专利名称：纤维蛋白原的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及严重急性出血治疗领域，包括但不限于产后出血、创伤后和手术(手术期)严重急性出血。
背景技术：
严重急性出血(SAH)被定义为快速(在几小时内)流失至少20-30%的个体血容量。SAH主要发生于产科(主要为产后出血)、创伤和手术中，但也不仅限于这些。在SAH情况中常常发生凝血障碍(凝血因子缺乏症)，凝血障碍与出血有直接或间接的联系。在凝血因子中，首先是血浆纤维蛋白原水平下降并达到关键值(Hippala等， 1995，Anesth Analg，第 81 卷360-365 ;Torrielli 等，1988，Rev Fr Gynecol Obstet，第 83卷7-9)。通常认为这些阈值在0. 5-lg/l之间，并且相应于在稳定非出血情况下能够获得满意凝血状态的浓度。纤维蛋白原水平降低过程中涉及到的机理为1.直接丧失，2.容量替代溶液的稀释，和3.凝结形成导致的纤维蛋白原的消耗。除纤维蛋白原是第1个血液水平降低的凝血因子这一事实外，还表明纤维蛋白原水平降低也是临床预后差的因素，并且这种降低与纤维蛋白原浓度降低患者更严重的过禾呈有关(Charbit 等，2006, Journal of Thrombosis and Haemostasis,第 5 卷266-273 ； Karlsson 等，2008，Transfusion，第 48 (10)卷2152-2158)。在紧急情况下，尽管对SAH的处理应当根据个体进行调整，但这些处理具有共同的目的，包括如果存在凝血障碍，对凝血障碍的处理，所述凝血障碍是经常存在的。目前， 当检测到血浆纤维蛋白原达到上述关键值时，推荐给予纤维蛋白原。这种替代途径的目的在于校正构成性凝血因子缺乏症，所述凝血因子缺乏症经常处于扩散性血管内凝血(DIVC) 阶段。这种替代途径意味着由于依赖于获得重复实验室结果所花费的时间而存在滞后，实验室实验结果有时需要花费较长的时间(近1小时)才能诊断出获得性纤维蛋白原缺乏并记录其随时间改变的过程。而且，根据该替代途径，需要不时重复给予纤维蛋白原，因为这是由重复测定纤维蛋白原浓度的结果决定的。纤维蛋白原的剂量可以通过数次输注给予， 每次都可以根据被量化的缺失的纤维蛋白原与应当达到的阈值纤维蛋白原血液值的比例进行确定。纤维蛋白原以推荐的小于5ml/分钟的速度缓慢给予，而这在紧急情况时并不适当。当循环纤维蛋白原水平低于lg/L时，应当给予外源性纤维蛋白原以使得能够形成正常凝结。提供的外源性纤维蛋白原的量应当在2-4克之间，需要的量因人而异，在实际情况下，它是根据对上述凝血参数连续测定的结果而确定。更准确地说，注入的纤维蛋白原的量通常根据下列公式计算外源性纤维蛋白原的量(g)=[需要的循环纤维蛋白原水平 (g/L)]_[治疗前循环纤维蛋白原水平(g/L)]X0.04X [患者体重(kg)]。所以，治疗期间连续给予的纤维蛋白原的量根据凝血参数计算，也随时间推移而发生改变。应当注意，必须精确计算给予的外源性纤维蛋白原的量，从而避免过量的循环纤维蛋白原，例如，循环纤维蛋白原水平大于5g/L时可能引起血栓形成。
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申请人还希望提及，可以给予浓缩血小板作为上述治疗手段的一种辅助手段，特别是在尽管有纤维蛋白原供给但是依然持续出血的情况下。目前采用的产后出血的治疗方案总体来讲是令人满意的。然而，考虑到与这些严重急性出血有关的死亡率或发病率的高风险存在，现有技术领域持续需要能够替代或改进现有解决方案的技术解决方案。还需要发现用于治疗其它类型严重急性出血的替代或改进方法，包括外科手术过程导致的或者剧烈物理创伤导致的严重出血。其它严重急性出血与产后出血具有相同的方面，包括体内动态平衡失调。发明概述本发明涉及纤维蛋白原在生产用于治疗严重急性出血的医用产品中的用途，无论最初纤维蛋白原水平如何，所述医用产品都能够尽早、快速地提供足够量的纤维蛋白原用于恢复血液的凝血能力。例如，在少于30分钟的给药期间内能够给予等于至少4. 5g的量。根据本发明，严重急性出血包括但不限于产后出血、手术期出血和创伤后出血。给予的纤维蛋白原适用于任何纤维蛋白原，不论其来源及性质如何。本发明还涉及预防或治疗用的含有纤维蛋白原的药用组合物，它们特别适合用于前述用途和方法。
图.1说明了在猪体内的实验方案中的时间连续性步骤。水平线代表时间。有标记的竖线代表本方案的连续步骤。1 动物的麻醉和仪器调试(instrumentation)步骤。2 待研究参数的基线测定，分别为HR (心率),MAP (平均动脉压)、PAP (肺动脉压),PCffP (肺中央楔压(pulmonary central wedge pressure))、CVP (中央静脉压)、ROTEM ，标准实验 凝血、血红蛋白、血细胞容量、血小板。3 进行血稀释的步骤，在此期间采用HES 130/0. 4组合物(Voluven )替代60%的血容量，目的在于使得MCF值低于40mm。4 洗涤的红细胞再注入的步骤，目的在于使得血红蛋白值达到5-6g/dl。5:实施骨损伤步骤。7:给予医用产品(不同剂量的纤维蛋白原和安慰剂组合物)后分别于15分钟、1小时、2小时和4小时测定下列参数HR、MAP、PAP、PCWP、ROTEM 、检验标准凝血、血红蛋白、血细胞容量、血小板以及血液流失。9 实施肝损伤步骤。9 肝损伤2小时后，最终实验步骤，在该步骤中测定下列参数HR、MAP、PAP、CVP, PCffP, R0TEM、标准检验凝血、血红蛋白、血细胞容量、血小板以及血液流失。图.2显示了通过ROTEM 方法测定INTEM凝血时间(CT)的结果。图.2顶端显示了动物分别接受下列物质后所获得的结果(i)安慰剂组合物，由实心菱形代表，(ii)37. 7mg/kg人纤维蛋白原，由实心正方形代表，(iii) 75mg/kg人纤维蛋白原，由实心黑三角形代表，和(iv)150mg/kg纤维蚤白原，由倒立的灰色三角形代表。图.2 底部显示了动物分别接受下列物质后所获得的结果(i)安慰剂组合物，由实心菱形代表， (ii)300mg/kg人纤维蛋白原，由实心正方形代表，(iii)450mg/kg人纤维蛋白原，由实心灰色三角形代表，(iv)600mg/kg纤维蛋白原，由倒立的灰色三角形代表。在纵坐标上凝血时间(CT)用秒表示。在横坐标上，表示各种体内连续实验步骤，自左到右分别为(i)仪器调试后以及动物治疗前，(ii)血稀释后，(iii)给予医用产品后15分钟，(iv)给予医用产品后1小时，(ν)给予医用产品后2小时，(vi)给予医用产品后4小时，(vii)实施肝损伤后 2小时或者死亡前。图.3显示了ROTEM 方法测定的INTEM最大血块稳固性(MCF)的结果。图.3 顶端显示了动物分别接受下列物质后所获得的结果(i)安慰剂组合物，由实心菱形代表， (ii)37. 7mg/kg人纤维蛋白原，由实心正方形代表，(iii) 75mg/kg人纤维蛋白原，由实心黑三角形代表，和(iv)150mg/kg纤维蛋白原，由倒立的灰色三角形代表。图.3底部显示了动物分别接受下列物质后所获得的结果(i)安慰剂组合物，由实心菱形代表，(ii)300mg/ kg人纤维蛋白原，由实心正方形代表，(iii)450mg/kg人纤维蛋白原，由实心灰色三角形代表，和(iv)600mg/kg纤维蛋白原，由倒立的灰色三角形代表。在纵坐标上最大血块稳固性 (MCF)以毫米表示。在横坐标上，表示各种体内连续实验步骤，自左到右分别为(i)仪器调试后以及动物治疗前，(ii)血液稀释后，(iii)给予医用产品后15分钟，(iv)给予医用产品后1小时，(ν)给予医用产品后2小时，(vi)给予医用产品后4小时，和(vii)实施肝损伤后2小时或者死亡前。图.4显示了ROTEM 方法测定的最大血块稳固性(MCF)PLASMAEXTEM(改良的 FibTEM)的结果。图.4顶端显示动物分别接受下列物质后所获得的结果(i)安慰剂组合物，由实心菱形代表，(ii)37.7mg/kg人纤维蛋白原，由实心正方形代表，(iii) 75mg/kg人纤维蛋白原，由实心黑三角形代表，和(iv)150mg/kg纤维蛋白原，由倒立的灰色三角形代表。图.4底部显示动物分别接受下列物质后所获得的结果(i)安慰剂组合物，由实心菱形代表，(ii)300mg/kg人纤维蛋白原，由实心正方形代表，(iii)450mg/kg人纤维蛋白原， 由实心灰色三角形代表，和(iv)600mg/kg纤维蛋白原，由倒立的灰色三角形代表。在纵坐标上最大血块稳固性(MCF)以毫米表示。在横坐标上，表示各种体内连续实验步骤，自左到右分别为(i)仪器调试后以及动物治疗前，( )血稀释后，(iii)给予医用产品后15分钟，(iv)给予医用产品后1小时，(ν)给予医用产品后2小时，(vi)给予医用产品后4小时，和(vii)实施肝损伤后2小时或者死亡前。图.5显示了血浆纤维蛋白原浓度的测定结果。曲线显示了动物分别接受下列物质后所获得的结果(i)安慰剂组合物，由实心菱形代表，在图5的底部曲线，(ii)37.5mg/ kg人纤维蛋白原，由实心正方形代表，在紧挨着前述曲线的上面的曲线上，(iii)75mg/kg 人纤维蛋白原，由实心黑色三角形代表，在紧挨着前述曲线的上面的曲线上，(iv)150mg/kg 纤维蛋白原，由倒立的灰色三角形代表，在紧挨着前述曲线的上面的曲线上，(v)300mg/kg 人纤维蛋白原，由实心正方形代表，在紧挨着前述曲线的上面的曲线上，(vi)450mg/kg人纤维蛋白原，由实心灰色三角形代表，在紧挨着前述曲线的上面的曲线上，和(vii)600mg/kg 纤维蛋白原，由灰色三角形代表，在紧挨着前述曲线的上面的曲线上，它也为图5的顶部曲线。在纵坐标上血浆纤维蛋白原浓度以mg/dl表示。在横坐标上，表示各种体内连续实验步骤，自左到右分别为(i)仪器调试后以及动物治疗前，( )血稀释后，(iii)给予医用产品后15分钟，(iv)给予医用产品后1小时，(ν)给予医用产品后2小时，(vi)给予医用产品后4小时，和(vii)实施肝损伤后2小时或者死亡前。图.6显示了根据给予动物的纤维蛋白原剂量通过ROTEM 方法测定的INTEM 最大血块稳固性(MCF)的实验结果。在纵坐标上最大血块稳固性(MCF)以毫米表示。在横坐标上，人纤维蛋白原浓度以mg/dl表示。
图.7显示了血液流失和凝血性能的测定结果。在纵坐标上血液流失值和血块大小值以ml/kg表示。在图7中，血块大小(“血块”)值和血液流失(“液体”)值由相邻的长条表示，对应着每一个给予动物的人纤维蛋白原的升高的浓度以及安慰剂组合物。在图 7中自左到右，每一对相邻的长条(血块/液体)代表着下面的各个值(i) 37. 5mg/kg纤维蛋白原，(ii)75mg/kg纤维蛋白原，(iii)150mg/kg纤维蛋白原，(iv) 300mg/kg纤维蛋白原， (v)450mg/kg纤维蛋白原，(vi)600mg/kg纤维蛋白原，和(vii)安慰剂组合物。发明详述令人惊奇的是，本发明显示，在治疗严重急性出血时，即使在不存在已知的纤维蛋白原不足的情况下，尽早和尽快地给予单次大剂量的纤维蛋白原也能够控制严重的急性出血并能够防止其恶化为无法控制的出血。根据本发明，在严重急性出血的情况下，尽早和尽快地给予大剂量外源性纤维蛋白原能够阻止早期隐匿性凝血障碍向固有性凝血障碍(constitutive coagulopathy)的发展，所述早期隐匿性凝血障碍主要是由于血液中凝血性能逐步降低而导致的，这主要是由于外源性纤维蛋白原的减少引起的，所述固有性凝血障可能导致无法控制的出血。因此，在本发明指定的情况下，给予外源性纤维蛋白原既能够治疗严重急性出血， 也能够防止其向无法控制的出血的有害结果的恶化。根据本发明，在不需要预先确定循环纤维蛋白原水平的情况下，给予预定量的外源性纤维蛋白原使得能够控制严重急性出血。事实上，本发明的治疗原理不是补偿纤维蛋白原的不足，也就是说，根据预定的阈值血值(该值对于获得有效的目标血值而言是非常关键的)供给纤维蛋白原的量，而是尽可能快地恢复血液的凝血能力。所以，考虑到用于确定是否需要给予纤维蛋白原以及用于确定必须给予的纤维蛋白原的量的纤维蛋白原测定的因素，医护人员必须能够获得测定血液纤维蛋白原水平的结果的方法。应当指出的是，血液纤维蛋白原水平的测定结果通常在取得血样后至少45分钟至1小时才能获得，即使在紧急情况下也是如此。这种在紧急治疗时的时间损失可能意味着患者血液纤维蛋白原水平的值(当获得测定结果时的值)低于前述阈值，这在某些情况下可能显著影响患者的生存机会。现在，本发明显示在不需要事先知道最初纤维蛋白原血液水平的情况下，给予纤维蛋白原也是有效的。因此，这表明一旦经临床诊断为严重急性出血，无需事先测定血液水平，即可通过尽早给予纤维蛋白原治疗SAH。因此，本发明显示，纤维蛋白原可以以单次量的纤维蛋白原给予患有严重急性出血的患者，以便于立即恢复血液的凝血能力，也就是说，不需要根据待治疗患者的情况调整纤维蛋白原的量。特别的是，本发明显示，在无需事先确定循环纤维蛋白原水平情况下，可以通过给予预定量的外源性纤维蛋白原成功地治疗严重急性出血。令人惊奇的是，本发明显示，在给药前没有确定循环纤维蛋白原水平的情况下，尽早、尽快地给予严重急性出血患者单次大剂量纤维蛋白原有可能改善或者防止所述患者所患有的不可逆性凝血障碍的加重，而且不会导致血栓形成。另外，本发明也显示，尽早、尽快地给予单次大剂量纤维蛋白原可以治疗严重急性出血，给予的量至少为4. 5g，也就是说，在患者的治疗和/或后续治疗期间无需多次连续给予外源性纤维蛋白原，需要根据纤维蛋白原水平调整纤维蛋白原的量。实施例中阐述了动物实验，其中给予的纤维蛋白原的剂量范围在37. 5mg/kg至 600mg/kg之间，该剂量取决于血容量流失达60%的创伤性休克所造成的血稀释的模型，然后采用6%的羟乙基淀粉(HEQ代替流失的血容量。结果显示，凝血时间和最大血块稳固性受到血稀释的显著影响。给予纤维蛋白原在所有的血块稳固性测量中引起了剂量依赖性的增加。实施例中的结果显示采用剂量为50mg/kg的纤维蛋白原治疗出血的动物，在结束纤维蛋白原输注后15分钟内能够完全恢复最大血块稳固性值，该作用可以维持直到实验结束。采用较大剂量的纤维蛋白原，可以使得EXTEMMCF值达到一个平台(ROTEM 实验)。相反，增加纤维蛋白原的剂量，INTEM MCF值(ROTEM 实验_血小板依赖性凝血)继续增加，如图.6所示。实施例中的结果显示，在给予纤维蛋白原的动物中凝血酶的产生并非不同于对照组动物中凝血酶的产生。血液流失的统计学分析显示显著的剂量-效应作用(P = 0. 02)，这表明采用递增剂量达400mg/kg的纤维蛋白原使得总血液流失减少， 当纤维蛋白原剂量为600mg/kg时达到一个平台，如图.7所示。实施例中的结果显示，接受 300mg/kg纤维蛋白原的动物中所获得的纤维蛋白原浓度接近没有出血的对照动物中所获得的基线值。采用400mg/kg纤维蛋白原治疗的动物中的纤维蛋白原浓度甚至高于相同组的对照动物。重要的是，实施例中显示，即使采用高剂量的纤维蛋白原，分析生物学或组织学参数后也没有观察到高凝血现象。实施例中的结果证实血块稳固性受到低纤维蛋白原水平的影响，低纤维蛋白原水平是在由稀释凝血障碍使用的实验模型中导致的。实施例中的结果证实了在此类凝血障碍中纤维蛋白原的关键性作用。纤维蛋白原的作用通过下列事实进一步得到证实单次给予纤维蛋白原具有以剂量依赖性模式调整凝血障碍作用的内在可能性。同样，实施例中的结果显示将纤维蛋白原浓度至少完全恢复到正常水平 (ROTEM 实验，EXTEM MCF)或者甚至略微高于正常的水平(INTEM MCF和血块重量) 对于重新建立最佳凝血而言是必需的。如上所述，显而易见的是，即使在高剂量纤维蛋白原的情况下，也没有观察到可能存在的高凝血现象。因此，实施例中的结果显示，在给药前无需确定循环纤维蛋白原水平，通过给予单次大剂量的纤维蛋白原能够防止止血障碍的加重，而且对于患者而言是非常安全的，因为令人完全惊奇的是，即使在高剂量纤维蛋白原的情况下，也没有观察到可能存在的高凝血作用。另外，本发明显示，给予单次高剂量的纤维蛋白原不会诱导超敏反应(测定血浆组胺水平)。对于所有的纤维蛋白原剂量(37. 5mg/kg-600mg/kg)而言，血浆组胺水平都是稳定的。另外，给予纤维蛋白原后，TNF-α的血浆浓度有所降低或者保持稳定。最后，从未检测到内皮素-1。总之，这些结果证实快速给予单次大剂量的纤维蛋白原治疗严重急性出血对于患者而言是无害的。本发明涉及纤维蛋白原在生产用于治疗严重急性出血的医用产品中的用途，所述医用产品用于以等于至少4. 5g纤维蛋白原的量单次剂量给予。
本发明还涉及纤维蛋白原在治疗严重急性出血中的用途，用于通过胃肠外给药， 优选通过静脉给药。本发明还涉及预防或治疗严重急性出血的方法，该方法包括以等于至少4. 5g量的纤维蛋白原的给药步骤。本发明显示，以至少等于4. 5g纤维蛋白原的预定量单次给药的步骤足以预防或治疗严重急性出血。实施例中显示，给予至少等于4. 5g纤维蛋白原的预定量是有效的，并且当快速给予纤维蛋白原时不会导致任何不需要的作用。尤其特别的是，在实施例中描述的猪实验模型中，600mg/kg量的纤维蛋白原可以在30分钟的给药步骤中给予。转换到人类，实施例中的结果显示6g剂量的纤维蛋白原可以可以在少于30分钟的给药步骤中非常快速地给予。根据本发明，少于30分钟的给予纤维蛋白原的步骤的持续时间包括小于四、28、 27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7 或 6 分钟的持续时间。在实施例中具体描述的情况中，6g量的纤维蛋白原的给予步骤的持续时间为5分钟，不会在患者中产生不需要的作用。根据本发明，少于30分钟的给予纤维蛋白原的步骤的持续时间包括给予步骤的持续时间大于1分钟。根据本发明的纤维蛋白原的使用方法，避免了在给予纤维蛋白原之前对于患者循环纤维蛋白原水平的检测的强制依赖，对于预防或治疗患者临床紧急事件而言，这是非常重要的技术优势，因为快速的预防或治疗干预对于患者的生存机会而言是决定性的。因此，本发明的纤维蛋白原的用途的进一步的特征在于医用产品用于以等于至少
4.5g纤维蛋白原的量单次剂量给予，在其给予患者之前不需要检查或确定循环纤维蛋白原水平。因此，本发明的预防或治疗的方法的特征还在于它不包括在给予纤维蛋白原步骤之前的检查或确定循环纤维蛋白原水平的步骤。另外，本发明的纤维蛋白原用途的特征还在于医用产品用于以等于至少4. 5g纤维蛋白原的量单次剂量给予，在其给予患者之后不需要检查或确定循环纤维蛋白原水平。 因此，本发明的预防或治疗的方法的特征还在于它不包括检查或确定循环纤维蛋白原水平的步骤，随后是给予纤维蛋白原的步骤。另外，不测定循环纤维蛋白原水平也表明其具有经济学优势，降低了预防或治疗的总费用。纤维蛋白原的量可以至少是4. 5g、4. 6g、4. 7g、4. 8g、4. 9g、5g、5. lg、5. 2g、5. 3g、
5.4g、5. 5g、5. 6g、5. 7g、5. 8g 或 5. 9g。尽管给予的纤维蛋白原的最大量不是基本特征，但是所述优选的纤维蛋白原的量优选最多15g，特别优选最多12g。优选纤维蛋白原的量约为6g，它包括纤维蛋白原的量在5. 5g-6. 5g的范围内，包括 5. 8g-6. 2g。本发明的纤维蛋白原的用途适合于预防和治疗某些严重急性出血。例如，本发明的纤维蛋白原的用途适合于治疗产后出血。从传统的医学意义上讲，产后出血被定义为分娩后M小时出血量大于500mL。
产后出血的各种危险因素是已知的，包括顽固性贫血、先天性凝血障碍的存在、 子宫收缩乏力的风险(例如，多胎产、子宫膨胀过度、分娩时间过长或者太快、绒毛膜羊膜炎)、子宫回缩异常的风险(例如，胎盘滞留或凝结，子宫纤维瘤或畸形，胎盘增生)、获得性凝血障碍、产道损伤，包括外阴切开术、子宫反转、子宫破裂或剖腹产。因此，在具有引发产后出血的重大风险的患者中，本发明的纤维蛋白原的用途可以是预防性的。然而，本发明的纤维蛋白原的用途主要是用于治疗性的，用于实际上已经发生产后出血的患者。同样，本发明的纤维蛋白原的用途适合于预防和治疗手术期间引发的出血。事实上，外科医生可以根据经验预先判断与导致严重急性出血的高风险相关的手术过程。这也是为什么本发明的纤维蛋白原的用途也适合于预防或治疗手术过程(手术) 中导致的严重急性出血的原因。另一种需要紧急治疗的严重急性出血情况为严重物理创伤后的创伤性出血休克， 它通常与血容量的急剧减少以及急性贫血有关。在创伤性出血休克的情况下，患者的预期生命与血液流失量以及治疗措施的及时性直接相关。这是急性出血的另一种情况，其治疗策略的主要方面是重建凝血机制。因此，另一方面，本发明的纤维蛋白原的用途适合于治疗物理创伤导致的严重急性出血，也称为创伤性出血休克。特别优选纤维蛋白原由人纤维蛋白原构成。在本发明的用途的某些实施方案中，纤维蛋白原由天然来源的纯化纤维蛋白原构成。在根据本发明的用途的其他实施方案中，纤维蛋白原由重组纤维蛋白原构成。 例如，有可能采用根据下列PCT国际申请中描述的任一种方法制备的重组纤维蛋白原 W0-207/10;M47、W0-2005/010178、W0-1996/077^ 或 W0-1995/022249。所述重组纤维蛋白原可以是药用组合物形式，其中重组纤维蛋白原分子与一或多种药学上可接受的赋形剂组
I=I O在其中纤维蛋白原是由天然来源的纯化纤维蛋白原构成的本发明的用途实施方案中，所述纤维蛋白原采用人血浆纯化，并且如果需要的话，它可以与一或多种药学上可接受的赋形剂组合。例如，可以采用根据欧洲专利申请EP 1 739 093中所述方法制备的天然来源的纯化纤维蛋白原。这是天然来源的纯化纤维蛋白原，它是以纤维蛋白原浓缩物的形式，通过纯化方法自人血浆的可溶解部分获得，包括下列连续步骤a)包括下列步骤的色谱纯化i)将所述可溶解部分上样于弱碱型(low base type)阴离子交换柱，事先采用预定离子强度的碱性pH缓冲液平衡，ii)通过增加所述缓冲液的离子强度将生物粘合剂洗脱，b)向至少部分生物粘合剂的洗脱液中加入至少一种能够沉淀因子XIII的化学试剂，将因子XIII自纤维蛋白原中分离出来，回收获得的上清液中的纯化的纤维蛋白原，和c)将纤维蛋白原溶液、生物粘合剂溶液以及再溶解的FXIII溶液渗滤，随后将所述溶液冷冻干燥。
也可以采用根据PCT申请W0-2005/004901中所述方法制备的天然来源的纯化纤维蛋白原。这是天然来源的纯化纤维蛋白原，它是以纤维蛋白原浓缩物的形式，通过纯化方法获得，该方法包括通过热处理人血浆低温沉淀蛋白的冻干物而灭活病毒的步骤。描述于 PCT申请W0-2005/004901中的方法的显著特征在于在将低温沉淀蛋白转化为冷冻干燥形式之前，加入稳定化和增溶制品，该制品包含精氨酸(至少一种疏水性氨基酸)和柠檬酸三钠的混合物。也可以采用根据欧洲专利申请EP 1 739 093中所述通用方法制备的天然来源的纯化纤维蛋白原，该方法包括PCT申请W0-2005/004901中所公开的方法中描述的病毒灭活步骤。天然来源的纯化形式的纤维蛋白原(通过选自欧洲专利申请EPl 739 093或PCT 申请W0-2005/004901中所述方法获得的人血浆纤维蛋白原浓缩物形式)具有包含高浓度人纤维蛋白原的优势，浓度可达到15g/l-20g/l。该人纤维蛋白原浓缩物在本发明中也可以表示为“reTi”，它特别适合于本发明中纤维蛋白原的用途，因为本发明要求给予至少等于4. 5g的较大量的纤维蛋白原，优选单次剂量给予，而此类浓缩物具有较高的纤维蛋白原回收率。此类血浆来源的人纤维蛋白原浓缩物的另一个优势是在所述浓缩物中其它血浆蛋白的量较低，这极大地减少了给予患者的血浆蛋白的总量。另一个优点是此类人纤维蛋白原浓缩物的高度病毒安全性。在某些优选的实施方案中，纤维蛋白原为冷冻干燥形式，如果需要，它可以与一或多种药学上可接受的赋形剂组合使用。在部分优选的实施方案中，所述纤维蛋白原为冷冻干燥形式，如果需要，可以与一种或多种可药用赋形剂混合，含于内部压力维持低于大气压的容器中。最好，容器内部体积维持部分真空。优选所述冷冻干燥的纤维蛋白原浓缩物含于真空重构装置中。给予患者的纤维蛋白原溶液可以通过向所述真空瓶加入适当体积的溶剂例如水或无菌、无热原盐水溶液即时制备。通常而言，由冷冻干燥的纤维蛋白原浓缩物经重构获得的纤维蛋白原溶液于25°C储存最多7天，优选最多M小时，或者优选于25°C储存最多6小时。在根据本发明的用途的部分实施方案中，纯化的纤维蛋白原或重组的纤维蛋白原为药用组合物形式，其中所述纤维蛋白原与一种或多种选自下列的赋形剂混合赖氨酸盐酸盐、氨丁三醇、甘氨酸、柠檬酸钠和氯化钠。在部分实施方案中，所述纤维蛋白原可以与所有下列赋形剂混合赖氨酸盐酸盐、氨丁三醇、甘氨酸、柠檬酸钠和氯化钠。优选用于重构给药的液体药用组合物时使用的溶剂为注射用水。在根据本发明的用途的其他实施方案中，纯化的纤维蛋白原或重组的纤维蛋白原为药用组合物形式，其中所述纤维蛋白原与一种或多种选自下列的赋形剂混合精氨酸盐酸盐、异亮氨酸、赖氨酸盐酸盐、甘氨酸和柠檬酸钠。在部分实施方案中，所述纤维蛋白原可以与所有下列赋形剂混合精氨酸盐酸盐、异亮氨酸、赖氨酸盐酸盐、甘氨酸和柠檬酸钠。优选用于重构给药的液体药用组合物时使用的溶剂为注射用水。用IOOml的WFI (注射用水)重构的纤维蛋白原浓缩物的瓶中含有1. 5g纤维蛋白原、4g精氨酸、Ig异亮氨酸、0. 2g赖氨酸盐酸盐、0. 2g甘氨酸和0. 25g柠檬酸钠。
在根据本发明的用途的另外的实施方案中，纯化的纤维蛋白原或重组的纤维蛋白原为药用组合物形式，其中所述纤维蛋白原与一种或多种选自下列的赋形剂混合人白蛋白、氯化钠、精氨酸盐酸盐、柠檬酸钠和氢氧化钠。在部分实施方案中，所述纤维蛋白原与所有下列赋形剂混合人白蛋白、氯化钠、精氨酸盐酸盐、柠檬酸钠和氢氧化钠。优选用于重构给药的液体药用组合物时使用的溶剂为注射用水。优选，以等于至少4. 5g的量给予纤维蛋白原的步骤通过胃肠外途径给予适合注射的医用产品进行，例如如上所述的药用组合物。在根据本发明的纤维蛋白原的用途的优选实施方案中，通过静脉(IV)途径给予适合给药的医用产品实施该方案。因此，在根据本发明的预防或治疗方法的优选实施方案中，以等于至少4. 5g的量给予纤维蛋白原的步骤包括通过静脉途径给药的步骤。在根据本发明的用途的部分实施方案中，使用含有冷冻干燥的纤维蛋白原浓缩物的真空容器，含有1. 5g纤维蛋白原，也就是说使用4个容器内的内容物以给予所需的约6g 的单次剂量的纤维蛋白原。在部分优选的实施方案中，含有人纤维蛋白原的重构液体组合物采用静脉途径以 5mL/分钟-30mL/分钟的给药速率给药。优选，所述人纤维蛋白原的重构液体组合物采用静脉途径以约20mL/分钟的给药速率给药，速率范围为15mL/分钟_25mL/分钟。高给药速率在严重急性患者需要紧急解决体内平衡问题的情况下也是可以的。本发明还涉及含有纤维蛋白原作为活性组分的药物组合物，该药物组合物的特征在于适合以包含至少等于4. 5g纤维蛋白原、优选至少约6g纤维蛋白原的单次剂量通过胃肠外给药。通过下面的非限定性实施例对本发明进行进一步说明。 实施例实施例1 产后出血的治疗A.材料和方法患者本研究涉及320名在怀孕多于27周时通过阴道途径或者通过剖腹产生产并严重产后出血的患者。严重产后出血的特征在于出血体积大于或等于IOOOmL并且对2线子宫收缩剂治疗耐受。人血浆纤维蛋白原浓缩物重构后立即单次静脉注射给予6g的TOTl对患者进行治疗。人纤维蛋白原浓缩物含有1.5g纤维蛋白原。治疗方案无需先测定循环纤维蛋白原水平，给予6g的纤维蛋白原。治疗后的临床观察通过静脉途径快速给予6g的TOTl进行治疗后，监测给予TOTl后血液流失的体积以及给予reTi至出血结束的时间。治疗是否成功通过12小时后的下列情况进行评价不用求助(recourse)到进一步供药(from absence of recourse to further resources)、大量输血以及死亡。实施例2 对止血猪模型的作用A.材料和方法Α. 1.研究目的实施例2的研究包括比较不同剂量(37. 5mg/kg-600mg/kg)的纤维蛋白原组合物 (称为“reTi”的人纤维蛋白原浓缩物组合物)对猪的作用。在动物标准化骨和肝损伤后， 测定对动物止血和血液流失的作用。目的实施例2的研究目的为测定-用不同浓度的纤维蛋白原进行凝血治疗的效能是否诱导对止血和血液流失的不同作用；-是否单次给予增加剂量的纤维蛋白原浓缩物能够诱导不同的血浆纤维蛋白原水平和/或导致不同的纤维蛋白原血浆半衰期；和-用纤维蛋白原浓缩物进行凝血治疗是否能够诱导与随后的血栓栓塞并发症有关的超凝状态。A. 2.动物该研究采用年龄为12-14周、体重为25_35kg的42只健康猪进行。采用动物模型以测定在诱导稀释凝血病后给予纤维蛋白原的情况下血块稳固性的动力学和血液流失的动力学。A. 3.麻醉在开始实验前1小时，先给予动物阿扎哌隆(％ig/kg，肌肉注射-Mresni 1 ， Janssen, Vienna,奥地利)和阿托品(0. lmg/kg,肌肉注射)。用异丙酚(l-2mg/kg,静脉注射)诱导并维持麻醉。为镇痛，注射哌腈米特(30mg，半衰期为约4-8小时的阿片样物质-Dipidolor ，Janssen, Vienna，奥地利)。气管内麻醉后，每小时给予罗库溴铵 (rocuronium)O. 6mg/kg 进行肌肉松弛。气管内麻醉后，对股动脉、两个股静脉以及锁骨下动脉进行解剖性准备。在实验期间，用拟晶体(Ringer乳酸盐溶液)提供液体替换的基线需求(％ig/kg体重)。然后将下列侵入性导管置于这些血管(vessels)中-大直径导管(双腔静脉入口，长度20cm)，-Swan-feinz 导管，和-动脉血压测定的侵入装置。然后测定最初的基线值(在图1中时间标记(time mark)为No. 2).Α. 4.血液稀释根据上述进行仪器调试(instrumentation)后，用6 %的HES 130/0. 4溶液(Voluven , Fresenius Co.，Bad Homburg,德国)对动物进行等容量血液稀释 (normovolaemic haemodilution)。采用大直径导管从动物逐步取血液，以1 1的比例用胶体溶液替换血液。用 1700ml 6% 的 HES 溶液130/0. 4 ( Voluven , Fresenius Co.，Bad Homburg，德国)对例如30kg体重的动物进行输注使总血液流失估计达到约60%。血液稀释后，在血液回收机(cell saver)型系统(Cats , Fresenius)中对收集的血液进行处理，浓缩并再输入以防止与血液动力学有关的贫血。根据血栓弹力图测定，当产生的凝血病最大血块稳固性(MCF) 值达到低于40mm时，达到等容量血液稀释(在图1中时间标记为Nos. 3和4)。A. 5.标准化骨损伤通过在给予测试的医用产品后5分钟，在胫骨头钻3mm的洞至穿透骨髓所需的深度制造标准化骨损伤。骨损伤后5分钟，测定纤维蛋白原(在图1中时间标记为No. 5)，随后给予测试的医用产品(在图1中时间标记为No. 6)。从骨和肌肉之间的伤口表面抽吸除去过量的血液，在收集杯(collecting cell)中合并。同时还测定至发生止血的时间。当由于骨损伤导致的血液流失超过500ml时，采用标准纱布绷带压迫使出血停止，确保从血液动力学观点看猪是稳定的从而能够进行下一个4小时的观察。给予测试的医用产品15分钟后，再对所有测定的参数进行测定(时间参数为 No. 4)。此外，在给予测试的医用产品1小时、2小时和4小时后，测定所有的参数(在图1 中时间标记为No. 7)。A. 6.标准化肝损伤给予纤维蛋白原后4小时，通过在肝中叶上方镰状韧带用模具制造中央切口造成标准化肝损伤。产生的肝切口长约8cm，深约2cm(在图1中时间标记为No.8)。对儿茶酚胺介导的循环没有作用。对标准化肝损伤的使用进行选择从而可以证明凝血的改变对死亡率产生了负面影响。在肝损伤后2小时或者在怀疑即将死亡前，测定所有的参数(在图1中，时间标为 No. 9)。在肝创伤后2小时，通过给动物输注钾使存活动物安乐死。先前初步研究结果表明， 随后再观察 2 小时足以(Fries 等，2006，Br. J. Anaesth.，第 97(4)卷=460-467 ；Fries 等， 2005，Br. J. Anaesth.，第 95 (2)卷172-177)。应当指出的是，该研究是盲的。A. 7.动物的随机分配(“随机化”)采用适当的软件，将动物随机分配在组1-6中(1 :37. 5mg/kg，2 :75mg/kg，3 150mg/kg, 4 :300mg/kg,5 :450mg/kg and 6 :600mg/kg)。A. 8.实验方案该实验方案特别在图1和下表中说明，其中描述了在研究中使用的42只猪的治疗细节。表 权利要求
1.纤维蛋白原在生产用于预防或治疗严重急性出血的医用产品中的用途，所述医用产品用于在单次剂量中以等于至少4. 5g纤维蛋白原的量在少于30分钟的时间内快速给予。
2.权利要求1的用途，其中所述医用产品适于肠胃外途径给予，优选静脉途径。
3.权利要求1或2中任一项的用途，其中所述医用产品的给予独立于初始纤维蛋白原水平。
4.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述医用产品使得能恢复血液的凝血能力。
5.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述医用产品使得能控制严重急性出血并预防其恶化为不可控制的出血。
6.权利要求1-3中任一项的用途，用于治疗严重急性产后出血。
7.权利要求1-3中任一项的用途，用于预防或治疗手术严重急性出血。
8.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述医用产品用于治疗严重急性创伤后出血。
9.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述医用产品用于预防和治疗其他严重急性出血。
10.权利要求1-9中任一项的用途，其中所述纤维蛋白原选自重组纤维蛋白原和纯化天然纤维蛋白原。
11.权利要求1-9中任一项的用途，其中所述纤维蛋白原由具有高病毒安全性的纤维蛋白原浓缩物组成。
12.药物组合物，该药物组合物包括作为活性成分的纤维蛋白原，所述药物组合物适于以单次剂量等于至少4. 5g的量胃肠外给予。
全文摘要
本发明涉及纤维蛋白原在生产用于预防或治疗严重急性出血的医用产品中的用途，所述医用产品用于在单次剂量中以等于至少4.5g纤维蛋白原的量给予。
文档编号A61P7/04GK102369020SQ201080012611
公开日2012年3月7日 申请日期2010年3月5日 优先权日2009年3月6日
发明者B·帕德拉齐, C·泰布尔 申请人:法国血液分割暨生化制品实验室