专利名称：一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法
技术领域：
本发明属中药成方制剂领域，具体来说是涉及一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法。
背景技术：
以玄参、地黄、麦冬、黄芩、牡丹皮等制成的一种中药制剂金嗓清音丸具有养阴清肺，化痰利咽。用于肺热阴虚所致的慢喉喑、慢喉痹，症见声音嘶哑、咽喉肿痛、咽干；慢性喉炎、慢性咽炎见上述证候者，效果明显。然而中药成份比较复杂，含有许多未知成份。目前既能有效控制治疗慢性咽喉炎的中药制剂的产品质量，又能操作方便的检测方法，还没有报道。
发明内容
本发明的目的在于能提供一种中药制剂金嗓清音丸的质量，准确度高的质量检测方法。
本发明的一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法，将玄参、地黄、麦冬、黄芩、牡丹皮、赤芍、川贝母、泽泻、薏苡仁(炒)、石斛、僵蚕(麸炒)、薄荷、胖大海、蝉蜕、木蝴蝶、甘草，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜35～50g与适量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸；或加炼蜜110～130g制成大蜜丸，即得，其检测方法包括以下步骤(1)取本品水蜜丸10g，研细；或取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研匀。加水80ml，超声处理20分钟，在转速为3500转/分钟的离心机中离心10分钟，取上清液加盐酸2ml，微沸5分钟，滤过，滤液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材0.5g，加水40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本品水蜜丸10g，研细，或取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研匀；加乙醚60ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点；(3)取本品水蜜丸12g，研细，或取大蜜丸18g，切碎，加硅藻土9g，研匀；加甲醇80ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调节PH值至约为2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)芍药苷含量测定对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品水蜜丸适量，研细，取约1g；或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约1.6g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；用高效液相色谱法测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相；检测波长为232nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷的含量。
本发明通过试验得出，本品含赤芍和牡丹皮以芍药苷(C23H28O11)计，水蜜丸每1g不得少于0.60mg；大蜜丸每丸不得少于3.3mg。
本发明质量标准提高的意义在于本发明提供了对丹皮酚、黄芩苷的定性鉴别，制定出了最佳的供试品制备方法，找到了合适的展开剂，能对该制剂进行有效的定性鉴别。此外本发明提供了芍药苷的含量测定方法，因为芍药苷与其它组份分离度、重现性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色谱法测定本品中芍药苷的含量，制定出了最佳的供试品制备方法和流动相配制方法，大大提高了芍药苷的含量检测准确度。本方法的建立，有利于市场上对该中药制剂的真伪优劣进行鉴别。
具体实施例方式实施例1将玄参、地黄、麦冬、黄芩、牡丹皮、赤芍、川贝母、泽泻、薏苡仁(炒)、石斛、僵蚕(麸炒)、薄荷、胖大海、蝉蜕、木蝴蝶、甘草，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜35～50g与适量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸；其检测方法包括以下步骤(1)取本品水蜜丸10g，研细；加水80ml，超声处理20分钟，在转速为3500转/分钟的离心机中离心10分钟，取上清液加盐酸2ml，微沸5分钟，滤过，滤液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材0.5g，加水40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本品水蜜丸10g，研细，加乙醚60ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点；(3)取本品水蜜丸12g，研细，加硅藻土9g，研匀；加甲醇80ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调节PH值至约为2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)芍药苷含量测定对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品水蜜丸适量，研细，取约1g；精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；用高效液相色谱法测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相；检测波长为232nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷的含量。
重复上述步骤一次，计算样品中芍药苷含量的平均值为0.9mg/g。
实施例2将玄参、地黄、麦冬、黄芩、牡丹皮、赤芍、川贝母、泽泻、薏苡仁(炒)、石斛、僵蚕(麸炒)、薄荷、胖大海、蝉蜕、木蝴蝶、甘草，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜110～130g制成大蜜丸，即得，其检测方法包括以下步骤(1)取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研匀。加水80ml，超声处理20分钟，在转速为3500转/分钟的离心机中离心10分钟，取上清液加盐酸2ml，微沸5分钟，滤过，滤液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材0.5g，加水40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研匀；加乙醚60ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点；(3)取大蜜丸18g，切碎，加硅藻土9g，研匀；加甲醇80ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调节PH值至约为2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)芍药苷含量测定对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约1.6g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；用高效液相色谱法测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相；检测波长为232nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷的含量。
重复上述步骤一次，计算样品中芍药苷含量的平均值为3.9mg/丸。
用实施例1和实施例2所述的质量检测方法反复试验8次，得出水蜜丸中芍药苷含量(mg/g)的平均值和大蜜丸中芍药苷含量(mg/丸)的平均值，结果见下表
实验报告1、仪器与试药仪器TSP2000高效液相色谱仪。P2000二元梯度泵，UV1000紫外检测器，N2000色谱工作站。
试剂乙睛为色谱试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。
对照品芍药苷 批号为0736-200117，供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供供试品金嗓清音丸(水蜜丸)，批号020306；规格每10粒重1g；包装塑料瓶，每瓶装36g，由本公司生产。
2、色谱条件色谱柱5μm，250mm×4.6mm的Poaris-ODS柱流动相17∶83的乙睛-0.1％磷酸溶液流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长232nm；3、前处理条件的选择提取方法的考察精密称取本品(批号020306)约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，分别用不同的提取方法提取30min，提取液放冷后，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液进样，测得其含量，结果见表1。
表1不同提取方法的比较(n＝2)
以上结果表明超声处理与回流提取差别不大，但超声简便，故确定超声提取为提取方法。
提取时间的考察精密称取本品(批号020306)约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，分别超声处理不同时间，放冷，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液进样，测得其含量，结果见表2。
表2不同提取时间的考察
以上结果表明超声30分钟，含量基本不变，故确定30分钟为超声提取时间。
4、方法学考察线性范围的考察精密量取芍药苷对照品溶液(0.208mg/ml)1，2，4，6，8，10μl进样，记录色谱图，测定其峰面积；结果见表3，并以峰面积值(A)对进样量(B)进行回归，得标准曲线方程方法。
表3芍药苷对照品测定结果
A＝15778B＝1405523r＝0.9999以上结果表明在0.208-2.08μg范围内，芍药苷峰面积值与进样量有良好的线性关系精密度试验精密吸取芍药苷对照品溶液(0.104mg/ml)10μl，重复进样5次，测定，结果见表4。
表4芍药苷精密度试验
结果表明精密度良好。
空白对照溶液的制备与测定按处方比例及工艺，制备不含赤芍、牡丹皮的空白样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，测定。空白对照色谱中，在与对照品峰保留时间相近没有色谱峰出现，表明阴性空白无干扰。
稳定性试验取样品(批号为020306)及对照品溶液分别于0，0.5，1，2，4小时，进样10μl，测定，结果见表5。
表5稳定性试验结果
试验结果表明，对照品与样品溶液均在4小时内稳定性良好。
重现性试验按拟定的含量测定方法，对同一批样品(批号020306)分别制备样品供试液，测得峰面积值并计算含量，结果见表6。
表6样品重现性试验(n＝2)
结果表明按拟定的含量测定方法，重现性良好。
加样回收率试验精密称取已知含量的样品(批号020306)适量，分别加入对照品溶液适量，按上述样品制备方法和色谱条件制备样品，进样。以下列公式计算回收率，结果见表7。
表7样品回收率试验结果
试验结果表明回收率均在95～105％之间，加样回收良好。
5、样品含量测定分别精密吸取对照品溶液与样品溶液，按正文含量测定项下方法，测定，结果见表8。
表8样品中芍药苷含量测定结果
根据上述试验结果，考虑到药材来源，以及制剂生产，贮藏等因素，故暂定本品含赤芍和牡丹皮以芍药苷(C23H28O11)计，水蜜丸每1g不得少于0.60mg；大蜜丸每丸不得少于3.3mg。
6、赤芍药材的含量测定取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，即得，结果见表9。
表9不同产地赤芍药材芍药苷含量测定结果
根据测定结果，考虑到药材产地、加工炮制、贮藏等因素和《中国药典》中含量限度规定，暂定含量不低于1.8％。
权利要求
1.一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法，将玄参、地黄、麦冬、黄芩、牡丹皮、赤芍、川贝母、泽泻、薏苡仁(炒)、石斛、僵蚕(麸炒)、薄荷、胖大海、蝉蜕、木蝴蝶、甘草，粉碎成细粉，过筛，混匀；每100g粉末加炼蜜35～50g与适量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸；或加炼蜜110～130g制成大蜜丸，即得，其特征在于包括以下步骤(1)取本品水蜜丸10g，研细；或取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研匀；加水80ml，超声处理20分钟，在转速为3500转/分钟的离心机中离心10分钟，取上清液加盐酸2ml，微沸5分钟，滤过，滤液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材0.5g，加水40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取本品水蜜丸10g，研细，或取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研匀；加乙醚60ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点；(3)取本品水蜜丸12g，研细，或取大蜜丸18g，切碎，加硅藻土9g，研匀；加甲醇80ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调节PH值至约为2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)芍药苷含量测定对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品水蜜丸适量，研细，取约1g；或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约1.6g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；用高效液相色谱法测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相；检测波长为232nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷的含量。
2.如权利要求1所述的一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法，其特征在于所述中药制剂含赤芍和牡丹皮以芍药苷计，水蜜丸每1g不得少于0.60mg；大蜜丸每丸不得少于3.3mg。
全文摘要
本发明属中药成方制剂领域，具体来说是涉及一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法。本发明提供了对丹皮酚、黄芩苷的定性鉴别，制定出了最佳的供试品制备方法，找到了合适的展开剂，能对该制剂进行有效的定性鉴别。此外本发明提供了芍药苷的含量测定方法，因为芍药苷与其它组份分离度、重现性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色谱法测定本品中芍药苷的含量，制定出了最佳的供试品制备方法和流动相配制方法，大大提高了芍药苷的含量检测准确度。本方法的建立，有利于市场上对该中药制剂的真伪优劣进行鉴别。
文档编号A61K9/20GK101028460SQ200710017620
公开日2007年9月5日 申请日期2007年4月4日 优先权日2007年4月4日
发明者黄小华, 付彬, 张 浩, 雒西萍 申请人:西安碑林药业股份有限公司