等效物一起给予附加药剂。在一些实施方案中，附加药剂含有凝血剂，包括，不限于，凝血因子，例如，举例来说，因子VIII、因子IX、因子V、因子XI或因子XIII；或纤维蛋白溶解系统抑制剂，例如，举例来说，PAI-1、抑肽酶、ε-氨基己酸或氨甲环酸。
可以理解，在包括给予因子VIIa与其他药剂的组合的实施方案中，因子VIIa或因子VIIa等效物的剂量可以单独含有有效量，而且附加药剂可以进一步增加对患者的治疗益处。可替换地，因子VIIa或等效物与第二种药剂的组合可以共同含有治疗创伤的有效量。也可以理解，有效量可以在特殊的治疗方案的上下文中进行定义，包括，举例来说，施用的时间和数量、给药模式、制剂等等。
治疗结果本发明提供了治疗创伤的方法和组合物。治疗包括表示创伤程度的任何参数的任何可以测量的改进或改善。这类参数的非限制性的例子包括·凝血状态，如反映在以下方面，举例来说，类似DIC的异常性；过多的纤维蛋白溶解；稀释性凝血病，包括，不限于，与正常混合的血液的血小板计数和血小板活性比较，有限数量的血小板和/或受损的血小板功能·低体温，包括体温低于大约37℃，例如，举例来说低于大约36℃，低于大约35℃，低于大约34℃·代谢性异常的指征，包括，不限于，血液pH低于大约7.5的酸中毒，例如，举例来说低于大约7.4，低于大约7.3，低于大约7.2，低于大约7.1·失血本发明方法在治疗创伤中的功效也可以通过评价晚期并发症的统计学减少来测量，晚期并发症包括，不限于，肺栓塞(PE)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、弥漫性血管内凝血(DIC)、急性心肌梗塞(AMI)、脑血栓形成(CT)、全身炎症反应综合征(SIRS)、感染、多器官衰竭(MOF)，和急性肺损伤(ALI)，包括由这些症状中的一个或多个引起的死亡。
在实践本发明中，晚期并发症可以使用常规方法进行评价，例如，举例来说在此在表1到5中描述的得分。根据本发明，评价可以在从开始治疗至少大约20天，例如，举例来说从开始治疗至少大约30天，至少大约35天，或至少大约40天进行。
器官损害或器官衰竭包括，不限于，在肾、肺、肾上腺、肝、肠、心血管系统和/或止血系统中对器官结构的损害和/或对器官功能的损害。器官损害的例子包括，但不限于，对器官形态/结构损害和/或功能的损害，例如，举例来说由于肺清除损害或对肺交换机制的损害或肺泡毛细血管膜的损害引起的蛋白质(例如表面活性物质)或流体蓄积。术语“器官损伤”，“器官损害”和“器官衰竭”可以交替使用。通常，器官损害导致器官衰竭。器官衰竭意思是指与正常、健康人中相应器官的平均、正常功能相比，器官功能的降低。器官衰竭可以是功能较小的降低(举例来说，正常的80-90％)或其可以是功能较大的降低(举例来说，正常的10-20％)；降低也可以是器官功能的完全衰竭。器官衰竭包括，不限于，举例来说，由于组织坏死，肾小球(肾)损失，纤维蛋白沉积，出血，水肿或炎症引起的生物学功能(举例来说，尿排出量)降低。器官损害包括，不限于，组织坏死，肾小球(肾)损失，纤维蛋白沉积，出血，水肿或炎症。
肺损害包括，但不限于，肺形态/结构损害/或功能损害，例如，举例来说，由于肺清除损害或对肺交换机制的损害或肺泡毛细血管膜的损害引起的蛋白质(例如表面活性物质)或流体蓄积。术语“肺损伤”，“肺损害”和“肺衰竭”可以交替使用。
检测器官功能和功效的方法，以及这种检测的适当生物化学或临床参数，对熟练的临床医生是熟知的。
器官功能的这样的标记，或生物化学参数是，举例来说呼吸PaO2/FiO2比率凝血血小板肝脏胆红素心血管血压和对血管加压治疗的需要肾脏肌酸酐和尿排出量其他临床评价包括不用呼吸机的天数、无器官衰竭的天数、无血管加压治疗的天数、SOFA分数和肺损伤分数评价以及生命体征。
测试凝血病或炎症的方法对熟练的临床医生同样是熟知的。这种凝血或炎性状态的标记是，举例来说PTT、纤维蛋白原缺失、TAT复合物上升、ATIII活性、IL-6、IL-8或TNFR-1。
慢性器官损害包括，但不限于，可能由ARDS产生的长期损害。这种残留损伤特别是肺力学的残留损伤，可以包括，但不限于，轻微限制、阻塞、一氧化碳弥散能力损伤、或运动时气体交换异常、伴有持久性低血氧症的纤维性肺泡炎、肺泡无效腔增加和肺泡及肺顺应性进一步降低。由于肺毛细血管床闭塞引起的肺高压，可能是严重的并导致右室衰竭。
在本发明上下文中，预防包括，不限于，衰减、消除、最小化、减轻或改进与和创伤有关的晚期并发症有关的一个或多个症状或状况，包括，但不限于，预防已经受到一定程度器官衰竭和/或损害的器官进一步的损害和/或衰竭，以及预防另外还没有受到器官衰竭和/或损害的器官的损害和/或衰竭。这类症状或状况的例子包括，但不限于器官的形态/结构损害和/或功能的损害，例如，但不限于，肺、肾、肾上腺、肝、肠、心血管系统和/或止血系统。这类症状或状况的例子包括，但不限于器官的形态/结构损害和/或功能的损害，例如，举例来说，由于肺清除损害或对肺交换机制的损害或肺泡毛细血管膜的损害引起的蛋白质(例如表面活性物质)或流体蓄积、尿排出量减少(肾)、组织坏死、肾小球(肾)损失、纤维蛋白沉积、出血、水肿或炎症。
当由至少一个众所周知的上述器官功能的标记测量时(见表1到4)，与在没有根据本发明进行治疗的创伤患者中发现的相应数值比较，器官衰竭或损害的减弱包括在器官功能上的任何改进。
预防也包括预防急性肺损伤(ALI)发展为ARDS。ALI是通过下面的标准定义的(Bernard et al.，Am.J.Respir.Crit.Care Med 149818-24，1994)急性发作；胸部放射线摄影上双侧浸润；肺动脉楔压≤18mm Hg或没有左房高压的临床证据；和PaO2∶FiO2≤300。ARDS是通过下面的标准定义的(Bernard et al.，Am.J.Respir.Crit.CareMed 149818-24，1994)急性发作；胸部放射线摄影上双侧浸润；肺动脉楔压≤18mm Hg或没有左房高压的临床证据；和PaO2∶FiO2≤200。(PaO2表示动脉氧分压，而FiO2表示吸氧分数)。
晚期并发症的量度下面是评价创伤晚期并发症的发生率和严重性方法的非限制性例子。
1.格拉斯哥昏迷评分确定如下
正常＝15植物性＝02.多器官衰竭(MOF)评分测定如下多器官衰竭评分
健康＝0严重＝153.ARDS评分测定如下
正常＝0严重＝204.SIRS评分测定如下全身炎症反应综合征评分
正常＝0严重＝45.DIC测量如下DIC
在一系列实施方案中，本发明的实践导致下列临床结果中的一个或多个·失血减少，包括失血完全停止·一个或多个休克参数的改善，包括，举例来说低体温和血液pH。
在一系列实施方案中，本发明的实践导致下列临床结果中的一个或多个·当在治疗开始后20天测量时，格拉斯哥昏迷评分大于大约9·当在治疗开始后30天测量时，格拉斯哥昏迷评分大于大约11·当在治疗开始后40天测量时，格拉斯哥昏迷评分大于大约13·当在治疗开始后20天测量时，MOF评分小于大约4·当在治疗开始后30天测量时，MOF评分小于大约3·当在治疗开始后40天测量时，MOF评分小于大约2·当在治疗开始后20天测量时，ARDS评分小于大约8·当在治疗开始后30天测量时，ARDS评分小于大约6·当在治疗开始后40天测量时，ARDS评分小于大约4·当在治疗开始后20天测量时，SIRS评分小于大约3·当在治疗开始后30天测量时，SIRS评分小于大约2·当在治疗开始后40天测量时，SIRS评分小于大约1·上述格拉斯哥昏迷评分、MOF评分、ARDS评分和/或SIR评分的任意组合。
治疗其它指数本发明方法的功效也可以使用其他的临床参数进行评价，包括，不限于，相对于还没有施用根据本发明的因子VIIa或因子VIIa等效物的相似患者，下列参数任意一个或多个的减少血液、血浆、红细胞、浓缩红细胞单位的减少，或需要施用的容量替代制品的减少；受到创伤后住院治疗天数的减少，包括患者可能花费在重症监护室(ICU)中天数的减少和其中需要某些干预(例如，举例来说，呼吸机)的天数的减少。结果的非限制性的例子包括(i)血液、血浆、红细胞、浓缩红细胞，或需要施用的容量替代制品单位减少至少大约2单位、4单位或6单位；(ii)在ICU中天数减少1天、2天或4天；(iii)使用呼吸机天数减少1天、2天或4天；(iv)住院治疗总天数减少2天、4天或8天。
以下实施例将作为本发明的非限制性说明。
实施例1 给创伤受害者的因子VIIa施用为了评价重组活化的凝血因子VII(rFVIIa，NovoSeven)作为严重创伤中出血控制的辅助治疗的功效和安全性，进行了下面的研究。
方法多中心、随机化、双盲试验比较了rFVIIa与安慰剂。在输注8单位的红细胞(RBC)后0、1和3小时，以3次静脉内注射(200,100和100μg/kg)施用研究产品。监测患者达服药后48小时，随访30天。全程给予标准的当地医院治疗。钝性和穿透性组分别进行分析。
结果总的说来，对143钝性和134穿透性创伤患者进行了分析。在钝性创伤患者中(损伤严重性评分平均值±标准差33±13)，与安慰剂组相比，在rFVIIa组中，当根据在48小时内死亡的患者进行调节时，在服药48小时内(最初的终点)存在减少RBC输注的趋势(p＝0.07)。排除减少的患者，RBC的降低是显著的(p＝0.02)。特别地，在rFVIIa组中很少患者接受了大量的输血(＞20RBC单位)。在钝性创伤中，观察到使用rFVIIa的患者很小有预先定义的危急并发症(表)。对于遭受穿透性创伤的患者，输血结果是相似的，但没有统计学意义。血栓栓塞的事件数量在治疗组之间是相似的。
结论在这个高危创伤群体中rFVIIa显示了良好的安全性特性。在钝性创伤中使用rFVIIa，RBC需要显著降低。减少并发症的趋势保证了进一步研究。
表在30天内发生危急事件的患者(钝性组)
来自钝性创伤的结果显示，用NovoSeven治疗的患者比接受常规治疗的患者具有更少的并发症，并在重症监护室花费时间较少，而且在用NovoSeven治疗的组中总死亡率更低。
实施例2 与标准治疗联合给予的因子VIIa在创伤治疗中的功效试验设计在严重钝性和/或穿透性创伤损伤的受试者中进行多中心、随机化、双盲、平行分组、安慰剂对照的试验。招募受试者，在收入创伤中心后进行筛选。结合试验产品，他们接受对于损伤和出血的标准治疗以及负责协调创伤组的医师认为必要的任何其他措施。试验由两个治疗分支(arms)组成。符合条件的受试者，在4小时期间内接受6单位的PRBC后，就被平等地分配到下列分支之一·与三个单剂量(容量等于200μg/kg+100μg/kg+100μg/kg)的安慰剂联合的标准治疗，施用3小时期间·与三个单剂量(200μg/kg+100μg/kg+100μg/kg)的rFVIIa联合的标准治疗，施用3小时期间一旦受试者接受8个单位的PRBC，就施用首次剂量的rFVIIa或安慰剂(试验产品)，并且在1小时后接着第二次剂量而且在另外2小时后接着第三次和最后剂量的试验产品。对依据主治外科医师要求输血超过8单位PRBC的受试者给予试验药物。一施用首次剂量就开始进行48小时观察期以及30天随访评价。试验产品以缓慢的一次性量(bolus)注射静脉内施用。贯穿试验始终进行特别程序例如身体检查、实验室评价和不良事件的评估。贯穿研究的始终，监测受试者几个终点包括需要的PRBC单位的数量、不良事件、存活者和凝血相关参数的变化。
为评价由于出血引起的死亡率，在来自首个100例受试者的死亡率数据可以获得时，开始对治疗的每批20名受试者进行序贯分析。因为它们是在试验期间报告的，所以考虑到所有的SAEs，对安全性进行连续地监测和评价。
试验产品活化的重组人FVII(rFVIIa)和安慰剂将以单个使用的2.4mg小瓶中的冷冻干燥粉末形式提供，使用时用适于欧洲药典注射剂的无菌水重构。
试验群体大约280名受试者(每个治疗分支140名)，16岁或更老，患严重的钝性/或穿透性创伤损伤的受试者被登记。
纳入标准进入试验的受试者满足下列纳入标准1.由于钝性和/或穿透性创伤引起的损伤。
2.在收入创伤中心后，4小时期间内接受6单位的PRBC。
3.一施用试验药物就接受8单位PRBC。
4.已知年龄≥16或根据当地法律的法定年龄并且≤65。
排除标准满足下列标准的受试者从研究中排除1.入院前心脏停搏。
2.在ER或OR中心脏停搏。
3.头部枪伤。
4.格拉斯哥昏迷评分＜8。
5.碱缺失＞15mEq/l或严重酸中毒(pH＜7.0)。
6.在到达创伤中心之前输注8单位或更多的PRBC。
7.已知先天性出血异常。
8.目前正参加或在最近30天内已参加另外的研究性药物试验。
9.在登记时已知怀孕或怀孕测试阳性。
10.以前参加过该试验。
11.在给予试验药物前，已知用维生素K拮抗剂、低剂量肝素治疗。
12.在随机化前损伤持续≥12小时。
13.估计体重＞130kg评价治疗功效基于从SOT到48小时期间对下列变量的评价·由于出血和所有其它原因引起的死亡时限和数量。
·施用的下列血液制品的输血单位时限和数量PRBC(时限)FFP血小板冷沉淀物·由于出血受试者进行手术的次数·在研究药物的首次剂量和凝血PT、正常温度和酸碱状况达到正常范围之间的间隔。
·药物动力学评价和群体药物动力学评价·在第30天的总存活者·从SOT到第30天发生的包括MOF、ARDS和感染的并发症的时限和数量·在从SOT到第30天期间，包括在重症监护室(ICU)、卧床(bedconfinement)和/或使用呼吸机天数的住院天数。
在治疗开始之前(治疗期0)进行血液取样是为FVIIC(接转(cf.)下文)
凝血相关参数和血液学(接转下文)PT(接转下文)血液化学(接转下文)在首次试验产品施用后并接着24小时。
对下列进行记录和/或研究死亡率和死亡时间在30分钟，1、2、4、6、8、12和24小时的生命体征(接转下文)。只在24小时的格拉斯哥昏迷评分。
需要的输血制品单位的数量(接转下文)。
包括组合物，例如，胶体、类晶体的I.V.流体(接转下文)。
受试者进行手术的次数和手术原因(接转下文)。
不良事件)。
ARDS、感染、MOF进行血液取样是为在1、4、8、12和24小时的凝血相关参数(接转下文)。
在1、4、8、12和24小时的血液学(接转下文)。
FVIIC 2到4个样品，在下列每个时间间隔中取一个0-1小时、1-3小时、3-8小时和8-12小时(接转下文)。
频繁取样在30分钟、1、2、3、4、6、8和12小时的FVIIC(接转下文)。
在1、4、8、12和24小时的PT(接转下文)。
频繁取样在30分钟、1、2、3、4、6、8、12、18和24小时(接转下文)。
在24小时血液化学(接转下文)。
从24到48小时死亡率和死亡时间每6小时的生命体征需要的输血制品单位的数量。
包括组合物，例如，胶体、类晶体的I.V.流体。
身体检查从基线的变化受试者进行手术的次数和手术原因。
在48小时的ECGARDS、感染、MOF不良事件为下列方面在36和48小时将进行血液取样凝血相关参数血液学PT血液化学-只在48小时随访-第30天死亡率和死亡日期和时间包括在重症监护室中和卧床天数的住院天数使用呼吸机天数严重的不良事件ARDS、感染、MOF分析凝血相关参数和血液学在下列时间点抽取血液进行首次治疗之前立即和首次治疗后的1、4、8、12、24、36、48小时，用来分析凝血相关参数APTT、纤维蛋白原、D-二聚体、抗凝血酶III、F1+2、TAT血液学血小板、血细胞比容、血红蛋白和白细胞血液化学在下列时间点抽取血液首次治疗前和首次治疗后的24小时、48小时，用来分析S-胆红素，S-清蛋白，S-肌酸酐，S-钾，S-钠，S-丙氨酸转氨酶FVIIC(药物动力学)
对于FVIIC，对50名受试者频繁取样，并且在下列时间点抽取血液进行首次治疗前立即以及在30分钟、1、2、3、4、6、8和12小时，用来分析FVIIC。
所有其他的受试者抽取血液2-4次，在下列时间间隔的2到4个抽取一个样品0-1小时(刚刚给予首次剂量之后和给予下次剂量之前)，1-3小时(刚刚给予第二次剂量之后和给予下次剂量之前))，3-8小时(刚刚给予第三次剂量之后)和8-12小时。这些样品可以在该时间间隔的任意时间取。记录取样的精确时间。
凝血酶原时间对频繁FVIIC取样的50名受试者，在下列时间点抽取血液进行首次治疗前立即以及在30分钟、1、2、3、4、6、8、12、18、24、36和48小时，来分析凝血酶原时间(PT)。
所有其他受试者在下列时间点抽取血液进行首次治疗前立即以及在1、4、8、12、24、36和48小时。
生命体征在治疗前和施用首次剂量研究药物后的30分钟，1、2、4、6、8、12、16、18小时，并且然后每6小时直到从首次剂量起48小时，记录生命体征(其它的根据受试者状况的需要)。
记录下列内容体温(C[直肠、口腔或耳])血压(mm Hg)(收缩压/舒张压)将在入院前期间在事故现场另外进行记录。
脉搏(跳/分钟)将在入院前期间在事故现场另外进行记录。
pH呼吸频率(只在脱离呼吸机时)将在入院前期间在事故现场另外进行记录。
呼吸PaO2/FiO2，PaCO2正末端呼吸压(cm H2O)格拉斯哥昏迷评分(接转本说明书)将在入院前期间在事故现场在创伤中心另外进行记录治疗前、从研究药物首次剂量24和48小时。如果患者使用呼吸机，不记录GCS。
实施例3 体外评价胶体血液稀释、酸中毒和低体温对重组因子VIIa作用的影响进行下面的实验以评价在创伤中临床有关的生理条件下因子VIIa对凝块形成的作用，所述生理条件即低pH(酸中毒)、低温度(低体温)和胶体血液稀释。
1.方法血液收集WB是使用21规格的针，从6名健康志愿者中获得的。将样品抽入包含柠檬酸盐的管子中，将一份柠檬酸盐与9份血液混合。丢弃收集自每一参与者的第一管血液。收集的血样品在室温静止30分钟后，模拟一个特定的临床状况进行操作，概述如下。
为了刺激酸中毒，WB(2ml)通过添加140μl N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(HEPES)1M缓冲液制成酸性(pH7)，调节到pH7。为了模拟低体温，血液样品温度降低到32℃。为了模拟血稀释，所有溶液用柠檬酸盐(10％v/v)混合，以保证血液稀释的WB的充足的抗凝。然后WB用三种不同的胶体溶液之一稀释20％，40％和60％(V/V)人血清白蛋白5％，MW＝68000；羟乙基淀粉6％(美国特拉华州威尔明顿，duPont Merck，Hespan)，MW＝450000，或羟乙基淀粉(HES)130/0.4(德国巴特洪堡Fresenius Kabi，Voluven)，MW＝130000。
凝血弹性描记法全血凝血分析凝血是通过将组织因子1∶50000(美国伊利诺斯州迪尔菲尔德Dade Behring的Innovin)加到WB中，并且用15mM氯化钙(游离CaCl2～2-3mM)再钙化而开始的。在WB中组织因子的终浓度相当于0.12pM。实验在没有或存在25nMrFVIIa(25nM≈90μg/kg)时进行。止血过程通过使用TEG凝血分析仪(Haemoscope公司的5000系列TEG分析仪)进行记录。凝块形成率(CFR)记录为TEGα-角(图)；更大的CFR值表示更坚固的凝块形成。
统计学分析药效学参数概括为平均数和标准差(SD)。对平均数据进行斯(student)氏t检验，双侧α-设在0.05。
2.结果酸中毒降低pH到7.0显著地减少CFR。添加rFVIIa导致CFR显著地增加。
低低温降低WB温度到32℃导致向着CFR适度减少的趋势。添加25nM rFVIIa显著地增加CFR。
血液稀释·白蛋白用白蛋白血液稀释与消弱凝块形成无关(表)。对20％和40％稀释度，但不是60％稀释度，添加rFVIIa显著增加CFR。
·羟乙基淀粉用羟乙基淀粉血液稀释只在40％和60％与消弱凝块形成有关(表)。对20％，但不是40％和60％稀释度，添加rFVIIa显著增加CFR。在60％稀释度，添加rFVIIa之后CFR与正常WB中的CFR相比保持了显著的减少。
·HES所有用HES的WB稀释，相对于正常WB与CFRs减少相关(表)。rFVIIa的添加只在20％稀释度水平提高了CFR。在40％和60％稀释度，添加rFVIIa后的CFR，与正常WB中的CFR相比保持了显著的减少。值得注意的，rFVIIa浓度增加到200nM(与施用720μg/kg之后的血浆浓度相当)，在40％稀释度(48±3)显著地提高CFR，但在60％稀释度没有提高CFR，其与正常WB中的CFR相比，保持显著的减少。
3.结论·rFVIIa的体外凝块促进作用不受酸中毒、低体温和低于40％的血液稀释度的不利影响。然而，当在体外用TEG测量时，更严重程度的用6％羟乙基淀粉和HES130/0.4的胶体血液稀释消弱了rFVIIa对凝块形成的作用。
实施例4 与标准治疗联合给予的因子VIIa在创伤的治疗中的功效为了评价重组活化凝血因子VII(rFVIIa，NovoSeven)作为严重创伤中出血控制辅助治疗的功效和安全性，进行了下列研究。
1.方法将有严重钝性和/或穿透性创伤损伤的严重出血患者，除了标准治疗之外随机接受rFVIIa(200+100+100μg/kg)或安慰剂。在第8RBC(红细胞)单位之后首次剂量，1和3小时后附加剂量。
在试验产品首次剂量之后的48小时期间密切监测患者。这包括记录输血和输液要求、不良事件和外科手术步骤。以频繁间隔抽取血液以评价凝血中和血液生化参数的变化。记录如试验场所报告的死亡率、使用呼吸机时间、住院资料和包括预先确定的危急并发症(MOF和急性呼吸窘迫综合征(ARDS))的严重不良事件，直到第30天。
终点为了评价止血作用，最初的终点是在试验产品首次剂量后48小时期间输注的RBC单位(同种异体RBC，自体RBC和全血)的数量。治疗结果通过对其他输血产品的需求量、死亡率、使用呼吸机天数和住院资料进行进一步评价。安全性结果包含不良事件的频率和时限和在凝血相关的实验室变量的变化(活化的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT))、血小板、纤维蛋白原、D-二聚体、抗凝血酶III、凝血酶原片段1+2和凝血酶-抗凝血酶复合物)。在创伤群体中，因为死亡率不是敏感的变量，所以我们研究了含有死亡、MOF和ARDS的复合终点。报告MOF和ARDS的安全性基于在该研究方案中提供的预先规定的定义。
统计学分析根据在严重钝性创伤患者群体中的回顾性研究的输血资料，我们计算了样品大小。发现了患者中14人有起始GCS≥8，0-48小时RBC输血要求12.4(SD6.2)单位。我们估计，将要求每一治疗组中70名患者检测在0-48小时RBC需求量除了8个预剂量单位外，从4.4单位到1.8单位60％减少，具有80％率(power)和5％的1类误差。因为试验包括两个创伤群体和两个治疗组，所以对总样品大小280名患者进行了计划。对钝性和穿透性创伤群体分别进行分析。结果适于所有知情同意并随机化的接受试验药物的患者。1类误差设定为5％。所有分析根据经验(priori)确定，除非另外规定。
从开始试验产品治疗(最初的终点)48小时内，输注的RBC单位总数通过使用单侧Wilcoxon-Mann-Whitney秩和检验在治疗组之间进行比较。因为不预期施用rFVIIa将增加输血要求量，所以选择单侧检验。进行单独分析，在48小时内死亡的患者被排除在外或指定为最坏结果。对将在48小时内死亡的患者被排除在外的分析给予优先，因为1)在大比例的这些患者中，治疗是无益的，2)对存活仅几个小时的患者，不能客观地评价48小时输血要求。Hodges-Lehman评价用于评价RBC输血中的差异。总RBC计算为自体RBC，同种异体RBC和全血的总和，每一组分标准化为RBC的标准单位(等于295ml体积，血细胞比容为63％，因为这是所有场所的平均值)。
使用费希尔(Fisher’s)精确检验比较需要大量输血患者的数量(此后定义为＞20单位RBC包括8个预剂量单位)和在30天内经历MOF、ARDS和/或死亡的患者的数量。计算大量减少的相对危险的减少和其95％可信区间(CI)。对48小时死亡率的影响使用卡方检验来分析。
2.结果在随机化的301名患者中，143名钝性创伤患者和134名穿透性创伤患者是符合分析条件的。在每一创伤群体中，根据基线特征对治疗组很好地匹配(表1)。患者主要是年轻男性而且具有凝血病、酸中毒和低体温特征。穿透性创伤的原因首要是枪伤(68％)和刺伤(30％)，而75％的钝性创伤是由于交通相关的损伤。
出血控制对于在48小时存活患者，最初的终点，即在试验产品初始剂量后48小时观察期内的RBC需要量显示于图1中。在钝性创伤的患者中，与安慰剂相比，rFVIIa显著地减少48小时RBC需要2.6单位(p＝0.02)。大量输血的需要从安慰剂组患者的20/61(33％)减少到rFVIIa组的8/56(14％)，表示相对危险减少56％(95％CI[9％；79％]；p＝0.03)(图2)。在穿透性创伤患者中，对于48小时RBC需要，RBC减少1.0单位，没有观察到rFVIIa的显著作用(p＝0.10)。在穿透性创伤中大量输血的需要从安慰剂组患者的10/54(19％)减少到rFVIIa组的4/58(7％)，这表示相对危险减少63％(95％CI[-12％；88％]；P＝0.08)(图2)。当指定最坏的结果为已死亡的患者时，在任一创伤群体中没有达到统计学显著性(表2)。
在任一创伤群体中，就施用新鲜冷冻血浆、血小板、冷沉淀物、类晶体或胶体而言，在治疗组之间没有观察到显著性差异(数据未显示)。
临床结果和安全性将不良事件、死亡率、不用呼吸机的天数和不在ICU中的天数的结果总结于表3中。对这些终点，特别是涉及危急并发症(ARDS、MOF和/或死亡)的那些，观察到了支持rFVIIa的正性趋势。存活曲线描述于图3中。
在治疗组之间，不良事件以相似的频率和严重性发生。总的说来，不良事件特征在rFVIIa治疗和安慰剂治疗的患者之间是相似的，而且在报告的不良事件的类型中没有明显的治疗依赖性模式。如能在此严重损伤的患者群体中所预期的，三个最频繁报告的严重不良事件是ARDS、MOF和脓毒症。
所有12个血栓检塞的不良事件是在试验期间由研究者报告的；6个在给予rFVIIa的患者中和6个在给予安慰剂的患者中。在钝性创伤的患者中，在安慰剂组记录了2例肺栓塞和1例锁骨下静脉血栓形成(在中心线后)，而在rFVIIa治疗的患者中，记录了1例颈静脉血栓形成(在中心线后)和1例肢动脉(arterial limb)血栓形成。在穿透性创伤患者中，注意到在每一治疗组中1例脑梗塞和1例DVT。此外，在安慰剂组记录了1例肠系膜静脉血栓形成，以及在rFVIIa组注意到1例肠梗阻形成(在手术部位)和1例静脉血栓形成。作为严重的不良事件，报告了所有12个血栓栓塞事件。
3.结论rFVIIa有助于在严重钝性创伤中的出血控制并且导致RBC输血的显著减少。在穿透性创伤中观察到了相似的趋势。在该创伤群体中，在研究的剂量范围内确定了rFVIIa的安全性。
表1基线特征
数据间隔指的是平均数±标准差。其他数据指的是患者数量(和百分比)。
*身体区域如对于损伤严重性量表所定义。
在rFVIIa和安慰剂组之间没有观察到显著性差异。aPTT活化的部分促凝血酶原激酶时间；PT凝血酶原时间。
表2在首次剂量试验药物后48小时期间总RBC输血(单位)
*从安慰剂到活性剂组输血量的变化的Hodges-Lehman点估计。
+48小时内死亡患者被指定有最高秩表3不良事件和临床结果
MOF多器官衰竭；ARDS急性呼吸窘迫综合征；ICU重症监护室在此涉及的所有专利、专利申请和参考文献据此通过参考将其完全并入本申请。
根据上面详细的描述，本发明的许多变化将给那些本领域技术人员以建议。这种明显变化落入在附后的权利要求完全的预计范围之内。
权利要求
1.因子VIIa或因子VIIa等效物在生产用于治疗创伤的药物中的用途。
2.根据权利要求1的用途，其中所述患者遭受钝性创伤。
3.根据权利要求1的用途，其中所述患者遭受穿透性创伤。
4.根据权利要求1到3任一项的用途，其中所述药物含有至少大约150μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物。
5.根据权利要求1到4任一项的用途，其中药物以包含至少大约150，优选200μg/kg因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的首次剂量来施用，接着在开始治疗后1小时施用包含100μg/kg因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的第二次剂量。
6.根据权利要求5的用途，其中进一步在开始治疗后3小时施用包含大约100μg/kg因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的第三次剂量。
7.根据权利要求1到6任一项的用途，其中所述药物用于治疗患者，该患者在他们的创伤性损伤时间和施用因子VIIa或因子VIIa等效物时间之间，接受了小于大约10单位全血(WB)，浓缩红细胞(pRBC)或新鲜冷冻血浆(FFP)，例如，举例来说，小于大约8单位、5单位或小于大约2单位，或在施用因子VIIa或因子VIIa等效物之前没有接受任何血液产品和/或容量替代产品。
8.根据权利要求1到7任一项的用途，其中所述药物进一步含有第二凝血剂，该凝血剂的量为增加因子VIIa或因子VIIa等效物的所述预防或减弱的量。
9.根据权利要求8所述用途，其中所述第二凝血剂选自由凝血因子和抗纤维蛋白溶解剂组成的组。
10.根据权利要求9所述的用途，其中所述凝血因子选自由因子VIII、因子IX、因子V、因子XI、因子XIII和这些因子的任意组合组成的组；并且抗纤维蛋白溶解剂选自由PAI-1、抑肽酶、ε-氨基己酸和氨甲环酸组成的组。
11.治疗创伤的要素的药剂盒，它含有(i)含有因子VIIa或因子VIIa等效物的药物；和(ii)使用说明书，其描述a.应在治疗开始时施用包含至少大约150，优选地至少大约200μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的首次剂量；b.应在治疗开始后1小时施用包含至少大约100μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的第二次剂量。
12.根据权利要求11的药剂盒，其中使用说明书进一步描述，可以在治疗开始后3小时给所述患者施用任选的包含大约100μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的第三次剂量。
13.一种治疗创伤的方法，该方法包括给需要所述治疗的患者施用对于所述治疗有效量的因子VIIa或因子VIIa等效物。
14.根据权利要求13的方法，其中所述患者遭受钝性创伤。
15.根据权利要求13的方法，其中所述患者遭受穿透性创伤。
16.根据权利要求13的方法，其中所述有效量含有至少大约150μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物。
17.根据权利要求16的方法，其中在开始治疗时施用至少大约200μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的首次剂量，并且在开始治疗后一小时给患者施用含有至少大约100μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的第二次剂量。
18.根据权利要求17的方法，它进一步包括在治疗开始后3小时给患者施用大约100μg/kg的因子VIIa或相应量的因子VIIa等效物的第三次剂量。
19.根据权利要求13的方法，它进一步包括给患者施用第二凝血剂，该凝血剂的量为增加因子VIIa或因子VIIa等效物的所述治疗的量。
20.根据权利要求19的方法，其中所述第二凝血剂选自由凝血因子和抗纤维蛋白溶解剂组成的组。
21.根据权利要求20的方法，其中所述凝血因子选自由因子VIII、因子IX、因子V、因子XI、因子XIII和这些因子的任意组合组成的组；并且抗纤维蛋白溶解剂选自由PAI-1、抑肽酶、ε-氨基己酸和氨甲环酸组成的组。
22.预防治疗创伤的方法，该方法包括为了治疗创伤的目的，给需要所述治疗的患者有意施用对于所述治疗有效量的因子VIIa或因子VIIa等效物。
23.在大部分创伤患者中治疗创伤的方法，所述方法包括(i)给一组创伤患者施用对于所述治疗有效量的因子VIIa或因子VIIa等效物；并且(ii)在所述组的患者中观察一个或多个创伤的临床参数相对于在还没有接受所述因子VIIa或因子VIIa等效物的同一组患者中应预期的所述临床参数的水平的减少。
全文摘要
本发明涉及VIIa因子或VIIa因子等效物用于生产治疗创伤的药物的用途。
文档编号A61P43/00GK1913916SQ200580004050
公开日2007年2月14日 申请日期2005年2月4日 优先权日2004年2月5日
发明者M·阿克塞尔森, E·埃哈特森, B·E·什科尔尼克 申请人:诺和诺德医疗保健公司