专利名称：具心肌保护作用的红花有效组分及制备方法与用途的制作方法
技术领域：
本发明属中药领域，涉及一种治疗心血管疾病的中药提取物，具体涉及从红花中 提取的有效组分，制剂及其制备方法与用途。
背景技术：
心血管疾病是危害人类健康的第一杀手，近年来，随着我国人口老年化以及人们 工作、生活、饮食结构及环境等的变化，冠心病等心脑血管疾病的发生率也逐年增多，严重 威胁着人民的身心健康。天然产物中许多活性物质具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 开发成治疗冠心病和心绞痛的新药。因而从天然产物中寻找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物质，是发现、开发新药的有效途径之一。我国药用生物资源十分丰富，其生理活 性物质是研究和发现新药先导化学物，开发新药的天然宝库。目前，我国从天然产物中提取 活性物质，用于开发成治疗冠心病、安全性好、毒性低的新药还很少，从天然产物中提取活 性物质，开发成具有抗心肌缺血，用于治疗冠心病和心绞痛的新药，具有重要应用价值和广 阔发展前景。红花为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的管状花。性味性温，味辛，具 有活血通径、散瘀止痛的功效。含有红花黄色素(Safflor yellow)、红花苷(Carthamin)、 15 α，20β_ 二 羟基- Δ 4-娠烯 _3_ 酮(15 α，20 β -Dihydroxy-Δ 4-pregnen-3_one)、 木犀草素-7-葡萄糖苷(Luteolin-7-glucoside)、红花醌苷(carthamone)、新红花苷 (neo-cqrthamin)、腺嘌呤核苷(adenosine)、黄色素(safflor yellow Α)、山柰酚、槲皮 素及槲皮素、槲皮素-3-葡萄糖苷、桷皮素-7-葡萄糖苷、山柰酚-3-芸香糖苷和芦丁 (rutin)、红花多糖等化合物。现代药理研究表明红花水提取物及红花水溶性混合物-红花黄色素有增加冠脉 血流量及心肌营养性血流量的作用，在兔、大鼠、犬等造成实验性心肌缺血或心肌梗塞的动 物模型上，红花及其制剂均有不同程度的对抗作用。红花可使因垂体后叶素引起的大鼠或 家兔急性心肌缺血有明显保护作用；可使反复短暂阻断冠状动脉血流造成麻醉犬急性心肌 缺血的程度明显减轻，范围缩小，心率减慢，并保护急性心肌梗塞区的边缘，缩小梗塞范围 及降低边缘区心电图ST段抬高的幅度，从而改善缺血心肌氧的供求关系。红花具有非常显 著地抑制ADP诱导的家兔血小板聚集作用，并对ADP已聚集的血小板也有非常明显的解聚 作用。红花尚可明显延长家兔血浆复钙时间、凝血酶原时间和凝血时间。表明它能同时影 响体内和体外的凝血系统。此外，红花油有降低血脂作用。红花具有以上对心血管系统的 明显药理作用，因此，从红花中分离出有效组分，开发出治疗心血管疾病的现代中药具有重 要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有心肌保护作用的红花有效组分，通过以下步骤制备 获得将红花药材加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液，将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗 脱液I，弃之，然后改用氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后得样 品；用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为半制备柱，流动 相为水和乙腈，梯度洗脱。具体制备步骤如下取红花药材，加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流 1小时，提取2次，滤液合并得提取液。将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正 相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50:1的石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液 I，弃之，然后改用体积比为10:1的氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓 缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品制备色谱的分离条件色谱柱为 制备柱(ZORBAX SB C18 ； 9. 4mmχ 250mm, 5 μιη ),流动相为水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下0min时，流动相A为70%的水， 流动相B为30%的乙腈溶液；18 min时，流动相A为60%的水，流动相B为40%的乙腈溶 液；30min时，流动相A为50%的水，流动相B为50%的乙腈溶液；流速为3ml/min，柱温为 室温；经制备液相色谱分离，在17. (Γ23. Smin时间段收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有 效组分。本发明的另一个目的是提供所述红花有效组分在制备治疗心血管疾病的药物中 的应用。经药理实验证明，本发明提供的红花有效组分对心肌细胞有保护作用。本发明的红花有效组分可以作为活性成分，加入药剂学上接受的辅料，按照药剂 学上记载的制剂的制备方法制成制剂。所述的制剂包括注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣 片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、 丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩片、微丸等。本发明的红花有效组分及其制剂可在制备治疗、预防心血管疾病药物中应用。本 发明提供的制备方法设计合理，能快速准确地得到有效成分，在药理研究上更易于阐明其 作用机制，在生产中更易于药物的质量控制。
具体实施例方式下面将结合实施例进一步详细说明本发明的实质内容和有益效果，该实施例仅用 于说明本发明而非对本发明的限制。实施例一红花有效组分的制备
将红花药材加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液，将提取液浓缩成浸膏，并将其与 硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为流洗脱剂，得洗 脱液I，弃之，然后改用氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后得样 品；用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为半制备柱，流动 相为水和乙腈，梯度洗脱。在17. (Γ23. Smin时间段收集溶液，浓缩干燥后得到有效组分。实施例二红花有效组分的制备
取红花药材250g，将其粉碎后加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时， 提取2次，滤液合并得提取液。将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶 柱对其进行分离，首先用体积比为50:1的石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I，弃之，然后改用体积比为10:1的氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥 后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品制备色谱的分离条件色谱柱为半制备 柱(ZORBAX SB C18 ； 9. 4mm 250mm, 5 μηι ),流动相为水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下 Omin时，流动相A为70%的水，流动相B为30%的乙腈溶液；18 min时，流动相A为60%的 水，流动相B为40%的乙腈溶液；30min时，流动相A为50%的水，流动相B为50%的乙腈溶 液；流速为3ml/min，柱温为室温；经制备液相色谱分离，在17. (Γ23. Smin时间段收集溶液， 溶液经浓缩干燥后得到有效组分。实施例三滴丸制剂的制备
取红花有效组分0. 5g与10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加热熔融，化料后移至滴丸 滴灌中，药液滴至6、°C液体石蜡中，除油，制得滴丸400粒。实施例四冻干粉针剂的制备
取红花有效组分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸钠0. 9g和蒸馏水1000ml，上述组分混合 均勻后，分装400支，冷冻干燥，即得。实施例五红花组分的活性评价实验
1.红花组分对H》2损伤心肌细胞的保护作用
体外培养H9C2心肌细胞，培养液为DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%双 抗。取对数生长期细胞置于96孔细胞培养板上，恒温培养M h后，加入200 μ mol/mL H2O2 损伤心肌细胞30 min,再加入终浓度为50 μ g/mL的红花组分孵育M h，采用MTT法测定细 胞活力。结果表明，该组分对H2O2损伤心肌细胞的保护率为16.27%。2.红花组分对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用
体外培养H9C2心肌细胞，培养液为DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%双 抗。取对数生长期细胞置于96孔细胞培养板上，恒温培养M h后，在缺氧小室中培养6 h。 缺氧结束后，取出细胞培养板加入经无糖Hank’ s稀释的终浓度为50 μ g/mL的红花组分，在 正常培养条件下孵育6 h，取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果表明，该组 分对缺氧复氧损伤的心肌细胞保护率为13. 04%。
权利要求
1.一种具有心肌保护作用的红花有效组分，其特征在于，通过以下步骤获得将红花 药材加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液，将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶进行拌 样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I，弃之， 然后改用氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后得样品；用制备液 相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为半制备柱，流动相为水和乙 腈，梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的一种具有心肌保护作用的红花有效组分，其特征在于，乙酸 乙酯和乙醇的体积比为1:0.纩1.2，石油醚和乙酸乙酯的体积比为47飞3:1，氯仿和甲醇的 体积比为8 13:1。
3.根据权利要求1所述的一种具有心肌保护作用的红花有效组分，其特征在于，通 过以下步骤获得取红花药材加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提 取2次，滤液合并得提取液；将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶 柱对其进行分离，首先用体积比为50:1的石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I，弃 之，然后改用体积比为10:1的氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干 燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品制备色谱的分离条件色谱柱为半制 备柱(ZORBAX SB C18; 19. 4mm250mm, 5 μπι )，流动相为水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下0min，30%B ； 18 min, 40%B 30min,50%B ；流速为3ml/min，柱温为室温；经制备液相色谱分离，在17. 0-23. 8min时间段 收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。
4.根据权利要求1或3所述方法制备获得的一种红花有效组分在制备治疗心血管疾 病的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物由红花有效组分加入药剂学上 可接受的辅料，按照药剂学上记载的制剂制备方法制成。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的制剂包括液体制剂或固体制剂。
全文摘要
本发明提供一种具有心肌保护作用的红花有效组分，将药材通过加热提取，浓缩，硅胶柱分离，洗脱，洗脱液浓缩干燥，再用制备液相色谱继续分离，收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。本发明提供的红花有效组分可在制备治疗、预防心血管疾病药物中的应用。本发明方法设计合理，能快速准确地得到有效成分，在生产中更易于药物的质量控制。
文档编号A61P9/10GK102119948SQ20111005903
公开日2011年7月13日 申请日期2011年3月13日 优先权日2011年3月13日
发明者李云飞, 王毅, 程翼宇, 葛志伟 申请人:浙江大学