专利名称：：地黄全药材用于预防和治疗高血脂和高血糖的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及地黄全药材或地黄提取物用于制备预防和/或治疗高血脂、高血糖等代谢异常疾病的药物的应用。
背景技术：
：随着社会经济的发展，生活方式的改变，高血脂、高血糖等代谢异常在全世界范围内有明显增加的趋势，由此可引起糖尿病、高血压、动脉粥样硬化及心血管疾病等疾病日益成为危害人们健康的突出问题，故对于开发能够预防和/或治疗高血脂、高血糖等代谢异常疾病的药物有着迫切需求。地黄为玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch的新鲜或干燥根块。中医临床用药中又将之分为鲜地黄、生地黄(干地黄)及熟地黄。据称鲜地黄偏于寒，具有清热生津之功效，生地黄可以凉血止血，熟地黄则用于滋阴补血。故地黄具有补血、凉血、调血之功，为血中之良药。常用于热病舌绛、内热消渴、肝肾阴虚，骨蒸潮热等症。近年来，国内外对地黄的化学成分及药理作用进行了许多研究，地黄当作用于内分泌系统时具有减轻糖皮质激素的效应，作用于心血管系统时可增强心肌收缩能力，作用于免疫系统时可显著增加外周血T淋巴细胞数量。此外，地黄还具有如抗辐射、止血、镇静、利尿、泻下等作用。在现有技术的基础上，需要进一步对全地黄的药理效果进行观察，发现其单个或多个有效组份以完善对其各种有效组份的保留，并全面显现地黄的药理效果。
发明内容本发明人经过研究出人意料地发现，地黄全药材及由其加工的地黄粉具有良好的预防和/或治疗高血脂、高血糖等代谢异常的功效，并发现乙醇提取物及梓醇含量大于18%的地黄提取物亦具有一定的预防和/或治疗高血脂、高血糖等代谢异常的功效。因此，本发明的一个方面涉及地黄全药材(粉)或地黄提取物用于制备预防和/或治疗高血脂、高血糖等代谢异常疾病的药物的应用。本发明的另一方面涉及制备地黄粉，包括鲜地黄、生地黄或熟地黄的方法，所述方法具有操作简便、可靠、重复性好等特点，且适合于大规模工业生产。本发明的另一方面涉及地黄乙醇提取物的制备方法。本发明的另一方面涉及其中梓醇含量等于或大于1Ww/w的地黄提取物的制备方法。本发明进一步的方面涉及由所述地黄粉或地黄提取物制成的各种药物剂型。本发明进一步的方面涉及由所述地黄粉或地黄提取物制成的保健食品。本发明所用的术语"等于或大于18%w/w地黄提取物"是指地黄干提取物中梓醇含量等于或大于18%w/w。具体来说，本发明的地黄粉可通过下述方法制备选用鲜地黄、生地黄或熟地黄用水洗净，所述的地黄药材质量均符合《中国药典》标准。然后将其干燥，粉碎，即得地黄全药材粉。更具体地，将鲜地黄全药材用水洗净，在60-90X:下真空干燥，粉碎过60至100目筛，即得地黄全药材粉。对于地黄乙醇提取物而言，其制备方法包括将地黄蒸透，粉碎，加三倍量95%乙醇搅拌提取，减压回收乙醇提取液，即得到乙醇提取物。对于梓醇含量大于18%地黄提取物而言，其制备方法包括将地黄蒸透，水提，醇沉，取上清液，减压回收醇溶剂，得到干提取物，经测定，其中梓醇含量约等于18%w/w，在本发明中又称为18%地黄提取物。用丙酮-水对其反复加工纯化，可得到其中梓醇含量更高的提取物，例如20%w/w、50。/。w/w及80。/。w/w的地黄提取物。上述地黄全药材粉或地黄提取物可按照药剂学上常规的制剂方法制成临床上可接受的剂型，如胶嚢剂、片剂、颗粒剂、丸剂等。例如，就本发明的地黄粉胶嚢剂的制备而言，可将如前述制备得到的本发明地黄粉直接或与一或多种胶嚢常用药学辅料混合后装入胶嚢壳制成胶嚢剂。就本发明的地黄粉片剂的制备而言，可将如前述制备得到的本发明地黄粉与一或多种常用片剂辅料，如淀粉、糊精、乳糖、糖粉、硫酸钙、微晶纤维素、甘露醇、硬脂酸镁、明胶浆、阿拉伯胶浆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低取代的羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮、海藻酸钠、聚乙二醇、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、滑石粉、微粉硅胶等按照常规片剂制备方法制成片剂。就本发明地黄粉颗粒剂的制备而言，可将如前述制备得到的本发明地黄粉与一或多种颗粒剂常用辅料，如糊精、枸橼酸、柠檬酸钠等按照常规颗粒剂制备方法制成颗粒剂。上述制剂均可采取Co"射线照消毒灭菌。具体实施例方式下列实施例将进一步说明本发明，但并不对本发明构成限制。实施例1地黄全药材粉的制备将鲜地黄根茎挖取后一周内用水洗净，在60-90。C下真空干燥，粉碎过60至100目筛，即得地黄全药材粉。实施例2地黄粉防治血脂水平异常的效果高血脂大鼠模型的制备取180-220g雄性Wistar大鼠50只，分出10只为正常对照组，喂以普通大鼠伺料，其余喂以特殊的高脂饲料(3%胆固醇，0.2%甲基硫氧嘧啶，80%猪油基础伺料)8周，制备高脂模型，按血清胆固醇含量随机分为模型对照组和给药组。自由饮水进食，每日光照12h,室温18-23。C，垫料每天换一次。给药方法将地黄粉用1°/羟曱基纤维素钠配制成混悬液，按2.5g地黄粉/kg体重灌胃给药，连续5周。观察指标采用商业试剂盒，按照操作说明测定血清中甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的含量。结果按照2.5g地黄粉/kg的剂量灌胃给药后，地黄粉对于血清总胆固醇，甘油三酯等均有显著的改善效果，且随着时间的延长，这种效果愈加明显(见表l-6)。表1.给药前各组血脂值(n-7)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>'与正常组比较*P<0.05,*#P<0.01表2.地黄粉灌胃1周血脂值(n-7)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与正常组比较*P<0.05,Hp<0.01;与模型组比较.P<0.05，"P<0.0表3.地黄粉灌胃2周血脂值(n=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与正常组比较#P<0.05,"P<0.01;与模型组比较:'P<0.05，"P<0.01表4.地黄粉灌胃3周血脂值(n=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与正常组比较*P<0.05，##P<0.01;与模型组比较*P<0.05，"P<0.01为显示本发明地黄粉与其提取物的效果不同，本发明人将本发明地黄粉与现有技术中制得的几种地黄提取物进行了药理学实验比较。实施例3本发明地黄粉或其制剂降血脂和血糖水平的效果高血脂高血糖大鼠模型的制备用链脲霉素(STZ)加喂高脂饲料诱导高血脂高血糖动物模型。取180-220g雄性Wistar大鼠70只，分出10只作为正常对照组，喂以普通大鼠饲料，其余经尾静脉注射50mg/kg链脲霉素(STZ)，挑选血糖值大于11.lmmol/L的大鼠，按照血糖值随机分组，分为模型对照组、地黄粉组、生地黄提取物组和18%地黄提取物组。喂以特殊的高脂饲料(3%胆固醇，0.2%甲基硫氧嘧啶，80%猪油，基础铜料)，自由饮水进食，每日光照12h，室温18-23TC，垫料每天换一次。受试药物A:地黄粉，其制备方法如实施例1。B:生地黄水提取物，如下制备将生地黄剪碎成约lcm3小块，用水提取2次，每次加5倍量水，浸泡过夜，加热80X:处理4小时，浓缩至每毫升含l克药材，备用。C:18%地黄提取物，如下制备将地黄蒸透切成lcm左右小片，水提取2次。第一次提取2小时，加6倍量水，第二次提取1.5小时，加5倍量水。合并两次提取液，过滤，减压浓缩至比重约1.8，加乙醇沉淀，乙醇含量达70。/。w/w。取上清液，减压回收乙醇，得到干提取物。此干提取物中梓醇含量约18%w/w。其中梓醇的含量可按照以下方法测定色i普条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1°/。磷酸溶液(1:99)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按梓醇峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取梓醇对照品适量，加甲醇制成每lml含0.3mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取供试品约0.3g，精密称定，置于100ml容量瓶中，加曱醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，即得。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各IOW，注入液相色谱仪进行测定。给药方法用1%羟甲基纤维素钠配制成混悬液，按照体重灌胃给药，地黄粉给药剂量为2.5g/kg，生地水提取物剂量为2.5g/kg，18%地黄提取物剂量为1g/kg，连续4周。观察指标采用商业试剂盒，按照操作说明测定血清中甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量。结果如表7所示，造模后，与正常组相比，各试验组大鼠血糖值显著升高(P〈0.01)，说明造模成功。其次，地黄粉组，生地水提取物组，18%地黄提取物组具有一定的改善效果，但地黄粉组自给药后1至4周的均优于其它二组。表8至表11显示，造模后，与正常组相比，各试验組大鼠血脂值显著改变(P〈0.01)，说明造模成功。其次，地黄粉组，生地水提取物组，18%地黄提取物组具有一定的改善效果，但地黄粉组自给药后1至4周的降血糖和降血脂效果均优于其它二组。特别地，对于总胆固醇，甘油三酯这两个重要指标，地黄粉组效果尤为特出。表7.地黄粉灌胃给药对高血糖、高血脂大鼠血糖的影响(n=7)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>表9.地黄粉灌胃给药2周对高血糖、高血脂大鼠血脂的影响(n=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>与正常组比较*P<0.05,"P<0.01;与才莫型组比较:'P<0.05，"P<0.01上述结果表明，在降血脂和降血糖方面，地黄粉、生地水提取物组以及18%地黄提取物均有效，以地黄粉的效果最佳。实施例4本发明地黄粉或其制剂对肝功异常的效果采用商业试剂盒，按照操作说明，测定了上述实施例6动物血清中血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量。如表12至表15所示，造模后，与正常组相比，各试验组大鼠肝功改变显著(P〈0.Ol)，说明制模成功。其次，地黄粉组和18%地黄提取物组的改善肝功效果优于生地黄水提取物组。表12.地黄粉灌胃给药1周高血糖、高血脂大鼠中血清转氨酶值(n-7)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>与正常组比较*P<0.05,*#P<0.01;与模型组比较'P<0.05，"P<0.01表14.地黄粉灌胃给药3周高血糖、高血脂大鼠中血清转氨酶值(n=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>与正常组比较*P<0.05,*#P<0.01;与模型组比较.P<0.05表15.地黄粉灌胃给药4周高血糖、高血脂大鼠中血清转氨酶值(n=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>与正常组比较sP<0.05，**P<0.Gl;与模型组比较'P<0.05因此，根据上述效果及安全性数据，可以判定地黄粉、18%地黄提取物更具实际应用价值.实施例5不同纯度地黄提取物降血糖的效果如上所述，18%地黄提取物具有一定的防治高血脂和高血糖的效果,用丙酮-水对其反复加工纯化，可得到梓醇含量更高的提取物，例如20%w/w、50。/。w/w及80%w/w的地黄提取物，并可保持或甚至提高效果。鉴于上述实验(如实施例6)表明，地黄对于高血脂或高血糖具有相联效果，因此观测二者之一即可了解其防治高血脂、高血糖的作用。四氧嘧啶致小鼠血糖升高模型的制备取80只健康KM小鼠，$，随机分出8只作为正常对照组。其余小鼠在禁食16h后，尾静脉快速注射新鲜配制的2%四氧嘧啶生理盐水溶液，剂量为60mg/kg。正常对照组小鼠在禁食16h后于尾静脉注射等体积生理盐水。上述小鼠经过72h的自由饮食后，于尾尖取血用血糖仪测定血糖值，挑选血糖值大于16.7mmol/L的小鼠作为血糖升高小鼠。实验分组取40只造模成功的小鼠按血糖值分层随机分为5组，每组8只，即模型对照组，80%纯度地黄提取物，50%纯度地黄提取物，20%纯度地黄提取物。动物给予标准小鼠饲料，自由每日光照12h，室温18-23。C，垫料每天换一次。给药方法kg的梓醇为统一标准剂量折算给药，以生理盐水配制成药液，按照体重灌胃给药，连续3周。观察指标小鼠血清血糖值。按照GLUCOCARDII血糖仪操作说明测定。结果如表16显示，造模后，与正常组相比，各试验组大鼠血糖值显著升高(P〈0.01)，说明造模成功。其次，80%，50%和20%纯度的地黄提取物口服给予2周均可不同程度的显著降低高血糖小鼠的血糖值，且具有纯度依赖关系。因此可以确定大于18%的地黄提取物即具有防治高血脂、高血糖的效杲。表16.不同纯度的地黄提取物对高血糖小鼠高血糖的影响(n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例6.不同剂量地黄乙醇提取物降血糖等效果四氧嘧啶致小鼠糖尿病，血糖升高模型的制备如上，试验随机分为6组，每组7只小鼠。给药方法，按不同剂量地黄乙醇提取物，以生理盐水配制成药液，按照体重灌胃给药，连续3周。结果如表17，18显示，造模后，与正常组相比，各试验组小鼠血清指标测量值显著改变，说明造模成功。而地黄乙醇提取物具有明显的效果，而且有效剂量范围颇宽。表17.地黄乙醇提取物对小鼠高血糖的影响(；±<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>与正常组比较'P<0.05，"P<0.01;与模型组比较'P<0.05，"P<0.01表18.地黄乙醇提取物对小鼠血清脂质及转氨酶的影响(；±s，n=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>与正常组比较'P<0.05，"P〈0.01;与模型组比较'P<0.05，"P<0.0权利要求1.地黄全药材用于制备预防和/或治疗高血脂、高血糖等代谢异常疾病的药物的应用。2.权利要求l的用途，其中所述的地黄全药材为地黄粉。3.权利要求1的用途，其中所述的地黄全药材为地黄提取物，且所述的地黄提取物为梓醇含量等于或大于18%w/w。4.权利要求l-3任一项的用途，其中所述的地黄为鲜地黄、生地黄或熟地黄。5.权利要求l-3任一项的用途，其中所述的地黄为鲜地黄。6.地黄粉的制备方法，所述方法包括选用鲜地黄、生地黄或熟地黄用水洗净，然后将其干燥，粉碎，即得地黄全药材粉。7.权利要求6的方法，所述方法包括将鲜地黄在60-90'C下真空干燥，粉碎并过60至100目筛。8.地黄提取物的制备方法，所述方法包括将地黄蒸透，7M，醇沉，取上清液，减压回收醇溶剂，得到干提取物，其中梓醇含量约等于18%w/w，进一步純化即可得到梓醇含量更高的提取物，或者将地黄蒸透，粉碎，加三倍量95%乙醇搅拌提取，减压回收乙醇提取液，即得到地黄的乙醇提取物。9.地黄制剂，其含有按照权利要求6或7所述方法制备的地黄粉或按照权利要求8所述方法制备的地黄提取物，以及一种或多种药剂学常用辅料。10.权利要求9所述的地黄制剂，其特征在于该制剂为片剂、胶嚢剂、颗粒剂或丸剂。11.保健食品，其含有按照权利要求6或7所述方法制备的地黄粉或按照权利要求8所述方法制备的地黄提取物，以及一种或多种常规食品添加剂。全文摘要本发明涉及地黄全药材粉或其提取物用于制备预防和/或治疗高血脂、高血糖等代谢异常疾病的药物的应用。本发明还涉及所述地黄粉或地黄提取物的制备方法。所述的地黄粉和地黄提取物可以按照药剂学上的常规方法制成各种剂型，如胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂等，或制成保健食品。本发明的地黄粉及地黄提取物的制备方法简单易行，适合于大规模生产。文档编号A61K9/20GK101385807SQ20081021190公开日2009年3月18日申请日期2008年9月9日优先权日2007年9月14日发明者卢兖伟,吴祖泽,唐仲雄,陈金龙申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所;北京三有利科技发展有限公司