专利名称：细辛药材和消肿止痛酊中马兜铃酸a的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，是植物原料和来源于植物原料的医药制品的质量控制 方法，具体涉及细辛药材和消肿止痛酊中马兜铃酸A的质量控制方法。
背景技术：
消肿止痛酊为广西壮族自治区花红药业股份有限z〉司的独家产品，该品种收 载于"中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂第十二册，，，细辛药材 是消肿止痛酊中的一味中药原料，根据现有研究资料表明，部分细辛中含有马 兜铃酸A,而该成分会对人产生肾毒性，原标准中的质量控制方法没有包含马兜 铃酸A的4全测。
因此，为了更好的控制消肺止痛酑质量，保证消肿止痛酊原料之一的细辛药 材中马兜铃酸A含量限度不超标，保证消肿止痛酊中马兜铃酸A的含量满足产 品的安全性要求，我们有必要进行质量控制方法研究，寻找出马兜铃酸A的质 量控制方法，对原料细辛药材和消肿止痛酊中的马兜铃酸A进行质量控制。
发明内容
本发明提供一种细辛药材和消肿止痛酊的质量控制方法，主要运用高效液 相色语仪进行检测，目的在于控制细辛药材和消肿止痛ST中马兜铃酸A的含量。 本发明消肿止痛酊的质量控制方法内容如下
1、 色if^f牛
色镨柱用十7、^JJ5^克键^^il交色i普柱。
流动相的组成为同时含有lml/L磷酸与0. 05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，乙 腈，四氬吹喃；这三种溶液的比例为65~ 67: 26: 8。 iti4: 0. 8 ~ 1. 5ml/min。 柱温10~40°C。 才企测波长319nm。
理论塔板数按马兜铃酸A "^i十算应不低于4000。
2、 对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加曱醇制成每毫升含马兜铃 酸A 500ng的溶液，即得。
3、 供试品溶液的制备精密量取消肿止痛酊6~20ml，水浴蒸至l 3ml， 加入二氧化硅粉末0. 08~0. 2g混合均匀，蒸干，残渣加石油醚回流提取2~5 次，每次15 30ml，每次提取时间为15~60分钟；放冷后，弃去醚液，将残渣 蒸干，加三氯曱烷20 60ml，回流提取1~3次，每次30~120分钟，放冷，滤 过，置分液漏斗中，用三氯曱烷20 60ml分多次洗涤残渣及滤纸，滤过，滤液 并入分液漏斗中，加盐酸水溶液(1 —100)洗涤2次，每次20ml，分取三氯曱烷液，置分液漏斗中，加0. 5% ~2%碳酸钠溶液振摇提取3~8次，每次10~ 40ml，合并提取液，加盐酸调节PH至1. 0~2. 0，加乙醚振摇提取3-6次，每 次20 60ml，合并乙醚液，水浴蒸干，残渣加曱醇使溶解，转移至2ml量瓶中， 稀释到刻度，摇勻即得。
4、测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20|al,注入液相色谱 仪，供试品色镨中，在与对照品色谱相应保留时间处，不得有吸收峰。
本发明消肿止痛酊的质量控制方法的优选方法如下
1、 色i普糾
色i普柱用十八;^^J^^^I^^皿色i普柱。
流动相的组成为含lml/L磷酸同时含0. 05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，乙腈， 四氢吹喃；这三种溶液的比例为66: 26: 8。 i^i4: lml/min。 柱温25°C。 才企测波长319nm。
理论塔板数按马兜铃酸A J^i十算应不低于4000。
2、 对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加曱醇制成每毫升含马兜铃 酸A 500ng的溶液，即得。
3、 供试品溶液的制备精密量取消肿止痛酊15ml,水浴蒸至l~2ml，加 入二氧化硅粉末0. lg混合均匀，蒸干，残渣加石油醚(60 ~ 90°C )回流提取2 次，每次20ml，每次提取时间为30分钟；放冷后，弃去醚液，将残渣蒸干，加 三氯曱烷40ml，回流提取l次，时间为60分钟，放冷，滤过，置分液漏斗中， 用三氯曱烷40ml分多次洗涤残渣及滤纸，滤过，滤液并入分液漏斗中，加盐酸 水溶液(1 —100)洗涤2次，每次201111，分取三氯曱烷液，置分液漏斗中，加 1 %碳酸钠溶液振摇提取5次，每次20ml,合并提取液，加盐酸调节PH至1. 0 ~ 2. 0，加乙醚振摇提取5次，第一次401111，第二次30ml、第三次30ml、第四次 30ml、第五次20ml,合并乙醚液，水浴蒸干，残渣加曱醇使溶解，转移至2ml 量瓶中，稀释到刻度，摇匀即得。
4、 测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20jal，注入液相色谱 仪，供试品色语中，在与对照品色谱相应保留时间处，不得有吸收峰。
本发明所提供的质量控制方法解决了微量马兜铃酸A的检测问题，经系统 的方法学研究后，证明该质量控制方法灵敏度高、准确可靠，能够很好的满足 实际生产产品的质量控制。
本发明细辛药材的质量控制方法的内容如下
1、色i输牛
5色i普柱用十/V^i^ii^^^^皿色i瞽柱。
流动相的组成为同时含有lml/L磷酸与0. 05mol/L磷酸二氬钠的水溶液，乙 腈，四氬吹喃；这三种溶液的比例为65~ 67: 26: 8。 ;jtt: 0. 8 ~ 1. 5ml/min。 柱温10~40°C。 才企测波长319nm。
理论塔板数按马兜铃酸A J^i十算应不低于4000。
2、 对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加曱醇制成每毫升含马兜铃 酸A 500ng的溶液,即得。
3、 供试品溶液的制备取细辛药材粉末l-3g,精密称定，精密加入5%氨 水溶液30 60ml，称定重量，超声处理20 - 60分钟，放冷，用水补足失重，摇 匀，滤过。精密量取续滤液25ml，滤液加lml盐酸稀释至2ml的溶液至无沉淀 产生，用乙醚振摇提取3-6次，每次10-30ml，合并乙醚液，用盐酸溶液(l —100 ) 20ml洗涤，分取乙醚液，蒸干，残渣加曱醇使溶解，定容至2ml，摇匀， 即得。
4、 测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20/al,注入液相色谱 仪，供试品色谱中，在与对照品色镨相应保留时间处，不得有吸收峰。
本发明细辛药材的质量控制方法的优选方法内容如下
1、 色i糊牛
色i普4i:用十/^MJ^^克^^^ii交色i普柱。
流动相的组成为含lml/L磷酸同时含0. 05mol/L磷酸二氢钠的水溶液，乙腈， 四氢呔喃；这三种溶液的比例为66: 26: 8。 i^i4: lml/min。 柱温25°C。 才全测波长319nm。
理论塔板数按马兜铃酸A J^i十算应不低于4000。
2、 对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加曱醇制成每毫升含马兜铃 酸A 500ng的溶液，即得。
3、 供试品溶液的制备取细辛药材粉末2g,精密称定，精密加入5%氨水 溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用水补足失重，摇匀，滤过。 精密量取续滤液25ml，滤'^口 lml盐酸稀释至2ml的溶液至无沉淀产生，用乙 醚振摇提取5次，每次15ml，合并乙醚液，用盐酸溶液(1 — 100 ) 20ml洗涤， 分取乙醚液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至2ml，摇匀，即得。
4、 测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20jul，注入液相色i普仪，供试品色谱中，在与对照品色语相应保留时间处，不得有吸收峰。
具体实施例方式
实施例1
细辛药材购于柳州市药材站 细辛药材检验的具体操作如下
1、 色i普条件
色"i普柱用十/V^J^^克^^石il交色i普柱。
流动相的组成为含lml/L磷酸同时含0. 05mol/L磷酸二氲钠的水溶液，乙腈， 四氢呋喃；这三种溶液的比例为66: 26: 8。 ;^i4: lml/min。 柱温25°C。 检测波长319nm。
2、 对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加曱醇制成每毫升含马兜铃 酸A 500ng的溶液，即得。
3、 供试品溶液的制备取细辛药材粉末2g，精密称定，精密加入5%氨水 溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用水补足失重，摇匀，滤过。 精密量取续滤液25ml，滤液加盐酸溶液(1 — 2)至无沉淀产生，用乙醚振摇提 取5次，每次15ml，合并乙醚液，用盐酸溶液(1 — 100 ) 20ml洗涤，分取乙醚 液，蒸干，残渣加曱醇使溶解，定容至2ml，摇匀，即得。
4、 测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20jil，注入液相色谱仪。
5、 结果供试品色i普中，在与对照品色谱相应保留时间处，没有吸收峰。 实施例2
供试品采用消肿止痛酊，市售产品，广西壮族自治区花红药业股份有限 公司生产，批号20070705
消肿止痛iiT检验的具体操作如下
1、 色语条件
色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
流动相的组成为含lml/L磷酸同时含0. 05mol/L磷酸二氩钠的水溶液， 乙腈，四氢呋喃；这三种溶液的比例为65: 26: 8。 流速0.8ml/min。 柱温25°C。 检测波长319nm。
2、 对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加曱醇制成每毫升含马兜铃酸A 500ng的溶液，即得。
3、 供试品溶液的制备精密量取消肿止痛酊15ml，水浴蒸至l. 5ml，加入 二氧化硅粉末0. lg混合均匀，蒸干，残渣加石油醚(60 ~ 90°C )回流提取2次， 每次20ml，每次提取时间为30分钟；放冷后，弃去醚液，将残渣蒸干，加三氯 曱烷40ml，回流提取l次，时间为60分钟，放冷，滤过，置分液漏斗中，用三 氯曱烷40ml分多次洗涤残渣及滤纸，滤过，滤液并入分液漏斗中，加盐酸水溶 液(1 — 100)洗涤2次，每次20ml，分取三氯曱烷液，置分液漏斗中，加1% 碳酸钠溶液振摇提取5次，每次20ml，合并提取液，加盐酸调节PH至1.5,加 乙醚振摇提取5次，第一次40ml，第二次30ml、第三次30ml、第四次30ml、 第五次20ml，合并乙醚液，水浴蒸干，残渣加曱醇使溶解，转移至2ml量瓶中， 稀释到刻度，摇匀即得。
4、 测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20pl，注入液相色i普仪。
5、 结果供试品色i普中，在与对照品色谱相应保留时间处，没有吸收峰。 实施例3
供试品采用消肿止痛酊，市售产品，广西壮族自治区花红药业股份有限 公司生产，批号20070801
消肺止痛打检验的具体操作如下 1、色i普条件
色i普柱用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
流动相的组成为含lml/L磷酸同时含0. 05mol/L磷酸二氢钠的水溶液， 乙腈，四氢呋喃；这三种溶液的比例为66: 26: 8。 流速lml/min。 柱温40°C。 检测波长319nm。
2、对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加曱醇制成每毫升含 马兜铃酸A 500ng的溶液，即得。
3、供试品溶液的制备精密量取消肿止痛酊6ml，水浴蒸至lml，加入二 氧化硅粉末0. 08g混合均匀，蒸千，残渣加石油醚(90 ~ 120°C )回流提取2次， 每次15ml，每次提取时间为15分钟；放冷后，弃去醚液，将残渣蒸干，加三氯 曱烷201！11,回流提取l次，时间为30分钟，放冷，滤过，置分液漏斗中，用三 氯曱烷20ml分多次洗涤残渣及滤纸，滤过，滤液并入分液漏斗中，加盐酸水溶 液(1 — 100)洗涤2次，每次20ml,分取三氯曱烷液，置分液漏斗中，加1% 碳酸钠溶液振摇提取3次，每次20ml，合并提取液，加盐酸调节PH至1.8，加
8乙醚振摇提取3次，第一次30ml，第二次20ml、第三次201111，合并乙醚液，水 浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至2ml量瓶中，稀释到刻度，摇匀即得。
4、 测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20jnl，注入液相色谱仪。
5、 结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应保留时间处，没有吸收峰。 实施例4
供试品采用消肿止痛酊，市售产品，广西壮族自治区花红药业股份有限 公司生产，批号20070802
消肿止痛ST检验的具体操作如下 1、色语条件
色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
流动相的组成为含lml/L磷酸同时含0. 05mol/L磷酸二氢钠的水溶液， 乙腈，四氢呋喃；这三种溶液的比例为67: 26: 8。
流速1. 5ml/min。
柱温l(TC。
检测波长319nm。
2、对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加曱醇制成每毫升 含马兜铃酸A 500ng的溶液，即得。
3、 供试品溶液的制备精密量取消肿止痛酊20ml，水浴蒸至3ml，加入二 氧化硅粉末O. 2g混合均匀，蒸干，残渣加石油醚(30~60°C)回流提取5次， 每次30ml，每次提取时间为60分钟；放冷后，弃去醚液，将残渣蒸干，加三氯 曱烷60ml，回流提取3次，时间为120分钟，放冷，滤过，置分液漏斗中，用 三氯曱烷60ml分多次洗涤残渣及滤纸，滤过，滤液并入分液漏斗中，加盐酸水 溶液(1 — 100)洗涤2次，每次20ml,分取三氯曱烷液，置分液漏斗中，加1 %碳酸钠溶液振摇提取8次，每次20ml，合并提取液，加盐酸调节PH至2，加 乙醚振摇提取6次，第一次60ml，第二次40ml、第三次40ml、第四次40ml、 第五次40ml，第六次30ml，合并乙醚液，水浴蒸干，残渣加曱醇使溶解，转移 至2ml量瓶中，稀释到刻度，摇匀即得。
4、 测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20|il，注入液相色谱仪。
5、 结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应保留时间处，没有吸收峰。
9
权利要求
1、一种细辛药材和消肿止痛酊中马兜铃酸A的质量控制方法，其特征在于采用高效液相色谱仪检测马兜铃酸A的含量，色谱条件是用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，同时含有1ml/L磷酸与0.05mol/L磷酸二氢钠的水溶液:乙腈:四氢呋喃(65～67:26:8)为流动相，流速为0.8～1.5ml/min，柱温为10～40℃，检测波长为319nm，理论塔板数按马兜铃酸A峰计算应不低于4000。
2、 根据权利要求1所述的质量控制方法，其优选的色谱条件为用十八烷 基硅烷键合硅胶色镨柱，同时含有lml/L磷酸与0. 05mol/L磷酸二氢钠的水溶 液乙腈四氢呋喃(66: 26: 8 )为流动相，流速为lml/min，柱温为25°C， 检测波长为319nm,理论塔板数按马兜铃酸A Jffri十算应不低于4000。
3、 根据权利要求1和2所述的质量控制方法，其特征在于用高效液相色 i普法测定消肿止痛酊中马兜铃酸A的含量时，对照品溶液为每毫升含马兜铃酸A 500ng的溶液；供试品溶液为每毫升含消肿止痛酊3 ~ 10ml的溶液。
4、 根据权利要求1和2所述的质量控制方法，其特征在于用高效液相色 镨法测定细辛药材中马兜铃酸A的含量时，对照品溶液为每毫升含马兜铃酸A 500ng的溶液；供试品溶液为每毫升含细辛药材0. 5 ~ 1. 5g的溶液。
5、 根据权利要求3所述的质量控制方法，其中供试品溶液是经以下步骤制备 成的精密量取消肿止痛酊6 20ml，水浴蒸至l 3ml，加入二氧^f圭粉末0. 08 ~ 0.2g混合均匀，蒸干，残渣加石油醚回-ull:取2 5次，每次15 30ml，每次提取 时间为15~60分钟；方文冷后，弃去醚液，将残渣蒸干，加三氯曱烷20 60ml，回 ^^取1~3次，每次30~120分钟，放冷，滤过，置分液漏斗中，用三氯曱烷20~ 60ml分多次洗涤残渣及滤纸，滤过，滤液并入分液漏斗中，加盐酸7JC溶液(1 — 100) 洗涤2次，每次20ml，分取三氯曱烷液，置分液漏斗中，力口 0. 5%~2%碳酸钠溶 液振摇提取3 ~ 8次，每次10 ~ 40ml ，合并提取液，加盐酸调节PH至1. 0 ~ 2. 0， 力口乙醚振摇提取3~6次，每次20 60ml，合并乙醚液，水浴蒸干，残渣加曱醇使 溶解，转移至2ml量瓶中，稀释到刻度，摇匀即得。
6、 根据权利要求5所述的质量控制方法，其中供试品溶液制备的优选方法为 精密量取消肺止痛酊6ml，水浴蒸至l 2ml，加入二氧^5圭粉末0. lg混合均匀， 蒸干，残渣加石油醚(60~90°C )回流提取2次，每次20ml,每次提取时间为30 分钟；放冷后，弃去醚液，将残渣蒸干，加三氯曱烷40ml，回流提取l次，时间为 60分钟，放冷，滤过，置分液漏斗中，用三氯曱烷40ml分多次洗涤残渣及滤纸， 滤过，滤液并入分液漏斗中，加盐酸7K溶液(1 —100)洗涤2次，每次20ml，分取 三氯曱烷液，置分液漏斗中，力口1%碳酸钠溶液振摇提取5次，每次20ml，合并提 取液，加盐酸调节PH至1. 0 ~ 2. 0，加乙醚振摇提取5次，第一次40ml,第二次30ml、 第三次30ml、第四次301111、第五次201111,合并乙醚液，水浴蒸干，残渣加曱Sff吏溶解，转移至2ml量瓶中，稀释到刻度，摇匀即得。
7、 根据权利要求4所述的质量控制方法，其中供试品溶液是经以下步骤制备 成的取细辛药材粉末l 3g,精密称定，精密加入5。/Q氨水溶液30 60m1,称 定重量，超声处理20 - 60分钟，放冷，用水补足失重，摇勻，滤过。精密量取 续滤液25ml，滤液加lral盐酸稀释至2ml的溶液至无沉淀产生，用乙醚振摇提 取3-6次，每次10 30ml，合并乙醚液，用盐酸溶液(1 — 100 ) 20ml洗涤， 分取乙醚液，蒸干，残渣加曱醇使溶解，定容至2ral，摇匀，即得。
8、 根据权利要求7所述的质量控制方法，其中供试品溶液制备的优选方法为 取细辛药材粉末2g，精密称定，精密加入5y。氨水溶液50ml，称定重量，超声 处理30分钟，放冷，用水补足失重，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，滤液 加lml盐酸稀释至2ml的溶液至无沉淀产生，用乙醚振摇提取5次，每次15ml， 合并乙醚液，用盐酸溶液(1 — 100 ) 20ml洗涤，分取乙醚液，蒸干，残渣加曱 醇使溶解，定容至2ml，摇匀，即得。
全文摘要
细辛药材与消肿止痛酊的质量控制方法，目的是控制细辛药材和消肿止痛酊中马兜铃酸A的含量，保证消肿止痛酊原料之一的细辛药材中马兜铃酸A含量限度不超标，保证消肿止痛酊中马兜铃酸A的含量满足产品的安全性要求。本发明所提供的方法解决了微量马兜铃酸A的检测问题，建立了高灵敏度、准确可靠的马兜铃酸A质量控制方法。从操作上看，本发明提供的方法简单易行，准确可靠，精确度高，具有很高的实用价值。
文档编号A61K36/264GK101455695SQ20071019689
公开日2009年6月17日 申请日期2007年12月11日 优先权日2007年12月11日
发明者晟 周, 晖 陆, 韦飞燕 申请人:广西壮族自治区花红药业股份有限公司