专利名称：：用于化妆品和医学用途的具有几种透明质酸级分的组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及包含至少两种透明质酸(HA)级分(fmction)或其盐的组合物，所述两种透明质酸级分为一种具有非常低的平均分子量(MW)的HA级分和一种低-中MW的HA级分，所述组合物用于保湿(moisturizing)、化妆或抗皱配制物中以减少深处和表面的皱紋。
背景技术：
：人体最丰富的杂多糖是糖胺聚糖(glycosaminoglycan)。糖胺聚糖是无支链的糖聚合物，由重复的二糖单元组成(只有硫酸角质素在糖的核心区是分支的)。所述二糖单元通常包含两种修饰的糖一N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)或N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)之一，作为第一糖单元。另一单元通常是糖醛酸，如葡糖醛酸(GlcUA)或艾杜糖酪酸(iduronate)。糖胺聚糖是带负电荷的分子，并且在溶液中(insolution)时具有赋予高粘性的延伸构象。糖胺聚糖主^f立于细胞表面上或胞外基质中。糖胺聚糖在溶液中还具有低压缩性，并因此是理想的生理润滑液体，例如关节(joint)。糖胺聚糖的刚性为细胞提供结构的整体性并且提供细胞之间允许细胞迁移的通道。具有最高生理重要性的糖胺聚糖是乙酰透明质酸(hyaluronan)、硫酸软骨素、肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸皮肤素和疏酸角质素。大多数糖胺聚糖通过特定的寡糖结构共价结合至蛋白聚糖核心蛋白。乙酰透明质酸与某些蛋白聚糖形成大聚集体(largeaggregate),但例外是游离糖链与蛋白聚糖形成非共价复合体。已鉴定了乙酰透明质酸在人体中的许多功能(参见，LaurentT.C.和Fraser5J.R.E.,1992,FASEBJ.6:2397-2404;和TooleB.P.，1991，"Proteoglycansandhyaluronaninmorphogenesisanddifferentiation.，，于CellBiologyoftheExtracellularMatrix,第305-341页，HayE.D.，编，Plenum,NewYork)。乙酰透明质酸存在于透明软骨、滑膜关节液(synovialjointfluid)以及真皮和表皮皮肤组织中。还猜测乙酰透明质酸在许多生理功能，如粘附、发育、细胞运动性、癌症、血管发生和愈伤中具有作用。由于乙酰透明质酸独特的物理和生物特性，将其用于眼外科和关节外科中，并且正在其它医学方法中对其进行评估。术语"透明质酸，，用于文献中的意思是由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-葡糖胺(D-glucuronicandN-acetyl-D-glucosamineacid)的残基纟且成的具有不同分子量的酸性多糖，其天然存在于细胞表面、脊推动物结締组织的基础胞外物质(basicextracellularsubstance)、关节的滑月莫'液、目艮3求内液(endobulbarfluidoftheeye)、人脐带组织和鸡冠(cocks，comb)中。术语"透明质酸，，实际上通常用于指具有不同分子量的带有交替D-葡糖酪酸和N-乙酰-D-葡糖胺残基的全系列多糖，或甚至其降解的级分，并且因此看上去使用复数术语"透明质酸，，会更加恰当。然而该单数术语将仍然用在本说明书中；另外，缩写"HA(hyaluronicacid;透明质酸)"将频繁地使用以代替此集合术语。HA在生物体中起着重要的作用，作为许多组织(如皮肤、腱、肌肉和软骨)的细胞的机械支持，它是胞间基质的主要成分。HA在生物过程中也起着其它重要的作用，如组织的湿润，和润滑作用。HA可从上述天然组织中提取，然而现今优选的是通过微生物方法制备HA以使转移传染剂的潜在风险最小化，并且提高产品的均匀性、质量和可用性(WO03/0175902,Novozymes)。已将HA和它不同分子大小的级分和它们各自的盐用作药物，特别在治疗关节病(arthropathy)方面；作为天然器官和组织的辅助和/或替代物，特别在眼科学和整容手术(cosmeticsurgery)方面；以及作为化妆品制品中的作用剂(agent)。也已开发了乙酰透明质酸的产品用于整形外科学(orthopaedics)、风湿病学(rheumatology)和皮肤病学(dermatology)。公知将具有约1至约1.5MDa平均分子量的高分子量HA级分用在化妆品组合物(例如露(lotions)和霜剂(creams))中来提供出色的保湿性质。已经报导了非常低分子量的HA级分显示抗皱性质，据称是因为这些级分穿过皮肤屏障的能力。在许多应用中保湿和抗皱性质两者都是高度期待的，呈现这两种性质的单一组合物将会具有巨大的商业意义。发明简述本发明的发明人近期配制了几种HA组合物，其包含两种独立的(separate)HA级分，一种具有非常低的平均分子量，另一种级分具有低-中平均分子量，并且他们评估了这些级分的保湿和抗皱效果。令人惊讶地，发现这些组合物显示保湿以及抗皱两种效果。因此，在本发明的第一方面中涉及保湿、化妆或抗皱产品，其包含至少两种透明质酸级分或其盐，其中一种级分具有8,000-100,000Da，优选10-90kDa，或优选20-80kDa，或30-70kDa，甚至更优选40-60kDa，或最优选约50kDa的平均分子量；并且另一种级分具有100，000-500,000Da，或优选150-450kDa，更有选200-400kDa，甚至更优选地250-350kDa或最优选约300kDa的平均分子量。在第二方面，本发明涉及组合物，其包含如第一方面中限定的产品，和活性成分，优选所述活性成分是药理活性剂。本发明的第三方面涉及药物组合物，其包含有效量的如第一方面中限定的产品，以及可药用的载体、赋形剂或稀释剂。第四方面涉及药物组合物，其包含有效量的如第一方面中限定的产品作为运载体，以及药理活性剂。第五方面涉及化妆品，其包含有效量的如第一方面中限定的产品作为活性成分。在第六方面中，本发明涉及卫生、医疗或外科物品，其包含如第一方面中限定的产品，优选所述物品是外科海绵、愈伤海绵，或包含在急救绷带(bandaid)或其它创伤敷裹材料中的部分。重要的方面涉及药物胶嚢或微胶嚢，其包含如第一方面中限定的产品。本发明最后的方面涉及在眼科学中、在骨关节炎或癌症的治疗中执行程序的方法；处理创伤的方法；进行药理活性剂的皮肤施用或透皮施用，或化妆品的皮肤施用的方法的改进，所述改进包括使用如第一方面中限定的产品，或者如第二、第三或第四方面中任一项限定的组合物。多个方面涉及如第一方面中限定的产品，或者如前述方面中任一项限定的组合物的用途，用于制备治疗骨关节炎、癌症的药物，制备用于眼科治疗的药物，制备用于处理创伤的药物，制备用于血管发生的药物，或制备保湿剂(moisturizer)。附图简述在一些附图中，柱状图标有一个星号，表示与，O时的值相比在统计学上显著差异值；pS0.05。标有两个星号的柱状图是与t=0时的值相比在统计学上高度显著差异的值；pSO.Ol。图1:对相对长时间皮肤水合作用(relativelongtermskinhydration)的比较评估。在4周和8周的处理之后，用3种分子量的HA级分获得水合作用的显著提高。图2:显示用皮肤弹性测量仪(cutometer)测量的多种皮肤弹性参数，如下文详述中所述。图3:显示在4周和8周的施用之后，相对的测量的总体皮肤弹性(relativemeasuredoverallskinelasticities)R2。用全部活性霜剂均清楚地观察到了总体弹性(R2)的显著提高。在不同分子量的HA级分之间未观察到显著差异。图4:相对平均4且并造度观'J量(relativemeanroughnessmeasurement)在下文描述，结果示于图4。在4周和8周的施用之后，平均粗糙度值显著降低。优先积累在皮肤表面的300,000DaMW级分的效果更加显著。图5:相对最大粗净造度观'j量(relativemaxroughnessmeasurement)在下文描述，结果示于图5;在4周和8周的施用之后，这些值也显著降低，但是仅就两种最低分子量的级分而言。能够穿过皮肤的非常低分子量的50kDaHA级分的这种效果明显是更显著的。图6:显示在如下文实施例中所述的4周和8周施用之后的相对粘弹性比例R6。就低MWHA级分观察到了非常显著的增加。发明详述"透明质酸"在本文定义为未硫酸化的糖胺聚糖，由N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和葡糖醛酸(GlcUA)的重复二糖单位组成，其通过交替的(3-1,4和卩-1,3糖苷键联接到一起。透明质酸也称作乙酰透明质酸、透明质酸盐或HA。8术语乙酰透明质酸和透明质酸在本文可以互换使用。本发明的第一方面涉及保湿、化妆或抗皱产品，其包含至少两种透明质酸级分或其盐，其中一种级分具有范围在8,000-IOO，OOODa，优选10-90kDa，或优选20-80kDa,或30-70kDa,甚至更优选范围在40-60kDa，或最优选约50kDa的平均分子量；并且另一种级分具有范围在100,000-500,000Da，或优选150-450kDa,更优选200-400kDa，甚至更优选范围在250-350kDa,或最优选约300kDa的平均分子量。鸡冠是乙酰透明质酸重要的商业来源。微生物是可供选择的来源。美国专利No.4,801,539公开了用于制备透明质酸的发酵方法，其包括兽瘟链球菌(Streptococcuszooepidemicus)菌林，报道的产率是约3.6g透明质酸每升。欧洲专利No.EP0694616公开了使用改进的兽瘟链球菌菌抹的发酵方法，报导的产率是约3.5g透明质酸每升。如WO03/054163(Novozymes)(该文件完整并入本文)中所公开的，可以重组产生透明质酸或其盐，例如在革兰氏阳性芽孢杆菌属宿主中重组产生。已描述乙酰透明质酸合酶来自于脊推动物、细菌病原体和藻病毒(DeAngelis,RL"1999,Cell.Mol.LifeSci.56:670-682)。WO99/23227公开了来自似马4连J求菌(Streptococcusequisimilis)的I组透明质酸盐合酶(hyaluronatesynthase)。WO99/51265和WO00/27437描述了来自多杀巴斯德氏菌(Pasturellamultocida)的II组透明质酸盐合酶。Ferretti等公开了酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)的乙酰透明质酸合酶操纵子，其由三个基因hasA、hasB和hasC组成，其分别编码透明质酸盐合酶、UDP葡糖脱氢酶和UDP-葡糖焦磷酸化酶(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,98，4658-4663,2001)。WO99/51265描述了具有似马链球菌乙酰透明质酸合酶编码区的核酸区段。由于重组芽孢杆菌属细胞的乙酰透明质酸直接表达至培养基，可以使用简单的方法从该培养基中分离乙酰透明质酸。首先，将芽孢杆菌属细胞和细胞碎片从培养基中物理去除。如果期望，首先可将培养基稀释，以降低培养基的粘性。用于从培养基去除细胞的许多方法对于本领域那些技术人员是已知的，如离心和微滤(microfiltration)。如果期望，然后可将剩余的上清液过滤，如通过超滤，以从乙酰透明质酸浓缩和去除小分子污染物。去除细胞和细胞碎片之后，通过已知机制从培养基简单沉淀乙酰透明质酸。盐、醇或盐和醇的组合可用于/人滤液沉淀乙酰透明质酸。一旦变为(reduceto)沉淀物，能够通过物理方法容易地将乙酰透明质酸从溶液中分离。可使用本领域已知的蒸发技术(如冻干或喷雾干燥)，从滤液溶液干燥或浓缩乙酰透明质酸。宿主细月包优选实施方案涉及第一方面的产品，其中所述透明质酸或其盐是重组产生的，优选通过革兰氏-阳性细菌或宿主细胞，更优选通过芽孢杆菌属(genusSac/〃w力的细菌重组产生。宿主细胞可以是适合用于重组产生透明质酸的任何芽孢杆菌属细胞。芽孢杆菌属宿主细胞可以是野生型芽孢杆菌属细胞或其突变体。在本发明的实施中有用的芽孢杆菌属细胞包括但不限于Sac/〃w、嗜碱芽孢杆菌C/ac/〃wsa仪a/o;/H7w力、角罕淀粉芽孑包杆菌C6ac/〃m1amy/o/^wej^c/em^短芽孢杆菌(^7c/〃z^6rev^)、环状芽孢杆菌(Bac/〃M"Vrw/a似)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)、凝结芽孑包杆菌(5(3c/〃MscoagM/ww)、坚强芽孑包杆菌(5"。'7/",mm力、杣烂芽孢杆菌(Sa"'〃^/a^M力、迟緩芽孢杆菌C6a"7/w/e"fw》、地衣芽孑包杆菌C6ac/〃z^//c/zem/omn'力、巨大芽孢杆菌C8ac/〃wmega&n'wm)、短小芽孑包杆菌(5ac/〃船/7Mm//w>sO、嗜热月旨肪芽孑包杆菌(5fl"7/wWeara^zermo;/H7w》、枯草芽孢杆菌(5a"'〃ww6"to)和苏云金芽孑包杆菌CSac/〃t^^zMr/"g7'em7、)纟田胞。特别适于重组表达的突变枯草芽孢杆菌细胞在WO98/22598有所描述。无包嚢(non-encapsulating)的芽孢杆菌属细胞在本发明中是特别有用的。在优选的实施方案中，芽孢杆菌属宿主细胞是解淀粉芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、迟緩芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌细胞。在更优选的实施方案中，芽孢杆菌属细胞是解淀粉芽孢杆菌细胞。在其它更优选的实施方案中，芽孢杆菌属细胞是克劳氏芽孢杆菌细胞。在其它更优选的实施方案中，芽孢杆菌属细胞是迟緩芽孢杆菌细胞。在其它更优选的实施方案中，芽孢杆菌属细胞是地衣芽孢杆菌细胞。在其它更优选的实施方案中，芽孢杆菌属细胞是枯草芽孢杆菌细胞。在最优选的实施方案中，芽孢杆菌属宿主细胞是枯草芽孢杆菌A164A5(参见美国专利No.5,891/701)或枯草芽孢杆菌168A4。用本发明的核酸构建体转化芽孢杆菌属宿主细胞可以，例如，通过原生质体转化(参见，例如Chang和Cohen,1979，MolecularGeneralGenetics168:111-115)，通过使用感受态纟田胞(参见，例如Young和Spizizen,1961，JournalofBacteriology81:823-829，或Dubnau和Davidoff-Abelson，1971，Journalo丄'MolecularBiology56:209-221)，通过电穿孑L(参见，例如Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques6:742-75l)或通过接合(参见，例如Koehler和Thome,1987,JournalofBacteriology169:5271-5278)来进行。分子量可以根据改良的。卡唑法(Bitter和Muir,1962,AnalBiochem.4:330-334)测定透明质酸的水平。此外，透明质酸的平均分子量可以使用本领域的标准方法测定，如由Ueno等，1988,C7zem.尸/画.城36,4971-4975;Wyatt,1993,C//附.272:1-40;和WyattTechnologies,1999，"LightScatteringUniversityDAWNCourseManual"和"DAWNEOSManual"WyattTechnologyCorporation,SantaBarbara,California所描述的那些。盐和交联的HA优选实施方案涉及第一方面的产品，其包含透明质酸的无机盐，优选透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸铵、透明质酸钓、透明质酸镁、透明质酸锌或透明质酸钴。已发现透明质酸钠与聚乳酸单酰氯或二酰氯(polylacticacidmono-ordi-acylchloride)的反应产生了相联的或交联的HA-PLA或HA-PLA-HA产物，当与未处理的HA或PLA的标准光谱比较时，所述产物在IR光谱上显示在1736cm-1的强峰，其对应于在相联的HA-PLA产物中新形成的聚乳酸酯的存在。因此，优选的实施方式涉及第一方面的产物，其中透明质酸或其盐包含聚合a-羟酸的酯，优选是聚乳酸或乙醇酸的酯。也已发现用硼酸处理透明质酸钠溶液产生了交联的HA-硼酸水凝胶，当与未处理的Na-HA的标准光谱比较时，所述交联的HA-硼酸水凝胶在FT-IR光谱上显示在1200和945cm-1的新的峰，其对应于交联HA-硼酸水凝胶中新形成的硼酸酯(borateester)的存在。因此，优选的实施方案涉及第一方面的产品，其中透明质酸或其盐包含硼酸酯。在第一方面产品的另一个优选实施方案中，透明质酸或其盐全部或部分地与二乙烯砜(divinylsulfone;DVS)交联。ii保湿和抗皱作用如下文的实施例中所示，第一方面的产品具有皮肤保湿作用，表现为增加皮肤水合值(hydrationvalue)的能力，在优选实施方案中，当如下文在实施例中所限定的进行测量时，使皮肤水合值经过8周(over8weeks)增加至少3%,优选至少5%，最优选至少7%。另外，第一方面的产品能够增加皮肤总体弹性R2，在优选的实施方案中，当如下文在实施例中所限定的进行测量时，使皮肤总体弹性R2经过8周增加至少4%,优选至少8%，最优选至少12%。同样，在优选的实施方案中，当如本文所述测量时，第一方面的产品能够使皮肤的平均粗糙度值经过8周降低至少5%,优选至少10%,并且最优选至少15%。在另一个优选的实施方案中，当如本文所限定的进行测量时，第一方面的产品能够使皮肤的最大粗糙度值经过8周降低至少3%，优选至少5%，并且最优选至少10%。当如本申请所限定的进行测量时，第一方面产品的另一个优选实施方案能够使皮肤的粘弹性比例R6经过8周增加至少10%,优选至少15%、20%、25%,并且最优选至少30%。其它成分在优选实施方案中，本发明的产品还可以包含其它成分，优选一种或多种活性成分，优选一种或多种药理学活性物质，并且还优选水溶性赋形剂，如乳糖。在另一个优选的实施方案中，本发明的产品还可以包含一种或多种酶，优选连接酶、转移酶、氧化还原酶、水解酶、裂合酶和/或异构酶；更优选淀粉分解酶、脂肪分解酶、蛋白水解酶、纤维素水解酶(cellulyticenzyme)、氧化还原酶或植物细胞壁降解酶，并且更优选具有选自下组的活性的酶氨肽酶、淀粉酶、淀粉葡糖芬酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶(cutinase)、环糊精糖基转移酶(cyclodextringlycosyltransfemse)、脱氧核糖核酸酶、酯酶、半乳糖苷酶、P-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、葡萄糖氧化酶、葡糖苷酶、卣过氧化物酶(haloperoxidase)、半纤维素酶、转化酶、异构酶、漆酶、连接酶、脂肪酶、裂合酶、甘露糖香酶、氧化酶、果胶酶、过氧化物酶、肌醇六磷酸酶、酚氧化酶、多酚氧化酶、蛋白酶、核糖核酸酶、转移酶、转谷氨酰胺酶或木聚糖酶。可以在本发明中使用的活性成分或药理活性物质的非限定性实例包括蛋白质和/或肽药物，如，人生长激素、牛生长激素、猪生长激素、生长激素释放激素/肽、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、红细胞生成素、骨形态形成性蛋白质(bonemorphogenicprotein)、干扰素或其衍生物、胰岛素或其衍生物、心房肽III(atriopeptin-III)、单克隆抗体、肿瘤坏死因子、巨噬细胞活化因子、白细胞介素、肿瘤退化因子(tumordegeneratingfactor)、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、组织纤溶酶原;敫活物(tissueplasminigenactivator)、因子VII、因子VIII禾口尿;敫酶。可包括水溶性赋形剂用于稳定活性成分，这种赋形剂可包括蛋白质，例如，白蛋白或明胶；氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸和它们的盐；糖如葡萄糖、乳糖、木糖、半乳糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、右旋糖苷(dextran)、甘露醇、山梨醇、海藻糖和硫酸软骨素；无机盐如磷酸盐；表面活性剂如TWEEN⑧(ICI)、聚乙二醇，和它们的混合物。赋形剂或稳定剂可以以产品重量的0.001至99%的量使用。本发明的几个方面涉及各种组合物和药物，除了其它成分外，其包含有效量的如第一方面所限定的产品，和活性成分，优选所述活性成分是药理活性剂；可药用的载体(pharmaceuticallyacceptablecarrier)、赋形剂或稀释剂，优选水溶性赋形剂，并且最优选乳糖。此外，本发明的多个方面涉及包含如第一方面所限定的产品或如上多个方面和实施方案中所限定的组合物的物品，例如，化妆品、卫生物品、医疗或外科物品。在本发明的最后方面涉及药物胶嚢或微胶嚢，其包含如第一方面所限定的产品或如本发明其它方面和实施方案中所限定的组合物。使用产品或组合物的方法
技术领域：
：本发明的不同方面涉及，例如在医学领域使用第一方面的产品或使用本发明的组合物执行处理程序的方法。一个方面涉及在眼科学中执行程序的方法，其包括使用如第一方面所限定的产品或本发明的组合物。说另一个方面涉及在骨关节炎治疗中执行程序的方法，其包括使用如第一方面所限定的产品或本发明的组合物。另一个方面涉及在癌症治疗中执行程序的方法，其包括使用如第一方面所限定的产品或本发明的组合物。一个方面涉及进行药理活性剂的透皮或皮肤施用的方法，其包括使用如第一方面所限定的产品或本发明的组合物。另一个方面涉及进行化妆品的皮肤施用的方法，其包括使用如第一方面所限定的产品或本发明的组合物。实施例实施例1使用了多种具有不同分子量的透明质酸钠(HA)级分。表1总结了重量平均分子量(Mw)、数量平均分子量(Mn)和多分散性(I=Mw/Mn)。表l.所用不同透明质酸钠的分子特性透明质酸钠MW(Da)Mn(Da)I=Mw/MnHA5053000370001.4HA130130000830001.6HA3003200002100001.5使用以下配方(表2)进行明确限定分子量的HA在化妆品配方中的功效测试。安慰霜剂(placebocream)由相同的成分构成但不含HA。表2.称为活性霜剂的化妆品配方的组成成分%w/w水(aqua)72.25HA0.10氬化聚姿烯(Hydrogenatedpolydecene)20.00硬脂基聚氧乙烯(2)醚(Steareth-2)3.00硬脂基聚氧乙烯(21)醚(Steareth-21)1.00十六/十八醇(Cetearylalcohol)1.50苯氧乙醇，对羟基苯曱酸曱S旨(Methylparaben),对羟基苯曱酸丁酯(Butylparaben),对羟基苯曱酸乙酯(Ethylparaben),对羟基苯甲酸丙酯(Propylparaben)，对羟基苯曱酸异丁酯0.80W-(羟曱基)-iV-(l，3-双羟曱基-2,5-二氧-4-咪唑烷基)-N，-(羟曱基)脲(DiazolidinylUrea)0.25EDTA二钠(Disodi飄EDTA)0.1014本研究的目的是评估在长期使用(l个月和2个月)后化妆产品的抗皱功效并将其与安慰霜剂比较。12名受试者在家中涂敷了活性霜剂和安慰霜剂，一天两次，持续2个月。在研究开始时，处理一个月之后，以及研究结束时，在眼周区域对皮肤水合作用和弹性进行仪器测量。在相同的区域制作皮肤表面的塑性复制品(plasticreplica)，并且以所述复制品的图像分析来评估皮肤角质层的微起伏(micro-rdief)。此外，为研究的区域拍摄数码照片。评价方法在生物气候室(bioclimaticroom)(24。C;50%相对湿度)中进行研究。要求志愿者们不要洗脸，并且在进行测量之前至少3个小时不要在测试所涉及的区域上涂敷产品。在研究开始时(To),在左眼周和右眼周区域对皮肤水合作用、弹性和粗糙度进行仪器评估，须以可重复的方式进行。对相同的区域还拍摄了数码照片。评估在脸上进行，其中用活性霜剂处理脸的一侧，而用安慰霜剂处理另外半边脸作为对照。在脸上涂敷这两种霜剂(活性霜剂和安慰霜剂)的两侧(左侧和右侧)是随机的。受试者在他们的脸上每天涂敷这两种产品两次，持续两个月。处理1个月之后(T3o天)和测试结束时(处理2个月之后，T6o天)，受试者回到实验室重复仪器测量并拍摄新的数码图像。然后分析获得的数据并进行统计学比较。长期水合作用使用皮肤角质层水分测量法(Corneometry)进行皮肤表面水合作用的评估。皮肤角质层水分测量法测定角质层(SC)的电容(capacitance)，并由此反映出相对SC含水量。测量使用皮肤角质层水分测量仪(Comeometer):CombiCM825(Courage&Khazaka)进行。结果示于图l;在4周和8周处理之后，用每种分子量HA均明显地获得了水合作用的显著增加。弹性使用皮肤弹性测量仪(Cutometer)SEM575(Courage&Khazaka)测量皮15肤弹性。皮肤弹性测量仪测量皮肤被吸入测量探针的开口时的垂直形变。这种方法通过以下参数提供与皮肤弹性有关的形变参数，如图2所示UA/UF-皮肤总体弹性(R2参数)UV/UE=粘弹性比例(R6^lt)UA=应力消除期结束时的总形变恢复(totaldeformationrecoveryattheendofthestress-offperiod)UF=皮肤的总延展性(totalextensibility)uv=弹性形变之后发生的粘弹性蠕变(viscoelasticcreepoccurringaftertheelasticdeformation)UE=因应力施加产生的皮肤弹性形变(elasticdeformationoftheskinduetotheapplicationofstress)。在涂敷8周之后测量的总体弹性R2示于图3。用全部活性霜剂均清楚地观察到了总体弹性(R2)的显著增加。在不同分子量的HA级分之间未观察到显著差异。抗皱通过皮肤表面复制品和图像分析来评估皮肤表面的形貌(topography)。测试的原理是通过应用快速硬化合成聚合物(SILFLC^-FlexicoLtd.UK.)来获得皮肤表面的阴印片(negativeimprint)。然后通过图像数字化来分析这种复制品。从这种图像计算标准的粗糙度参数Ra(平均粗糙度)和Rz(深紋的最大粗糙度)。平均粗糙度结果示于图4。在4周和8周的涂敷之后平均粗糙度值显著降低。在皮肤表面优先积累的300,000DaMW级分的效果更加明显。最大粗糙度结果示于图5;这些值在4周和8周的涂敷之后也显著下降，但是仅就两种最低分子量的级分而言。能够穿过皮肤的非常低分子量的50kDaHA级分的这种效果明显地更加显著。1权利要求1.保湿、化妆或抗皱产品，其包含至少两种透明质酸级分或其盐，其中一种级分具有8,000-100,000Da的平均分子量，另一种级分具有100,000-500,000Da的平均分子量。2.根据权利要求1的产品，其中所述透明质酸或其盐是重组产生的，优选通过革兰氏阳性细菌，更优选通过芽孢杆菌属的细菌重组产生。3.根据权利要求1或2的产品，其包含透明质酸的无机盐，优选透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸铵、透明质酸4丐、透明质酸镁、透明质酸锌或透明质酸钴。4.根据权利要求1-3中任一项的产品，当如本文所限定的进行测量时，其能够使皮肤水合值经过8周增加至少3%,优选至少5%,最优选至少7%。5.根据权利要求1-4中任一项的产品，当如本文所限定的进行测量时，其能够使皮肤总体弹性R2经过8周增加至少4%，优选至少8%，更优选至少12%。6.根据权利要求1-5中任一项的产品，当如本文所限定的进行测量时，其能够将皮肤的平均粗糙度值经过8周减少至少5%,优选至少10%,并且最优选至少15%。7.根据权利要求1-6中任一项的产品，当如本文所限定的进行测量时，其能够将皮肤的最大粗糙度值经过8周减少至少3%,优选至少5%，并且最优选至少10%。8.根据权利要求1-7中任一项的产品，当如本文所限定的进行测量时，其能够使皮肤的粘弹性比例R6经过8周增加至少10%，优选至少15%、20°/0、25%，并且最优选至少30%。9.根据权利要求1-8中任一项的产品，其中所述透明质酸或其盐包含硼酸和/或聚合a-羟酸的酯，优选是聚乳酸或乙醇酸的酯。10.根据权利要求1-9中任一项的产品，其中所述透明质酸或其盐全部或部分地与二乙烯砜(DVS)交联。11.根据权利要求1-10中任一项的产品，其还包含活性成分，优选药理活性物质。12.根据权利要求1-11中任一项的产品，其还包含水溶性赋形剂，优选乳糖。13.组合物，其包含如权利要求1-12中任一项限定的产品，和活性成分，优选所述活性成分是药理活性剂。14.根据权利要求13的组合物，其还包含水溶性赋形剂，优选乳糖。15.药物组合物，其包含有效量的如权利要求1-12中任一项限定的产品，以及可药用载体、赋形剂或稀释剂。16.药物组合物，其包含有效量的如权利要求1-12中任一项限定的产品作为运载体，以及药理活性剂。17.化妆品，其包含作为活性成分的有效量的如权利要求1-12中任一项限定的产品。18.卫生、医疗或外科物品，其包含如^L利要求1-12中任一项所限定的产品；优选所述物品是外科海绵、愈伤海绵，或包含于急救绷带或其它创伤敷裹材料中的部分。19.药物胶嚢或微胶嚢，其包含如权利要求1-12中任一项所限定的产品。20.在眼科学中执行程序的方法中的改进，其包括使用如权利要求1-9中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物。21.在骨关节炎治疗中执行程序的方法中的改进，其包括使用如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中^f壬一项所限定的组合物。22.在癌症治疗中执行程序的方法中的改进，其包括使用如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物。23.在进行透皮施用药理活性剂的方法中的改进，其包括使用如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物。24.在进行皮肤施用药理活性剂的方法中的改进，其包括使用如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物。25.在进行皮肤施用化妆品的方法中的改进，其包括使用如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物。26.使用如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物的眼科学方法。27.治疗骨关节炎的方法，其包括向哺乳动物施用有效量的如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物，优选所述施用是皮肤施用、透皮施用、口服施用或通过注射施用。28.处理创伤的方法，其包括向哺乳动物施用有效量的如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的組合物。29.如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物用于制备治疗骨关节炎的药物的用途。30.如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物用于制备眼科学治疗的药物的用途。31.如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物用于制备治疗癌症的药物的用途。32.如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物用于制备处理创伤的药物的用途。33.如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物用于制备用于血管发生的药物的用途。34.如权利要求1-12中任一项所限定的产品或如权利要求13-16中任一项所限定的组合物用于制备保湿剂、化妆品或霜剂的用途。全文摘要本发明提供保湿、化妆或抗皱产品，其包含至少两种透明质酸级分或其盐，其中一种级分具有8,000-100,000Da的平均分子量，另一种级分具有100,000-500,000Da的平均分子量。文档编号A61K31/728GK101500535SQ200780029995公开日2009年8月5日申请日期2007年6月26日优先权日2006年6月28日发明者伯吉特·M·马勒,卡迪加·施瓦克-阿布德劳伊申请人:诺维信生物聚合物公司