专利名称：从罗汉果植株中提取降血糖和抗糖尿病的活性组合物及其提取方法
技术领域：
本发明涉及从天然物质提取生物活性成分，具体而言涉及从罗汉果植林 提取降血糖和抗糖尿病活性物质及方法。
背景技术：
罗汉果植抹为葫,科多年生宿根攀援藤本植物罗汉果(#OM i^/ CS
^TWM/7or/),罗汉果主要栽培在中国的广西北部，在华南、贵州、江西以 及其它许多地区都有分布，已有300多年的种植、应用历史，其果有"东方 神果"之称。中医药学认为，罗汉果具有降血糖作用，可以用来辅助治疗糖 尿病；含丰富的维生素C,有抗衰老、抗癌及益肤美容作用；有降血脂及减 肥作用，可辅助治疗高脂血症，改善肥胖者的形象。对罗汉果果实的生物活 性研究报道中有关罗汉果苷V具有抗口腔微生物的活性，另有罗汉果苷的抗 肿瘤活性和有降血糖作用的文献报道。罗汉果的果实通常是在秋末进行采 摘，与此同时，罗汉果植抹的藤就被欲掉，叶被丟弃，其根仍埋在土里。迄 今为止，人们对于罗汉果的利用基本上只利用了其果实，例如中国专利申请 件200510055228.1号"一种添加了罗汉果提取物的甜味剂及其制备方法" 和200410103484. 9号"罗汉果袋泡茶"，而对罗汉果植林的非果实部分几 乎没有多少研究，其叶和藤也从未加以利用，对于其植抹非果实部分的生物 活性人们知之甚少，也没有人从其中获得任何有活性的提取物。 发明内容本发明的目的在于提供从罗汉果植林提取的具有降血糖和抗糖尿病活 性组合物。
本发明的另 一 目的是提供从罗汉果植抹提取具有降血糖和抗糖尿病活 性天然组合物的提取方法。
迄今为止，在对罗汉果的研究中，非果实部分及果实的具有降血糖作用 活性成分的研究尚属于创新型的研究。发明人率先通过研究发现了罗汉果中 具有激发胰岛素分泌、降血糖和抗糖尿病活性有效组分，从罗汉果全植抹， 即叶、藤、根、茎和果实中分离得到了具有很强的i肤胰岛素分泌活性的有 效组分。经研究发现，上述活性组分不只是存在于人们已知的罗汉果香中， 而且还存在于罗汉果叶、藤、根、和茎中，活性在罗汉果叶、藤、根、茎和 果实提取物的中等极性部分，所述的活性主要表现在激发胰岛素分泌而降低 血糖，提取的活性组分可用于药物及功能性食品和饮料、保健品、日用品及 食品添加剂等，将会有很大的实用价值和经济价值。
为了将这一发现造福于人类，发明人对从罗汉果植株提取激发胰岛素分 泌活性成分的方法进行了探索。经过反复研究、试验，发明人提供的从罗汉 果植林提取的具有降血糖和抗糖尿病活性组合物是从罗汉果全植抹中提取、 分离、纯化具有降血糖和抗糖尿病活性天然组合物。
发明人提供的提取活性天然组合物的具体方法包括以下第一步或第一
步和第二步
①将事先晒干的罗汉果植林的各个部分，即叶、藤、根、茎和果实分 别或一起进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果植抹的叶、藤、根、茎 和果实分别或一起压碎得到湿的碎块，用清水或水溶性有机溶剂的水溶液浸 泡所述粗粉和碎块，在室温提取或加热提取，得到粗提取液，过滤并干燥得到粗提物，此粗提物即具有所述的活性；
②以中等极性溶剂对粗提取液进行萃取以除去杂质，水层干燥即得到 具有以上所述的活性的组合物；或将粗提取液过滤，滤液在室温下通过大孔 吸附树脂以层析方法进行分离，大孔吸附树脂柱在经水洗去未吸附的物质后 用乙醇水溶液洗脱，分别收集从40%乙醇水溶液到100%乙醇水溶液的洗脱 液，即得到所需的活性部分；
上述用来进行分离的大孔吸附树脂和硅胶包括市售的各种孔径和型号 的树脂和硅胶，如Amberlite XAD系列及山东鲁抗医药股份有限/>司的DM 系列的大孔吸附树脂等。
上述第 一步中所使用的水溶性有机溶剂主要选自含碳数介于1 ~ 8的醇 类、烷类及酯类，常用的是乙醇或曱醇，其水溶液浓度为任意浓度。
上述第二步中所用的溶剂为中等极性溶剂，常用的是乙酸乙酯；所用的 乙醇水溶液浓度为任意浓度。
发明人对活性组合物的降血糖和抗糖尿病活性进行过验证试验即取5 ia 1罗汉果植抹各部分的活性提取物溶液力口入200 ja 1的胰岛细胞培养液中， 使其终浓度为5 mg/ml，于37。C培养lh,将此培养液稀释1: 10;取50ial 稀释过的培养液检验胰岛素分泌浓度；计算胰岛素浓度与对照对比计算胰岛 素分泌浓度，浓度5 mg/ml的提取物能激发50多倍胰岛素分泌，结果表明 罗汉果植抹的提取物具有很好的激发胰岛素分泌活性。
本发明的从罗汉果植抹中提取的降血糖和抗糖尿病活性组合物及其提 取方法，首次发现并提供了从罗汉果叶，藤，根，茎和果实中提取、分离、 纯化具有激发胰岛素分泌活性的天然组合物，提供的方法是从实验室到工业 化规模的提取技术。本发明实现了将废弃的罗汉果的叶、茎、藤、根用来制备降血糖和抗糖尿病的提取物，并为其应用于制备抗糖尿病相关的产品，如 药物、功能性食品、饮料、保健品、日用品及食品添加剂等创造了条件，将 会有很大的实用价值和经济价值。
具体实施例方式
实施例1 100g罗汉果叶研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min进行提 取，此过程重复3次；将提取液过滤得到滤液约1G00ml;滤液干燥得到7g 具有活性的粗提物，此粗提物具有一定的激发胰岛素分泌及降血糖的活性。
实施例2 100g罗汉果叶研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min进行提 取，此过程重复3次；将提取液过滤得到滤液约1000ml，滤液通过100ml 已进行过水平衡的非极性的Amberlite XAD柱；用1000ml水洗以移去未吸 附的物质；分别再用乙醇水溶液进行梯度洗脱；40%到IO(W的洗脱液中含有 激发胰岛素分泌的活性物质，收集该部分洗脱液，干燥得到2. 5g的活性提 取物。
实施例3取50g罗汉果叶研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min进4亍才是 取，提取重复3次；将提取液过滤得到滤液约500ml;浓缩滤液，用乙酸乙酯 进行30min以上的萃取，重复3次，得到有机层和水层；将水层萃取重复3 次，分离有机层和水层；合并水层，将其通过50min已进行过水平衡的非极 性的Amberlite XAD离子交换柱；用500min水洗以移去未p及附的物质；分 别再用乙醇水溶液进行梯度洗脱；40%到100%的洗脱液中含有激发胰岛素分 泌的活性物质，收集该部分洗脱液，干燥得到1. 2g的活性提取物。
实施例4 取100g罗汉果果实研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min进 行提取，此过程重复3次；将提取液过滤得到滤液约1000ml;滤液通过100ml已进行过水平衡的非极性的Amberlite XAD柱；用1000ml水洗以移去未吸 附的物质；分别再用乙醇水溶液进行梯度洗脱；40%到100%的洗脱液中含有 激发胰岛素分泌的活性物质，收集该部分洗脱液，干燥得到2. lg的活性提 取物。
实施例5取50g罗汉果茎研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min进行提 取，此过程重复3次；将提取液过滤得到滤液约500ml;滤液通过50ml已进 行过水平衡的非极性的Amberlite XAD柱；用500ml水洗以移去未吸附的物 质；分别再用乙醇水溶液进行梯度洗脱；40%到100%的洗脱液中含有激发胰 岛素分泌的活性物质，收集该部分洗脱液，干燥得到'1.25g的活性提取物。
实施例6取50g罗汉果根研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min进行提 取，此过程重复3次；将提取液过滤得到滤液约500ml;滤液通过50ml已进 行过水平衡的非极性的Amberlite XAD离子交换柱；用500ml水洗以移去未 吸附的物质；分别再用乙醇水溶液进行梯度洗脱；40%到100°/。的洗脱液中含 有激发胰岛素分泌的活性物质，收集该部分洗脱液，干燥得到1.25g的活性 提取物。
实施例7取50g罗汉果叶研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min进行提 取，此过程重复3次；将提取液过滤得到滤液约500ml;'浓缩滤液，用中等极 性溶剂乙酸乙酯进行30min以上的萃取，重复3次，得到有机层和水层；将 水层萃取重复3次，分离有机层和水层；合并水层，干燥得到所需活性组合 物。
实施例8取50g罗汉果茎研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min进行提 取，此过程重复3次；将提取液过滤得到滤液约500ml;浓缩滤液，用中等极性溶剂乙酸乙酯进行30min以上的萃取，重复3次，得到有机层和水层；将 水层萃取重复3次，分离有机层和水层；合并水层，将其干燥得到所需活性 组合物。
实施例9取市售的25g罗汉果提取物粉末在250ml水中溶解；将提取 液过滤并通过50ml已进行过水平衡的非极性的Amber lite XAD离子交换柱； 用500ml水洗以移去未吸附的物质；分别再用乙醇水溶液进行梯度洗脱；40% 到100°/ 的洗脱液中含有激发胰岛素分泌的活性物质，收集该部分洗脱液，干 燥得到20g的活性提取物。
实施例IO取市售的25g罗汉果提取物粉末在250ml水中溶解，用中等 极性溶剂乙酸乙酯进行30min以上的萃取，重复3次，得到有机层和水层； 将水层萃取重复3次，分离有机层和水层；合并水层，将其干燥得到所需活 性组合物。
权利要求
1从罗汉果植株提取的具有降血糖和抗糖尿病的活性组合物，其特征在于该活性组合物是从罗汉果全植株中提取、分离、纯化具有降血糖和抗糖尿病活性的天然组合物。
2. 根据权利要求1所述的活性组合物的提取方法，其特征包括以下第 一步或第一步和第二步① 将事先晒干的罗汉果植抹的各个部分，即叶、藤、根、茎和果实分别 或一起进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果植抹的叶、藤、根、茎和 果实分别或一起压碎得到湿的碎块，用清水或水溶性有机溶剂浸泡所述粗粉 和碎块，室温提取或加热提取，得到粗提取液，过滤并干燥得到具有活性的 粗提物；② 以中等极性溶剂对粗提取液进行萃取以除去杂质，水层干燥即得到 具有以上所述的活性组合物；或将提取混合物过滤，滤液在室温下通过大孔 吸附树脂以层析方法进行分离，大孔吸附树脂柱在经水洗去未吸附的物质后 用乙醇水溶液洗脱，收集40%到100%乙醇水溶液的洗脱液，即得到所需的活 性组合物。
3,按照权利要求2所述的提取方法，其特征在于用来进行分离的大孔 吸附树脂和硅胶包括市售的各种孔径和型号的树脂和硅胶，即Amberlite XAD系列或山东鲁抗医药股份有限公司的DM系列的大孔吸附树脂。
4.按照权利要求2所述的提取方法，其特征在于上所述第一步中所使 用的水溶性有机溶剂主要选自含碳数介于1~8的醇类、烷类及酯类，常用 的是乙醇或曱醇，其水溶液浓度为任意浓度。
5.按照权利要求2所述的提取方法，其特征在于所述第二步中所用溶 剂为中等极性溶剂，常用的是乙酸乙酯；所用的乙醇水溶液浓度为任意浓度。
全文摘要
本发明公开了从罗汉果植株中提取的降血糖和抗糖尿病活性组合物及其提取方法，该活性组合物是从罗汉果全植株中提取、分离、纯化具有降血糖和抗糖尿病活性的天然组合物；提取方法包括以下一步或两步将干的罗汉果植株粉碎得到粗粉，或将新鲜植株压碎得到湿的碎块，用水或水溶性有机溶剂浸泡，室温提取或加热提取，得到粗提取液，过滤并干燥得到活性粗提物；以中等极性溶剂萃取粗提取液，干燥即得到具有以上所述的活性组合物；或将粗提取液过滤，滤液通过大孔吸附树脂层析分离，经水洗后用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，即得到活性组合物。本方法首次提供了从罗汉果植株中提取、分离、纯化具有生物活性的组合物，其应用将有很大的实用价值和经济意义。
文档编号A61P3/10GK101297852SQ200710077750
公开日2008年11月5日 申请日期2007年4月30日 优先权日2007年4月30日
发明者英 周, 黄赤夫 申请人:英 周