专利名称：强力脑清素片在制备防治骨质疏松症药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属医药领域，具体涉及强力脑清素片在制备防治骨质疏松 症药物中的应用。
背景技术：
强力脑清素又名更年康，属名优中成药之一，是由刺五加、五味
子、鹿茸、甘油磷酸钠四种药物制成的片剂。处方中每50ml五味子 流浸膏中，配有刺五提取物126-157个重量单位、鹿茸2. 8重量单位、 甘油磷酸钠35重量单位。临床上主要用于补肾健脾，养心安神，脾 肾两虚，心神失养引起的心悸失眠，食欲不振，神疲乏力，尿频阳痿， 神经衰弱，非器质性性功能衰退及妇女更年期综合症见上述症候者， 有一定的治疗作用。经文献检索，目前，尚未发现强力脑清素片具有 防治骨质疏松，改善骨质疏松模型动物的骨密度、增加骨矿含量等作 用。
发明人通过研究发现了其能够改善骨质疏松模型动物的骨密度、 增加骨矿含量，可用于防止老龄动物和人性激素水平的降低等，并证 明其具有抗衰老和增强性腺功能等功效。
发明内容
本发明涉及强力脑清素片在制备防治骨质疏松症药物中的新用 途，在制备改善骨质疏松模型动物的骨密度、增加骨矿含量中药物中 的应用，以及在制备防止老龄动物和人性激素水平的降低，抗衰老和增强性腺功能的药物中的应用。
基于上述药理作用，本发明所述之强力脑清素可以用于预防和治 疗骨质疏松症，具有抗衰老、增强性功能和增加骨密度等功效。
本发明的突出进步和显著效果在于，提供了 一种具有疗效确切、 廉价的可以用于预防和治疗骨质疏松症的中成药，所述之强力脑清素 是历史悠久、疗效确切的中成药，副作用少，资源丰富，制作工艺简 易，质量稳定可控。该方能够预防和治疗治疗腰膝酸软，心悸失眠， 神疲乏力，头晕眼花，性欲减退，阳萎，健忘等非器质性功能衰退及 妇女更年期综合症，改善骨质疏松模型动物的骨密度、增加骨矿含量， 防止老龄动物和人性激素水平的降低等，具有抗衰老和增强性腺功能 等功效。
具体实施例方式
实例一、强力脑清素镇静、安神、耐缺氧、抗疲劳、增加性功能的药
效实验研究
1材料与方法
1. 1实验动物NIH小鼠，由广州中医药大学实验动物中心提供， 合格证号2003A004,室温控制在24—28'C，湿度控制在70—85%。
1. 2药物与试剂强力脑清素，由广州白云山和记黄埔中药有限公 司提供，批号020711。龟鹿补肾丸，广东华天宝药业有限公司提供， 批号20020814。
1. 3实验仪器微量移液器，GERSON;掌上型电子称，HL—200 型，韩国；分析天平，GF—200型，日本；离心沉淀器，上海医疗器 械厂；电热恒温水温箱，GB11241-89型，北京市医疗设备厂。1. 4实验分组 (l)正常组(NS); (2)阳性组(龟鹿补肾丸)；(3) 脑清素高、低剂量组。
全部数据以3f士S表示，两组间比较t检验，多组比较采用方差 分析。
2方法与结果
2. 1强力脑清素片对小鼠耐缺氧时间的影响
取48只NIH雄性小鼠，体重18 22g，随机分组，灌胃给药， 正常组灌胃给予等容积蒸馏水，每日1次，连续15天，于第15天给 药后1小时，将小鼠放入盛有15g钠石灰的广口瓶内，立即开始计时， 以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间，比较各组间差异， 结果见表l。
表l强力脑清素片对小鼠耐缺氧时间的影响(I土s， n=12)
组另u剂量 (g/kg)给药前体重(g) 给药后存活时间 (min)延长S (%)
NS——19.8±1. 327.5 ±1.831.1±5. 5——
龟鹿补肾丸2.019.8±1.326.1 ±1. 937.3 ±6. 4*19.9
强力脑清素0.4519.8±1. 726.6 ±2. 237.8±7. 4*21.5
强力脑清素0.90
20.1 ±1.427.0±2. 037.3±9. 719.9
注:与正常组比较，*p<0.05， **p<0.01。
结果表明龟鹿补肾丸和强力脑清素剂量组的耐缺氧时间与正 常组比较(p〈 0.05)，具有显著性差异。
2. 2强力脑清素片对小鼠游泳时间的影响
取80只NIH雄性小鼠，按体重的10%负重，放入26"C恒温大水盆中，直径65cm,水深22cm，每盆两只。记录小鼠游泳时间(游至
头持续没入水中5s为标志)，凡短于4min，长于15min者剔除。将选
出的46只小鼠按筛选时的游泳时间和体重分为4组，每日上午9时
给药，连续7天，第7天称重给药lh后进行负重游泳试验，试验条
件同筛选，记录小鼠游泳时间。结果见表2。
表2强力脑清素片对成年雄性小鼠游泳时间的影响(I ± s)
剂量 游泳时间 延长率
组另U n
(g/kg) (min) (%)
NS 11 —一 15.1±7.6 ——
龟鹿补肾丸 11 2.0 21.1±8.7 39.7
强力脑清素 12 0.45 18.6±6.4 23.2
强力脑清素 i2 0.90 22.1±5.1* 46.3
注与正常组比较，*p<0.05。
结果表明强力脑清素大剂量组能延长小鼠游泳时间，与正常
组比较具有显著性差异(P<0.05 )。
2. 3强力脑清素片对未成熟雌性小鼠体重、免疫器官及性器官发育 的影响
取44只NIH雌性小鼠，体重13 15g，随机分组，灌胃给药， 空白对照组灌胃给予等容积蒸馏水，每日一次，连续7日，于末次给 药后1小时，小鼠称重，并放血处死小鼠，剖取卵巢、子宫、胸腺、 脾脏精密称重，计算脏器系数，结果见表3。表3强力脑清素片对未成熟雌性小鼠体重、性器官及免疫器官的影响(i土S， n=ll)
组另IJ剂量 (g/kg)体重(g) 给药前 给药后胸腺系数 (mg/10g)脾脏系数 (rag/10g)子宫+卵巢系数 0ng/10g)
NS——11.50±0. 9014. 10±3. 1833. 22 ±18. 6851. 17±8. 1818. 05 ±2. 00
龟鹿补肾丸2.011.60±1. 1816. 80±1.72*64. 36±8. 03**53. 03±5. 3933. 37±30. 21
强力脑清素0. 4511. 50±1. 0816. 70±1.4163. 26±13. 20**55. 30±9. 5223. 57±4. 04**
强力脑清素0. 9011. 30±1. 1615. 90±1. 3863. 59±13. 51**51.84±3. 9028. 28士5. 17**
注:与正常组比较，*p<0.05， **p<0.01
结果表明与正常组比较，强力脑清素能显著性增加胸腺系数和 子宫卵巢系数(P<0.01)。龟鹿补肾丸也能增加小鼠体重、胸腺系数(
p〈0.05 0.01 )。
2.4强力脑清素片对戊巴比妥钠阈下剂量所致小鼠睡眠时间的影响 取50只NIH雄性小鼠，体重18 22g，随机分组，灌胃给药， 空白对照组灌胃给予等容积蒸馏水，于给药后1小时，各组小鼠腹腔 注射阈下剂量戊巴比妥钠37mg/kg，以小鼠翻正反射消失1分钟以上 为入睡指标，记录小鼠15min后入睡只数和睡眠时间，比较给药与正 常组的差异。结果见表3。
表4强力脑清素片对戊巴比妥钠阈下剂量所致小鼠睡眠时间的影响(i ±S)
组另ij剂量 (g/kg)动物只数 (只)入睡数 (只)入睡率 (%)睡眠时间 (min)
NS——1936.830.1 ±17.2
强力脑清素0.4512541.738.6±13. 1*
强力脑清素0.90191052.638.5±17. 2*
注与正常组比较，*p<0.05
结果表明强力脑清素对戊巴比妥钠阈下剂量所致的睡眠时间有 明显的延长，与正常组比较具有显著性差异(p<0.05 )。通过以上实验，结果表明，强力脑清具有镇静、安神，耐缺氧， 抗疲劳，增加性功能的功效。
实例二、强力脑清素片对去卵巢骨质疏松大鼠的防治作用
2.材料与方法 材料
(1)药物
本发明，由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供，新工艺批 号070512，
阳性药牡蛎碳酸钙片，广州白云山光华制药股份有限公司，批
号T32016;
IL-6检测试剂盒，解放军总医院科技开发中心放免所提供，批 号070330;
E2检测试剂盒，北京科美东雅生物技术有限公司提供，批号
070325。
(2)动物选用32周龄，清洁级、SD雌性大鼠72只，体重(380 土20g)，由中山医科大学实验动物中心提供。予普通饲料喂养， 参照AIN-93M啮齿类动物饲料配方，用适当的物质替换伺料中 来源于大豆的成分，以避免大豆异黄酮等植物激素对实验结果 的干扰。自由摄水，照明昼夜明暗交替时间为12-12，适应性喂 养7天。 (3)仪器
日本NORLAND双能骨密度测量仪，变异系数 CV<0.1%，
8扫描次数2次。
上海日环一厂SN-695B型智慧放免Y测量仪。CV〈1. 19%
方法造模方法参照文献，大鼠经腹腔注射30mg/kgBW的戊巴 比妥钠溶液麻醉，腹位固定后于腹中线距阴道口 3-4cm去毛，分 别用碘酒和酒精消毒，将稍干后切开皮肤和腹肌约2-3cm，切口 视野可见白色脂肪，拨开脂肪层找到子宫后，轻轻将一测子宫角 拉出，在其末端可见被脂肪团包裹的卵巢。分离脂肪团，便可见 到粉红的卵巢，以止血钳夹住卵巢，然后将卵巢下输卵管(包括 脂肪)用丝线结扎，剪除卵巢(检查是否完全剪除)，顺势将子宫 角送回腹腔中，同法剪除另侧卵巢。腹肌和皮肤分层缝合后，再 次消毒。最后经后肢肌肉注射2万U青霉素。假手术对照组(10 只)开腹剪除一小块脂肪后缝合。术后5天，动物恢复后开始分 组给药，分组情况见表。假手术对照组和卵巢切除组给予生理盐 水10ml/kg;切除卵巢+西药组(碳酸钙)给予碳酸钙0.2g/kg; 切除卵巢+低剂量强力脑清素组给予强力脑清素0.135g/kg (相当 于临床人用量的5倍)；切除卵巢+中剂量强力脑清素组给予强力 脑清素0.27g/kg (相当于临床人用量的IO倍)；切除卵巢+高剂量 强力脑清素组给予强力脑清素0.54g/kg (相当于临床人用量的20 倍)。每天灌胃给药一次， 一周给药6天，共给药16周。试验期 间，继续按照普通饲料喂养及饮水。 观察指标
(1)血清生化等指标的测定造模16周后股动脉取血，血样本 经处理后，分离血清，各组随机取10个样品进行放射免疫法测定血清雌二醇(E2)、白介素-6 (IL-6);完整取出右侧股骨，剥离
干净，称湿重。分离子宫，称重。计算每100g体重的子宫指数以
及股骨指数。
(2)骨密度将取出的右侧股骨用日本NORLAND双能骨密度 测量仪，扫描测量骨密度及骨矿含量。
结果
(1)骨密度的变化
表5可见，去卵巢16周后，卵巢切除组大鼠右股骨骨密度和 骨矿密度均明显低于假手术对照组，差异有显著性(PO.Ol)，表 明造模成功。与卵巢切除组比较，强力脑清素中剂量组和大剂量 组也可明显提高OVX大鼠股骨BMC含量(P<0.05-P<0.01)，大剂量 组可明显提高OVX大鼠股骨BMD的含量(P<0.05)。
表5.强力脑清素对雌性OVX大鼠股骨BMD、 BMC的影响(3f士s)
假手术组10—0.1426±0.0052**0.4318 ±0.0302**
卵巢切除组10—0.1302 ±0.00560.3792 ±0.0297
切除卵巢+牡蛎碳酸钙100.20.1304±0.00590.3693±0.02512
切除卵巢+强力脑清素小100.1350.1293 ±0.00520.38卯±0.0371
切除卵巢+强力脑清素中100.270.1335±0細80.4158±0雄6*
除卵巢+强力脑清素大100.540.1381 ±0.0088*0.4323 ±0.0432**
与模型组比较*p<0.05 ， **p<0.01 (2)血清E2和IL-6的变化
表6可见，去卵巢16周后，卵巢切除组大鼠血清&含量显 著低于假手术对照组，差异有显著性(P<0.05)，表明造模成功。 中药中剂量组及高剂量组E2含量明显高于模型组，差异有显著性 (P<0.05-P<0.01)。
右股骨
BMD BMC
(g/cm2) (g)表6.强力脑清素对雌性0VX大鼠E2和IL-6的影响(±s )
组别IL-6E2
n
(pg/ml)(pmol/L)
假手术对照组1081,59±41.52141.26±41.18*
卵巢切除组1061.68±35.2050.56± 14.07
切除卵巢+牡蛎碳酸钙1061.22±21.0671.74± 18.59
切除卵巢+强力脑清素小1067.68 ±14.2471,62±56.50
切除卵巢+强力脑清素中1059.02 ±55.2282.19±34.36*
切除卵巢+强力脑清素大1078,45±65.59107,26 土43.9(T
与模型组比较*p<0.05 ， **p<0.01
(3)子宫指数和股骨指数
表7可见，与假手术组比较，卵巢切除组子宫指数以及股骨 指数明显降低，具有统计学意义(P<0.05)，提示造模成功。与卵 巢切除组比较，高剂量组子宫指数明显增加(PO.05);高中低三 个剂量组股骨指数均明显增加(P<0.05)。
表7.强力脑清素对雌性OVX大鼠子宫指数和股骨指数的影响(7±s )
组别n子宫指数股骨指
(g/100g)(g飾g)
假手术对照组100. 3332±0. 1574*0. 336±0. 018*
卵巢切除组100. 0355±0. 00970. 282±0. 022
切除卵巢+牡蛎碳酸钙100. 0584±0. 04480. 304±0, 022*
切除卵巢+强力脑清素小100. 0522±0. 05760. 307±0. 023*
切除卵巢+强力脑清素中100. 0354±0. 00860. 310±0. 036*
切除卵巢+强力脑清素大100. 1008±0. 1107*0. 319±0. 047*
与模型组比较*p<0.05 ， **p<0.01
讨论
上述实验表明，与模型组比较，本发明可明显阻止大鼠血清E2 水平下降、右股骨湿重下降以及子宫指数的下降，表明本发明具有预 防更年期雌激素水平的降低和增加骨密度功能并能预防性器官的萎 縮，增强性功能。
实例三强力脑清素治疗骨质疏松症的临床观察1.临床研究 1. 1临床资料
1. 1. 1西医诊断标准骨质疏松诊断标准采用与本地女性的骨密 度峰值相比，减少2个标准差(SD)以上为骨质疏松症。本研究参考
中国成人腰椎骨密度值，女性峰值为1.004±0. 107g/cm2，在30 40 岁年龄段，标准差为0.107，故以0.790 g/cm2为骨质疏松诊断标准， 低于此值即为骨质疏松患者。除外继发性骨质疏松症、特发性骨质疏 松症及3个月内服用过影响骨代谢药物者。
1. 1. 2中医诊断标准①腰脊酸痛；②胫膝酸软；性欲低下；③ 耳鸣耳聋；④面色萎黄；⑤发脱齿摇；⑥自汗盗汗；⑦夜尿频数；⑧ 脉细无力，舌淡或舌紫。具备上述①②③外加2项者，诊为肾虚气血 不足证。
1. 1. 3病例选择1999年1月一2001年12月间，门诊确诊为原 发性骨质疏松症肾虚气血不足证患者32例，年龄50-80岁，平均64. 5 岁；女性绝经时间l-30年，平均12.8年。随机分为治疗组20例， 对照组12例，两组一般情况比较无明显差异(p>0.05)。
表12两组一般情况比较U土s)
项目强力脑清素治疗组仙灵骨葆胶囊对照组
年龄(岁)63.89±12. 9267, 02±10. 56
绝经年限(y)14. 01 ±9. 8212.95±10. 05
身高(cm)157, 56±9. 54156. 85±9. 02
体重(kg)52. 45土8. 2353. 78±8. 78
1. 2方法1. 2. 1治疗组给予强力脑清素片，每次3片，每天2次，连服6
个月。对照组给予仙灵骨葆胶囊(贵州同济堂制药有限公司生产，
批号040202)每次3粒，每日2次，连服6个月。两组观察期间停 服其它中药、止痛药与本病相关西药。
1. 2. 2 观察指标 ①BMD用Hologic-QDR-4500A型双能X线骨密 度仪(变异系数(CV)〈0. 1 %)分别于治疗前及治疗6个月后检测腰椎 正位(L2-L4)的骨密度。②骨钙素(BGP)用RIA法测定。③尿钙及 尿肌酐测定采用清晨空腹尿测定，并计算Ca/Cr比值，试剂盒由中 生公司提供，日立7170全自动生化仪测定。@雌二醇(E2)用RIA 法测定。⑤临床表现采用记分法(无症状记0分，症状轻或时而出现 记1分，症状反复出现或时轻时重记2分，症状持续出现或严重者记 3分；记录中医证前后变化的记分总和)。⑥观察不良反应。
1. 2. 3疗效判定标准①显效BMD值较前提高5%以上，生化指 标明显改善，中医证总积分下降^2/3。②有效BMD值较前提高 2%-4%，生化指标有所改善，中医证总积分下降》1/3。③无效BMD 值较前提高〈2%或继续下降，生化指标未改善或改善不明显，中医证 总积分下降〈1/3。
1. 2. 4统计学处理采用X2检验或t检验 1. 3结果
1.3.1临床疗效评定结果如表13所示，治疗组与对照组比较无 显著差异(p>0.05)。
13表13临床疗效比较
组别例数显效(例)有效(例)无效(例)总有效率(％)
治疗组2089385. 0%
对照组1264283. 3%
1. 3. 2骨密度变化观察结果如表14所示治疗组与对照组的 BMD值治疗后比治疗前都有所提高，两组间比较也无显著性差异。
表14两组治疗前后BMD的变化(3f±s)
组别例数治疗前治疗后
治疗组200. 663±0. 1020. 722±0. 095
对照组120. 682±0. 1060. 735 ±0. 098
1.3.3生化指标变化观察结果如表15所示，治疗后两组BGP较 治疗前比较略有降低，治疗后两组E2水平与治疗前比均有显著提高 (p〈0.05)， Ca/Cr的比值则有明显的降低。
表15生化指标变化比较表
治疗组 对照组
组别 -
治疗前 治疗后 治疗前 治疗后
E2(pg. m1—1) 50. 23±19.82~"~66. 41 ±20. 12* 51.23±21.21 65. 72±19. 45* BGP (ng.ml—1) 6.74±1.85 6.45±1.79 6.85±1.98 6.61±1.91
Ca/Cr 0. 184±0. 105 0.098±0.059* 0. 189±0. 121 0. 104±0.049*
注治疗后与治疗前比较*P〈0.05 2.结论
14临床观察表显示，强力脑清素能够升高血清中E2水平，降低
Ca/Cr，治疗后BMD也有所提高，能明显缓解临床症状，总有效率 达85%;无明显不良反应，与仙灵骨葆胶囊相当，但缓解腰背、四肢 骨痛的疗效较仙灵骨葆明显，表明强力脑清素能够有效地治疗骨质疏 松症，改善骨虚血瘀等症状。
以上对本发明所提供的由刺五加、五味子、鹿茸、甘油磷酸钠四 种药物组合物及其制备方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例 对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于 帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术 人员，依据本发明的思想，在具体实施方式
及应用范围上均会有改变 之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
权利要求
1.强力脑清素片在制备防治骨质疏松症药物中的用途。
2. 根据权利要求1所述的强力脑清素片在制备防治骨质疏松症 药物中的用途，其特征在于每50ml五味子流浸膏中，配有刺五提 取物126-157个重量单位、鹿茸2. 8重量单位、甘油磷酸钠35重量 单位，与适量药用辅料，共制成1000个制剂单位。
3. 根据权利要求2所述的强力脑清素片在制备防治骨质疏松症 药物中的用途，其特征在于所述的鹿茸是微粉，或者是用乙醇制成 的鹿茸含量10wtM的溶液。
4. 根据权利要求2所述的在制备防治骨质疏松症药物中的用途， 其特征在于所述的药用辅料是淀粉、糖粉或糊精。
5. 强力脑清素片在制备防止老龄动物和人性激素水平的降低， 抗衰老和增强性腺功能的药物中的应用。
6. 强力脑清素片在制备改善骨质疏松模型动物的骨密度、增加 骨矿含量中药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种强力脑清素片的新的医药用途。具体涉及强力脑清素片在制备防治骨质疏松症药物中的应用。这些应用包括在制备改善骨质疏松模型动物的骨密度、增加骨矿含量中药物中的应用，以及在制备防止老龄动物和人性激素水平的降低，抗衰老和增强性腺功能的药物中的应用。
文档编号A61K36/185GK101618072SQ20081012915
公开日2010年1月6日 申请日期2008年6月30日 优先权日2008年6月30日
发明者李楚源, 李淑如, 罗佩霞, 蔡越冬, 覃仁安, 黄竹英 申请人:广州白云山和记黄埔中药有限公司