专利名称：人参皂苷Re的抗休克作用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及人参皂苷Re的抗休克作用。
背景技术：
人参为珍贵药材之一。《神农本草经》就明确记载“人参主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目开心益智，久服轻身延年”。《本草汇言》人参补气生血，助精养神之药也。故真气衰弱，短促气虚，以此补之，如荣卫空虚，用之可治也。精神错乱，魂魄飞扬，以此敛之，如阳亡阴脱，用之可回也。惊悸怔忡，健忘恍惚，以此宁心，如心志懒怯，用之可壮也。目前从人参中提取出的成分有皂苷、多糖类、蛋白质等。人参皂苷(ginsenoside)为人参的主要有效成分之一，人参皂苷中人参三型皂苷Re(ginsenoside-Re)含量占总皂苷的23％，为无色针状结晶，mp 201～203℃，分子量947.12。因此人参皂苷Re，有可能是人参功能的代表。
国内外文献报道人参皂苷Re具有许多药理活性1.保护心脏功能人参皂苷Re能增加NO的生成量，激活cGMP依赖蛋白激酶，使肌凝蛋白轻链去磷酸化而产生平滑肌松弛作用，扩张血管改善心肌供血(Ethnopharmacol 2001；76(1)109-13；Pharmacol.2001，134(6)1159-65.)。人参皂苷Re还可以扩张冠脉，使心输出量增加。(沈阳药科大学学报，1995，12(2)130.)人参皂苷Re对内源性和外源性氧化剂所诱导的心肌细胞的氧化损伤具有保护作用(Pharmacol 2006，532(3)201-7.)，能显著抑制心肌缺血再灌注环境下中性粒细胞PMNs浸润和过氧化物酶MPO活性(临床心血管病杂志，2004，20(12)736-8.)。人参皂苷Re兼有钙通道阻滞作用和抗自由基作用，可使心室肌细胞呈现自发性博动的群落性和心脏肌细胞动作电位各参数减少(长春中医学院学报，1997，13(2)52-3.)。人参皂苷Re在体外对豚鼠心室肌细胞有一定的缩短其动作电位时程作用，但缩短的幅度很小，同时可抑制L型Ca2+通道并激活K+离子通道(European Journal of pharmacology，476(2003)35-44.)。人参皂苷Re能改善新生大鼠由乙醇所致的脑损伤，具有较强的恢复小脑生长的作用(Biol.Pharm.Bull，1994，17(2)270)。不同浓度的人参皂苷Re能够显著保护缺氧、缺糖、自由基、谷氨酸、H2O2等多种因素导致体外培养的PC12细胞损伤或死亡，对神经具有保护作用(Ethnopharmacol.2006，107(1)48-52.)。人参皂苷Re连续灌胃给药7天能显著延长结扎双侧颈总动脉和迷走神经小鼠存活时间，显著降低小鼠脑指数和脑含水量，降低脑组织MDA含量，提高脑内SOD水平；显著延长断头小鼠全脑缺血后喘息时间。人参皂苷Re可延长给药小鼠常压耐缺氧的存活时间，减少耗氧量，提高小鼠耐缺氧能力。人参皂苷Re能够通过提高大鼠脑缺血再灌注后脑组织神经元线粒体膜流动性、抗自由基损伤、抗氧化从而发挥对缺血神经元的保护作用。人参皂苷Re对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元具有保护作用(沈阳药科大学学报.2005，22(1)36-44.)。人参皂苷Re能使黑质致密部(SNc)的TH阳性神经元和黑质网状部(SNr)的GABA阳性神经元数目显著增多；增加PPD扩增产物，人参皂苷Re对MPTP诱致帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元具有明显的保护作用，其作用可能与改变GABA能神经元以及PFDmRNA表达水平，从而调节PD中直接回路和间接回路的兴奋-抑制平衡有关。实验证明，用人参皂苷Re预处理的小鼠，然后用顺铂处理30分钟，每24小时测定食物的摄入量和体重，共5天，发现kaolin摄入量减少。人参皂苷Re具有减弱顺铂诱导的异食癖作用。在对人参皂苷Re预处理72小时的乳腺癌MCF-7细胞用体外细胞增殖测定进行细胞计数时发现，人参皂苷Re并没有减弱顺铂的抑癌效应。(Cancer Chemotherapy AndPharmacology Cancer Chemother Pharmacol.2007，59(3)369-74)。通过建立NGF引导下鼠胚脊神经节体外培养模型的研究发现人参皂甙Re具有保护脊髓神经元和促进周围神经轴突生长作用(中国神经科学杂志，2000，16(4)345-8)浓度60μmol/L人参皂苷Re对小鼠皮层神经元缺氧损伤具有保护作用，且能减轻细胞损伤的形态学改变(南通医学院学报.2002，22(2)134-5)。采用Morris水迷宫法观察人参皂苷Re对大鼠学习记忆功能的影响并采用电生理学方法观察人参皂苷Re对大鼠突触长时程强化(LTP)作用的结果显示人参皂苷Re能显著对抗自然衰老引起的记忆获得障碍，对麻醉大鼠海马齿状回基础突触传递有增强作用，且能形成突触长时程增强形象，而该作用可能与其增强基础突触传递、促进LTP形成有关(中药新药与临床药理.2007，18(1)20-2)。
人参皂苷Re在条件培养液中，促进小鼠骨髓细胞集落形成和3H-TdR摄入作用，显示其外源性促进小鼠骨髓细胞增殖活性(白求恩医科大学学报，1997，23(2)141)。人参皂苷Re能够显著增强在卵清蛋白(OVA)免疫的鼠中Con A，LPS和卵清蛋白所诱导的脾细胞的增殖，与OVA对照组相比，人参皂苷Re能够明显增强血清中OVA特异的IgG，IgG1和IgG2b的抗体滴度。实验结果显示，在抗OVA的鼠中，对特异性抗体和细胞内的免疫应答有明显的辅助效应(Chemistry & Biodiversity[ChemBiodivers]2006，3(7)718-26)。人参皂苷Re对体外培养的人胚肺形成纤维细胞，具有可促进衰老细胞的增殖的作用(天然产物研究与开发，1996，8(4)3)。人参皂苷Re可增加高龄人胚肺成纤维细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)和丙酮酸脱氢酶(PVO)的活性。并降低HeLa细胞内几种酶的活性(中药药理与临床，1997，13(6)18.；天然产物研究与开发，1996，8(4)3)。人参皂苷Re能够增加培养基中分泌型脂酶活性(Biol.Pharm.Bull，1996，60(12)1962-65)。人参皂苷Re有益于精子的获能和顶体反应，这一作用是通过NO/cGMP/PKG途径完成的(Molecular Reproduction AndDevelopment.2007，74(4)497-501)。人参皂苷Re对醋酸泼尼松造成的血清总胆固醇和甘油三酯的升高均有一定抑制作用，能够减轻PA的副作用引起的血脂升高(中国中药杂志.1997，22(3)174-6)。日本专利93p-2401公开人参皂苷Re能显著对抗CHCl3、CaCl2-Ach、哇巴因、脑垂体后叶制剂及结扎左冠状动脉前降支诱发的心律失常，提高兔左心室致颤阈；本研究小组申请的中国专利(专利号200410021113.6)公开人参皂苷Re对1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶致帕金森病小鼠具有保护多巴胺能神经元形态与功能，抑制黑质星形胶质细胞增生，调节脑内阿片肽，抗黑质神经元凋亡等作用。本研究小组申请的另一项中国专利(专利号200810010677)公开人参皂苷Re对神经细胞的保护作用。
综上所述，人参皂苷Re具有抗心肌氧化，保护心功能，抑制黑质星形胶质细胞增生、调节脑内阿片肽和抗黑质神经元凋亡等方面作用，对脑缺血再灌注所造成损伤具有保护作用，能够改善微循环，提高机体免疫功能等。这些文献资料暗示人参皂苷Re具有抗休克效果。
休克(shock)是涉及临床各科常见的危重病症，它是微循环功能障碍为主要特征，并导致多器官功能衰竭的综合症，很多疾病到垂危时均可产生休克。休克时发生两个关键问题，一方面微循环灌流障碍，另一方面细胞对缺血缺氧的耐受性低，导致休克抢救的成功率低，抗休克治疗始终是现代医学研究的重大课题。70年代曾经用升压的办法抢救休克，但效果不佳，80年代以后，又改用解痉的办法，使休克抢救的成功率有所提高，但还是有一多半休克患者死亡。每年因休克抢救无效死亡的病例有4000万人以上。因此，休克的治疗到目前还没有解决。
能不能在改善微循环灌流的同时增加细胞对缺血缺氧的耐受性？寻找古今中外的治疗药物，发现人参自古就用来回阳救逆，治疗休克，现代研究证明人参皂苷Re具有较强的抗氧化活性，可增加细胞对对缺血缺氧的耐受性。因此，将人参作为抗休克辅助药，将有助于休克的抢救。
发明内容
本发明的目的是提供一种人参皂苷Re的医药新用途，即人参皂苷Re在辅助抗休克提高休克抢救的成功率中的应用。
本发明的是通过如下技术方案实现的 1.人参皂苷Re提取方法 A.人参原料浸泡及煎煮 (A)按人参原料与自来水的重量份数比为1∶8，1∶16向人参原料中加水，常温浸泡5小时，然后，将两者的混合物加热至100℃，保温4小时，之后，滤渣取液 (B)按人参原料与水的重量份数1∶10向(A)滤出的渣中加入自来水，并将两者混合物加热至100℃，保温2.5小时，之后，滤渣取液。
(C)按人参原料与水的重量份数1∶8向(B)滤出的渣中加入自来水，并将两者混合物加热至100℃，保温1.5小时，之后，滤渣取液。
B液体浓缩 将制取的提取液体混合一起后减压浓缩，直至其浓缩至约3升为止。
C吸附、洗脱 使浓缩后的液体通过经活化处理后的HPD-100大孔树脂柱，使液体中的人参皂苷Re被树脂柱吸附，并弃去流出液，再用3升蒸馏水冲洗树脂柱，弃去流出液，继用浓度为35％的乙醇清洗树脂柱，使吸附于其上的人参皂苷-Re被完全洗脱为止，并收集洗脱液，减压回收乙醇至干，得人参皂苷-Re粗结晶。
D重结晶 将获得的人参皂苷-Re粗结晶用其重量100倍的乙醇-水重结晶即得人参皂苷-Re成品。
2人参皂苷Re抗休克作用的药理学研究 2.1实验动物与分组 Wistar大鼠体重220-260克雌雄各半，沈阳药科大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(2003)0008号，动物随机分成6组，每组12只，分别为假手术对照组、模型组、654-2组、人参皂苷Re注射液低剂量组、人参皂苷Re注射液中剂量组、人参皂苷Re注射液高剂量组。
2.2实验方法 2.2.1肠系膜上动脉夹闭性休克(SMAO)模型的建立 大鼠随机分成6组，每组12只，分别为假手术对照组、模型组、654-2组、人参皂苷Re低剂量组、中剂量组和高剂量组。大鼠实验前禁食12h，自由饮水，用25％乌拉坦0.1g/100g腹腔注射麻醉，固定后行颈总动脉插管，通过血压换能器连接Pc-LAB系统，记录血压和心率。于上腹部正中切口，长约2cm，用无菌棉签将内脏轻轻推向左下腹，暴露出脊柱腹膜后组织以及肠系膜上动脉，分离该血管周围组织，在肠系膜上动脉根部用一个套硅胶管小动脉夹钳夹，观察2min待确定肠系膜上动脉血流被阻断，肠壁苍白，血管无搏动，夹闭伤口120min后开腹，打开动脉夹，恢复肠系膜上动脉血流供应，肠壁变红，血管恢复搏动，再关腹观察，整个手术过程中，保持室温20-25℃，维持动物肛温在37℃左右，假手术对照组同样开腹，不钳夹血管，仅轻扰腹腔后关腹。
给药方法人参皂苷Re组分别按40、80、160mg/kg，剂量用药，模型组给予等量生理盐水，阳性药组给予654-2注射液20mg/Kg，溶于等量生理盐水，分别于夹闭同时腹腔注射。
2.2.2失血性休克模型的建立 将猫随机分成6组，每组8只，分别为假手术对照组、模型组、多巴胺组、人参皂苷Re低剂量组、中剂量组和高剂量组。实验前动物禁食过夜，自由饮水。用25％乌拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，背位固定后，分离右侧颈动脉、股动脉、股静脉，股静脉插管以给药，全身肝素化(肝素生理盐水500U/kg)，股动脉插管后经三通管一端连接于储血瓶供放血用，颈动脉连接于PC-Lab生理记录仪监测收缩压、舒张压、平均动脉压，动物放血(约10min)使平均动脉压降至5.3kPa(40mmHg)，记为休克后0min，并维持该血压90min，在休克后0分钟各组分别给予相应的药物治疗(股静脉滴入)。随后将动物自身血液回输。观察动物状态和考察指标至液体回输后2小时。假手术对照组手术如前，但不放血。
2.2.3烫伤性休克模型 将大鼠随机分成6组，假手术对照组，模型组、人参皂苷Re低剂量组、中剂量组和高剂量组及多巴胺组。动物禁食不禁水15小时，用25％乌拉坦0.1g/100g腹腔注射麻醉，剪去背部从自肩至髋30％体表面积的毛发，用固定器固定，置98℃沸水18s造成III度烫伤，保持脱毛区以外的部位不与水相接触，观察并记录动物的状态。
给药方法人参皂苷Re组分别以50、100、200mg/kg剂量给药，模型组给予等量生理盐水，阳性药组给予地塞米松注射液20mg/kg，于烫伤后10分钟给予腹腔注射。假手术对照组同样麻醉并剪去背部自肩至髋30％体表面积毛发，但不进行烫伤。
2.24.4胰岛素性休克模型 将小鼠随机分成4组，分别是对照组、人参皂苷Re低剂量组、中剂量组和高剂量组。
动物禁食不禁水20小时，保持室温20-25℃，用微量进样器(100微升)抽取胰岛素原液按0.1U/g，给小鼠皮下注射，20分钟后腹腔注射给药，对照组给予生理盐水0.1ml/10g，给药组分别给予人参皂苷Re 50，100，200mg/kg，观察给药后240分钟内动物首次发生惊厥和死亡的时间。
2.3标本采集与处理 2.3.1肠系膜上动脉夹闭性休克(SMAO)的标本采集与处理 2.3.1.1观察休克2小时动物死亡率 观察动物休克后的一般情况，记录2小时各组动物的死亡数，计算死亡率。
2.3.1.2血液动力学变化 2.3.1.2.1记录SMAO大鼠的平均动脉压(MAP) 按照设定时间点，各组动物于夹闭前，再灌注后0，5，10，15，20，30，45，60，90，120MI N记录动物的平均动脉压，把动物最初的MAP作为100％，以后每个时间点的MAP与之相除得到百分数，对百分数进行统计。开夹后，动物的血压都有所下降，下降的幅度一般为最初血压的60％左右，本试验规定，血压下降至原血压的2/3以下的动物为造模成功，否则被视为无效模型，弃去。
2.3.1.2.2记录SMAO大鼠的心率 记录每个时间点的心率数进行统计。在一定范围内，如果每次心搏出量不变，心率增快，则心排出量增加，但如果心率过大，舒张期过短，心室充盈时间过短，充盈不足，每次心搏出量也随之减少，导致心排出量降低。
2.3.1.3SMAO大鼠血清生化指标的测定 于夹闭前、再灌注后120MI N抽取动脉血约0.5ml，2500rpm×5min离心，取上清，进7170型自动生化分析仪测定BUN、Cr、GPT、GOT、LDH、CK和GLU。
2.3.1.4休克2小时血清一氧化氮(nitric oxide，NO)的测定于再灌注后120min抽取动脉血离心，按一氧化氮试剂盒步骤操作。具体操作 混匀，37℃准确水浴60分钟 充分斡旋混匀30秒，室温静置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取上清显色。
混匀，室温静置10分钟，蒸馏水调零，550nm，0.5cm光径，测各管吸光度值 计算公式
2.3.1.5SMAO大鼠组织抗氧化指标的测定 2.3.1.5.1大鼠小肠组织丙二醛(MDA)的测定 休克2小时后处死动物(或动物死亡后)，迅速解剖，选取回盲瓣上端6厘米处的小肠作为取材，用锐利刀片割取小肠组织约0.5g。称重，用生理盐水制成10％的组织匀浆，取0.1ml上述组织匀浆，依次加入8.1％十二烷基硫酸钠(SDS)0.2ml，pH 3.5的醋酸缓冲液1.5ml，1％硫代巴比妥酸(TBA)1.5ml，蒸馏水1.0ml，沸水浴40分钟，冷却后3000rpm离心15分钟，取上清液，721分光光度计于532nm波长处测定A值。按下式计算每克组织MDA的生成量 C＝A×D/ε(μmol/g) 其中A为吸光度，ε为消光系数(156000L/mol/cm)，D为稀释倍数。
2.3.1.5.2大鼠肝、肾组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的测定 采集动物休克2小时血样，将动物处死，取肝脏和肾脏各约0.5g。按谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒操作。
取组织用冰冷的生理盐水漂洗，拭干，称重，制成10％组织匀浆， (1)酶促反应 37℃水浴预温5分钟 37℃水浴准确反应5分钟 混匀，3500～4000转/分，离心10分钟，取上清显色。
(2)显色反应 混匀，室温静置15分钟，蒸馏水调零，412nm，1cm光径，测各管吸光度值
2.3.1.6SMAO大鼠肺组织含水率及支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白的测定 肠缺血再灌注导致的多种脏器功能障碍中以呼吸衰竭最为常见，取右肺肺组织，吸干后称湿重，60℃烤箱烘烤48h，再称干重。含水率＝(湿重-干重)/湿重×100％；收集全部支气管肺泡灌洗液(bronchiaalveolus lung fluid，BALF)离心，1000rpm，10min，取上清用考马斯亮兰法蛋白定量(g/L)。
支气管肺泡灌洗液收集方法从气管插入输液用塑料细管至左主支气管，经左主支气管行左肺支气管肺泡灌洗。用生理盐水5ml分3次灌洗，回收率80％-90％，收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。
2.3.2失血性休克猫的标本采集与处理 2.3.2.1失血性休克猫血压的测定 观察动物放血、回输液体的一般情况，记录各组动物在休克前、休克后0分钟及复苏后30、60、120分钟的收缩压、舒张压、平均动脉压。
2.3.2.2失血性休克猫血气分析的测定 各组动物均于放血前、休克0分钟和复苏120分钟抽取动脉血标本约1ml进血气分析仪测定血气(血气标本6小时内测定)，标本隔绝空气。记录pH、BE、HCO3-act、PCO2、PO2等指标。
2.3.2.3失血性休克猫复苏后血常规的测定 各组动物均于复苏120分钟抽取动脉血标本约1ml，肝素抗凝后进自动分析仪测定血常规。记录血红蛋白、白细胞计数。
2.3.2.4失血性休克猫血清丙二醛(MDA)的测定 各组动物均于复苏120分钟抽取动脉血3500～4000转/分，离心10分钟，取上清待测MDA。
2.3.2.5失血性休克猫血清乳酸(LD)的测定 各组动物均于复苏120分钟抽取动脉血，3500～4000转/分，离心10分钟，取上清待测乳酸。
混匀，37℃水浴准确反应10分钟 混匀，530nm，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值
2.3.2.6组织病理标本的制备 各组动物复苏2h被处死后迅速开胸，取肺脏、肝脏各约1.0克，存于福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色观察。
2.3.3烫伤性休克大鼠标本的采集 2.3.3.1烫伤后3小时大鼠红细胞压积(Hct)的测定 观察并记录动物的状态。分别于烫伤后3小时收集大鼠静脉血约0.5ml，抗凝后检测Hct。
2.3.3.2烫伤后3小时大鼠心肌酶的测定 于烫伤后3小时收集大鼠静脉血约0.5ml，3500～4000转/分，离心10分钟，分离血浆后进全自动生化分析仪测定血浆CK-MB、LDH、α-HBD等的变化。
2.3.4胰岛素性休克的记录 观察给药后240分钟内动物的一般情况，记录小鼠首次发生惊厥和死亡的时间。
3统计学处理 本实验数据均采用均数±标准差(mean±s)表示。采用SPSS 13.0统计软件包处理，多组间比较用方差分析，两两比较采用配对t检验。
4结果 4.1人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克的影响 4.1.1人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠死亡率的影响夹闭肠系膜上动脉后，肠组织循环障碍，血液淤积，因肠组织长时间的缺血缺氧，引起肠壁细胞坏死和通透性增加，大量体液从肠腔丢失，肠道内的细菌代谢产物和毒素进入血液，加上肠缺血再灌注生成大量自由基，启动脂质过氧化反应，导致毒血症，使动物死亡。结果从
图1可以看出，休克后2小时内，除假手术对照组外各组均出现动物死亡，但模型组动物死亡过半，人参皂苷Re不同剂量组及654-2组动物死亡率明显低于模型组，在10％-20％左右，显示人参皂苷Re能明显降低SMAO大鼠的死亡率(表4)。
表4.人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠死亡率的影响
与模型组比**p＜0.01，与假处理组比#p＜0.01 表5.人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠平均动脉压％的影响
表内数据为平均动脉压(mmHg)，与模型组比*p＜0.05，**p＜0.01，与假处理组比#p＜0.05，##p＜0.01 4.1.2人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血液动力学的影响 4.1.2.1人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠平均动脉压的影响 肠系膜上动脉夹闭120分钟后，假手术对照组血压略有降低，降至原平均动脉压的80％左右，模型组平均动脉压降至原平均动脉压的2/3以下，显著低于假手术对照组，进入休克状态，虽然在10分钟后血压代偿性回升，但从休克第20min起，模型组平均动脉压开始进行性下降，而人参皂苷Re不同剂量组与654-2组从休克后第30min至120min各时间点的平均动脉压均显著高于模型组(表5)，表现为稳定而持久的代偿性变化。
4.1.2.2人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠心率的影响 休克后各组动物的心率随时间逐渐下降，但各组之间相比均无显著性差异。心率下降的原因主要考虑为麻醉的影响、心肌受损以及电解质紊乱，如高血钾、低血钙等。
4.1.3人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清生化指标的影响 4.1.3.1人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清尿素氮和肌酐的影响 表6人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清尿素氮和肌酐的影响
与模型组比*p＜0.05，**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 由表6可见，休克前各组动物尿素氮和肌酐无显著性差异，休克2小时模型组动物尿素氮和肌酐显著高于假手术对照组，显示休克后肾功能受损，血中尿素氮和肌酐含量升高。与模型组相比，人参皂苷Re中、高剂量能明显降低血清尿素氮的含量，人参皂苷Re中剂量能明显降低血清肌酐的含量。但各给药组并不能使尿素氮和肌酐降至正常水平。
4.1.3.2人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的影响 表7人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的影响
与模型组比**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 由表7可见休克前各组血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶无显著性差异，休克2小时模型组二者含量显著高于假手术对照组，显示休克后肝细胞受损，细胞膜破裂，谷丙转氨酶和谷草转氨酶释放入血。与模型组相比，人参皂苷Re中剂量组能明显降低血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量。但各给药组并不能使谷丙转氨酶和谷草转氨酶恢复至正常水平。
4.1.3.3人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶的影响 由表8可见，休克前各组动物血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶无显著性差异，休克2小时模型组二者含量显著高于假手术对照组，显示休克后细胞受损，细胞膜破裂，乳酸脱氢酶和肌酸激酶大量释放入血。与模型组相比，人参皂苷Re低、中剂量组能明显降低血清乳酸脱氢酶的含量。显示人参皂苷Re具有稳定细胞膜、保护受损细胞的作用。但人参皂苷Re各给药组并不能降低血中肌酸激酶的含量。
表8人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶的影响 与模型组比*p＜0.05，**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 4.1.3.4人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血糖的影响 表.9人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血糖的影响
与模型组比，**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 由表9可见，休克前各组动物血糖无明显差异，均在4mmol/l左右，休克2小时后模型组血糖升高，显著高于假手术对照组，说明休克后由于缺血缺氧，有氧代谢障碍，热量产生不足，机体为满足热量的需要就大大加强无氧代谢，必然要消耗更多的葡萄糖，同时，休克也是一种应激，血糖随之升高。但人参皂苷Re给药组及654-2组的血糖与模型组无显著性差异。
4.1.3.5人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清一氧化氮的影响 表10显示休克2小时，模型组血清一氧化氮的水平明显高于假手术对照组，说明休克后由于毒素、细胞因子及炎症介质等的诱导，一氧化氮大量生成，与模型组相比，人参皂苷Re能明显降低血清的一氧化氮值，但Re高剂量组无此作用。
表.10人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠血清NO的影响
与模型组比*p＜0.05，与假处理组比##p＜0.01 4.1.4人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠抗氧化作用的影响 4.1.4.1人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠小肠组织丙二醛的影响 表.11人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠小肠丙二醛的影响
与模型组比*p＜0.05，与假处理组比##p＜0.01 表11可见，肠缺血再灌注损伤2小时后，由于脂质过氧化损伤，模型组小肠组织丙二醛显著高于假手术对照组。与模型组相比，人参皂苷Re中剂量组小肠组织丙二醛显著降低，但仍然显著高于假手术对照组。
4.1.4.2人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠肝脏及肾脏组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的影响 表12人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠肝脏及肾脏组织谷胱甘肽过氧化物酶的影响
与模型组比，*p＜0.05，与假处理组比##p＜0.01 由表12可见，休克2小时，模型组肝、肾组织的GSH-PX显著低于假手术对照组，显示了肠缺血再灌注损伤2小时后，组织的GSH-PX含量明显下降。人参皂苷Re中、低剂量组与654-2组的肝组织GSH-PX明显高于模型组，其有增加缺血再灌注后肝组织内GSH-PX水平的作用，但肾脏组织的GSH-PX各给药组与模型组相比无显著性差异。
4.1.5人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠肺组织含水率及支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量的影响 表.13人参皂苷Re对肠系膜上动脉夹闭性休克大鼠肺组织含水率及支气管肺
与模型组比*p＜0.05，，**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 表13显示休克2小时后，模型组肺组织含水率及肺泡灌洗液的蛋白含量明显高于假手术对照组，表明休克后动物肺组织水肿和炎性渗出，二者明显升高，人参皂苷Re各剂量组肺组织含水率均明显低于模型组，人参皂苷Re中、高剂量组支气管肺泡灌洗液的蛋白含量明显低于模型组，表明了人参皂苷Re具有减轻肺水肿和炎性渗出的作用。
4.2人参皂苷Re对猫失血性休克的影响 4.2.1失血性休克猫的一般状况 表.14失血性休克猫的一般状况的影响(mean±s，n＝8)
与模型组比p＞0.05，与假处理组比p＞0.05 由表14可见，几组动物的体重、放血总量、放血时间等比较P＞0.05，没有显著性差异，说明两组动物在性别、体重、放血总量、放血时间上具有可比性。
4.2.2人参皂苷Re对失血性休克猫血液动力学的影响 4.2.2.1人参皂苷Re对失血性休克猫收缩压(mmHg)的影响 表.15人参皂苷Re对失血性休克猫收缩压(mmHg)的影响(mean±s，n＝8)
与模型组比，*p＜0.05，**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 由表15可见，放血前各组动物收缩压无显著性差异，放血后，除假手术对照组外各组收缩压均降至68mmHg左右，假手术对照组的收缩压随时间改变略有下降，液体回输后，收缩压逐渐回升，但模型组各时间点的收缩压均明显低于假手术对照组，人参皂苷Re低、中、高剂量组及多巴胺组收缩压回升较快，至再灌注60分钟，上述三组收缩压显著高于模型组。再灌注120分钟时，各组收缩压有所下降，人参皂苷Re中剂量及多巴胺组收缩压仍显著高于模型组。表明人参皂苷Re具有升高失血性休克动物的收缩压的作用。
4.2.2.2人参皂苷Re对失血性休克猫舒张压(mmHg)的影响 表.16人参皂苷Re对失血性休克猫舒张压(mmHg)的影响(mean±s，n＝8)
与模型组比，*p＜0.05，与假处理组比##p＜0.01 表16可见，放血前各组动物舒张压无显著性差异，放血后，除假手术组外各组舒张压均降至28mmHg左右，假手术对照组的舒张压随时间改变略有下降，随着液体的回输，舒张压逐渐回升，但休克后模型组各时间点的舒张压均明显低于假手术对照组，至再灌注120分钟时，模型组舒张压逐渐下降，而人参皂苷Re中、高剂量组持续增高，显著高于模型组。表明人参皂苷Re具有升高失血性休克后动物的舒张压的作用。
4.2.2.3人参皂苷Re对失血性休克猫平均动脉压(mmHg)的影响 平均动脉压是指一个心动周期中每一瞬间动脉血压的平均值，等于舒张压+(收缩压-舒张压)/3。
表.17人参皂苷Re对失血性休克猫平均动脉压的影响(mmHg，χ±s，n＝8)
与模型组比，*p＜0.05，**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 由表17可见，放血前各组动物平均动脉压无显著性差异，放血后，除假手术组外各组收缩压均降至40mmHg左右，随着液体的回输，平均动脉压逐渐回升，但各组均无显著差异。至再灌注60分钟，人参皂苷Re中、高剂量及多巴胺组平均动脉压回升较快，显著高于对照组。再灌注120分钟时，各组平均动脉压均有所下降，人参皂苷Re中、高剂量及多巴胺组平均动脉压仍显著高于对照组。
4.2.3人参皂苷Re对失血性休克猫血气及血常规的影响 4.2.3.1人参皂苷Re对失血性休克猫pH值的影响 表18人参皂苷Re对失血性休克猫pH值的影响(χ±s，)
n＝8与模型组比，*p＜0.05，与假处理组比##p＜0.01 由表18可见，两组动物在休克期与休克恢复期pH值均呈下降趋势，所有动物均出现明显的代谢性酸中毒；人参皂苷Re中、高剂量组及多巴胺组能改善机体代谢性酸中毒的状态，pH值明显高于对照组。
4.2.3.2人参皂苷Re对失血性休克猫血气分析其他指标的影响 表19人参皂苷Re对失血性休克猫血气分析其他指标的影响(χ±s，n＝8)复苏120min
与模型组比，*p＜0.05，与假处理组比##p＜0.01 由表19可见，实验结果显示，休克复苏2小时末，模型表现为代谢性酸中毒伴呼吸性碱中毒，其中人参皂苷Re中、高剂量组及多巴胺组的BE负值小于模型组，HCO3-显著高于模型组，表明人参皂苷Re可以改善机体代谢性酸中毒的状态。各组的PCO2值及氧分压比较无统计学差异。
4.2.3.3人参皂苷Re失血性休克猫血常规的影响 表20人参皂苷Re失血性休克猫血常规的影响(χ±s，n＝8)
与模型组比，*p＜0.05，**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 由表20可见，休克复苏2小时各组Hct无明显差异。人参皂苷Re中剂量组血红蛋白显著高于对照组，表明人参皂苷Re中剂量可以提高休克复苏后血红蛋白的含量，改善了器官组织的供氧障碍。人参皂苷Re各剂量组白细胞数均显著低于对照组，表明人参皂苷Re具有抗炎作用，减轻了血管内皮的损伤，改善了休克所致的微循环障碍。
4.2.4人参皂苷Re失血性休克猫血清乳酸及MDA的变化 4.2.4.1人参皂苷Re失血性休克猫血清MDA的影响 表21人参皂苷Re失血性休克猫血清MDA的影响(χ±s，n＝8)
与模型组比，*p＜0.05，与假处理组比##p＜0.01 由表21可见，人参皂苷Re各给药组及多巴胺组血清MDA均显著低于对照组。表明人参皂苷Re有抗氧化、抗自由基、抑制脂质过氧化物生成、稳定生物膜的作用，减轻了细胞结构在休克过程中的损害，保护细胞功能，从而避免或减轻重要脏器的损伤，有利于脏器功能的恢复，使休克得以纠正。
4.2.4.2人参皂苷Re对失血性休克猫血清乳酸(LD)的影响 休克复苏2小时模型组血清LD显著高于假手术对照组，表明了休克后组织由于缺血缺氧，加剧无氧代谢，导致酸性产物堆积，人参皂苷Re中、高剂量组与654-2组的血清LD明显低于模型组，提示人参皂苷Re可以改善机体的缺氧状态。
4.3人参皂苷Re对烫伤性休克大鼠的影响 4.3.1人参皂苷Re对烫伤性休克大鼠Hct的影响 严重的烫伤、剧烈的疼痛等超强刺激传入中枢，引起交感神经强烈兴奋，烫伤后毛细血管的通透性增加，血浆成分大量丧失，有效循环血量减少，红细胞压积增加。表22显示休克3小时，模型组Hc t显著高于假手术对照组，表明烫伤后毛细血管的通透性增加，血浆成分大量丧失，有效循环血量减少，Hc t增加，人参皂苷Re中、高剂量组及多巴胺组HCT显著低于模型组，表明人参皂苷Re中剂量、高剂量组可以提高休克后的有效循环血量，改善了器官组织的供氧障碍。
表.22人参皂苷Re对烫伤性休克大鼠Hct的影响(mean±s，n＝8)
与模型组比，*p＜0.05，与假处理组比##p＜0.01 4.3.2人参皂苷Re对烫伤性休克大鼠心肌酶的影响 表23人参皂苷Re对烫伤性休克大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK-MB)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBD )的影响(mean±s，n＝8)
与模型组比，**p＜0.01，与假处理组比##p＜0.01 结果显示休克3小时，模型组大鼠血清LDH、CK-MB、α-HBD较假手术对照组明显升高，显示了休克后动物的心肌受到损害，心肌细胞破裂，LDH、CK-MB、α-HBD等大量释出，从表.20我们看出人参皂苷Re中、高剂量组LDH、CK-MB、α-HBD显著低于模型组，显示了人参皂苷Re具有稳定心肌细胞膜的作用(表23)。
4.4人参皂苷Re对胰岛素性休克小鼠的影响 4.4.1人参皂苷Re对胰岛素性休克小鼠惊厥时间和死亡时间的影响 结果显示人参皂苷Re中剂量组可以明显延长小鼠死亡时间，但各给药组对首次惊厥时间无影响(表24)。
表24.人参皂苷Re对胰岛素性休克小鼠惊厥时间和死亡时间的影响(mean±s)
与模型组比，*p＜0.05 以上结果提示，人参皂苷Re可改善休克动物的状态，降低休克动物的死亡率，对失血性休克、感染性休克等模型都展示出良好的治疗效果。
试验结果表明，人参皂苷Re的最小有效量为40mg/kg，LD50为400mg/kg。
人参皂苷Re可以和药学上可接受的载体混合制备临床上可以接受的各种剂型，如片剂、胶囊、注射剂、颗粒剂等。
人参皂苷Re可改善休克动物的状态，降低休克动物的死亡率，在临床上可用于休克患者，产生辅助抗休克作用，以提高休克抢救的成功率。
具体实施例方式 下述实施例是为了更好的阐述本发明，并不是用来限制发明的范围。
实施例1人参皂苷Re注射液 处方(按1000支计算) 人参皂甙Re20g 丙二醇300g 聚乙二醇400 150g NaCl 9g 加注射用水至 2000ml 制法 称取处方量的药物、丙二醇/聚乙二醇和1000ml注射用水，混合溶解后，加入0.1％活性炭，搅拌10分钟，过滤。滤液中加注射用水至2000ml，搅拌均匀，过滤。分装，灭菌。得成品。
实施例2人参皂苷Re片 人参皂苷Re60g 羧甲基淀粉钠 18g 微晶纤维素72g 乳糖 150g 制成 1000片 制法将上述原、辅料过80目筛混合均匀，再以5％聚维酮K30水溶液为粘合剂过18目筛制粒，在40℃的条件下干燥，然后用16目筛整粒，加入处方量的硬脂酸镁混匀，压片，即得。
权利要求
1.人参皂苷Re在感染性休克、失血性休克、烫伤性休克、低血糖休克药物中的应用。
2.人参皂苷Re可与药学上可接受的载体混合制备临床接受的片剂、胶囊剂、注射剂、颗粒剂。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了人参皂苷Re的抗休克作用。人参皂苷Re对失血性休克、感染性休克、烫伤性休克、低血糖休克均有良好的治疗效果。试验结果表明，人参皂苷Re的最小有效量为40mg/kg，LD50为400mg/kg。人参皂苷Re可以和药学上可接受的载体混合制备临床上可以接受的各种剂型，如片剂、胶囊、注射剂、颗粒剂等以改善休克状态，降低休克动物的死亡率。在临床上可用于休克抢救，产生辅助抗休克作用，提高休克抢救的成功率。
文档编号A61P43/00GK101721420SQ20081022818
公开日2010年6月9日 申请日期2008年10月21日 优先权日2008年10月21日
发明者徐峰, 路金才, 邓意辉, 吕爽, 马文慧, 徐静华, 王敏 申请人:沈阳药科大学