专利名称：超浓缩胎盘脂多糖冻干胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种含胎盘素多糖的保健品以及制备该保健品的 方法。
背景技术：
胎盘中药名为紫河车，具有调节人体机能、增强抵抗力、大补 元气精血的作用。胎盘素是从胎盘中提取出来的药用成分，含有多 种激素和生物酶。以前胎盘素的提取多采用蒸煮浓缩的方法。本发 明人通过研究，提供了 一种利用二氧化碳超临界萃取提取胎盘素的
方法，请参见中国专利200410096974.0,利用该方法提取的胎盘素 具有所提取的胎盘素中的活性成分不会流失，而且胎盘中的胎盘素
提取比较彻底的优点。
本发明人曾将利用二氧化碳超临界萃取法提取的胎盘素制成 了针剂，但针剂产品具有给被注射人带来注射痛苦、使用风险较高， 不方便携带的缺点，而原来利用蒸煮工艺方法获得胎盘素具有胎盘 中的一些活性基因调控因子和部分代i射调控酶会因高温作用而失 活的缺点。因此，对于提供一种更便于使用，没有注射痛苦、使用 风险低，方便携带，而且能充分保持活性基因调控因子和代谢调控 酶的胎盘素产品具有广泛和迫切的需要。
此外，利用二氧化碳超临界流体低温萃取技术(SFE)虽然在 胎盘素的提取分离水平上获得了较大突破，使用该技术提取的人体胎盘的成份可较传统工艺提高1100多倍，且其提取成份的分子量
4支传统方法更小、更利于人体吸收，该:技术最大优点是可几乎100%
保留提取成份的生理活性。但是，利用SFE技术"活性提取"的胎 盘素还存在产品的分子量还不够小，人体最终吸收融合的胎盘素核 心成分仍达不到4艮高的水平的问题。
发明内容
因此，针对目前利用SFE技术l是取的胎盘素的分子量仍然4交大 的问题，本发明人提供了 一种利用生物酶技术提取的超浓缩胎盘脂 多糖冻千胶嚢制剂。
本发明提供的超浓缩胎盘脂多糖冻干胶嚢的有效成分的分子 量达到6000道尔顿，优选达到4000道尔顿以下。
本发明还提供超浓缩胎盘脂多糖冻干胶嚢的生产方法，包括以 下步骤
a)将胎盘脂多糖原液经过二氧化碳超临界流体萃取，得 到胎盘素萃取物；
b利用生物酶处理所述胎盘素萃取物，将分子量降低到 6000道尔顿以下；
c) 将步骤b)中得到的小分子萃取物冷冻干燥，得到冻干 粉；以及
d) 采用脂质体制备方法将所述冻干粉制成超浓缩胎盘脂 多糖冻干胶嚢。
本发明提供的胎盘素多糖因子的主要成分包括胎盘脂多糖、月台 盘核酸，及胎盘富有的8000多种原始生命物质。由本发明制得的胎盘多糖因子月交嚢还具有以下优势
1. 能更多地4是取胎盘富含的8000多种活性物质，^是取率 可高达99.999% (为目前口服产品的最高纯度)。
2. 其提取胎盘活性成份的分子量可纯化分离到最低4000 道尔顿；
3. 功效不差于胎盘素针剂活性程度和活性物质含量接近 胎盘素注射液，其美容、保健、护力夫、治疗疾病等功效也接近 胎盘素注射液。实验证明约1瓶超浓缩胎盘脂多糖冻干胶嚢 的美容抗衰老功效相当于2支同样剂量的胎盘素注射液。
4. 实-验证明其提取的胎盘成份的活性程度可4交第4代胎 盘素产品3是高约67.73%。
具体实施例方式
一般地，本发明提供的超浓缩胎盘脂多糖冻干胶嚢的生产方 法，包4舌以下步骤
a) 将胎盘脂多糖原液经过二氧化碳超临界流体萃取，得 到胎盘素萃取物；
b) 利用生物酶处理所述胎盘素萃取物，将分子量降低到 6000道尔顿以下；
c) 将步骤b)中得到的小分子萃取物冷冻干燥，得到冻干 粉；以及
d) 采用脂质体制备方法将所述冻干粉制成超浓缩胎盘脂 多糖冻干胶嚢。
本发明的 一个特点是，将市场可得的胎盘脂多糖原液进行超临 界二氧化碳萃取。该步骤是在30 — 40Mpa的压力、30 — 40。C的温度 条件下进行，萃取时间一般为8~ 12h。然后进行两级减压分离经过一级减压分离，分别采用8 ~ 12Mpa和6Mpa的才喿作压力，以及30 ~ 35。C和15 25。C的操作温度。得到胎盘素萃取物。
本发明的另 一个特定是，采用生物酶处理所述胎盘素萃取物， 以便将分子量降低至有利于人体吸收的范围。在一种实施方式中， 利用限制性或半限制性内切酶在30 ~ 4(TC下对胎盘素中大分子量 的核酸或多糖进行限制性酶内切反应。所述限制性内切酶为Mmel， TCCRAC(20/18) ;Eco571 ，CTGAAG(16/14) ;Eco57MI ， CTGRAG(16/14);或Bce831, CTTGAG(16/14)。
在实际生产中，优选在上述步骤b)后引入超滤步骤，即，用 预定孔径的超滤膜对所得的处理液进行超滤。在本发明的一个实施 例中，选用了美国millipore^^司生产的截留分子量为6000道尔顿 的超滤膜，以使所得产品的有效成分的分子量达到6000以下；在 本发明的另一实施例中，选用了美国millipore公司生产的截留分子 量为6000道尔顿的超滤膜，以使所得产品的有效成分的分子量达 到6000以下。这种有效成分分子量的控制对产品的性能是大有益 处的，因为小分子的胎盘素更有利于人体的吸收。在这种情况下， 要相应地重复INT步骤和超滤步骤，以提高活性成分的收率。在本 发明中，可以将上述两个步骤重复3到4次，以几乎百分百地达到 6000道尔顿以下的活性成分；若将上述两步艰《重复7到9次，则能 百分百地得到4000道尔顿以下的活性成分。
在本发明中，采用冷冻干燥法对所得的萃取物进行干燥是有益 的，因为它可以完好地保持这些生理活性物质的活性，尤其是保持 热敏性物质的活性。该冻干法在食品和制药领域是熟知的，即在低 温(通常是_60~ -10。C)和高真空下(例如6.67 40Pa)将物淖+ 或者溶液中水份直接升华的干燥方法。在操作中，首先将干燥的药 液装入小并瓦或平盘里，然后置于干燥箱中，降温至例如-50~-40 。C进行预冻， -使药液或者物料冻结，4妄着开启真空泵，〗吏干燥箱内压降至6.67~40Pa。与此同时，适当升高干燥箱内的温度，使水加 快升华。需要注意的是，真空度的选择要取决于干燥箱内的温度。 例如，-3(TC时，水的蒸汽压为38.12Pa，应将真空度控制在该蒸 汽压的1/4 ~ 1/2之间，即9.33 ~ 18.63Pa之间。
本发明的进一步的优势还在于使用脂质体来制备超浓缩胎盘 脂多糖冻千胶嚢，而不是采用其他载体。脂质体因其具有无毒、稳 定活性、緩释、长效以及靶向性的优点非常适于作为本发明多糖胶 嚢的载体。给脂质体形式非常适合用于口服制剂。
制备脂质体的方法有多种，包括薄膜法、复乳法、离心法、钙 融合法、注入法、pH梯度法和前纟是脂质体法。这些方法皆适用于 本发明的多糖胶嚢的生产。这些方法的详细内容参见微胶嚢技术一 原理与应用，i午时婴等人，4匕学工业出腐j土， 2006年，pp91 124, 在此将其^皮露的内容引入本文作为参考。
本发明优选前体脂质体法用于超浓缩胎盘脂多糖冻干胶嚢的 生产，前体脂质体法具有成本低廉、条件温和、操作简便还同时适 用于热敏性物质。前提脂质体法包括喷雾干燥法、冷冻干燥法、薄 膜沉积法和真空干燥法。这几种方法皆适用于本发明，但是优选薄 膜沉积法和冷冻干燥法。因为其工艺简单，操作方便，适于工业化 生产，制得的前体脂质体稳定性好。其具体工艺包括
制备脂质溶液称取适量的磷脂、胆固醇及分散剂，用一 定量的三氯甲烷或二氯甲烷溶解成脂质溶液备用；
芯材与载体的混合耳又适量的载体(如甘露醇、葡萄糖、 山梨醇、海藻糖或蔗糖)和芯材，将载体和芯材充分混合均匀， 方文入旋转的4唐衣锅中；
包封芯材及栽体制备前体脂质体，用喷雾器将脂质溶液少 量多次喷雾到;衮动着的载体与药物的混合物上。30。C热风加热，待有机溶剂挥发后再喷雾，直至将脂质溶液喷完，得到前 才是脂质体，可以立即4吏用。临用前加水水合，即成脂质体。
可用作本发明的胶嚢包衣选自由聚乙婦醇、改性壳聚糖、明胶、 海藻酸钠、羟丙基纤维素、曱基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙 基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物、 聚乙烯醇缩乙醛-二乙氨基醋酸共聚物、二乙氨基乙基丙烯酸曱酉旨-甲基丙烯酸甲酯共聚物、邻苯二甲酸醋酸纤维素，邻苯二甲酸羟丙 基甲基纤维素、六氢邻苯二甲酸醋酸纤维素、六氢邻苯二曱酸羟丙 基甲基纤维素、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸乙酯、聚丙烯酸丁酯、聚 曱基丙烯酸曱酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚丙烯酸丁酯、聚丙烯酸羟 乙酯、聚甲基丙烯酸羟乙酯、聚丙烯酸羟丙酯、聚甲基丙烯酸羟丙
酯、聚丙烯酸4-羟丁酯、聚甲基丙烯酸4-羟丁酯，及其共聚物或掺
和物构成的ia中。
在一具体实施方式
中，，本发明的胶嚢包衣是胃溶性的。
而在另一具体实施方式
中，本发明的月交嚢包衣是肠溶性的
下面用实施例进一步描述本发明，有利于对本发明及其优点的 更好了解，但所述实施例仅用于说明本发明并非用于限制。
实施例i
将胎盘脂多糖原液放入萃取釜中，通入30~40Mpa的二氧化 碳，在30 40。C条件下萃取8~ 12h;经过一级减压分离，操作压 力为8-12Mpa,操作温度为30~35°C;再进行二级减压分离，条 件为操作压力6Mpa以下，操作温度为15~25°C，得到胎盘素萃取 物。然后4吏该胎盘素萃取物用内切酶TCCRAC(20/18)在3(TC下处 理24小时，使主要成分的分子量降低到6000道尔顿以下。将得到的小分子萃取物在-40°C、 12 Pa的真空下经过冷冻干燥，得到冻 干粉。
称80g磷脂、40g胆固醇及33g泊洛沙姆(F68)，用1000ml 氯仿或者二氯甲烷溶解，制成脂质体溶液钡盐。另取80g萃取物、 240g甘露醇过100目筛混合均匀，置于糖衣锅中，30。C热风力口热， 糖衣锅以30r/min旋转，用喷雾器将所配制的脂质溶液少量喷雾至 翻动着的物料中，热风挥干溶剂，然后再少量喷雾，挥干，如此反 复至全部脂质沉积在药物和载体的混合物上，挥干溶剂将物料置于 干燥器中过夜，过筛，即得干燥的流动性好的胎盘素脂质体。最后 装入明胶胶嚢。
实施例2
将胎盘脂多糖原液放入萃取釜中，通入20~30Mpa的二氧化 碳，在30 40。C条件下萃取8~ 12h;经过一级减压分离，操作压 力为8-12Mpa,才喿作温度为30-35。C;再进行二级减压分离，条 件为操作压力6Mpa以下，操作温度为15~25°C，得到胎盘素萃取 物。然后j吏该胎盘素萃耳又物用内切酶CTGAAG(16/14在30。C下处 理18小时，使主要成分的分子量降低到6000道尔顿以下。用截留 分子量为6000道而顿的超滤膜(美国millipore公司，标准超滤系 统)超滤萃取物，使超滤液经过冷冻干燥，得到冻千粉，将超滤截 留物重复进4亍内切酶处理，再进4亍超过滤。如此重复直到几乎全部 萃取液能透过超滤膜。重复大约4至5次。将得到的小分子萃取物 在-40°C、 12Pa的真空下经过冷冻干燥，得到冻干4分。
称80g磷脂、40g胆固醇及33g泊洛沙姆(F68)，用1000ml 氯仿或者二氯甲烷溶解，制成脂质体溶液钡盐。另取80g萃取物、 240g甘露醇过100目筛混合均匀，置于糖衣锅中，30。C热风加热， 糖衣锅以30r/min旋转，用喷雾器将所配制的脂质溶液少量喷雾至翻动着的物料中，热风挥干溶剂，然后再少量喷雾，挥干，如此反 复至全部脂质沉积在药物和载体的混合物上，挥干溶剂将物料置于 干燥器中过夜，过筛，即得干燥的流动性好的胎盘素脂质体。最后 装入明胶胶嚢。
实施例3
将胎盘脂多糖原液放入萃取釜中，通入20-30Mpa的二氧化 碳，在30-40。C条件下萃取8~ 12h;经过一级减压分离，操作压 力为8-12Mpa，操作温度为30~35°C;再进行二级减压分离，条 件为操作压力6Mpa以下，操作温度为15~25°C，得到胎盘素萃取 物。然后^吏该胎盘素萃取物用内切酶CTTGAG(16/14)在30。C下处 理24小时，使主要成分的分子量降低到4000道尔顿以下。用截留 分子量为4000道尔顿的超滤膜(美国millipore公司，标准超滤系 统)超滤萃耳又物，将超滤截留物重复进4亍内切酶处理，再进4亍超过 滤。如此重复直到几乎全部萃取液能透过超滤力莫。重复大约7至9 次。
将得到的小分子萃取物在-40°C、 12 Pa的真空下经过冷冻干 燥，得到冻干粉。称80g磷脂、40g胆固醇及33g泊洛沙姆(F68)， 用1000ml氯仿或者二氯甲烷溶解，制成脂质体溶液钡盐。另取80g 萃取物、240g甘露醇过100目筛混合均匀，置于糖衣锅中，3(TC热 风加热，糖衣锅以30r/min旋转，用喷雾器将所配制的脂质溶液少 量喷雾至翻动着的物料中，热风挥干溶剂，然后再少量喷雾，挥干， 如此反复至全部脂质沉积在药物和载体的混合物上，挥干溶剂将物 料置于干燥器中过夜，过筛，即得干燥的流动性好的胎盘素脂质体。 最后装入明胶爿交嚢。
本发明的优点在于采用二氧化碳超临界萃取与内切酶多糖制 备技术的结合。二氧化碳超临界萃取技术可以完全所有胎盘素提取物的生物活性，而内切酶^支术可以有效控制活性成分的分子量，4吏 得由该方法制得的口服胶嚢中的活性成分能够完全被人体吸收，其 保健效果不差于针剂产品，而且避免了针剂产品的不便和使用者扎 针的痛苦。因此，与现有技术相比，本发明4是供的方法和产品优于 现有的胎盘素保健品。
权利要求
1.一种超浓缩胎盘脂多糖冻干胶囊的生产方法，包括以下步骤a)将胎盘脂多糖原液经过二氧化碳超临界流体萃取，得到胎盘素萃取物；b)利用生物酶处理所述胎盘素萃取物，将分子量降低到6000道尔顿以下；c)将步骤b)中得到的小分子萃取物冷冻干燥，得到冻干粉；以及d)采用脂质体制备方法将所述冻干粉制成超浓缩胎盘脂多糖冻干胶囊。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述萃取步骤是在20-40 MPa，30 ~ 40。C的条4牛下进4亍。
3. 根据权利要求2所述的方法，其中，将所述萃取步骤重复3 次至10次，〗尤选5次至10次。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤b中，利用限制性 或半限制性内切酶在30 ~ 40°C下对胎盘素中大分子量的核酸 或多糖进行限制性酶内切反应。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中，所述限制性内切酶为 Mmel， TCCRAC(20/18); Eco571， CTGAAG(16/14); Eco57MI， CTGRAG(16/14);或Bce831， CTTGAG(16A4)。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤b)之后进一步包 括一个超滤步骤，并且通过选择超滤膜的孔径来控制截留分子量。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中，将所述脂质体制备方法选 自由薄膜法、复乳法、离心法、钙融合法、注入法、pH梯度 法和前4是脂质体法构成的组。
8. —种由权利要求1至7任一项所述方法制得的超浓缩胎盘脂多 一唐冻千"交嚢。
9. 根据权利要求8所述的超浓缩胎盘脂多糖冻干胶嚢，其中胎盘 素多糖的分子量在6000道尔顿以下。
10. 根据权利要求9所述的超浓缩胎盘脂多糖冻干胶囊，其中胎盘 素多冲唐的分子量在4000道尔顿以下。
全文摘要
一种超浓缩胎盘脂多糖冻干胶囊的生产方法，包括a)将胎盘脂多糖原液经过二氧化碳超临界流体萃取，得到胎盘素萃取物；b)利用生物酶处理所述胎盘素萃取物，将分子量降低到6000道尔顿以下；c)将步骤b)中得到的小分子萃取物冷冻干燥，得到冻干粉；以及d)采用脂质体制备方法将所述冻干粉制成超浓缩胎盘脂多糖冻干胶囊。本发明还提供由所述方法制成的胶囊，本发明提供的胶囊和方法消除了现有针剂产品的使用和携带不便的问题。
文档编号A61K35/50GK101306017SQ20071010791
公开日2008年11月19日 申请日期2007年5月15日 优先权日2007年5月15日
发明者陈包容 申请人:陈包容