一种微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及一种微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法。
【背景技术】
[0002] 胳蛇蓬（PeganumharmalaL.)为漢薬科（Zygophyllaceae)胳蛇蓬属（Peganum) 植物，以全草及种子入药，广泛分布于亚洲、北非等地。在我国，骆驼蓬主要生长在西北 等地，常作为中药、维药和蒙古族药材，收载于《中华人民共和国药品标准维吾尔药分册》 (WS3-bw-0080-98, 1999年版）中，具有消肿止痛、通血调经的作用，用于关节骨痛、月经闭 阻、咳嗽气喘等症。目前，以骆驼蓬种子为主要成分的复方骆驼蓬软膏已上市应用，具有清 泻局部异常黑胆质、粘液质，消肿止痒，散气止痛。用于湿寒所引起的关节酸痛、风湿性关节 炎、坐骨神经痛、湿瘆，疥癣，疥疮等。
[0003] 研宄表明：骆驼蓬主要要含有生物碱类、黄酮类化合物等成分，其中生物碱为有效 成分，包括鸭嘴花碱（visicine),骆蛇蓬碱（harmaline)、去氢骆蛇蓬碱（harmine)、鸭嘴花 酮碱、哈儿明碱等，药理作用十分广泛，具有平喘、抗菌、抗肿瘤、抗炎镇痛、止痒杀虫及对中 枢神经系统、心血管系统和气管平滑肌等方面的作用。自1841年第一个从骆驼蓬中生物碱 分离鉴定以来，人们对其化学成分和药理活性开展了广泛的研宄，早在30年代骆驼蓬碱和 去氢骆驼蓬碱作为单胺氧化酶抑制剂用于帕金森病的治疗，70年代我国首次将骆驼蓬碱制 剂用于治疗消化道肿瘤的治疗，其抗癌作用引起国际上广泛的重视。同时，其良好的抗辐 射、杀虫、抗病毒及抗氧化活性也引起人们的关注，医药行业对骆驼蓬生物碱的需求量越来 越大。
[0004] 目前，人们已采用多种化学分离方法提取制备骆驼蓬中总生物碱，在中国专利 CN101433565A、CN101491557A、CN1250560C、CN101229203A、CN104107199A及相关文献中均 有报道。但这些方法在提取制备生物碱过程中存在工艺复杂、有机溶剂使用量大和对环境 污染、且得率较低的问题，不能满足对提高生物利用度、充分利用资源、保护环境和工业化 生产的要求。
[0005] 1)乙醇回流提取后，酸液酸化，氨水碱化析出沉淀，得到总生物碱提取物，再经硅 胶柱和大孔吸附树脂等色谱法分离，既得单体化合物（CN101433565A)
[0006]2)用5%的盐酸浸提，酸液用阳离子交换树脂交换，用氨水碱化树脂，再用乙醚、 氯仿或无水乙醇洗脱得到骆驼蓬总生物碱（李春杰，新疆医学院学报，1987, 10, 27)。或将 骆驼蓬提取液酸化后，滤过，滤液上阳离子交换树脂，以水除杂，酸液洗脱后，收集洗脱液， 加碱中和，脱盐处理后得到骆驼蓬总生物碱（CN101491557A)
[0007] 3)比较了三种提取方法，结果发现用氯仿氨水混合溶媒沉淀法分离提取骆驼蓬子 中的生物碱（浸膏中总生物碱的回收率6.93% )优于阳离子交换树脂法和氯仿提取法。 (张学农，新疆医学院学报，1993, 16, 350)
[0008] 4)用乙醇提取后，氯化汞处理后去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱以复合物沉淀下来，然 后用H2S处理得到骆蛇蓬生物碱。（Munir,Fitoterapia, 1995,66, 73)
[0009] 5)用碱性乙醇浸润后回流提取，经碱化游离，甲酸乙酯、乙酸乙酯等回流分离、硅 藻土与活性碳减压过滤、回收溶剂、烘干、再用醇溶液回流提取。然后用水沉等方法处理后， 得到骆驼蓬总生物碱。（CN1250560C)
[0010] 6)采用二氧化碳超临界萃取技术，碱水冷浸除杂后再用酸性醇溶液提取，减压后 再用盐酸浸泡，过滤后加氨水碱化，过滤干燥既得骆驼蓬总生物碱。（CN101229203A)
[0011] 7)将骆驼蓬乙醇提取液在旋转薄膜蒸发器中制得紫褐色粗提膏。加盐酸加热至溶 解，热过滤后用氯仿提取两次；用氢氧化钠溶液中和母液，析出棕黄色固体。再用盐酸，加热 溶解后。通过乙醇加热等处理，析出结晶，制得骆驼蓬总碱盐酸盐。重结晶后，得骆驼蓬生 物碱。（CN104107199A)
[0012] 8)采用超声技术，在考察最优条件后，骆驼蓬总生物碱的得率为2. 043g/50g，即 40.lmg/g。（李越鱼昆，西北农业学报，14, 110)
[0013] 以上方法在推进骆驼蓬生物碱提取技术时，也均有不足之处：1)在提取骆驼蓬生 物碱时虽然工艺简单，但提取率不高。在分离骆驼蓬生物碱单体时，采用了硅胶柱及大孔吸 附树脂等色谱分离法，虽然分离出10个化合物，但操作复杂，没有与现代色谱分离技术相 融合；2)氯仿等有机试剂的使用，对环境造成污染，且使用阳离子交换树脂，其再生及与处 理复杂；3)尽管浸膏中总生物碱的回收率6. 93%，回收率较高。但如果以骆驼蓬种子的重 量计，则回收率很低。且提取过程使用有毒溶剂氯仿等；4)提取过程使用重金属，影响总生 物碱的品质；5)提取过程复杂，且有机试剂用量较大，增加成本；6)使用二氧化碳临界萃取 脱脂后，提取成本增加，且酸性乙醇提取后不宜过滤；7)使用氯仿等有机溶剂，对环境造成 污染；8)总生物碱提取率较低，仅为40.lmg/g。
【发明内容】
[0014] 本发明的针对目前骆驼蓬中生物碱制备方法不足，提取过程有机溶剂浪费和环境 破坏严重，提供一种高效提取骆驼蓬生物碱的方法。
[0015] 本发明实现上述目的所采用的技术方案如下：
[0016] 一种微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法，包括如下步骤
[0017] 1)取骆驼蓬，烘干至恒重，用体积浓度为60~95%乙醇作溶剂，液料比为10~ 50ml/g，微波加热辅助提取8~12分钟，提取温度为60~100°C，过滤得提取液，提取液浓 缩至无醇味，得浓缩液；
[0018] 优选的，乙醇浓度为75%，料液比为31ml/g，提取温度为81°C，提取时间为10分 钟；
[0019] 微波功率为400~1000W，优选的为600W ;
[0020] 2)将浓缩液上制备型高效液相色谱C18反相硅胶柱，用体积比为70 : 30~96 : 4 的0.lmol/L乙酸铵缓冲盐溶液和乙腈为洗脱相，以0. 5~1.OmL/min的流速，在20~40°C 温度范围内，分离制备，通过紫外280nm在线监测，收集特定吸收峰的洗脱液，挥干，即得鸭 嘴花碱（visicine)、骆蛇蓬碱（harmaline)和去氢骆蛇蓬碱（harmine)三种生物碱。
[0021] 优选的，洗脱相中乙腈的体积比变化如下：0~15min，4%~8% ;15. 1~30min， 8%~10% ;30. 1 ~80min，10%~30% ;
[0022] 优选的，洗脱相的流速为0. 7ml/min。
[0023] 所述的visicine,harmaline和harmine三种生物碱的分子结构式：
【主权项】
1. 一种微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法，包括如下步骤 1) 取骆驼蓬，烘干至恒重，用体积浓度为60~95%乙醇作溶剂，液料比为10~50ml/ g，微波加热辅助提取8~12分钟，提取温度为60~100°C，过滤得提取液，提取液浓缩至无 醇味，得浓缩液； 2) 将浓缩液上制备型高效液相色谱C18反相硅胶柱，用体积比为70 : 30~96 : 4的 0. lmol/L乙酸铵缓冲盐溶液和乙腈为洗脱相，以0. 5~1. 0 mL/min的流速，在20~40°C 温度范围内，分离制备，通过紫外280nm在线监测，收集特定吸收峰的洗脱液，挥干，即得鸭 嘴花碱、骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱三种生物碱。
2. 如权利要求1所述微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法，其特征在于，微波功率为 400 ~10001
3. 如权利要求1所述微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法，其特征在于，步骤（1)中，乙 醇浓度为75%，料液比为31 ml/g，提取温度为81°C，提取时间为10分钟。
4. 如权利要求1所述微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法，其特征在于，洗脱相中乙腈 的体积比变化如下：〇~15min，4%~8 % ;15. 1~30min，8%~10% ;30. 1~80min，10%~ 30% 〇
5. 如权利要求1所述微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法，其特征在于，洗脱相的流速 为 0? 7 ml/min〇
6. 如权利要求1所述微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法，其特征在于，所述骆驼蓬为 种子和/全草。
【专利摘要】本发明公开了一种微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法，包括如下步骤：取骆驼蓬植物，烘干至恒重，用体积浓度为60～95%乙醇作溶剂，液料比为10～50ml/g，微波加热辅助提取8～12分钟，提取温度为60～100℃，过滤得提取液，提取液浓缩至无醇味，上制备型高效液相色谱C18反相硅胶柱，用体积比为70∶30～96∶4的0.1mol/L乙酸铵缓冲盐溶液和乙腈为洗脱相，以0.5～1.0mL/min的流速，在20～40℃温度范围内，分离制备，通过紫外280nm在线监测，收集特定吸收峰的洗脱液，挥干，即得鸭嘴花碱、骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱三种生物碱。方法简便易行，可控，生物碱的得率高于现有提取方法。
【IPC分类】C07D487-04, C07D471-04
【公开号】CN104628731
【申请号】CN201510039879
【发明人】尚小飞, 潘虎, 苗小楼, 王东升, 王学智, 王瑜, 张继瑜
【申请人】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月27日