专利名称：林可霉素-庆大霉素复方注射液的制备方法及其产品的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种注射液的制备方法，尤其涉及一种林可霉素-庆大霉素复方 注射液的制备方法及由该方法制备得到的产品，属于注射制剂领域。
背景技术：
庆大霉素又称正泰霉素，是放线菌属小单孢菌所产生的氨基糖苷类广谱抗 生素，为繁殖期杀菌药，可阻止细菌细胞壁合成或损伤胞浆膜，适用于耐药性 金葡球菌、绿脓杆菌、变形杆菌、大肠杆菌、链球菌等敏感菌所引起的各种严 重感染，如呼吸道、肠道、泌尿道、乳腺炎及皮肤、软组织等部位感染和败血
症等病症的治疗。庆大霉素由d、 C2、 Cla、 C2a四组分组成，其抗菌活性和毒副作 用相近，四种组分都易溶于水，水溶液对热稳定，在酸、^喊或加热条件下稳定。 林可霉素又称洁霉素，由链丝菌变异菌林的发酵液中提取的林可胺类抗生
素，其化学名称是为6-(1-曱基-反-4-丙基-L-2-吡咯烷曱酰氨基)-1-硫代-6， 8-二脱氧-D-苏式-a-D-半乳辛吡喃糖苷盐酸盐一水合物。临床上应用于革兰氏 阳性菌引起的各种感染，特别适用于耐青霉素、红霉素菌抹的感染或对青霉素 过敏的患畜，如肺炎、蜂窝织炎、骨髓炎和败血症等疾病。
庆大霉素和林可霉素主要通过抑制细菌蛋白质的合成而达到抑杀病原微生 物的作用，二者配伍应用具有协同增效的作用。为适应猪场食^l下降发病猪的 临床治疗需要，可以将林可霉素-庆大霉素制成复方注射剂便于治疗食^l下降的 发病猪只。但是由于林可霉素分子中含有酰胺基及甲硫基，这些基团在水溶液 中热稳定性差，林可霉素在加热条件(高于6(TC)以及酸性条件(pH低于4)下分解最快，容易发生水解或氧化反应，会发生降解导致有关物质不合格。其水解 生成物之一为曱硫醇，曱硫醇能和重金属氧化物或盐作用而生成不溶性的盐， 从而使产品的有效成分造成不可逆的变化。但是为了使产品达到无菌的要求， 需要进行高温灭菌，因此有关物质与无菌保证之间是矛盾关系，需要选择合适 的生产工艺及灭菌工艺，保i正林可-庆大复方注射液的稳定性和安全性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种稳定性高、 安全性好的林可霉素-庆大霉素复方注射液的制备方法。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的 一种林可霉素-庆大霉素复方注射液的制备方法，包括(l)将乙二胺四乙
酸(EDTA )加入到温热的注射用水中溶解，得到EDTA水溶液，备用；(2 )将庆 大霉素和林可霉素加入到温热的注射用水中，搅4半均匀，加入EDTA水溶液和无 水亚硫酸氢钠，搅拌均匀，得到药液；(3)调节药液的pH值；(4)加入针用活 性炭搅拌，过滤，流通蒸汽灭菌；其中，步骤(3)中将药液的pH值调至4. 0-6. 0; 优选的，将药液的pH值调至4. 0-5. 0;更优选的，将药液的pH值调至5. 0。
本发明人通过实验发现，随配制温度升高，林可霉素有关物质升高，当配制 温度为25-35。C的温度范围时，林可霉素的有关物质可控制在较低的范围内，综 合考虑生产效率和控制有关物质的含量，最终发现，配制温度为3(TC时最为适 宜；所以，步骤(1)和步骤(2)中所述的温热注射用水的温度优选为25-35 °C,更优选为30°C;
本发明通过加入不同浓度的EDTA以考察林可霉素有关物质的含量。结果发 现，EDTA在药液中的终浓度在0.02-0.04% (W/V)之间，林可霉素的有关符合中国兽药典的规定，庆大霉素的有关物质也符合中国兽药典的规定，所以
步骤(1 )中所述EDTA在药液中的终浓度优选为0. 02-0. 04% (W/V),更优选为 0. 02%;
亚硫酸氢钠的浓度高低与林可霉素的有关物质含量也密切相关，当亚硫酸 氢钠在药液中的终浓度为0. 1% (W/V)时，林可霉素的有关物质为5. 04%,而亚 硫酸氬钠在药液中的终浓度为0. 2%(W/V)时，林可霉素的有关物质为3.2°/。。 说明亚硫酸氬钠在药液中的终浓度为0. 2%时抗氧化作用最强，所以步骤(2)中 所述无水亚^J菱氢钠在药液中的终浓度优选为0. 2% (W/V);
在制备林可霉素-庆大霉素复方注射液的过程中加入活性炭，有利于降低林
可霉素的有关物质的含量，但活性炭量增加到一定程度，林可霉素的有关物质反 而升高。活性炭具有脱色、吸附和助滤作用，因此加入活性炭可使有关物质降低， 但随活性炭量增加，活性炭吸附饱和，出现脱吸附现象，反而使有关物质增加。本 发明通过大量的实验最终发现，当步骤(4 )中加入占总体积0. 1 % ~ 0. 2 % ( V/V ) 的活性炭可4吏林可霉素有关物质降低0. 3% ~ 0. 7%，更优选的，将活性炭的加入量 控制在总体积的0. 1°/。 (V/V)为最适宜；
灭菌时间和温度对林可霉素-庆大霉素复方注射液中有关物质的含量有一 定的影响，林可霉素的有关物质随着温度的升高，降解加快。在灭菌温度为110 。C时，林可霉素降解速度较慢，灭菌时间控制在25分钟内有关物质合格。在灭 菌温度为115。C时，林可霉素降解速度较慢，灭菌时间控制在25分钟内有关物 质合格。在灭菌温度为12rC时，林可霉素降解速度较快，灭菌时间控制在15 分钟内有关物质合格。综合考虑有关物质的含量和生产成本、效率等因素，最 终确定灭菌温度为U5。C,灭菌时间为20分钟为最佳的灭菌条件。
针对林可霉素在加热条件以及酸性条件下分解最快，容易发生水解或氧反应，导致有关物质不合格等特点，本发明对林可霉素-庆大霉素注射液的制备
工艺进行了优选和筛选，分别考察了 pH值，配制温度，亚硫酸氬钠的浓度、EDTA 的浓度、活性炭的加入量以及灭菌的温度和时间对林可霉素-庆大霉素注射液的 稳定性和安全性的影响，最终确定了最适宜的制备工艺或条件，所制备的林可-庆大霉素复方注射液具有优异的稳定性和良好的安全性。
具体实施例方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着 描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何 限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对 本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发 明的保护范围内。
1、 实验材料
盐酸林可霉素山东新华制药股份有限公司(0806076批)；活性炭上海活 性炭有限公司(0551068批)，亚硫酸钠天津市长河化工有限公司，EDTA:天津市 福晨化学试剂厂。硫酸庆大霉素邯郸滏荣原料药公司(0805023批)。
2、 林可霉素和庆大霉素中有关物质的含量测定方法 2. 1盐酸林可霉素有关物质的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 0. 05mol/L硼砂溶液(用85 %磷酸溶液调节pH值至6. 0 )-曱醇(4: 6)为流动相； 检测波长为214nm。理论板数按林可霉素峰计算应不低于1500,林可霉素峰与林可霉素B峰的分离度应不小于2. 6。林可霉素B峰为林可霉素峰相对保留时间 的0. 5 ~ 0. 7。
测定法取本品约20mg，精密称定，置25ml量瓶中，用适量流动相溶解并 稀释至刻度，摇匀，取10jul注入液相色谱仪，记录色i普图；另取盐酸林可霉 素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C18H34NAS的含量。 林可霉素B的峰面积不得过林可霉素与林可霉素B峰面积之和的5. 0%。 2. 2硫酸庆大霉素有关物质的含量测定
用十八烷基珪烷键合硅胶为填充剂；水-冰乙酸-乙腈(48: 1: 51)配制的 0. 02mol/L庚烷磺酸钠溶液。色谱柱安捷伦Eclipse XDB-C18 。检测波长为 "Onm 。理论板数按C2组分峰计算应不低于2000。 C2a峰和C2峰的分离度应 符合要求。
测定法取本品适量，加水制成每lml中含O. 65mg的溶液，精密量取4. 0 ml,置10ml量瓶中，加异丙醇2ml与邻苯二醛试液1.6ml ,用异丙醇稀释至 刻度，摇匀，置60。C水浴中加热15分钟，冷却，滤过，取续滤液10ial注入 液相色语仪，记录色谱图；另取庆大霉素标准品，同法测定。
4、 pH值的测定 按照中国药典附录VI pH值测定法进行。
试验例1 pH值对林可霉素-庆大霉素复方注射液稳定性影响 1、试验方法
为考察pH值对注射液的稳定性影响，按照林可霉素、庆大霉素注射液的质 量标准规定的3. 0 ~ 6. 0范围，分别按照上述方法配制pH值为2. 0、 3. 0、 4. 0、
5. 0、 6. 0的不同pH的注射液，在115。C灭菌25分钟，测定注射液的有关物质和pH值。
2、试验结果
灭菌前后酸度变化值不大，说明灭菌前后对酸度的变化影响较小。根据检
测结果对比质量标准可知，酸度在4. G范围内，随着pH值的降低，有关物质急 剧升高，因此配制药液时pH值应接近4. O为最好。考虑到工艺内控的要求及灭 菌后酸度值变化不大的因素，因此配制药液的最佳pH值范围是4. 0~5. 0,工艺
控制配制pH值为4. 0 ~ 6. 0为宜。
表1不同pH值进行灭菌15分钟后的检测结果(峰面积) ^^^^^^^^^^^ S^T霉素庆大霉素
关物质 有关物质 有关物质
2.0 9.4% A 1.9 9.7% A
3.0 6.4% A 3. 1 7.2% A
4. 0 3. 8%_^___^_
6.0 4.8% A 6. 1 5.4。/0 A
~~A代农C,为25% 50%, (二为15% 40%, C2。+C2为20% 50%
试验例2配制温度对林可霉素-庆大霉素复方注射液中有关物质的影响
1、 试验方法取林可霉素、庆大霉素加辅料分别在1Q。C、 2Q。C、 30°C、 40 。C配制药液,考察温度对林可霉素、庆大霉素有关物质的影响。
2、 试验结果随配制温度升高，林可霉素有关物质升高，而硫酸庆大霉素 有关物质符合中国兽药典的规定，最终确定配制温度控制在25-35。C左右较合 适，最优选为控制在30°C。
试验例3 EDTA对林可霉素-庆大霉素复方注射液中有关物质的影响
1、试验方法取林可霉素、庆大霉素加辅料溶解，配成药液，分别加入总 体积0%、 0.01%、 0.02%、 0. 04% (W/V)的EDTA搅拌30min，过滤，取滤液检查有关物质。
2、试验结果在0. G2y。EDTA之上，林可霉素的有关物质符合中国兽药典的 规定，庆大霉素的有关物质也符合中国兽药典的规定。考虑到生产成本，确定 EDTA的浓度为0. 02-0. 04% (W/V)较为适宜，最优选为0. 02% (W/V)。
试验例4不同浓度亚硫酸氢钠抗氧化剂对林可霉素-庆大霉素复方注射液中有 关物质的影响
1、 试验方法取林可霉素、庆大霉素加辅料溶解，配成药液，分别加入总 体积0%、 0.1%、 0. 2% (W/V)的亚硫酸氢钠搅拌30min,过滤，取滤液检查有关 物质。
2、 试验结果在O. 1%亚硫酸氢钠中，林可霉素的有关物质为5. 04%,而在 0. 2%亚硫酸氢钠中，林可霉素的有关物质为3. 2%，说明0. 2%亚硫酸氢钠的抗氧 化作用强。
试验例5活性炭对林可霉素-庆大霉素复方注射液中有关物质的影响
1、 试验方法取林可霉素、庆大霉素加辅料溶解，配成药液，分别加入总 体积0°/。、 0.1%、 0.2%、 0. 4。/。(V/V)的活性炭搅拌30min,过滤，取滤液检查有关 物质。
2、 实验结果加入活性炭，有利于降低有关物质，但活性炭量增加到一定 程度,林可霉素的有关物质反而升高。活性炭具有脱色、吸附和助滤作用，因此 加入活性炭可使有关物质降低，但随活性炭量增加，活性炭吸附饱和，出现脱吸 附现象,反而〗吏有关物质增加。加入总体积O. 1 %~0. 2 % (V/V)的活性炭可使 有关物质降4氐0. 3% ~ 0. 7%,活性炭量控制在总体积的O. 1%为最好(此时，有关物质的含量最低，活性炭的用量也较少，可有效节省生产成本)。
试验例6 灭菌时间和温度对林可霉素-庆大霉素复方注射液中有关物质含量
的影响
1、 试验方法将配制灌装好的注射液，放入手提式灭菌器内，开启加热电 源，分別于110。C、 U5。C、 121。C下进行灭菌，灭菌时间分别为10min、 15min、 20min、 25min、 30 min,其中升温和降温均控制在10min内。考察灭菌温度对 有关物质的影响。
2、 试验结果灭菌时间和温度对林可-庆大霉素复方注射液中有关物质的 影响，结果见表2。灭菌时间和温度对硫酸庆大霉素的有关物质影响很小，在不 同温度和时间下，其有关物质符合中国兽药典的规定。但是林可霉素的有关物 质随着温度的升高，降解加快。
在灭菌温度为ll(TC时，林可霉素降解速度较慢，灭菌时间控制在25分钟 内有关物质合格。在灭菌温度为115'C时，林可霉素降解速度较慢，灭菌时间控 制在25分钟内有关物质合格。在灭菌温度为121。C时，林可霉素降解速度较快， 灭菌时间控制在15分钟内有关物质合;^各。
综合考虑有关物质的含量和生产成本、效率等因素，最终确定灭菌温度为 115°C,灭菌时间为20分钟为最佳的灭菌条件。
表2 不同的灭菌温度和时间复方药物的有关物质检测结果
序号 灭菌温度rc)灭菌时间F。 林可霉素有关物质峰
_(min)_面积(％)_
1 ^ 巧 OE T"^
2 110 15 0.375 3.68
3 110 20 0.5 3.92
4 110 25 0.625 4.04
5 110 30 1.975 4.34
6 115 10 0.79 3.467 115 15 1.185 3.67
8 115 20 1.58 3.97
9 115 25 2.975 4.54
10 115 30 3.875 4.62
11 121 10 2.51 4.42
12 121 15 3.765 4.57
13 121 20 5.02 4.78 _121 25_6. 275_
实施例1林可霉素-庆大霉素复方注射液的制备
取0. 02°/。EDTA,加入30。C注射用水中，搅拌，溶解；分别取庆大霉素、林 可霉素共同加入适量注射用水(3(TC)中搅拌。取0. 2%无水亚硫酸氢钠加入药液 中，搅拌。用盐酸溶液调节溶液pH至5. 0，用注射用水定溶。加入0. 1°/。针用活 性炭(25°C)搅拌20分钟。分别用经0.45um和0. 22咖微孔滤膜过滤至澄明。 充氮气灌封，流通蒸汽灭菌115。C, 20分钟。
实施例2林可霉素-庆大霉素复方注射液的制备
取0. 03%EDTA,加入35。C注射用水中，搅拌，溶解；分别取庆大霉素、林 可霉素共同加入适量注射用水(35。C)中搅拌。取0. 2°/。无水亚硫酸氢钠加入药液 中，搅拌。用盐酸溶液调节溶液pH至4. 0,用注射用水定溶。加入O. 2°/。针用活 性炭(25°C )搅拌20分钟。分别用经0. 45um和0. 22um微孔滤膜过滤至澄明。 充氮气灌封，流通蒸汽灭菌115。C, 30分钟。
实施例3林可霉素-庆大霉素复方注射液的制备
取0. 04°/ EDTA,加入25。C注射用水中，搅拌，溶解；分别取庆大霉素、林 可霉素共同加入适量注射用水(25。C)中搅拌。取0. 15°/ 无水亚硫酸氢钠加入药液中，搅拌。用盐酸溶液调节溶液pH至6. 0,用注射用水定溶。加入O. 1%针用活 性炭(25°C )搅拌20分钟。分別用经0. 45um和0. 22um微孔滤膜过滤至澄明。 充氮气灌封，流通蒸汽灭菌115。C, 20分钟。
权利要求
1、一种林可霉素-庆大霉素复方注射液的制备方法，包括(1)将乙二胺四乙酸加入到温热的注射用水中溶解，备用；(2)将庆大霉素和林可霉素加入到温热的注射用水中，搅拌均匀，加入乙二胺四乙酸水溶液和无水亚硫酸氢钠，搅拌均匀，得到药液；(3)将药液pH值调至3.0～6.0；(4)加入针用活性炭搅拌，过滤，流通蒸汽灭菌；其特征在于步骤(3)中将药液pH值调至4.0-6.0。
2、 按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(3)中将药液 pH值调调至4. 0-5. 0。
3、 按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(3)中将药液 pH值调调至5. 0。
4、 按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(1 )和步骤(2 ) 中所述的温热注射用水的温度为25-35°C;优选为30°C。
5、 按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述乙 二胺四乙酸在药液中的终浓度为0. G2-0. 04% (W/V),优选为0, 02wt%。
6、 按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述无 水亚石克酸氪钠在药液中的终浓度为0. 2°/。 (W/V)。
7、 按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中，向药 液中加入占总体积O. 1 %~0. 2 % (V/V)的活性炭，优选为0.1%。
8、 按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(4)所述灭菌 温度为110。C,灭菌时间控制在20分钟。
9、 由权利要求1-8任何一项所述制备方法制备得到的林可霉素-庆大霉 素复方注射液。
全文摘要
本发明公开了一种林可霉素-庆大霉素复方注射液的制备方法，包括(1)制备EDTA水溶液；(2)将庆大霉素和林可霉素加入到温热注射用水中搅拌均匀，加入EDTA和无水亚硫酸氢钠，得到药液；(3)将药液pH值调至3.0～6.0；(4)加入活性炭搅拌，过滤，流通蒸汽灭菌；其中，步骤(3)中将药液pH值调至4.0-6.0。本发明对林可霉素-庆大霉素注射液制备工艺进行了优化和筛选，分别考察了pH值，配制温度，亚硫酸氢钠和EDTA的浓度、活性炭的加入量以及灭菌温度和时间对林可霉素-庆大霉素注射液的稳定性和安全性的影响，最终确定了最适宜的制备工艺，所制备的林可-庆大复方注射液具有优异的稳定性和良好的安全性。
文档编号A61K9/08GK101518543SQ20091012915
公开日2009年9月2日 申请日期2009年3月27日 优先权日2009年3月27日
发明者永 刘, 洋 刘, 琳 崔, 阳 崔, 刚 徐, 李明雁, 李艳华, 敏 王, 栋 边 申请人:东北农业大学;中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局