专利名称：从金银花叶中提取活性成分的方法
技术领域：
本发明涉及一种从中药材叶中提取活性成分的方法，尤其涉及一种从金银花叶中提取活性成分的方法。
背景技术：
金银花是一种常用中药材，其主要活性成分为绿原酸和异绿原酸，其他活性成分还有黄酮类、挥发油等，具有抑菌、抗病毒、解热、抗炎、保肝、止血、抗氧化、免疫调节等作用。几千年传统经验及近代药理实验和临床应用都证明金银花对于多种病菌有较强的抗菌作用和较好的治疗效果。现有技术中关于金银花活性成分和有效部位的提取，仅仅利用金银花花蕾为原料，以甲醇、乙醚或乙酸乙酯为提取溶剂，主要包括直接煎煮法、浸渍法、热回流法等，并且各种提取方法仍为传统的水提醇沉或醇提水沉，在后续处理中产生大量沉淀，不仅使得绿原酸等活性成分大量损失，还给过滤等工艺操作带来较大的困难，耗时耗能。另外，这些方法均具有提取周期长，所用溶剂具有毒性、用量大，要求温度高致使活性成分降解等诸多缺点，并且最终的目标产品提取率和回收率很低。因此传统的加工工艺没有能充分利用金银花中的活性成分，从而大大降低了其应用价值，造成很大的资源浪费。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术之缺陷，提供一种从金银花叶中提取活性成分的方法，该方法具有工艺简单、成本低、易操作、提取物中有机酸含量高、适合工业化生产等特点。本发明所述技术问题是由以下技术方案实现的 一种从金银花叶中提取活性成分的方法，它按如下步骤进行
a.鲜金银花叶预处理将鲜金银花的叶片于45-60°C干燥12-17小时后，粉碎成40-300 目的粉末，冷藏保存，备用；
b.超临界C02萃取
将步骤a中所得粉末装入萃取釜中，萃取温度25 35°C，萃取压力20 60 MPa, C02 流速10 25 kg/h ；
萃取物在分离釜中进行两级减压分离，一级分离釜的压力为10 18 MPa,温度为25 35 0C ；二级分离釜压力为5 8 MPa，温度为25 50°C，收集产物，备用；
c.超声波强化浸提将步骤b所得产物按重量比加入3 10倍的提取溶剂，超声波强化浸提温度为20 50°C，超声功率为120 250w，超声时间为30 60min ；浸提液在_5 0°C、以 5000 r/min 速度离心 10 20 min ；
然后沉淀部分加入3 5倍重量比的提取溶剂，重复上述步骤；合并所得上清液，备
用；
d.浓缩上清液将步骤c所得上清液在50 60°C，0.OlMPa下减压蒸发并真空干燥得
3膏状物，备用；
e.制得活性成分将步骤d所得膏状物用蒸馏水进行溶解，再用酸调节PH值为1 7 (以便使被分离物符合大孔树脂分离要求)，上大孔吸附树脂分离，依次以0. 5-1. Oml/min的流速用水、乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，再用有机溶剂进行萃取，减压回收有机溶剂，最后得到活性成分。上述从金银花叶中提取活性成分的方法，其中， 步骤a中所述冷藏温度为0-20°C ；
步骤c中所述提取溶剂为无水乙醇或丙酮；
步骤e中所述蒸馏水与膏状物的重量比W浸膏W蒸馏水=1 :10-25 ；所述调节pH值用酸为浓盐酸，其浓度为30%-36. 5% ；所述大孔吸附树脂为DlOl大孔吸附树脂或AB-8大孔吸附树脂；所述乙醇水溶液其体积浓度为50% 90% ；所述有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇或异戊醇。本发明首次提出综合利用的思想，以金银花叶片作为提取活性成分的原料，利用本发明技术可以实现金银花叶中活性成分的综合利用，拓展金银花植株的应用价值。使用本发明提取技术所得活性成分中含有两大类，一类是弱极性的脂溶性物质，如芳樟醇、双花醇、香叶醇等活性挥发油成分；另一类是绿原酸、异绿原酸、黄酮类化合物等强极性物质。利用超临界C02萃取技术既可以使附加值高的脂溶性活性挥发油成分得到回收利用，又相当于为提取金银花叶中有机酸等活性部位进行脱脂预处理，不但有助于对金银花叶挥发油的充分利用，更有助于有机酸的后期纯化。首次运用大孔吸附树脂富集、溶剂萃取相结合的方法获得有机酸含量高于50%的提取物，建立了一套较为科学合理的金银花叶有机酸提取分离工艺流程。该技术减少了有机酸常规提取过程中因沉淀造成的损失，提高有机酸的回收率，使有机酸总提取率达到1. O 3. 0% ；减少了有机酸常规提取液在后期过滤中的困难； 在不影响有机酸总量的前提下，增加了金银花叶中芳樟醇、双花醇、香叶醇、总黄酮等的利用。该技术具有工艺简单、成本低、易操作、制取成品有机酸含量高等优点，有机酸含量高达 68%，适于工业化生产，所得活性成分可用于保健品或药品等诸多场合。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明做一步详细说明。实施例1
a.鲜金银花叶预处理将500g鲜金银花叶片于45°C干燥14小时后，粉碎成100目的粉末，于5°C条件下冷藏，备用；
b.超临界C02萃取
将200g步骤a所得粉末装入萃取釜中，萃取温度35°C，萃取压力55 MPa, C02流速15 kg/h;—级分离釜的压力为15 MPa，温度为35°C，二级分离釜压力为5 MPa，温度为50°C，收集产物，备用；
C.超声波强化浸提取IOOg步骤b所得产物，加入IOOOg无水乙醇，温度为20°C，超声功率为200 w，超声浸提30 min ；浸提液在-4"C、以5000 r/min的速度离心20 min ； 然后沉淀部分加入500 g无水乙醇，重复上述提取步骤；合并所得上清液，备用； d.浓缩上清液将步骤c所得上清液在50°C，0. OlMPa下经过减压蒸发和真空干燥得膏状物质，备用；
e.制得活性成分将步骤d所得膏状物用50ml蒸馏水溶解，再用30%_36. 5%的浓盐酸调节PH值1后，上DlOl大孔吸附树脂，依次以0. 5ml/min的流速用水、90%乙醇进行洗脱， 收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，再用乙酸乙酯进行萃取，减压回收乙酸乙酯，最后得到有机酸含量约为68%的活性成分。实施例2
a.鲜金银花叶预处理将500g鲜金银花叶片于60°C干燥12小时后，粉碎成40目的粉末，于10°C条件下冷藏，备用；
b.超临界C02萃取
将200g步骤a所得粉末装入萃取釜中，萃取温度25°C，萃取压力20 MPa, C02流速10 kg/h ；一级分离釜的压力为18 MPa，温度为25°C，二级分离釜压力为8MPa，温度为25°C，收集产物，备用；
c.超声波强化浸提取IOOg步骤b所得产物，加入300g无水乙醇，温度为50°C，超声功率为120w，超声浸提60min ；浸提液在_5°C、以5000 r/min的速度离心10 min ；
然后沉淀部分加入300g无水乙醇，重复上述提取步骤；合并所得上清液，备用；
d.浓缩上清液将步骤c所得上清液在60°C，0.OlMPa下经过减压蒸发和真空干燥得膏状物质，备用；
e.制得活性成分将步骤d所得膏状物用W浸膏W蒸馏水=115的蒸馏水溶解，再用30%-36. 5%的浓盐酸调节pH值7后，上AB-8大孔吸附树脂，依次以1. Oml/min的流速用水、50%乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，再用正丁醇进行萃取，减压回收正丁醇，最后得到有机酸含量约为60%的活性成分。实施例3
a.鲜金银花叶预处理将500g鲜金银花叶片于50°C干燥17小时后，粉碎成300目的粉末，于-20°C条件下冷藏，备用；
b.超临界C02萃取
将200g步骤a所得粉末装入萃取釜中，萃取温度30 V，萃取压力60MPa，C02流速25kg/ h ；一级分离釜的压力为lOMPa，温度为30°C，二级分离釜压力为6MPa，温度为40°C，收集产物，备用；
c.超声波强化浸提取IOOg步骤b所得产物，加入600g丙酮，温度为40°C，超声功率为250w，超声浸提40min ；浸提液在0°C、以5000 r/min的速度离心15min ；
然后沉淀部分加入400g丙酮，重复上述提取步骤；合并所得上清液，备用；
d.浓缩上清液将步骤c所得上清液在55°C，0.OlMPa下经过减压蒸发和真空干燥得膏状物质，备用；
e.制得活性成分将步骤d所得膏状物用W浸膏W蒸馏水=120的蒸馏水溶解，再用30%-36. 5%的浓盐酸调节pH值5后，上AB-8大孔吸附树脂，依次以1. Oml/min的流速用水、80%乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，再用异戊醇进行萃取，减压回收异戊醇，最后得到有机酸含量约为62%的活性成分。实施例4
a.鲜金银花叶预处理将500g鲜金银花叶片于55°C干燥16小时后，粉碎成200目的
5粉末，于0°C )条件下冷藏，备用；
b.超临界C02萃取
将200g步骤a所得粉末装入萃取釜中，萃取温度32 °C，萃取压力40MPa，C02流速20kg/ h ；一级分离釜的压力为13MPa，温度为31°C，二级分离釜压力为7MPa，温度为35°C，收集产物，备用；
c.超声波强化浸提取IOOg步骤b所得产物，加入800g丙酮，温度为30°C，超声功率为150w，超声浸提50min ；浸提液在_3°C、以5000 r/min的速度离心16min ；
然后沉淀部分加入300g丙酮，重复上述提取步骤；合并所得上清液，备用；
d.浓缩上清液将步骤c所得上清液在60°C，0.OlMPa下经过减压蒸发和真空干燥得膏状物质，备用；
e.制得活性成分将步骤d所得膏状物用W浸膏W蒸馏水=115的蒸馏水溶解，再用30%-36. 5%的浓盐酸调节pH值3后，上AB-8大孔吸附树脂，依次以1. Oml/min的流速用水、60%乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，再用异戊醇进行萃取，减压回收异戊醇，最后得到有机酸含量约为59%的活性成分。 实施例5
a.鲜金银花叶预处理将500g鲜金银花叶片于55°C干燥14小时后，粉碎成250目的粉末，于15°C条件下冷藏，备用；
b.超临界C02萃取
将200g步骤a所得粉末装入萃取釜中，萃取温度30 V，萃取压力45MPa，C02流速25kg/ h ；一级分离釜的压力为15MPa，温度为35°C，二级分离釜压力为6MPa，温度为45°C，收集产物，备用；
c.超声波强化浸提取IOOg步骤b所得产物，加入700g丙酮，温度为35°C，超声功率为250w，超声浸提45min ；浸提液在_1°C、以5000 r/min的速度离心17min ；
然后沉淀部分加入400g丙酮，重复上述提取步骤；合并所得上清液，备用；
d.浓缩上清液将步骤c所得上清液在60°C，0.OlMPa下经过减压蒸发和真空干燥得膏状物质，备用；
e.制得活性成分将步骤d所得膏状物用W浸膏W蒸馏水=115的蒸馏水溶解，再用30%-36. 5%的浓盐酸调节pH值3后，上DlOl大孔吸附树脂，依次以1. Oml/min的流速用水、90%乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，再用异戊醇进行萃取，减压回收异戊醇，最后得到有机酸含量约为64%的活性成分。
权利要求
1.一种从金银花叶中提取活性成分的方法，其特征在于，它按如下步骤进行a.鲜金银花叶预处理将鲜金银花叶片于45-60°C干燥12-17小时后，粉碎成40-300 目的粉末，冷藏保存，备用；b.超临界C02萃取将步骤a中所得粉末装入萃取釜中，萃取温度25 35°C，萃取压力20 60 MPa, C02 流速10 25 kg/h ；萃取物在分离釜中进行两级减压分离，一级分离釜的压力为10 18 MPa，温度为25 35 0C ；二级分离釜压力为5 8 MPa，温度为25 50°C，收集产物，备用；c.超声波强化浸提将步骤b所得产物按重量比加入3 10倍的提取溶剂，超声波强化浸提温度为20 50°C，超声功率为120 250w，超声时间为30 60min ；浸提液在_5 0°C、以 5000 r/min 速度离心 10 20 min ；然后沉淀部分加入3 5倍重量比的同种溶剂，重复上述步骤；合并所得上清液，备用；d.浓缩上清液将步骤c所得上清液在50 60°C，0.OlMPa下减压蒸发并真空干燥得膏状物，备用；e.制得活性成分将步骤d所得膏状物用蒸馏水进行溶解，再用酸调节pH值1 7后， 上大孔吸附树脂，依次以0. 5-1. Oml/min的流速用水、乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液， 减压回收乙醇，再用有机溶剂进行萃取，减压回收有机溶剂，最后得到活性成分。
2.根据权利要求1所述从金银花叶中提取活性成分的方法，其特征在于，所述步骤a中冷藏温度为0-20°C ；所述步骤c中所述提取溶剂为无水乙醇或丙酮。
3.根据权利要求2所述从金银花叶中提取活性成分的方法，其特征在于，所述步骤e中所述蒸馏水与膏状物的重量比W浸膏W蒸馏水=1 :10-25 ；所述调节PH值用酸为浓盐酸，其浓度为30%-36. 5% ；所述乙醇水溶液其体积浓度为50% 90% ；所述有机溶剂为乙酸乙酯、 正丁醇或异戊醇。
4.根据权利要求3所述从金银花叶中提取活性成分的方法，其特征在于，步骤e中大孔吸附树脂为DlOl大孔吸附树脂或AB-8大孔吸附树脂。
全文摘要
一种从金银花叶中提取活性成分的方法，它包括鲜金银花叶预处理、超临界CO2萃取、超声波强化浸提、浓缩上清液、最后制得活性成分等步骤。应用本发明方法提取金银花叶片中活性成分，其中有机物酸可达到50%以上，大大提高其应用价值，得到的产品可应用于制药、保健品等诸多场合。
文档编号A61K127/00GK102166249SQ201110058959
公开日2011年8月31日 申请日期2011年3月11日 优先权日2011年3月11日
发明者牛志勇, 王志香, 王欢, 田会彦, 赵素娟, 郭艳玉, 陈淑芳 申请人:河北科星药业有限公司