专利名称：：具有抗肿瘤活性的去氢骆驼蓬碱衍生物的制作方法
技术领域：
：本发明提供一种具有抗肿瘤活性的去氢骆驼蓬碱衍生物。技术背景自20世纪40年代氮芥用于治疗恶性淋巴瘤后，几十年来化学治疗癌症已经有了很大的进展。已由单一的化学治疗进入了联合化疗和综合化疗的阶段，并且能成功地治愈病人或明显地延长病人生命，因此抗肿瘤药物在肿瘤治疗中占有着越来越重要的地位。去氢骆驼蓬碱来源于蒺藜科植物骆驼蓬，为--咔啉类生物碱。20世纪70年代我国学者首次报道骆驼蓬生物碱具有明确的抗肿瘤作用，药理作用十分广泛，还包括对中枢神经系统的作用，对心血管系统的作用，对肌肉、离子通道的作用，对呼吸系统、免疫系统的作用，辐射防护和光敏作用等。此外，其也是高效可逆的单胺氧化酶(MAO)抑制剂。国内外有一定数量的文献和专利报道去氢骆驼蓬碱衍生物合成工作(Bioorg.Med.Chem.Lett.1999,9(23):3319-3324;Bioorg.Med.Chem.Lett.2002,12(7):1129-1132;Eur.J.Med.Chem.2005,40(10):991-1001;Med.Chem.2004,12(17):4613-4623;Eur.J.Med.Chem.2005,40(3):249-257;Int.J.Cancer.2005，114(5):675-682;Bioorg.Med.Chem.Lett.2001,11(4):437-441)。现有去氢骆驼蓬碱化合物活性还不是很高，例如去氢骆驼蓬碱的抗癌抑制活性为SGC-7901人胃癌细胞8.3ug/ml,HepG2人肝癌细胞10.2ug/ml，而其他去氢骆驼蓬碱衍生物不一定有活性或活性不高。
发明内容本发明的目的在于提供一类新的具有抗肿瘤活性的去氢骆驼蓬碱衍生物。该类化合物以去氢骆驼蓬碱的化学结构为基础，引入不同的取代基团，本发明的去氢骆驼蓬碱衍生物体外显示具有抑制GC-7901人胃癌细胞和HepG2人肝癌细活性，从而显示具有较高的抗肿瘤活性。本发明的具有抗肿瘤活性的去氢骆驼蓬碱衍生物用下述通式(I)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，R表示NH2、NH3+Cl'或NHCOORp所述Ri选自dC4的烷基或苄基。上述dQ的烷基是指具有l4个碳原子的直链或支链的垸基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基。优选的本发明化合物是其中R为NH2、NH3+Cl—或NHCOORi的式(I)化合物，其中R,选自C3的垸基或苄基。进一步优选为R为NH2、NH3+Cr或NHCOOR4的式(I)化合物，其中Ri为异丙基。R为NH2、NH/Cr的式(I)化合物其合成路线如下首先l-甲氧羰基-7-甲氧基-"-咔啉4(合成方法可参见《上海医科大学学报》，1999,26(2):146-147文献或《精细化工中间体》，2008,38(3)，22-24文献制备方法说明)在室温下与80%的水合肼发生胺解反应得7-甲氧基-^咔啉-l-碳酰肼^然后7-甲氧基^咔啉-1-碳酰肼5在0r下与HN02反应得到7-甲氧基-从咔啉-l-酰基叠氮f(产率可达99.5%)，最后一步的Curtius重排反应得l-氨基-7-甲氧基-从咔啉j[，最后成盐得l-氨基-7-甲氧基-^咔啉盐酸盐2。R为NHCOO&的式(I)化合物的合成路线如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>中间体酰基叠氮6经Curtius重排得到的异氰酸酯类化合物分别与甲醇、乙醇、丙醇等反应合成得到1-垸氧羰基氨基-7-甲氧基-P-咔啉类化合物。具体实施方式下面结合实施例对本发明的作进一步的说明。实施例1:7-甲氧基-^咔啉-l-碳酰肼⑤的合成将134.0mg(0.52mmol)4溶于2ml甲醇中，缓慢滴加0.7ml80%水合肼，渐渐析出白色固体，室温下搅拌半小时，放入冰箱过夜。过滤，滤渣用少量甲醇洗涤，真空千燥得到白色固体133.0mg(99.3%)。m.p.250.4-252.7。C。^NMR(DMSO-de)S:3,86(s,3H,7-OCH3)，6.86，6.89(dd，1H，《/=2.6，8.9Hz，ArH)，7.31(d,1H，/=1.8Hz,ArH),8.12(d，1H，/=8.5Hz,ArH)，8.18(d,1H，《/=5.0Hz,ArH),8.31(d，1H,/=4.6Hz,ArH).实施例2:7-甲氧基-从咔啉-l-酰基叠氮(^)的合成在17.3ml水中加入133.0mg(0.52mmol)f，加入36%盐酸0.76ml，冷却至0°C,加入41.0mg(0.59mmol)NaN02，继续在0。C搅袢2h。慢慢加入饱和Na2C03水溶液，调节pH值呈强碱性，过滤，真空干燥得138.0mg淡黄色粉末(99.5%)。m.p.100°C(dec.)。实施例3:l-氨基-7-甲氧基-^咔啉0)的合成将149.0mg(0.56mmol)f溶于3ml无水苯中，在N2保护下，回流10min，降温至50°C，加入0.6ml50%NaOH水溶液，回流半小时。反应液冷却后，加入5ml乙酸乙酯，过滤，滤渣依次用水、乙酸乙酯洗涤，真空干燥，乙醇重结晶得114.0mg淡黄色粉末(96%)。m.p.230.5°C(dec.)。EIMSm/z:213.10(M+，4.01%),60.05(79.19%)，45.00(93.19%),43.00(100.00%).实施例4:l-氨基-7-甲氧基-^咔啉盐酸盐(l)的制备将40.0mgi用5mlHCl气体饱和的甲醇溶液溶解，在接近回流的状态下，慢慢滴加无水乙醚至刚好出现混浊，静置冷却后放入冰箱，过滤得到37.0mg黄色固体(92.5%)。&NMR(DMSO-d6)S:3.93(s，3H,7-OCH3),7.04，7.07(dd，1H,J=2.8，12.0Hz,6-ArH),7.38(d,1H,J=2.8Hz,8-ArH),8.38(d,1H,/=11.6Hz，5-ArH),8.50(d，1H，《/=8.0Hz,4-ArH),8.69(d，1H,J=7.6Hz,3-ArH)，12.26(s,1H，9-NH).13C画R(DMSO-d6)S:55.62:95.65,112.12，112.95，117.79,124.50,131.60,134.60,135.89,146.51,162.20,163.04.Anal.Calc.forC12H12C1N30:C，57.72;H,4.84;N,16.83.Found:C,57.78;H,4"0;N,16.67.实施例5:l-甲氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qa)的合成向2ml无水甲醇中加入61.0mg(0.23mmol)f回流搅拌5h，静置冷却后放入冰箱过夜，析出淡黄色固体，过滤，滤渣用少量甲醇洗涤，真空干燥得26.0mg淡黄色粉末(42.0%)。m.p.204.0°C(dec.)。'HNMR(CDC13)5:3.92(s,6H,7-OCH3，COOCH3)，6.90(d,1H,/=8,0Hz,ArH),7.01(s，1H,ArH),7.68(d，1H，/=4.8Hz，ArH),7.95(d，1H，/=8.4Hz，ArH),8.03(s,1H,ArH),9.00(brs,1H，l-NH)，10.53(brs,1H,9隱NH)。13CNMR(CDC13)S:29.69，53.06，55.57，88.26，94.77,110.18，110.86，115.27，122.21，132.19，136.48,141.84，155.33,161.16。EIMSm/z:272.00(M+l，4.62%),271.00(M+，30.59%)，239.00(100.00%)，196.00(20.29%)。Anal.Calc.forC14H13N303:C，61.99;H,4.83;N，15.49.Found:C,61.84;H,4.94;N,15.40.实施例6:l-乙氧羰基氨基-7-甲氧基-从咔啉(^)的合成向3ml无水乙醇中加入50.0mg(0.19mmol)g，回流搅拌5h，静置冷却，析出淡黄色晶体，过滤，滤渣用少量乙醇洗涤，真空干燥得34.0mg淡黄色粉末(63.7%)。m.p.200.0°C(dec.)。&NMR(DMSO-d6)S:1.28(t,3H,■/=6.8Hz，-OCHCH2),3.86(s，3H,7-OCH3),4.20(q,2H,/=6.8Hz,-0￡^CH3)，6.83,6.85(dd,1H，J=2.0,8.8Hz，6-ArH),7.13(d，1H,/=1.6Hz,8-ArH),7.84(d,1H,/=5.2Hz，4-ArH),8.03(d,1H,/=5.2Hz，3-ArH),8.06(d,1H，/=8.4Hz,5-ArH)，9.92(s,1H,卜NH),10.87(s，1H,9-NH)。EIMSm/z:286.05(M+l,1.89%)，285.10(M+，10.98%)，239.05(100.00%),196.05(24.67%)。Anal.Calc.forC15H15N303:C,63.15;H,5.30;N，14.73.Found:C，63.32;H，5.22;N，14.56.实施例7:l-正丙氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qs)的合成向3ml无水正丙醇中加入58.0mg(0.22mmo1)《，回流搅拌5h，静置冷却，过滤，滤渣用少量正丙醇洗漆，真空干燥得46.0mg淡黄色针状结晶(70.8%)。m.p.224.0°C(dec.)。!HNMR(DMSO-d6)5:0.94(t，3H,/=7.2Hz，-CH，CH!).1.63-1.70(m,2H,/-6.8，7.2Hz,-CH2CHA3.86(s，1H,7-OCH3),4.11(t,2H,/=6.8Hz，-OCH2),6.83,6.85(dd，1H,J=2.0,8.8Hz，6-ArH)，7.13(d,1H，/=2.0Hz,8-ArH),7.83(d，1H，J=5.2Hz,4-ArH)，8.03(d,1H，J=5.2Hz,3-ArH),8.06(d，1H，/=8.4Hz,5-ArH),9.92(s，1H,l國NH),10.87(s,1H,9-NH)。13CNMR(CDC13)S:10.36，22.30,55.53，67.69,94.75，109.97，110.63,115.31,122.15，125.46,132.12,136.37,137.04,141.72,155.15，161.01。EIMSm/z:300.00(M+l，2.93%)，299.05(M+，8.79%)，239.00(100.00%),196.00(26.06%)。Anal.Calc.forC16H17N303:C，64.20;H，5.72;N,14.04.Found:C，64.26;H，5.95;N，13.87.实施例8:l-异丙氧羰基氨基-7-甲氧基-A咔啉(M)的合成向3ml干燥的异丙醇中加入61.0mg(0.23mmo1)《，回流搅拌4h，静置冷却，过滤，滤渣用少量异丙醇洗漆，真空千燥得44.0mg淡黄色粉末(64.4%)。m.p.190.5-192.7°C。!HNMR(CDC13)S:1.40(d，6H，《/=8.0Hz，-CWCHA),3.91(s，3H,7-OCH3)，5.09-5.13(m，1H,J=8.4Hz，-CH)，6.87，6.90(dd,1H，《/=2.8，11.6Hz，6陽ArH)，7.00(d，1H，《/=3.2Hz，,8-ArH)，7.66(d,1H,J=6.8Hz,4-ArH),7.94(d，1H，《/=11.6Hz,5-ArH),8.08(d，1H,/=6.0Hz,3-ArH),9.07(brs,1H，l-NH)，10.53(brs，9-NH).13CNMR(CDC13)S:22.13，55.51，69.85,94.61，109.95,110.49，115.22，122.15，125.36,132.03,136.43,137.14,141.64,154.67,160.89.EIMSm/z:300.05(M+l，5.57%),299.05(M+，28.18%)，239.00(100.00%)，213.05(50.32%),196.00(26.23%),45.05(22.65%)。Anal.Calc.forC16H17N303:C，64.20;H,5.72;N,14.04.Found:C,64.46;H,5.38;N,14.01.实施例9:l-正丁氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Os)的合成向3ml干燥的正丁醇中加入61.0mg(0.23mmol)f回流搅拌4h，静置冷却，析出针状结晶，过滤，滤渣用少量正丁醇洗涤，真空干燥得44.0mg银白色粉末(61.5%)。m.p.154.6-155.6。C。!HNMR(CDC13)S:0.91-1.06(m,3H,-CH7CH2),1.42-1.54(m,2H,-CH2CHQ,1.71-1.81(m,2H,-OCHCH2),3.91(s，3H,7-OCH3)，4.27-4.31(m,2H，-OCH2),6.87,6.89(dd，1H,/=2.8，11.6Hz,6-ArH),6.98(d,1H，《/=2.8Hz,8-ArH),7.65(d,1H,/=7.2Hz，4-ArH),7.94(d,1H，J=11.2Hz，5-ArH)，8.09(d,1H,/=7.6Hz，3-ArH),9.33(brs,1H,1-NH),10.50(brs,1H,9-NH).13CNMR(CDC13)S:13.71,19.10,30.97,55.53,65.95,94.75，109.95,115.59,115.32，122.15，125.48，132.12,136.41,137.06，141.71，155.18，161.01。EIMSm/z:314.05(M+1,2.88%)，313.05(M+,13.70%),239.00(100.00%),196.00(22.15%)。Anal.Calc.forCnH19N303:C，65.16;H，6.11;N，13.41.Found:C，65.30;H,6.12;N，13.56.'实施例10:l-苄氧羰基氨基-7-甲氧基-A咔啉Qf)的合成向3ml无水苯甲醇中加入61.0mg(0.23mmo1)《，浴温升至120-130°C，搅拌4h。减压蒸去苯甲醇，加入3ml无水乙醇回流，静置冷却，过滤，滤渣用少量无水乙醇洗涤，真空干燥得35.0mg浅棕色粉末(44.1%)。m.p.194.0°C(dec.)。!HNMR(CDCl3)S:3.92(s，3H,7-OCH3),5.32(s,2H，-OCH2Ph),6.87,6》0(dd，1H,</=2.8，11.6Hz,6扁ArH)，6.99(d,1H，/=2.4Hz,8-ArH),7.34-7.47(m,5H,PhH)，7.61(d，1H，/=7.2Hz,4-ArH)，7.93(d,1H,/=12.0Hz，5-A邻,8.00(d,1H,■/=7.2Hz，3-ArH).13CNMR(CDC13)S:29.69，55.56,67.76,94.77，110.03，110.79,115.30，122.19，125.38，128.18,128.49,128.70,132.16,135.72,136.50，141.71，161.06。EIMSm/z:348.05(M+l，2.11%),347.05(lvT，5.98%),239.00(100.00%),196.00(33.87%),108.05(27.69%),79.05(32.34%)。Anal.Calc.forC20H17N3O3:C，69.15;H,4.93;N，12.10.Found:C,68.97;H,5.22;N，12.05.实施例11:l-叔丁氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qg)的合成向2ml干燥的叔丁醇中加入44.0mg(0.17mmol)f，回流搅拌5h。减压蒸去叔丁醇，加入2ml无水乙醇回流，静置冷却后放入冰箱，过滤，滤渣用少量无水乙醇洗涤，真空干燥得26.0mg淡黄色粉末(50.4%)。m.p.230.0。C(dec.)。'HNMR(CDC13)S:1.60(s，9H，-C(CH3)3),3.93(s,3H,7-OCH3),6.86，6.89(dd，1H，《/=3.2,11.6Hz，6-ArH),7.02(d，1H，/=2.8Hz,8-ArH),7.63(d,1H，《/=7.2Hz,4國ArH)，7.93(d,1H，J=11.6Hz，5-ArH)，8.05(s,1H,J=7.2Hz,3-緒)，8.46(brs，1H,l-NH)，10.50(brs，1H，9-NH)。EIMSm/z:314.00(M+l,4.48%)，313.05(IvT,20.88%),239.00(39.02%)，213.00(100.00%)。Anal.Calc.forC17H19N303:C,65.16;H，6.11;N,13.41.Found:C，65.28;H，6.18;N，13.50.实施例12:l-仲丁氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qli)的合成向2ml干燥的仲丁醇中加入45.0mg(0.17mmol)《，回流搅拌5h。静置冷却后析出晶体，过滤，滤渣用少量仲丁醇洗涤，真空干燥得28.0mg无色针状晶体(53.1%)。m.p.160.2。C(dec.)。'HNMR(CDC13)S:1.00(t,3H,/=10.0Hz，-CH，CH》,1.36-1.44(m,3H，-CHQHj),1.63-1.82(m,2H,-CH2)，3.91(s,3H,7-OCH3),4.90-4.97(m,1H，-CH),6.86，6.89(dd,1H，《/=3.2,11.6Hz,6-ArH),6.99(d，1H,/=3.2Hz,8-ArH)，7.65(d，1H,J=7.2Hz,4-ArH),7.93(d，1H,/=11.2Hz，5-ArH),8.10(d，1H,/=7.2Hz，3-ArH),9.16(brs，l-NH)，10.52(brs，9-NH)。EIMSm/z:314.05(M+l,9.99%)，313.05(IVT,44.96%),239.00(66.71%),213.00(100.00%)。Anal.Calc.forC17H19N303:C，65.16;H,6.11;N，13.41.Found:C,64.94;H,6.63;N,13.22.实施例13:l-异丁氧羰基氨基-7-甲氧基-^咔啉Qi)的合成向2ml干燥的异丁醇中加入40.0mg(0.15mmol)f，回流搅拌4.5h。静置冷却后析出晶体，过滤，滤渣用少量异丁醇洗涤，真空干燥得36.0mg淡黄色粉末(76.8%)。m.p.172.0-174.0°C。！HNMR(CDC13)5:1.01-1.03(m.6H，隱CH(CH!V),2.01-2.14(m，1H，-CH),3.91(s，3H,7-OCH3),4.07(d，2H,7=8.8Hz,-CH2),6.87，6.90(dd,1H,/=2.8,11.6Hz，6-ArH),6.98(d,1H,/=2.8Hz,8-ArH)，7.65(d,1H,/=6.8Hz,4-ArH)，7.94(d,1H，</=11.2Hz，5-ArH),8.07(d,1H,</=7.6Hz,3-ArH)，8.83(brs，1H,l-NH)，10.47(brs,1H，9-NH)。EMSm/z:314.00(M+l，5.61%)，313.05(M^29.40%)，239.00(100.00%),213.00(29.79%)，40.00(26.05%)。Anal.Calc.forCi7Hi9N303:C,65.16;H，6.11;N,13.41.Found:C,65.18;H,6.40;N,13.25.实施例14:选取部分上述实施例制备出来的去氢骆驼蓬碱衍生物，但并不限于这几种，在国家新药筛选中心进行肿瘤抑制试验。采用磺酰罗丹明B蛋白染色法作用72小时进行后，测定各化合物10.5mol/L浓度下对肿瘤细胞生长的百分抑制率％，结果如下表，同时，我们也采用了相同的方法测定了去氢骆驼蓬碱在10.5mol/L浓度下对肿瘤细胞生长的百分抑制率％，结果也列于下表。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>相对比于去氢骆驼蓬碱的抗癌抑制活性，我们设计的化合物对HepG2和SGC-7901的百分抑制率有明显的提高。以上实施例是对专利的说明和进一步解释，而不是对本发明的限制，在本发明的精神和权利保护范围内所做的任何修改，都落入本发明的保护范围。权利要求1、下述通式(I)化合物其中，R表示NH2、NH3+Cl-或NHCOOR1，所述R1选自C1～C4的烷基或苄基。2、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于R,选自C3的烷基或苄基。3、根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于R表示NH2或NH3+C1'。4、根据权利要求l或2所述的化合物，其特征在于R4选自异丙基。全文摘要本发明涉及通式(I)具有抗肿瘤活性的去氢骆驼蓬碱衍生物，其中，R表示NH<sub>2</sub>、NH<sub>3</sub><sup>+</sup>Cl<sup>-</sup>或NHCOOR<sub>1</sub>，所述R<sub>1</sub>选自C<sub>1</sub>～C<sub>4</sub>的烷基或苄基。该类化合物以去氢骆驼蓬碱的化学结构为基础，引入不同的取代基团，其生物体外显示具有抑制GC-7901人胃癌细胞和HepG2人肝癌细活性，从而显示具有较高的抗肿瘤活性。文档编号A61P35/00GK101328175SQ20081006324公开日2008年12月24日申请日期2008年7月25日优先权日2008年7月25日发明者伊周,徐广宇,蒋勇军,邹建卫申请人:浙江大学宁波理工学院