专利名称：一种栀子提取物在制备药物中的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种梔子提取物的新用途，特别是涉及ー种梔子提取物在制备治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、以及心律失常药物中的用途。·
背景技术：
梔子,菌草科植物山桅Gardenia iasminoides Ellis的果实、性苦寒、无毒。常绿灌木，高O. 5 2米，幼枝有细毛。常生于低山温暖的疏林中或荒坡、沟旁、路边。根、叶、花均供药用。入心、肝、肺、胃经。能清热泻火凉血。临床用于急性黄疸型肝炎、止血、扭挫伤等疾病。梔子主要含有含黄酮类梔子素、果胶、鞣质、藏红花素、藏红花酸、D-甘露醇、廿九烷、β-谷留醇。另含多种具环臭蚁醛结构的甙桅子甙、去羟桅子甙泊素-1-葡萄糖甙，格尼泊素-1-β -D-龙胆ニ糖甙及小量的山桅甙。梔子的药理作用很丰富①利胆作用梔子水提取液及醇提取液给予家兔ロ服，对输胆管导出的胆汁量及固形成分无影响，但有人用同样制剂注射于家免，15 30分钟胆汁分泌开始增加，持续I小时以上。给兔静脉注射藏红花素和藏红花酸钠后，胆汁分泌量增カロ。梔子水煎剂或冲服剂给人口服后作胆囊拍片，证明服药后20及40分钟胆囊有明显的收缩作用。家兔总输胆管结扎后，ロ服梔子水提取液则血中胆红素減少，用药愈多，減少愈显著，尤其连续服用适量药物以后结扎，所得效果最佳，醇提取液亦具有相同的作用，但较水提取液作用稍弱。梔子醇提取液注射于家免，2小时血中胆红素较对照组稍增加，6小时后较对照组低，24 48小时后明显减少，藏红花素及藏红花酸钠亦有同样作用。在总胆管结扎的家兔，注射醇提取液，24小时末梢淋巴液中胆红素減少，藏红花素及藏红花酸钠亦有同样作用。梔子可用于胆道炎症引起的黄疸。②镇静作用给予小白鼠皮下注射梔子流浸膏后，可见其自发活动减少闭目、低头、肌肉松弛，井能对抗戊四氮所致的惊厥，而不能对抗士的宁引起的惊厥，但能減少其死亡率，以流浸膏灰分作对照则未见以上作用。也有用以消除失眠及过度疲劳者。梔子煎剂和醇提取液对麻醉或不麻醉猫、大白鼠和兔，不论ロ服或腹腔注射，均有持久性降压作用，静脉注射降压迅速而维持时间短，其降压部位似在延脑副交感中枢。③抗微生物作用。梔子水浸液对许兰氏黄癣菌，腹股沟表皮癣菌、红色表皮癣菌等多种真菌有抑制作用，其水煎剂15毫克/毫升能杀死钩端螺旋体，在体外，梔子煎剂能使血吸虫停止活动，煎剂对细菌生长无抑制作用。④其他作用梔子醇提取液对家兔及大白鼠离体肠管平滑肌，具有低浓度兴奋，高浓度抑制的作用。去羟梔子甙对小鼠有泻下作用，其提取物制成油膏，可加速软组织的愈合。《雷公炮炙论》"凡使梔子，先去皮须了，取人，以甘草水浸一宿，漉出焙干，捣筛如赤金末用。"
发明内容
本发明目的在于公开ー种梔子提取物在制备治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常药物中的用途。
本发明目的是通过如下方案实现的梔子提取物在制备治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、经皮冠状动脉腔内成形术术后再狭窄造成的急性心肌缺血药物中的应用梔子提取物在治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、经皮冠状动脉腔内成形术术后再狭窄造成的急性心肌缺血是指保护心肌和心肌细胞损伤或者对抗心肌细胞的炎性病变、氧化损伤。本发明梔子提取物可以通过如下方法制备的取梔子100重量份，加1000-2000体积份的水，加热煮沸O. 5-2小时，分别提取2
次。将两次所得药液合并，进行薄膜蒸发浓缩至密度为1.25g/ml(60°C測定)。继续进行水浴蒸发至密度为I. 30-1. 40g/ml (60°C測定)，放置于干燥箱中，进行真空减压干燥至恒·重，得梔子提取物。本发明梔子提取物优选通过如下方法制备取梔子100重量份，加1500体积份的水，加热煮沸I小时，分别提取2次。将两次所得药液合并，进行薄膜蒸发浓缩至密度为I. 20-1. 30g/ml (60°C測定)。继续进行水浴蒸发至密度为I. 35g/ml (60°C測定)，放置于干燥箱中，进行真空减压干燥至恒重，得梔子提取物。本发明梔子提取物还优选通过如下方法制备取梔子100重量份，加1200体积份的水，加热煮沸O. 8小时，分别提取2次。将两次所得药液合并，进行薄膜蒸发浓缩后，浓缩至密度为1.25g/ml(60°C測定)。继续进行水浴蒸发至密度为I. 35g/ml (60°C測定)，放置于干燥箱中，进行真空减压干燥至恒重，得桅子提取物。本发明药物提取物还优选通过如下方法制备的取梔子100重量份，加1800体积份的水，加热煮沸I. 5小时，分别提取2次。将两次所得药液合并，进行薄膜蒸发浓缩至密度为I. 25g/ml (60°C測定)。继续进行水浴蒸发至密度为I. 35g/ml (60°C測定)，放置于干燥箱中，进行真空减压干燥至恒重，得梔子提取物。本发明制备得到的梔子提取物，加入常规辅料，按照常规エ艺制备得到临床上可接受的剂型。所述临床上可接受的剂型可以是片剂、胶囊剂、软胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸剂、颗粒剂、ロ服液体制剂、冻干粉针剂、注射剂、速释制剂或缓释制剂。其中，每单位制剂中含桅子提取物有效剂量为2 6g。其中，每单位制剂中含梔子提取物的最有效剂量为5g。梔子在制备治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、经皮冠状动脉腔内成形术术后再狭窄造成的急性心肌缺血药物中的应用梔子在治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、经皮冠状动脉腔内成形术术后再狭窄造成的急性心肌缺血是指保护心肌和心肌细胞损伤或者对抗心肌细胞的炎性病变、氧化损伤。其中，每单位制剂中含梔子有效剂量为8 18g。其中，每单位制剂中含梔子的最有效剂量为17g。本发明中所述的重量份和体积份的关系为kg/L或g/ml。
以ー个成年人体重为60千克，每天服药两次计算有效剂 量=小鼠每千克体重的有效剂量剂量X60千克+2本发明所述的单位制剂针对不同的制剂有不同的计算方式，片剂以每片中含梔子提取物的量，胶囊剂以每粒胶囊中含梔子提取物的量计算，其他剂型，以此类推。本发明梔子提取物在心肌和心肌细胞保护作用上的应用，效果显著，明显高于对照药组和空白组。下述实验例和实施例进ー步说明本发明药物组合的作用，但不限于本发明的组合，凡是以本发明药物组合为基础进行加减而成的组合也属本发明的保护范围。实验例I不同剂量梔子提取物对急性心梗大鼠心肌缺血及心肌细胞保护作用的实验材料准备和实验方法的选择I、实验材料(I)实验动物SD大鼠，雄性，体重(220±20) g，以及I 3d SD大鼠乳鼠，SPF级，均由北京大学医学部实验动物科学部提供(许可证编号SCXK (京)2006-0008)。(2)药物及制备梔子，由北京人卫饮片厂提供，批号8021801。盐酸地尔硫卓片，天津田边制药有限公司，批号0802001，梔子提取物，本发明实施例I制备。(3)试剂肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，均为中生北控生物科技股份有限公司产品；过氧化物歧化酶(S0D)、丙ニ醛(MDA)试剂盒，均为南京建成生物工程研究所产品；DMEM培养基(GIBC0产品)，胎牛血清(四季青公司)；胰蛋白酶、胶原酶II (科海军舟)；噻唑蓝(MTT)、ニ甲基亚砜(DMSO)(美国sigma公司)。⑷仪器多导生理记录仪(BIOPAC Systems InC产品)，XL_300全自动生化分析仪(上海圣荷西医疗用品有限公司)，microlab-300半自动生化分析仪(荷兰制造)，LYMPUS SZX7解剖显微镜(日本制造)，DL-LJ-ZN医用型洁净工作台(北京东联哈尔仪器制造有限公司)，C02 培养箱(Thermo Electron Corporation 产品)。2、实验方法(I)动物分组、给药处理及造模将大鼠随机分为假手术组、模型组、地尔硫卓组(37. Smg · kg—1 · cf1)和梔子提取物组(279. 72mg · kg—1 · d'559. 442mg · kg—1 · cf1),相当于临床等效剂量及其两倍。灌胃给药，I次/ld，连续7d。假手术与模型组给予同体积的蒸馏水。末次给药30min后，腹腔麻醉，背位固定，记录II导联心电图，行人工呼吸。胸部去毛、消毒、沿左锁骨中线纵行切开皮肤约2cm，3、4肋间开胸，左冠状动脉起2 3mm处结扎，复制心肌缺血模型。假手术组仅穿线不结扎。(2)心肌细胞原代培养无菌取出生I 3d乳鼠心尖部组织，将其剪成约Imm3大小碎块，以适量0. 125%胰酶和O. 05% II型胶原酶消化制成细胞悬液，IOOOr · min—1，离心IOmin, PBS洗3次。用含20% (体积分数)胎牛血清、100万U青霉素、链霉素的DMEM培养基，37°C、5% CO2培养箱中培养I. 5 2h，差速贴壁分离法纯化心肌细胞。以6X IO5个· mr1的接种密度，接种到培养板中。48h后换液,培养3d后用于实验。(3)缺氧-复氧模型的建立及分组取培养3d的心肌细胞，去除培养基，加入事先用95% N2+5% CO2饱和的无糖D-hanks 液，置于低氧盒中(95% N2+5% C02，流速 IL .mirT1，通气 15min) 37°C >5% CO2 培养箱内孵育I I. 5h,再放回5% CO2的培养箱内，孵育2h。于缺氧I小时，及复氧2小时后取细胞培养液上清，測定相应的LDH值。含药血清的制备SD大鼠20只，分为空白对照组及梔子组，各10只。梔子组(559. 442mg· kg—1 · cf1)，灌胃给药，I次/ld，连续3d，第三天给药I小时后，取血制备血清，加热灭活备用。
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实验分组在各组中添加不同浓度的空白血清或梔子含药血清。空白血清对照组4个(5%、10%、15%、20% )、梔子含药血清4个剂量组(5%、10%、15%、20% )。均在缺氧和复氧过程的开始分别加入相应浓度的药物，每组设5个复孔。(4)观察指标及检测方法①心电图观察术后IOminII导联心电图ST段的变化，计算各组ST-T段上移幅度的Amv值。②血清酶学指标按照CK、LDH试剂盒说明书，測定血清心肌酶CK和LDH活力。③氧化损伤相关指标按照SOD、MDA试剂盒说明书，测定血清SOD活性、MDA含量。④细胞上清液于缺氧I小时，及复氧2小时后取细胞培养液上清，測定相应的LDH值。(5)统计学分析本发明统计学处理采用SPSS13. O软件包，检测结果用X土SD表示。多组间均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)，P < O. 05，认为差异有显著性；p < O. 01，差异有极显著性。利用上述实验例I中所述的实验材料和实验方法对不同剂量梔子提取物对急性心梗大鼠心肌缺血及心肌细胞的保护作用进行研究，得出下述实验例1-4的結果。实验例I梔子提取物对急性心肌梗死大鼠心电图的影响观察本发明实施例I中制备的桅子提取物对急性心肌缺血大鼠II导联心电图ST-T段的影响。具体实验结果见下表I。表I桅子提取物对急性心肌缺血大鼠II导联心电图ST-T段的影响(η = 10, χ + ^)
权利要求
1.梔子在制备治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、经皮冠状动脉腔内成形术术后再狭窄造成的急性心肌缺血药物中的应用，其特征在于每单位制剂中含梔子有效剂量为8 18g。
2.如权利要求I所述的用途，其特征在于所述治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、经皮冠状动脉腔内成形术术后再狭窄造成的急性心肌缺血是指保护心肌和心肌细胞损伤或者对抗心肌细胞的炎性病变、氧化损伤。
3.如权利要求I或2所述的用途，其特征在于所述每单位制剂中含梔子有效剂量为17g。
4.ー种梔子提取物在心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常、经皮冠状动脉腔内成形术术后再狭窄造成的急性心肌缺血药物中的应用，其中梔子提取物是通过如下方法制备 取梔子100重量份，加1000-2000体积份的水，加热煮沸O. 5-2小吋，分别提取2次；将两次所得药液合并，进行薄膜蒸气浓缩至60°C密度为I. 20-1. 30g/ml，继续进行水浴蒸发至60°C，密度为I. 30-1. 40g/ml，放置于干燥箱中，进行真空减压干燥至恒重，得梔子提取物25-35重量份，其中所述的重量份和体积份的关系为kg/L ;每单位制剂中含梔子提取物有效剂量为2 6g。
5.如权利要求4所述的梔子提取物的制备方法，其特征在于该方法为 取梔子100重量份，加1500体积份的水，加热煮沸I小时，分别提取2次；将两次所得药液合并，进行薄膜蒸发浓缩至60°C至密度为I. 25g/ml ;继续进行水浴蒸发至60°C，密度为I. 35g/ml，放置于干燥箱中，进行真空减压干燥至恒重，得梔子提取物29. 6重量份，其中所述的重量份和体积份的关系为kg/L ;每单位制剂中含梔子提取物有效剂量为2 6g。
6.如权利要求4所述的梔子提取物的制备方法，其特征在于该方法为 取梔子100重量份，加1200体积份的水，加热煮沸O. 8小时，分别提取2次；将两次所得药液合并，进行薄膜蒸发浓缩至60°C至密度为1.25g/ml ;继续进行水浴蒸发至60°C，密度为I. 35g/ml，放置于干燥箱中，进行真空减压干燥至恒重，得梔子提取物26. 5重量份，其中所述的重量份和体积份的关系为kg/L ;每单位制剂中含梔子提取物有效剂量为2 6g。
7.如权利要求4所述的梔子提取物的制备方法，其特征在于该方法为 取梔子100重量份，加1800体积份的水，加热煮沸I. 5小吋，分别提取2次；将两次所得药液合并，进行薄膜蒸发浓缩至60°C至密度为I. 25g/ml ;继续进行水浴蒸发至60°C，密度为I. 35g/ml，放置于干燥箱中，进行真空减压干燥至恒重，得梔子提取物33. 2重量份，其中所述的重量份和体积份的关系为kg/L ;每单位制剂中含梔子提取物有效剂量为2 6g。
8.如权利要求4-7之一所述的用途，其特征在于所述每单位制剂中含梔子提取物有效剂量为5g。
9.如权利要求4-7之一所述的梔子提取物，其特征在于制备得到的梔子提取物后，カロ入常规辅料，按照常规エ艺制备得到临床上可接受的片剂、胶囊剂、软胶囊剂、散剂、丸剤、滴丸剤、颗粒剂、ロ服液体制剂、冻干粉针剂、注射剂、速释制剂或缓释制剂。
全文摘要
本发明通过实验证明栀子及栀子提取物在制备治疗心肌梗死、冠心病、心肌缺血、心律失常药物的用途。特别是在经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)术后再狭窄造成的急性心肌缺血或冠心病心肌缺血中的应用。并通过实验证明上述的各种用途是通过保护心肌和心肌细胞损伤或者是对抗心肌细胞的炎性病变、氧化损伤达到，并测定得到单位制剂中栀子和栀子提取物的有效剂量。
文档编号A61P9/10GK102716230SQ20111007892
公开日2012年10月10日 申请日期2011年3月30日 优先权日2011年3月30日
发明者张加晏, 张翰涛, 连增林, 迟玉明, 陈霞, 靳冉 申请人:北京中研同仁堂医药研发有限公司