专利名称：乌骨藤皂苷h及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的乌骨藤皂苷H的制备方法及其应用，属于医药 领域范畴。
背景技术：
肿瘤是世界卫生组织(WHO)认定危害人类生命的第一大杀手，成为常见且严重威 胁人类生命和生活质量的主要疾病之一，过去20年中肿瘤发病率呈总体上升之势，肿瘤已 越来越严重地威胁着人类健康和生命安全。我国使用中草药治疗各种疾病有着悠久的历史，从中草药中筛选抗癌新药具有自 己的优势，在已上市的抗肿瘤药中有很多都是从天然中草药中提取的有效成分制成的，在 临床治疗肿瘤方面起了非常重要的作用，因此运用先进的分离纯化技术，从天然产物中开 发出具有良好活性的抗肿瘤药物不但完全符合当前"回归自然"的世界潮流，而且具有非 常重要的社会意义。乌骨藤是萝蘑科(Asclepiadaceae)植物通关藤(Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight etArn.)的藤茎。主要产于我国云南、贵州等西南地区，始载于 《滇南本草》。乌骨藤中化学成分复杂，主要含有皂苷、生物碱、有机酸、多糖、树脂及色素等 多种化学成分，临床应用表明，本品具有抗肿瘤、免疫调节等作用。目前，在国内市场上由乌 骨藤单味中药开发出的中成药是消癌平，包括注射液、片剂、胶囊、口服液等多种剂型，这些 制剂均具有一定的抗癌疗效，对胃癌、肝癌、肺癌、食道癌等多种肿瘤具有确切的疗效，在临 床上已得到较广泛的应用，说明乌骨藤具有确切的抗肿瘤活性。由于消癌平开发于上世纪90年代，时间较早，当时的技术相对落后，再加上乌骨 藤药材中化学成分很复杂，所以诸多消癌平制剂中均未能明确其中真正的抗肿瘤活性成 分，在质量控制上也是选择主要有抗菌、消炎活性的绿原酸作为指标性成分，显然存在不 妥。另外由于制备工艺落后，导致活性成分含量低，服用剂量很高，以消癌平片为例，其口服 剂量为一次8 10片，一日3次，如此大的给药剂量给患者带来了很多麻烦。随着分离纯化 技术的提高以及药理研究的深入，研究表明乌骨藤中起抗癌作用的是一类“C21-留体苷” 成分，其机理为作用于肿瘤细胞防止分裂，抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞分化。尽管明确了乌骨藤中的主要活性成分是一大类皂苷类成分，但由于乌骨藤皂苷种 类很多，而且很多结构相似，分离纯化难度很大，很难进一步明确这类皂苷中真正具有活性 的成分是哪一种，也很难对本品进行有效的质量控制，达不到国家对现代中药活性成分结 构明确、质量可控的要求，严重制约了本品的进一步开发提高。本发明的目的是提供一种结构明确、疗效确切的乌骨藤皂苷H。乌骨藤皂苷H是 从中药乌骨藤中通过科学的分离纯化方法制备得到，具有结构明确，活性高，毒副作用小的 特点。通过对乌骨藤皂苷H含量的控制可大大提高乌骨藤制剂的安全性、稳定性和可控性。 同时由于其含量高，能大大降低原制剂的使用剂量，减少其他杂质药物对机体的刺激性。本 发明提供的乌骨藤皂苷H可以作为乌骨藤制剂的质量控制指标性成分，能更好的保障乌骨藤皂苷制剂的临床疗效，更好的为广大癌症患者服务，使抗肿瘤中药乌骨藤发挥更大社会 价值。在专利申请号为CN200610091096. 2的名为《一种具有抗肿瘤活性的中药有效部 位的制备及其应用》专利中，公开了一种由乌骨藤多糖和总皂苷的组成的混合物有效部位， 没有明确其中的某一活性成分及其化学结构，与本发明提供的化学成分及结构明确的乌骨 藤皂苷H具有明显的不同。在专利申请号为CN200810059047.X的名为《具有抗肿瘤作用的 乌骨藤碳-21留体皂苷混合物》专利中，公开了具有抗肿瘤作用的乌骨藤皂苷，虽然提到了 其中的皂苷类成分乌骨藤苷A、B、C、D、K，并且将由这些皂苷组成的混合物定名为乌骨藤总 苷H，但与本发明中所提供的结构明确的单一成分乌骨藤皂苷H具有本质的区别。在专利申 请号为CN92102027. 9的名为《消癌平有效成分的提取及剂型制备》发明专利中，公开的是 一种从中药乌骨藤中提取的抗癌有效成分乌骨藤多糖的生产工艺，该发明采用水浸泡，煎 沸，醇沉，去蛋白，过柱，透析，醇沉，洗涤干燥而获得乌骨藤多糖，与本发明所说明的内容不 属于一类成分。在专利申请号为CN2005100^960.8名为《一种含乌骨藤苷元的药物及其制 备方法和应用》专利中，公开的是一类由乌骨藤总皂苷水解制成的总皂苷元，也是由多种成 分组成的混合物，与本发明提供的乌骨藤皂苷H也具有本质的不同。本发明的优势在于克服了以往工艺的不足，提供了一种结构明确、高含量的乌骨 藤皂苷H;本发明还提供了高含量的乌骨藤皂苷H及其药物组合物的制备方法，临床用于肿 瘤的治疗。本发明提供的乌骨藤皂苷及其药物组合物的制备方法重复性好，可适用于生产 放大，易于推广，具有很强的实用性。
发明内容
本发明的目的在于克服传统工艺的不足，提供一种具有良好抗肿瘤活性的高含量 的乌骨藤皂苷H，采用高效液相色谱法测定，含量60% 99.8%，其结构式如下
权利要求
1.一种具有抗肿瘤活性的乌骨藤皂苷H，其特征在于采用高效液相色谱法测定，含量 范围为60% 99. 8%。
2.一种具有抗肿瘤活性的乌骨藤皂苷H，其制备方法由以下几步组成(1)取乌骨藤药材，加适量溶剂提取，合并提取液；(2)提取液浓缩后，过滤，滤液上大孔树脂柱，上柱完成后，加水洗脱去除大极性杂质， 改用乙醇洗脱，至洗脱液中无乌骨藤皂苷H，收集洗脱液；(3)洗脱液减压浓缩成稠膏，减压干燥，粉碎，得乌骨藤总皂苷粗品；(4)取乌骨藤总皂苷粗品，加入适量有机溶剂加热回流提取，过滤，残渣弃去，提取液 合并浓缩至一定体积，冷却，加入微量纯度大于98%的乌骨藤皂苷H结晶作为晶种，静置结 晶，过滤，干燥，得类白色乌骨藤皂苷H粗品。(5)取上述乌骨藤皂苷H粗品，加适量溶剂加热回流溶解后，过滤，滤液冷却，加入微量 纯度大于99%的乌骨藤皂苷H结晶作为晶种，静置，重结晶，重复上述重结晶步骤2 4次， 得高含量的乌骨藤皂苷H。
3.根据权利要求1所述的乌骨藤皂苷H，其特征在于可以加入适量药学上可接受的载 体进一步制成各种适合于临床应用的制剂，包括片剂、胶囊、滴丸、软胶囊、粉针或注射液。
4.根据权利要求2所述的乌骨藤皂苷H的制备方法，其特征在于步骤(1)中的提取 方式为加热提取；提取溶剂可以是水、甲醇或乙醇，优选使用乙醇作为提取溶剂；其浓度为 50% 95%，优选浓度为80% ；提取溶剂的用量为药材量的5 12倍(M/V)，优选为7倍 量；提取次数为2 4次，优选3次。
5.根据权利要求2所述的乌骨藤皂苷H的制备方法，其特征在于步骤O)中，将提取 液浓缩至药材量的5 10倍(M/V)后再上柱，优选为7 8倍量；所用的大孔吸附树脂型 号可为 HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600、D101、D1300，优选大孔吸附树脂型号为 DlOl ； 洗脱用乙醇的浓度为50 95%，优选浓度为65% ；洗脱溶剂用量为药材量的2 6倍(M/ V)，优选为3 4倍量。
6.根据权利要求2所述的乌骨藤皂苷H的制备方法，其特征在于步骤C3)中，乙醇洗脱 液在55 75°C下减压回收，优选60°C;减压干燥温度为65 75°C，优选为70°C;粉碎后颗 粒粒度为40 100目，优选为80目。
7.根据权利要求2所述的乌骨藤皂苷H的制备方法，其特征在于步骤中，结晶所 用的有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、正丁醇或异丙醚，或是以上溶剂中两种或几种的 组合，优选为乙酸乙酯；提取次数为2 4次，优选为3次；结晶时间为6 M小时，优选为 12小时。
8.根据权利要求2所述的乌骨藤皂苷H的制备方法，其特征在于步骤(5)中，所用的结 晶溶剂可以为水、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、异丙醚或冰醋酸，或是以上溶剂中两 种或几种溶剂的组合，优选为甲醇一水组合，更优选的比例为甲醇水(75 25)。
9.根据权利要求3所述适合于临床应用的乌骨藤皂苷H制剂，其特征在于每个制剂单 位含乌骨藤皂苷H的量为2mg lOOmg。
全文摘要
本发明提供一种乌骨藤皂苷H及其制备方法，本制备方法是以中药乌骨藤为原料，经提取、分离、结晶、重结晶等一系列步骤，制备得到具有良好抗肿瘤活性、高含量的乌骨藤皂苷H，采用高效液相色谱法测定，其含量范围为60％～99.8％；该乌骨藤皂苷H可加入适当药学上可接受的载体制成一定剂型，临床用于肿瘤的治疗；本发明提供的乌骨藤皂苷H及其制备方法采用中药现代化分离纯化技术，工艺新颖，适合工业化生产，具有很强的实用性。
文档编号A61K31/7048GK102070700SQ20091023462
公开日2011年5月25日 申请日期2009年11月25日 优先权日2009年11月25日
发明者季浩, 杨永安, 陈月红 申请人:江苏天晟药业有限公司