专利名称：齐墩果酸的抗乳腺癌作用及其药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明是涉及齐墩果酸(Oleanolic acid )在抗乳腺癌方面的应用及其药物制 剂，属于中药领域。齐墩果酸(Oleanolic acid )是五环三萜类化合物，以游离体和配糖体的形式 存在于多种植物中。主要提取来源木犀科植物齐墩果的叶，女贞果实；龙胆科植物青叶胆全 草，川西獐牙菜；伞形科植物大星芹的叶、根；五加科植物橡木的根皮及茎皮；葫芦科植物 大籽雪胆，可爱雪胆，中华雪胆的块根。齐墩果酸已报道的药用作用主要有护肝降酶、促进肝细胞再生、抗炎、强心、利尿， 还具有降血糖、降血脂、镇静等作用，是开发治疗肝病和降血糖等药物的有效成分。我们在 筛选抗肿瘤药物过程中发现齐墩果酸具有较强的抑制乳腺癌细胞及其实体瘤生长的作用。在本发明之前未见以齐墩果酸为原料研究药物剂型并用于预防和治疗乳腺癌疾 病的报道。齐墩果酸是五环三萜类化合物，几乎无毒，中药资源极为丰富，是一种非常有前 途的抗肿瘤药物。齐墩果酸(Oleanolic acid )的化学名3 β-hydroxy-olea-12-en-28_oic acid ；分子式 C30H48O3 ；分子量456. 71。化学结构式
发明内容
本发明的目的之一是提供了齐墩果酸的药物制剂； 本发明的目的之二是提供了齐墩果酸的抗肿瘤新用途。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
本发明的药物制剂含有1%_99%的齐墩果酸和99%-1%的赋形剂(包括其它配用的药 物)，优选含有20%-80%的齐墩果酸和80%-20%的赋形剂(包括其它配用的药物)，最好含有 60%-70%的齐墩果酸和40%-30%的赋形剂(包括其它配用的药物)。按药剂学方法，可以将本发明的齐墩果酸制备成多种临床药物剂型作为抗乳腺癌 药物，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒 剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种；所说的非肠道给药剂型选自于注
背景技术：
射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。本发明的抗乳腺癌药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防 腐剂、着色剂、粘合剂等。本发明的抗肿瘤药物中的其它配伍用的药物，指的是以有效剂量 的齐墩果酸为一定的药物原料，再配伍其它已允许合用的中药或化学药品。本发明的齐墩果酸药物制剂具有抗乳腺癌作用，是通过以下的药效学试验得到证 实的。试验例1考察了齐墩果酸对体外乳腺癌细胞的抑制作用
细胞人乳腺癌细胞(MCF-7)。为中科院海洋所海洋药物实验室提供。药品及试剂齐墩果酸(Oleanolic acid )中科院海洋所海洋药物实验室提供，白 色粉末；5-氟脲嘧啶(5-FU)江苏南通精华制药有限公司产品，批号为100402 ； MTT(SIGMA, USA)；DMSO (SIGMA，USA);胰蛋白酶(SIGMA，USA);RPMI 1640 (GIBCO, Invitragen Co. ,USA)； DMEM (GIBCO, Invitragen Co.，USA)；优级胎牛血清(GIBC0，Invitragen Co.，USA)；特级 月台牛血清 Fetal Bovine Serum (Hyclone)0仪器超低温冰箱(Nature，USA)，细胞培养箱(SANYO，Japan),倒置显微镜 (NIKON, Japan), SItgftCBio-Tek Instruments, Inooski, VT, USA), PHifCThermo orion, USA)，超净工作台(FLC-哈尔滨东联仪器厂)。实验方法MTT法将肿瘤细胞株按照常规方法培养传代，收集对数生长期细胞，调 节细胞悬液浓度5 X IO4个/ml左右。将细胞悬液加入96孔培养板中，每个孔加入180 μ 1。 置于37°C恒温培养箱中培养M h后，实验组加入各浓度齐墩果酸(以5-FU作为阳性对照 组)20μ 1/孔，每组各设4个平行孔，并设空白孔(只加入溶解药用的溶齐IJ)以调零。在培养 箱37°C，培养48 h后，用移液枪将96孔板中液体洗净后每孔加入MTT (1 mg/ml)30 μ 1， 置CO2培养箱37°C培养4 h，弃去上清，每孔加入DMSO 150 μ 1，置摇床摇勻30 min，用酶 标仪在492 nm下检测，利用SPSS统计软件，计算细胞死亡率，求取IC5(1。试验结果表明，经SPSS软件统计，不同浓度的齐墩果酸对用于试验的人乳腺癌细 胞(MCF-7)有不同程度的抑制作用，并且呈一定的剂量依赖关系，不同浓度的齐墩果酸对 乳腺癌细胞的抑制率、IC50值详见表1。表1不同浓度的齐墩果酸对乳腺癌细胞的抑制率
\、辦轉 作用浓度(μ§ω) W^m 相关系 1 ^ 10-0 20.0 30.0_ ”力_数 R (μ_)
MCF-7 29.1%^44.2%^67.3% y= 1.91x + 8.66670J93 2L6^
试验例2齐墩果酸对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用
实验动物BALB/c裸鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证编号 SYXK (沪)2010-0047，共20只，7 9周龄，体重20 22g，均为雄鼠。动物饲养及实验为无特 殊病原菌级屏障系统，饲养于青岛大学医学院实验动物中心。肿瘤细胞接种取对数生长期的人乳腺癌细胞(MCF-7)制成瘤细胞悬液(IXlO7 个/ml)，植入BALB/c雄性裸鼠腋部皮下(约0. 3ml/只)，接种后定期观察小鼠精神、饮食及 排便等情况。传代一次后，将肿瘤组织无菌取出并切成大小相同2mm3的小块，用套管针接 种在裸鼠腋部皮下。试验分组及方法游标卡尺测量肿瘤结节的长径(a)、短径(b)，按公式V=aXb2X0. 52计算肿瘤体积，当皮下移植瘤长到100 mm3后，挑选肿瘤大小一致的裸鼠，将 裸鼠称重用随机数字表法分成3组，分别为阴性对照组、阳性对照组、齐墩果酸组，每组5只 裸鼠。药物浓度及具体分组如下(1)阴性对照组腹腔注射0. 2ml生理盐水；(2)阳性药 物对照组腹腔注射30mg/kg的5-FU ； (3)齐墩果酸组40mg/kg腹腔注射。每3天注射一 次，连续注射10次，于末次给药M h后，取出瘤块，测定瘤重，最后计算平均肿瘤抑制率。 采用SPSS软件统计，试验数据以(平均数士标准差)表示，P小于0.01为统计学差异显著 性意义标准。试验结果见表2。 表2齐墩果酸对MCF-7裸鼠移植瘤的抑制作用试验结果ΓX 士SD)
权利要求
1.一种用于治疗乳腺癌的药物制剂，其特征在于含有治疗有效剂量的齐墩果酸和一 种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与齐墩果酸组方的其它药物。
2.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于含有1%_99%的齐墩果酸和99%-1%的 药用赋形剂或其它可组方的药物。
3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于含有20%-80%的齐墩果酸和80%-20% 的药用赋形剂或其它可组方的药物。
4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于含有60%-70%的齐墩果酸和40%-30% 的药用赋形剂或其它可组方的药物。
5.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所说的药物是口服制剂或非肠道给药 的剂型。
6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于所说的口服制剂选自于片剂、丸剂、胶 囊剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种。
7 根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于所说的非肠道给药剂型选自于注射 剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的任何一种。
8.齐墩果酸在制备抗乳腺癌药物中的应用。
9.根据权利要求8的用途，其特征在于所说的抗乳腺癌是指抑制人乳腺癌细胞 (MCF-7)及其裸鼠移植性肿瘤的生长。
全文摘要
本发明公开了齐墩果酸(Oleanolicacid)在抗乳腺癌方面的医药新用途，同时也公开了以齐墩果酸为制药原料制备成片剂、胶囊剂、丸剂、注射剂等临床上可接受的药物制剂。本发明的齐墩果酸药物制剂含有1%-99%的齐墩果酸和99%-1%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物)。本发明提供的齐墩果酸及其药物制剂具有很好的抗乳腺癌作用，表现在对体外人乳腺癌细胞具有明显的抑制活性，并对此肿瘤细胞的裸鼠移植瘤具有显著的抑瘤活性。此外，由于该药物制剂的活性成分为中药提取物，因而相对化学治疗药物而言具有毒副作用小的优点。
文档编号A61P35/00GK102114021SQ20101029268
公开日2011年7月6日 申请日期2010年9月27日 优先权日2010年9月27日
发明者刘海洲, 廖德忠, 林秀坤 申请人:林秀坤