治疗或预防毛发脱落或促进毛发生长的方法

专利名称：治疗或预防毛发脱落或促进毛发生长的方法
技术领域：
本申请涉及治疗和预防哺乳动物脱发或毛发稀少以及促进哺乳动物毛发生长的领域，例如在患有脱发或有脱发倾向的人中，以及促进哺乳动物毛发生长，例如在患有脱发或有脱发倾向的人中。
背景技术：
毛发及毛发的生长 毛发是我们身体形象不可或缺的，对我们的自尊心和自信心有深刻的影响。非人类的哺乳动物物种的毛发通常被称为“软毛”。除非另有特殊说明，或者语境中另有要求，这里使用的术语“hair”(毛发)应包括“软毛”。除非语境另有要求，该术语“hair”(毛发)还应包括哺乳动物身体任何部位的毛发，包括眉、眼睑边缘、腋窝以及鼻孔内。因此，毛发可以包括头发、眉毛、睫毛或其它体毛。每一根毛发包括两种结构毛干和毛囊。毛干主要组成成分是角蛋白。毛干包括三层角蛋白，然而内层，即毛髓，可能不存在。中层，即皮质，组成了毛干的大部分。外层，即表皮，由毛鳞片以重叠的结构紧紧包裹而成。色素细胞遍布于皮质和毛髓中，使毛发呈现特征性的颜色。毛囊包含好几层。在毛囊基部有一个凸起，称为乳突，它含有毛细血管或微小血管，为细胞提供营养。毛发有生命的部分，即乳突周围的区域，称为延髓，是毛细血管唯一给养的部分。延髓中的细胞每23-27个小时分裂一次，比身体其它细胞都快。毛囊由内根鞘和外根鞘包裹。这两层根鞘保护着毛干并使生长中的毛干成型。内根鞘连接着毛干，终止于产生皮脂的皮脂腺的开口下方，有时终止于顶泌腺的开口下方。外根鞘完全连接着皮脂腺。立毛肌附着在皮脂腺下方外根鞘周围的纤维层上。当这块肌肉收缩时，毛发便竖立起来。人类的皮肤含有两种类型的毛发毫毛和终毛。毫毛短且纤细，像桃子的绒毛一样的体毛。它是一种非常柔软、通常为灰白色的短毛，在人类两性身体的大部分区域生长。毫毛的长度一般短于2厘米，并且生长毫毛的毛囊不与皮脂腺连接。在较少终毛覆盖的妇女和儿童身上最容易发现毫毛。在青少年和存在男性型秃发的男性中也可以发现毫毛。终毛或者说男性型的毛发是发育后的毛发，通常比毫毛更长、更粗糙、更粗以及更黑。由于终毛具有更长的毛发生长初期的优势，所以它的生长阶段也比毫毛的更加明显。终毛具有相应的皮脂腺。在青春期，一些毫毛可以发育成终毛。在其它情况下，例如男性型秃发，终毛可以恢复到毫毛状态。毛发的生长中有三个连续的阶段毛发生长中期、毛发生长终期以及毛发生长初期。毛发生长初期是毛发活跃生长时期，毛发根部的细胞在这个时期快速分裂。毛发生长初期的毛发深深地扎根于皮下脂肪，不容易拔出来。当一根新的毛发形成时，它推动杵状毛至毛囊上方，最后推出去。在这个时期，毛发每28天生长约I厘米。头发的活跃生长时期为2-6年。人类研究对象中难以使头发的生长超过一定长度的人可能具有一个缩短的毛发生长初期，而那些能够使头发快速生长得更长的人可能具有一个更长的毛发生长初期。在人类中，与头发相比，手臂、腿、睫毛以及眉上的毛发通常具有短的毛发生长初期。毛发生长中期是一个过渡时期，在人类中大约持续2-3个星期，此时生长停止，由此形成“杵状”毛。毛发生长终期是一个静止期，在头发中持续100天左右，在其它体毛中持续的时间比在头发中长得多。在毛发生长终期，毛囊生长停止，杵状毛形成。与毛发生长初期相比，毛发生长终期的毛发处于浅表处，可以很容易地拔出来。毛发生长终期的毛发含有一个可见的、固体状的、坚硬的、干燥的以及发白的物质。毛发生长终期的毛发脱落是正常的，每天有多达75根的头发从人的头皮上脱落。脱落的毛发通常被取代，因为每天有大约相同数量的毛囊进入毛发生长初期。正常的头皮在任何时候都有大约80%-90%的毛囊处于毛发生长初期，大约1%-3%的毛囊处于毛发生长中期，即退化中，以及大约5%-10%的毛囊处于毛发生长终期。毛发脱落和/或毛发生长减少的情况 毛发脱落或毛发变少包含各种导致替换脱落头发的能力减弱，或导致脱落加剧而不伴随后续的毛发再生的情况，例如，弱的毛发生长、细的毛发生长，短的毛发生长、稀少的毛发生长、脱发或者毛发褪色。例如，毛发周期可能暂时或持久地变得不受控制，加速毛发脱落。在这里用到的术语“alopecia”(脱发)指的是毛发脱落，除非另有特殊说明或语境
另有需要。脱发有多方面的诱因。遗传的男性型脱发是最常见的脱发形式其表现是头发数量减少，或甚至秃发，影响高达70%的男性。急剧的脱发可能与化学疗法、压力、严重的营养不良、缺铁、内分泌紊乱、艾滋病或强烈的辐射有关。簇状脱发似乎由自身免疫(细胞调节机制)引起，其特征是在身体一个或多个地方形成大小不同的“斑”。秃头属于一种簇状脱发扩展至整个头皮的形式，而全秃属于簇状脱发扩展至整个身体的形式。从机理上看，在所有的脱发形式中，毛发脱落直接与能力减弱相关，毛囊进入毛发生长初期减慢或不能进入毛发生长初期，或不能使毛囊维持在毛发生长初期，因此毛干的形成减少、减慢或者完全停止。毛发可能在生长初期阶段还没达到充分生长时便进入毛发生长中期阶段，因此形成持久的毛发短且稀的状态(即毛发变少)。化学治疗药物、放射性治疗药物及其它的医药产品可能引起毛囊的细胞坏死和细胞凋亡等副作用，同时也阻止了毛囊进入毛发生长初期。例如，烷基化药物，如替莫唑胺、白消安、异环磷酰胺、盐酸美法仑、亚硝基脲氮芥、环己亚硝脲或环磷酰胺；抗代谢药物，如5_氟尿嘧啶、卡倍他滨、吉西他滨、氟脲苷、地西台宾、巯基嘌呤、培美曲塞二钠、甲氨蝶呤或氮烯唑胺；天然产物，如长春新碱、长春碱、酒石酸长春瑞滨、特素、多西他奇、伊沙匹隆、道诺霉素、表柔比星、亚德里亚霉素、去甲氧基柔红霉素、米托蒽醌、丝裂霉素、放线菌素D、依立替康、托泊替康、依托泊苷、替尼泊苷、磷酸依托泊苷或博来霉素硫酸盐；生物制剂，如非格司亭、乙二醇化非格司亭、贝伐单抗、沙莫司亭或帕尼单抗；激素或激素相关药物，如醋酸甲地孕酮、氟羚甲基睾丸素、亮脯利特、醋酸奥曲肽、枸橼酸它莫西芬或氟甲睾酮；其它治疗药物，如索拉非尼、埃罗替尼、奥沙利钼、右丙亚胺、阿那格雷、异维甲酸、贝沙罗汀、伏立诺他、亚德里亚霉素，环磷酰胺、紫杉酚、甲基四氢叶酸、奥沙利钼以及上述已知的引起暂时或持久脱发的药物的组合。由上述任何因素所导致的脱发成为许多患者自尊心低和焦虑的原因。对于那些接受化疗或放射性治疗的癌症患者，在治疗引起的如恶心、皮疹等其它不良副作用的同时，脱发又增加了不适。许多脱发患者，包括接受化疗的患者，选择使用假发、头发片、围巾、帽子或头巾来盖住他们光秃或头发稀少的部位。脱发患者经常遇到尴尬并且害怕被别人嘲笑，因为他们看起来与别人不一样。为了遮住缺少的眼睫毛和/或眉毛，一些患者可能戴上超大号的墨镜。在一些研究对象中，脱发可能导致抑郁。脱发的动物模型人类有好几个实用的脱发模型，在用于脱发治疗方法及其它的生发治疗方法的效果测试中得到了普遍认可。例如，短尾猕猴具有遗传性的秃顶特征，与人类男性型脱发的许多方面相似，因此 被用来进行毛囊周期变化速率的形态测定评估，包括周期进展速率(静止期到再生期，以及再生期至毛发生长初期末期)及毛囊大小的整体变化。这些灵长目动物也是化合物功效很好的预测器，例如，它们已被用来检测米诺地尔对男性型脱发的治疗效果。局部的米诺地尔治疗的中断导致秃发的复发，微形态测定分析表明静止期毛囊的比例上升。在随后的米诺地尔处理过程中，这种治疗的中断似乎对头发再生没有影响。这样的治疗对头发再生的作用与第一次治疗期相似。连续4年的局部米诺地尔治疗不会给这些动物带来整体或局部的副作用。参见文献例如 Brigham et al. , Clin. Dermatol. 6, 177-187, 1998; Sundberg etal.，Exp. Mol. Pathol. 67，118-130 (1999)的全文，其内容包含于此。总体上，对小鼠模型的研究结果支持了簇状脱发是一种自身免疫病的观点，已经发现几个具有自发和诱导的簇状脱发的啮齿目动物模型。例如，邓迪实验秃毛大鼠(DEBR)是第一个被发现的出现自发性簇状脱发的啮齿目动物模型，并被用来验证候选的簇状脱发敏感基因位点(Michie et al. , Br J Dermatol.，125，94-100，1991,通过参照包含于此)。特征最全、最容易获得的簇状脱毛模型是C3H/HeJ小鼠模型(Sundberg et al.，J InvestDermatol.，102, 847-56，1994，通过参考，内容包含于此)。老龄的C3H/HeJ小鼠(雌性年龄为3-5个月或更老，雄性年龄大于6个月)出现人类簇状脱发的组织病理学及免疫组织化学的特征。脱发在年龄十分大的动物背面广泛出现或呈圆形区域。组织学上，这种无疤脱发的变化仅出现在毛发生长初期的毛囊，这些毛囊被主要由细胞毒素或细胞生长抑制物(CD8+)组成的单核细胞及辅助(CD4+) T细胞所围绕，这与毛囊和毛干的营养不良有密切联系。谱系追踪受感染的C3H/HeJ小鼠表明，这种无疤脱发可能是一种可遗传的复杂的多基因疾病，主要出现在比较年轻的雌性中。患有簇状脱发的C3H/HeJ小鼠能被用来研究现有治疗方法的效果，研究既定簇状脱发的新的治疗形式的有效性和安全药历，以及评估脱发过程中各种因素的影响，达到预防这种疾病发病的目的。文献Paus et al. ,Am. J. Pathol. 144，719-734(1994)也描述了一种急剧脱发的啮齿目动物模型，通过引用其全部内容包含于此。在此模型中，通过对C57BL/6小鼠进行一次环磷酰胺的腹腔注射来诱导脱发。在脱发的C57BL/6小鼠中，毛囊在毛发生长初期同步。脱毛后第9天，所有的毛囊处于成熟毛发生长初期VI，小鼠的皮肤具有灰色至黑色的毛干特征。组织学上、宏观上及机能上，诱导脱发的毛发生长初期VI的毛囊与自发产生的毛发生长初期的毛囊没有区别。脱毛后大约第16天，毛囊开始退化，此时脱毛后的动物毛干没有脱落，皮肤颜色由黑色变成粉红色，表明毛发生长中期的诱发和黑素生成的终止。毛发生长中期的毛囊发育在宏观上表现为皮肤颜色由黑色变成亮灰色，颈部首先产生大波纹，然后是身体两侧和尾部区域。在脱毛后第20天，所有的毛囊再次进入毛发生长终期，其特征为皮肤颜色由灰色变为粉色。在脱毛后第9天给C57BL/6小鼠施加环磷酰胺，动物表现出快速的可重复的剂量依赖型的急剧脱发的明显迹象，包括软毛的脱落及毛发生长初期的提前终止。提前终止以褪色为特征，导致第12-14天的皮肤呈灰色。因此，在环磷酰胺处理3-5天后，颈部的毛囊通常处于毛发生长中期。在第12-14天时，动物背部的毛干也容易揉搓掉。到第15天，背面60%可能秃掉。环磷酰胺引起的颜色变化和脱发反映了在毛发生长初期VI的毛囊中，毛发生长初期和毛发生长中期的营养不良形式的诱发。在环磷酰胺处理的动物中，毛囊发展至毛发生长终期也很迅速，粉红色的皮肤可以证明这一点，并且由于毛囊破坏，软毛也迅速脱落。随着环磷酰胺的处理，毛发生长终期也被缩短，正常的毛发生长终期毛囊进入下一个毛发周期，因此动物在第16-20天时开始长新毛干，即处理后大约7-10天内。由于营养不良的毛发生长初期毛囊还来不及产生新的正常着色的毛干，因此这些新的毛干通常是褪色的。然后，着色的毛干才产生。
毛发脱落和/或毛发生长减少的状况的治疗方法现有的治疗脱发的方法包括局部的米诺地尔及其衍生物的治疗，例如美国专利号 4，139，619 和 4，596，812，以及欧洲专利号 EP-0353123、EP-0356271、EP-0408442、EP-0522964、EP-0420707、EP-0459890和EP-0519819、安体舒通、醋酸环丙氯地孕酮、氟他胺、菲那司提、孕酮或雌激素。抗雄激素药物如非那司提和米诺地尔，是已知的治疗男性型脱发的药物。这些治疗方法中没有一个是普遍适用的。例如，上述方法不能抑制化疗药物治疗过程中的毛发脱落。另一方面，这些化合物可能引起不良的副作用。例如，米诺地尔是一种有效的血管舒张药。为了达到治疗效果，患者可能还需要频繁地用药。例如，米诺地尔只有非常短暂的效果，因为局部米诺地尔治疗中断后通常会导致秃发的复发，并且微形态测定分析表明静止期毛囊的比例上升。米诺地尔的使用推荐量为以2%的浓度每天服用两次。尽管如此，与米诺地尔相比，非那司提在口服方法上有一个改进，它被认为是目前最好的治疗方法，大约35%或更多的秃发男性用药者对药物没有出现反应或反应较小。非那司提对一些用药者也可能引起显著的副反应，因为许多用药者在使用该药后表现出阴茎勃起失调、阳痿、性欲低下或乳房发育症。在遭受这些副反应的男性中，停止使用非那司提后副反应可能不会消失。多种前列腺素类似物也已公开用于治疗男性型脱发，例如曲伏前列素、voprostol，这些药物可能也需要频繁用药，例如至少每天服用大约一个剂量的曲伏前列素已有记述，例如美国专利公布20100190853。前列腺素类似物也是已知的用于治疗化疗引起的脱发的药物，例如美国专利公布20110002286。前列腺素类似物可能具有多种不利影响，例如肌肉收缩引起的炎症、钙的转运、激素调节及细胞生长控制。肝素结合细胞因子家族蛋白肝素结合细胞因子(MK)是一种生长/分化因子，它是在视黄酸诱导的胚胎肿瘤细胞(EC)分化过程中首先发现的一种瞬时表达的基因产物。目前已知MK产生广泛的不利和有利的生物效应。MK在人类癌症细胞中(包括食道癌、甲状腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胃癌、胰腺癌、胸癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、成神经细胞瘤、成神经细胞瘤、成胶质细胞瘤、子宫癌、卵巢癌以及肾母细胞瘤)表达量提高，被认为具有促进癌症细胞存活和转移及促进血管生成的作用。MK还能够促进诸如巨噬细胞和嗜中性粒细胞等炎症细胞的转移，从而引发炎症。在子宫内膜异位时，MK还能促进培养的子宫内膜间质细胞的增殖。因此，MK抑制剂，例如抗体、适配体或靶向MK蛋白的RNAi或RNA，已经公开用于治疗广泛的炎症疾病，如关节炎、自身免疫病、风湿性关节炎、骨关节炎、多发性硬化、手术后粘连、大肠炎、牛皮癣、狼疮、气喘、嗜中性粒细胞功能异常以及子宫内膜异位。MK有利的生物效应也众所周知，其中MK还可以在血管损坏及缺血性肾炎发病后促进新生内膜的形成，以及减少风湿病患者手术后粘连。因此，MK蛋白已经公开用于治疗脑缺血、心脏缺血、血管重建手术后的再狭窄、心脏冠状动脉血管阻塞疾病、大脑血管阻塞疾病、肾脏血管阻塞疾病、周围性血管阻塞疾病以及动脉硬化。多效生长因子(PTN或ΗΒ-GAM)是一种氨基酸序列与MK有近50% —致性的肝素结合细胞因子家族蛋白。MK和PTN蛋白都包含较高含量的半胱氨酸和碱性氨基酸残基。在MK和PTN蛋白中，10个半胱氨酸残基都很保守，并且两种蛋白在结构上都可以被分为氮端结构域和碳端结构域。核磁共振分析表明，这两个蛋白分子具有非常相似的三维结构。每 个结构域由三个β片层组成，片层之间通过柔韧的连接区域连接。K79，R81及Κ102被认为是这两个蛋白中保守的氨基酸残基，对于结合硫酸软骨素和肝素十分重要。MK和PTN在三维结构上有相同之处，其中，这些碱性氨基酸出现在接近蛋白质表面的部位。因此，PTN以前已经显示出与MK具有相同的医疗指征。需要说明的是，如果本文中参考了任何在先公开的文本，这样的参考不等同于承认该公开文本成为澳大利亚或其它地方的常识或背景技术的一部分。

发明内容
在本发明的准备工作中，发明人试图开发蛋白类试剂，例如用于对患者局部给药，促进容易脱发或毛发脱落的患者的毛发生长或生发。尽管真皮通常对外用药物具有屏蔽作用，但发明人还是试图研发出一种有效的局部蛋白类配方，使其能够方便地涂抹在皮肤上并发挥功效。发明人开发出一种毛发脱落的动物模型，基本上由老龄的患有毛发脱落的小鼠组成，例如用秃毛区域或脱毛位点的形式。发明人发现在动物模型的这些秃毛区域或脱毛位点局部涂抹肝素结合细胞因子或多效生长因子可以诱导毛发生长或毛发生长重新开始。研究发现，在这个动物模型中，肝素结合细胞因子或多效生长因子的局部配方比注射药物配方在促进毛发生长上具有更好的效果。这里提供的数据还表明，与米诺地尔相比，肝素结合细胞因子和多效生长因子不能明显地促进经过剃毛使毛囊同步于毛发生长初期的健康动物的毛发生长，也没有表现出临床脱毛的症状。由此表明肝素结合细胞因子和多效生长因子与米诺地尔相比，以一种更加独特的机制发挥作用，该机制不包含引起皮疹的血管扩张作用。因此，由肝素结合细胞因子家族蛋白促使的毛发再生起因于肝素结合细胞因子对毛囊的抗细胞凋亡效应，从而延长它们的毛发生长初期阶段，或者使正常的终期毛囊重新进入下一次毛发周期。在本发明的进一步工作中，申请人使用公认的化疗诱导脱毛(CIA)的动物模型，如Paus et al.，Am.J. Pathol. 144,719-734(1994)所述(其内容全部包含于此)。申请人进行了一次随机组合的实验，在这个实验中，所有的动物被剃毛并上蜡，其中五组动物前7天每天施加一种肝素结合细胞因子蛋白的局部配方，后19天腹腔注射环磷酰胺；另外两组动物前19天每天被给予一种肝素结合细胞因子蛋白的局部配方，然后再腹腔注射环磷酰胺。对照小鼠接受的是盐水安慰剂处理。这里的数据表明，肝素结合细胞因子家族蛋白如MK和/或PTN在化疗前或化疗前后的局部给药能够显著地降低毛发脱落的严重性，即在使用化疗药物后的所有时间点促进毛发生长。化疗后用肝素结合细胞因子家族蛋白处理还可以使处于生长初期的毛囊保持一个更高的比例，因为经过肝素结合细胞因子家族蛋白处理的具有黑色或深灰色毛皮的动物数量比接受安慰剂处理的多。由此表明该蛋白对初期毛囊的抗细胞凋亡效应。这些有利的效应可以在紧接化疗后的毛囊还没有恢复的时期以及化疗终止后毛囊恢复末期检测到。这里的数据还表明肝素结合细胞因子家族蛋白，如MK和/或)PTN，在化疗后的局部给药，至少改善了毛囊的恢复，因为实验组与安慰剂处理组相比脱发的发生率降低了。因此，化疗后每天局部使用肝素结合细胞因子蛋白处理的动物与对照组相比还减少了总的毛发脱落，毛发脱落减少的效果在化疗前和化疗后处理的动物中差不多。化疗前或化疗后接受肝素结合细胞因子处理的动物在毛囊恢复期还表现出更高的毛发生长速率，表明肝素结合细胞因子对毛囊具有抗细胞凋亡的效应，由此延长了它们的毛发 生长初期阶段，或者说经过处理后正常的终期毛囊重新进入了下一个毛发周期。需要说明的是，这里所述的以老龄的小鼠为模型的方法适用于测试其它人类脱发的动物模型，包括具有男性型脱发特征的短尾猕猴21-23模型和/或正如本文所述的毛发特别稀少的无毛(hr/hr)模型。因此，本文提供的数据为含有肝素结合细胞因子家族蛋白的成分在促进毛发生长和/或减少毛发脱落和/或减轻毛发变少和/或预防毛发脱落和/或预防毛发变少和/或延迟毛发脱落和/或延迟毛发变少等方面的使用提供了依据，例如在老龄化的研究对象及患有脱发(如男性型脱发或急剧脱发)的研究对象中。通常，本发明中治疗和/或预防脱发的有效成分被制成局部用药，但注射药物的制备也可以采用，例如通常用于注射的引起急剧脱发的一种细胞毒素或细胞生长抑制剂的同时使用，如一种化疗药物。相应地，本发明的一个实施例提供了一个配方，例如一种有效预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长的局部配方，含有一定量的一种肝素结合细胞因子家族蛋白，如肝素结合细胞因子、多效生长因子或它们的一种变体或同源蛋白，及一种局部载体，赋形剂或润滑剂。局部配方表示该配方能够外敷于哺乳动物皮肤或敷于真皮。例如，该配方有助于对易脱发或有脱发危险的雄性进行给药，例如对男性型脱发患者或有发展为男性型秃顶的危险的雄性给药。在另一个实施例中，本发明的配方有助于对患有脱发相关疾病或症状(例如脱发，特别是急剧脱发或男性型脱发)的研究对象的真皮或皮肤给药。在一个实施例中，该局部配方含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白及局部载体，赋形剂或润滑剂，有效治疗和预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。该配方用于对易脱发或有脱发危险的研究对象的真皮或皮肤给药，或者用于对脱发对象的真皮或皮肤给药会更好。我们将体会到局部配方适用于脱发的治疗和预防，如脱发中的一种急剧形式或男性型脱发。例如，该配方可以用于治疗或预防接受细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗或处方中已经含有细胞毒素或细胞生长抑制剂疗法的对象出现的脱发。肝素结合细胞因子家族蛋白可以是肝素结合细胞因子、多效生长因子、肝素结合细胞因子类似蛋白或截短的肝素结合细胞因子蛋白。因此，本发明提供了改良的局部配方，包含有效治疗剂量的肝素结合细胞因子家族蛋白，例如含有有效剂量的肝素结合细胞因子蛋白或多效生长因子蛋白或它的生物活性变体，促进毛发生长。本发明中的局部配方对预防或治疗脱发特别有效，包括男性型脱发、急剧脱发、簇状脱发、秃顶及全身性脱发。本发明中的局部配方更适合于治疗男性型脱发。本发明中的局部配方甚至更适合于治疗接受细胞毒素或细胞生长抑制剂等引起脱发的化合物治疗后导致急剧脱发的对象，尤其是化疗药物、放射性治疗药物或抗病毒化合物，如感染了 HIV-I病毒的对象所使用的药物。本发明中局部配方还能更好地预防将要接受细胞毒素和细胞生长抑制剂等引起脱发的化合物治疗的对象会出现的急剧脱发，尤其是化疗药物、放射性治疗药物或抗病毒化合物，如感染了 HIV-I病毒的对象所使用的药物。需要说明的是，本发明的局部配方有利于促进毛发生长，适合男性型脱发或男性型秃顶的对象，或有发展成男性型脱发或男性型秃顶倾向的对象，和/或将要接受细胞毒素和细胞生长抑制剂等引起脱发的化合物治疗的对象或接受这种治疗的对象。
还需要说明的是，本发明中局部配方适用于各种类型的治疗药物或载体，它们可以结合或相继使用或同时使用或伴随使用。例如，含有一种肝素结合细胞因子蛋白的局部配方还可以包含第二种治疗相同症状的化合物，和/或与第二种化合物同时使用。在这种情况下，肝素结合细胞因子家族蛋白的功效得到了第二种化合物作用的补充。例如，肝素结合细胞因子家族蛋白与雌二醇和/或氧雄龙和/或米诺地尔和/或非那司提或抑制睾酮转变为二氢睾酮的药物同时使用。或者，本发明的局部配方还可以与细胞毒素或细胞生长抑制剂等引起脱发的化合物同时使用，例如，在对象接受化疗或放射性治疗或感染HIV-I病毒或AIDS进行治疗的情况下。在这些情况下，肝素结合细胞因子家族蛋白的作用中和了细胞毒素或细胞生长抑制剂的脱发效应。本发明的另一个实施例提供了肝素结合细胞因子家族蛋白在药物生产中的应用，例如，一种用于预防和/或治疗脱发或有脱发倾向的对象头发脱落的局部药物。该药物可以用于群体中易脱发或患有脱发的部分个体，如产生男性型秃顶或有发展成男性型秃顶的危险的对象。例如，个体可能没有明显的脱发特征，但患有一种使其有脱发倾向的遗传症状，或可能即将接受一种细胞毒素或细胞生长抑制剂或抗病毒化合物等引起脱发的治疗方法的对象。在另一个实施例中，局部药物有利于对毛发脱落疾病或相关症状(如秃发)的对象进行真皮或皮肤给药。例如，先前存在脱发或即将接受细胞毒素或细胞生长抑制剂或抗病毒化合物等引起脱发的治疗方法的对象，无论在肝素结合细胞因子家族蛋白治疗开始之前有或没有发展出明显脱发特征。在制备治疗或预防接受化疗的对象出现的急剧脱发的药物中，肝素结合细胞因子家族蛋白特别有用，并且这种药物可以制成局部或注射用药配方，但局部配方为首选。“局部配方”表示将活性药物，即肝素结合细胞因子家族蛋白，如肝素结合细胞因子、多效生长因子或它们的变体或同源蛋白，与一种局部载体，赋形剂或润滑剂，一起制成配方，用于涂抹在哺乳动物的皮肤上。在一个优选的实施例中，肝素结合细胞因子家族蛋白用于制备治疗或预防人类或其它哺乳动物对象脱发的药物，例如，脱发中的急剧形式或男性型脱发。对象可以是人类或哺乳动物中接受细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗或处方中已经含有细胞毒素或细胞生长抑制剂疗法的对象。该药物可以作为一种局部敷用的配方。肝素结合细胞因子家族蛋白可以是肝素结合细胞因子、多效生长因子、肝素结合细胞因子类似蛋白或截短的肝素结合细胞因子蛋白。本发明的另一个实施例提供了一种治疗和预防毛发脱落的方法，上述方法包含对有需要的对象使用一种配方，例如，含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白(例如肝素结合细胞因子、多效生长因子或它们的变体或同源蛋白)和局部载体(赋形剂或润滑剂)的局部配方，有效预防对象毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。对象通常会是一种哺乳动物，例如人。例如，本发明的方法有助于治疗易脱发或有脱发危险(如男性型秃顶)的雄性对象。这种对象可能没有明显的脱发特征，但患有使其具有脱发倾向的遗传症状，或该对象可能即将接受或正在接受细胞毒素或细胞生长抑制剂或抗病毒化合物等引起脱发的治疗方法。在另一个实施例中，本发明的方法有助于治疗具有毛发脱落疾病或相关症状(如秃发)的对象。这种对象可能先前存在脱发或正在接受一种细胞毒素或细胞生长抑制剂或抗病毒化合物等引起脱发的治疗方法，其中，已出现脱发特征。对接受化疗或处方中含有化学疗法的对象的治疗和预防清楚地包含在本发明的方法中。 本发明的另一个实施例提供了一种促进或增强毛发生长或生发的方法，例如在细胞毒素或细胞生长抑制剂或抗病毒化合物等引起脱发的治疗期间或治疗后，上述方法包含对有需要的对象使用一种配方，例如，含有一定量的一种肝素结合细胞因子家族蛋白(如肝素结合细胞因子、多效生长因子或它们的一种变体或同源蛋白)和局部载体(赋形剂或润滑剂)的局部配方，有效预防对象毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗或预防毛发脱落的方法，上述方法包含对有需要的对象，例如，脱发对象(如脱发的急剧形式或男性型脱发)或容易发展为上述脱发的对象，使用含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白和载体，赋形剂或润滑剂，有效预防个体毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。优选地，该配方是一种局部配方，上述方法包含在对象毛发已经脱落的皮肤感染区或毛发可能脱落的皮肤区域使用该局部配方。在能够减少对象毛发脱落和/或影响毛发生长的条件下，该配方可以用于脱发一段时间的对象。或者，在能够预防或减少对象毛囊细胞凋亡的条件下，该配方还可以用于脱发一段时间的对象。或者，在能够延长对象毛囊生长初期阶段的条件下，该配方还可以用于脱发一段时间的对象。或者，在能够促进或增强对象正常的终期毛囊进入下一个毛发周期的条件下，该配方还可以用于脱发一段时间的对象。本发明的方法特别适用于接受细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗或处方中已经含有细胞毒素或细胞生长抑制剂疗法的对象。在一个优选的实施例中，肝素结合细胞因子家族蛋白可以是肝素结合细胞因子、多效生长因子、肝素结合细胞因子类似蛋白或截短的肝素结合细胞因子蛋白。在另一个实施例中，本发明提供了一种促进或增强毛发脱落对象的毛发生长或生发的方法，上述方法包含对有需要的对象使用含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白及局部载体，赋形剂或润滑剂，有效预防个体毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。肝素结合细胞因子家族蛋白最好是肝素结合细胞因子或多效生长因子。在另一个实施例中，本发明提供了一种使接受化疗或处方中已含有化学疗法的对象毛发脱落减少的方法，上述方法包括在一段时间内及能够预防或减少化疗引起的毛发脱落的条件下对对象施加含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白和载体(赋形剂或润滑齐IJ)的局部配方。优选地，该方法包含将配方局部用于经过化疗的或在化疗开始前处方中已经含有化学疗法的对象。在一个实施例中，该方法包括将配方局部用于化疗开始之前处方中已经含有化学疗法或化疗开始之后的对象。正如文中所举实施例，肝素结合细胞因子家族蛋白可以是肝素结合细胞因子。本发明的另一个实施例提供了一种毛发脱落的动物模型，基本上由患有毛发脱落的老龄小鼠组成，例如，以秃发区域或脱发位点的形式。本发明明确扩展至利用这种动物模型筛选新颖的治疗和预防组分，用于预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。其中上述筛选包含将被测化合物用于动物身上并测定毛发生长和/或减少毛发脱落，其中，与没有被测化合物相比，在被测化合物存在时动物出现的毛发脱落减少和/或增强毛发生长和/或促进生发等症状表明被测化合物能预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。在该筛选方法的一个实施例中，将被测化合物的活性与种肝素结合细胞因子家族蛋白的活性进行比较，一种活性与肝素结合细胞因子家族蛋白相当或更强的被测化合物将被鉴定和/或筛选和/或采用本发明中的方法按照本文中任何实施例制成配方。
在另一个实施例中，本发明提供了一种鉴定或筛选预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长的化合物的方法，其中上述方法包括用被测化合物作用于小鼠。上述小鼠的年龄大于一年且患有毛发脱落，其体内的一种肝素结合细胞因子蛋白编码基因的一个等位基因及该基因的另一个功能等位基因被敲除，然后测定小鼠身上的毛发生长和/或减少的毛发脱落，其中，与没有被测化合物相比，在被测化合物存在时小鼠出现的毛发脱落减少和/或增强的毛发生长和/或毛发开始生长表明该测试化合物能预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。注释本说明书包含PatentIn Version 3. 6软件处理过的核酸和氨基酸序列信息，在本文权利要求书后面提供。在序列表中，每一个核酸序列都经过数字指示器〈210〉及随后的序列标识符(例如，〈210>1、〈210>2、〈210>3等)鉴定。序列的长度和类型(DNA、蛋白质(PRT)等)以及每一条核酸序列的生物来源分别在数字指示器域〈211>、〈212>和〈213〉提供的信息中指明。说明书中提到的核酸序列以序列标识符给出的“SEQ ID NO:”(序列身份编号)表示(例如SEQ ID NO: I指序列表中命名为<400>1的序列)。这里所用到的术语“derived from”(来源于)应该被理解为一个确定的整体可以从一个确定的来源获得，即使不必直接从那个来源获得。说明书自始至终，除非文中另有要求，单词“comprise”(包含)或其变体如“comprises”(包含)或“comprising”(包含),应被理解为包含一个规定的步骤或组分或整体或步骤群或多种组分或多个整体而不排除任何其它的步骤或组分或整体或组分群或多个整体。术语“hair”(毛发)表示包含人类在内的哺乳动物身体上的任何毛发或软毛，包括例如头发、眉毛、睫毛、髭、胡须、胸毛、背毛、臂毛、腿毛、阴毛、鼻毛或耳毛。正如本文所用到的，术语“treat”(治疗)或“treating”(治疗)或“treatment”(治疗)应被理解为包含一种对先前存在的症状进行治疗的方法，或预防的或预防性的方法，其目的是预防、改善、减少或减慢(减轻)毛发变少、毛发脱落或秃发。由此得出，毛发生长或治疗毛发变少，是指正常化变少的毛发，例如脱发，和/或增加毛发的长度和粗度。需要治疗的哺乳动物可能已经产生这种症状或容易产生这种症状，或可能是预防这种症状。这种治疗方法更好地包含了一种抗毛囊细胞凋亡的效应，因此延长了它们的毛发生长初期阶段，或使正常的毛发生长终期的毛囊重新进入下一个毛发周期。“Preventing” (阻止)、“prevention” (阻止)、“preventative” (预防性的)或“prophylactic”(预防的)指的是阻止发生，或阻碍、保护，或保护对象不出现症状、疾病、失调或表型，包括异常或征兆。需要预防的哺乳动物可能容易产生这种症状。术语“ameliorate”(改进)或“amelioration”(改进)指的是症状、疾病、失调或表型的减少、降低或消除，包括异常或征兆。术语“therapeutically effective amount”(有效治疗剂量)指能够使哺乳动物的毛发变少、毛发脱落或秃发减少到有效治疗和预防的程度所需的肝素结合细胞因子家族蛋白的量。有效治疗剂量可以通过经验及一种关于治疗毛发减少、毛发脱落或秃发的常规方法来确定。
本说明书自始至终，除非另有特殊说明或文中另有要求，所提及的单一步骤、物质组分、步骤群或物质组分群应被理解为包括单一的或多元的(即一个和多个)那些步骤、物质组分、步骤群或物质组分群。除非另有特殊说明，本文所述的每个实施例对每一个其它的实施例已作必要修正。除非文中另有要求，本文每一个定义或说明用语应被理解为对本发明的每一个实施例已作必要修正。那些对此技术熟悉的人将体会到本文所述发明除了适用于那些特别描述的情况外，还适用于各种变化形式或变型。要说明的是本发明包括所有这样的变化形式或变型。本发明还包括说明书中个别或全部的相关的或指明的步骤、特征、组分和化合物，以及上述步骤或特征中任意两个或多个的任意组合和全部组合。


图I提供的照片显示的是每周三次在I. 5岁脱发的Black 6MK基因杂合敲除(+/_)小鼠不同的脱发区域施加局部配方15天后促进软毛生长的效果，该配方包含溶于40%甘油的肝素结合细胞因子(I μ g/ml)或溶于40%甘油的10 μ I多效生长因子(lyg/ml)。图片中每一排圆环表示同一排的每个小鼠身上MK (靠近颈部区域的圆环)和PTN (靠近尾巴的圆环)作用的斑块位置。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-L分别显示治疗开始后第I天，第4天，第6天，第8天，第11天，第13天，第15天，第18天，第20天，第22天及第25天的小鼠。数据显示，在这个动物模型中，经过MK或PTN局部配方治疗后的小鼠表现出明显的软毛再生，并且使用MK处理的小鼠的软毛再生速度比使用PTN处理的小鼠快。15天后治疗停止(图H)，MK有一个持续至第25天的有利效应。软毛再生并非完全局限于处理区域，因为动物在经过处理后整个背部区域表现出改善的软毛状况。图2提供的照片显示的是在I. 5岁的老年Black 6 MK基因纯合敲除(-/-)小鼠的不同脱发区域注射(即皮下注射)治疗配方15天后，再使用图I的

中所述的局部配方治疗10天后的效果。该注射配方包含MK (I μ g/ml)或50μ I的PTN (I μ g/ml)。图片中每一排圆环表示同一排的每个小鼠身上皮下注射及MK (靠近颈部区域的圆环)和PTN(靠近尾巴的圆环)作用的位置。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-L分别显示治疗开始后第I天，第4天，第6天，第8天，第11天，第13天，第15天，第18天，第20天，第22天及第25天的小鼠。图H显示了每周三次局部治疗开始当天的小鼠。数据表明皮下注射MK或PTN的小鼠15天后没有表现出明显的软毛再生现象。然而，在这个动物模型中，局部治疗10天，MK或PTN的使用促进了软毛再生(图L)。皮毛再生并非完全局限于处理区域，因为动物在经过处理后整个背部区域表现出改善的皮毛状况。图3提供的照片显示的是每周5次在I. 5岁Black 6MK基因杂合敲除(+/_)小鼠的脱发区域外敷溶于10%甘油的100 μ I MK (2 μ g/ml)后促进皮毛生长的效果。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-F分别显示治疗开始后第7天、第14天、第21天、第28天以及第35天的小鼠。数据显示了在35天测试周期中软毛持续再生，大约21-28天(图C和D)后明显出现显著的软毛再生。图4提供的照片显示的是每周5次在I. 5岁的Black 6MK基因杂合敲除(+/_)小鼠的脱发区域外敷溶于10%甘油的100 μ I PTN (2 μ g/ml)后的促进皮毛生长的效果。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-F分别显示治疗开始后第7天、第14天、第21天、第28 天以及第35天的小鼠。数据显示了在35天的测试周期中软毛持续再生，大约21-28天(图C和D)后明显出现显著的软毛再生。图5提供的照片显示的是在老年Black 6MK基因杂合敲除(+/-)小鼠的脱发区域外敷100 μ I的米诺地尔(RiUP ,Taisho Pharmaceutical Co. , Ltd.)后促进软毛生长的效果，作为图3和图4实验的阳性对照。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-F分别显示治疗开始后第7天、第14天、第21天、第28天以及第35天的小鼠。数据显示了用米诺地尔处理后的效果不如观察到的MK或PTN处理的效果好，因为米诺地尔处理的很多皮肤区域在35天后不能重新长出软毛。图6提供的照片显示的是在9周大的雄性C3H/HeJ小鼠剃毛区域外敷100 μ 110%(ν/ν)的甘油/磷酸盐缓冲液(PBS)后的软毛再生，作为图8和图9实验的阴性对照。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-D分别显示治疗开始后第7天、第14天和第21天的小鼠。数据显示出缓慢的软毛再生，只有到第21天左右才明显观察到。图7提供的照片显示的是在9周大的雄性C3H/HeJ小鼠剃毛区域外敷100 μ I米诺地尔(例如，l%w/v Ri U P , Taisho Pharmaceutical Co.，Ltd.)后的软毛再生,作为图 8和图9实验的阳性对照。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-D分别显示治疗开始后第7天、第14天和第21天的小鼠。数据显示出缓慢的软毛再生，只有在第21天左右才明显观察到，与米诺地尔在治疗皮疹时的血管扩张效应一致。图8提供的照片显示的是在9周大的雄性C3H/HeJ小鼠剃毛区域外敷100 μ I的溶于10%甘油/PBS的MK (2 μ g/ml)后的软毛再生。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-D分别显示治疗开始后第7天、第14天和第21天的小鼠。数据显示出缓慢的软毛再生，只有在第21天左右才明显观察到，表明在没有出现脱发症状、仅同步于毛发生长初期的动物中，MK与米诺地尔相比具有一种不同的作用模式。图9提供的照片显示的是在9周大的雄性C3H/HeJ小鼠剃毛区域外敷100 μ I的溶于10%甘油/PBS的PTN (2 μ g/ml)后的软毛再生。图A显示治疗开始当天的小鼠。图B-D分别显示治疗开始后第7天、第14天和第21天的小鼠。数据显示出缓慢的软毛再生，只有在第21天左右才明显观察到，表明在没有出现脱发症状、仅同步于毛发生长初期的动物中，MK与米诺地尔相比具有一种不同的作用模式。图10提供的图示显示的是，在第I天通过剃毛和上蜡使其同步于毛发生长初期，在第9天皮下注射150mg/kg的环磷酰胺(CYP)后由环磷酰胺诱导脱发一段时间的鼠科动物模型中脱发发生的百分率。脱发发生的百分率决定于指定测量日敷过药的皮肤斑块中表现出软毛脱落的皮肤面积的百分比。圆圈表示每天接受盐溶液安慰剂的动物中出现的脱发，即除了 CYP外，没有肝素结合细胞因子蛋白。实心正方形(MK 2-29)表示自第2天至第29天每天局部接受5yg肝素结合细胞因子蛋白的动物在实验结束时出现脱发的百分比。实心三角形(MK-10-29)表示自第10天至第29天每只动物每天接受5 μ g肝素结合细胞因子蛋白的动物在实验结束时出现脱发的百分比。数据表明在CYP处理之前和/或紧接着CYP处理之后施加肝素结合细胞因子蛋白减少了 CYP诱导的软毛脱落，并且肝素结合细胞因子蛋白提高了由CYP处理中断后的软毛生长所决定的毛囊恢复比率。在这些情况下，接受安慰剂处理的对照组和接受肝素结合细胞因子蛋白处理的实验组动物之间最大的区别在第 12至14天检测到。图11提供了图10中第13天出现的脱发百分率数据的图示。脱发发生的百分率决定于指定测量日敷过药的皮肤斑块中表现出软毛脱落的皮肤面积的百分比。白条(PBS)显示每天接受盐溶液安慰剂的动物中有42%脱发，即除了 CYP外，没有肝素结合细胞因子蛋白。阴影条(MK 2-29)表示自第2天至第29天每天局部接受5yg肝素结合细胞因子蛋白的动物在实验结束时只有20%脱发。条纹条(MK-10-29)表示自第10天至第29天每只动物每天接受5yg肝素结合细胞因子蛋白的动物在实验结束时只有26%脱发。数据表明在CYP处理之前和/或紧接着CYP处理之后肝素结合细胞因子蛋白减少了 CYP诱导的软毛脱落，并且肝素结合细胞因子蛋白提高了由CYP处理中断后的软毛生长所决定的毛囊恢复比率。图12提供的是15只小鼠背部皮肤的图示，每只小鼠用磷酸盐缓冲液安慰剂处理，即不含有肝素结合细胞因子蛋白，每天将安慰剂作为一种局部配方使用(5只小鼠一组，标为PBS)，或在接受一次环磷酰胺(CYP)腹腔注射之前和/或之后每天将5 μ g肝素结合细胞因子蛋白作为一种局部配方使用(5只小鼠一组，标为MK 2-29)，或在接受一次150mg/kg环磷酰胺(CYP)腹腔注射后每天局部施加5μ g肝素结合细胞因子蛋白(5只小鼠一组，标为MK 10-29)。观察动物出现的软毛再生/脱发的迹象及皮肤的色素沉着。数据表明用PBS处理的小鼠表现出广泛的软毛脱落及灰色或粉色的皮肤颜色，尤其是在它们的颈部，与大部分毛囊处于毛发生长中期(灰色)或毛发生长终期(粉红色)相一致。与PBS处理的小鼠相比，在CYP处理之前和之后用肝素结合细胞因子蛋白处理的小鼠(MK2-29)表现出减少的软毛脱落面积，并且皮肤颜色呈均一的黑色或深灰色，与大部分毛囊处于毛发生长初期(黑色)及较小比例的毛囊处于毛发生长中期相一致。在这个实验组中几乎没有明显的粉红色皮肤，表明处于毛发生长终期的毛囊所占比例有一个很大程度的减小。类似的，与PBS处理的小鼠相比，只在CYP处理后用肝素结合细胞因子蛋白处理的小鼠(MK10-29)表现出减少的软毛脱落面积，并且宏观上与化疗之前或之后接受肝素结合细胞因子蛋白的动物相似。只在化疗后接受肝素结合细胞因子蛋白的小鼠的皮肤颜色呈均一的深灰色，与大部分毛囊处于毛发生长初期或毛发生长中期一致。
序列表简要说明SEQ ID NO: I提供了人类肝素结合细胞因子的氨基酸序列(访问标识符gi|4505135 andref|NP_002382. I)。SEQ ID NO: 2提供了人类多效生长因子的氨基酸序列(访问标识符gi | 4506281_andref|NP_002816. I)。SEQ ID N0:3提供了一种人类肝素结合细胞因子类似蛋白的氨基酸序列，与TO2004/052928 的 SEQ ID N0:4 相一致。SEQ ID NO:4提供了人类肝素结合细胞因子mRNA的核苷酸序列(访问标识符gi 1182650 andgb|M69148. I)。发明的详细说明 肝素结合细胞因子家族蛋白肝素结合细胞因子是一种分子质量为13-kDa的蛋白，是在肺癌细胞分化早期发现的由视黄酸诱导产生的一个基因产物。多效生长因子是在新生大鼠大脑中发现的能够增强神经突起延伸的肝素结合蛋白。这里所用到的“肝素结合细胞因子家族蛋白”是一种与肝素结合细胞因子或它的一个功能区域具有相似氨基酸序列的蛋白并表现出与肝素结合细胞因子相同或相似的功能。肝素结合细胞因子家族蛋白包括肝素结合细胞因子家族蛋白的功能性变体。即使一种与肝素结合细胞因子具有较低同一性的蛋白也可能是一种肝素结合细胞因子家族蛋白，如果这种蛋白具有与肝素结合细胞因子相同或相似的功能。这种肝素结合细胞因子家族蛋白的一个例子可以是肝素结合细胞因子(例如SEQ ID N0:1)、肝素结合细胞因子类似蛋白(例如SEQ ID NO:3 (W0 2004/052928))，截短的肝素结合细胞因子蛋白或多效生长因子(例如SEQ ID N0:2)。肝素结合细胞因子家族蛋白可以是一种肝素结合细胞因子家族蛋白的功能性变体，包括肝素结合细胞因子、肝素结合细胞因子类似蛋白、截短的肝素结合细胞因子蛋白或多效生长因子等蛋白的一种功能性变体。功能性变体与未修饰的蛋白相比可以替代、删除或增加一至多个氨基酸。一种肝素结合细胞因子家族蛋白的功能性变体将表现出肝素结合细胞因子的一种功能。在一个实施例中，肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子。在另一个实施例中，肝素结合细胞因子家族蛋白是多效生长因子。肝素结合细胞因子的功能可以是一种增强细胞增殖、抑制细胞凋亡、结合肝素、增强细胞迁移或诱导细胞分化的功能。在一个实施例中，MK的功能是抑制细胞凋亡。这里所用到的“功能性变体”和“变体”包括具有肝素结合细胞因子的一种功能的天然蛋白质变体或人工修饰的蛋白质变体。例如这里所用到的“modified”(修饰)或“modification”(修饰)包括一个氨基酸残基的替代、增加和/或删除。肝素结合细胞因子家族蛋白可以在长度或功能区域上与肝素结合细胞因子家族蛋白(例如，SEQ ID NO中1-3中任意一个)的一个片段(最好是一个连续的片段)具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的氨基酸序列同一性。肝素结合细胞因子家族蛋白可以含有I个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个修饰，或者甚至15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个或50个修饰，例如，在选取的维持或增强肝素结合细胞因子功能的位置。因此，特别声明的肝素结合细胞因子家族蛋白序列在个别替代、删除和/或增加一个氨基酸不会强烈削弱其功能的条件下可以不同。肝素结合细胞因子家族蛋白或它们的功能性变体在不给它们的功能带来强烈不利影响的条件下也可以连接其它的肽或多肽或进一步连接化学基团，例如糖基、脂类、磷酸盐、乙酰基团或类似物。因此，肝素结合细胞因子家族蛋白可以是一种融合结构。例如，肝素结合细胞因子家族蛋白可以与含有一个技术识别蛋白转移结构域的一个肽基融合，从而有利于肝素结合细胞因子家族蛋白进入毛囊细胞。除了天然产生的氨基酸，非天然氨基酸或修饰的氨基酸也会考虑，并属于本发明的范围内。实际上，这里所用到的“氨基酸”指的是天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物及它们的D或L立体异构体。
天然氨基酸包括丙氨酸(A)、精氨酸(R)、天冬酰胺(N)、天冬氨酸(D)、半胱氨酸(C)、谷氨酰胺(Q)、谷氨酸(E)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、赖氨酸(K)、甲硫氨酸(M)、苯丙氨酸(F)、脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)、缬氨酸(V)、羟脯氨酸(O和/或Hyp)、异二酪氨酸(IDT)以及异二酪氨酸二聚体(di-IDT)。羟脯氨酸、异二酪氨酸以及异二酪氨酸二聚体在翻译后形成。在一些实施例中，使用天然氨基酸，尤其是这20个基因编码的氨基酸。替代可以是保守氨基酸的替代，替代的氨基酸与涉及的序列中相应的氨基酸具有相似的结构或化学性质。或者，替代也可以是非保守氨基酸的替代。举个例子，保守的氨基酸替代包括脂肪族氨基酸或疏水氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)的互相替代；含羟基的氨基酸(例如，丝氨酸和苏氨酸)的互相替代；酸性氨基酸(例如，谷氨酸或天冬氨酸)的互相替代；含酰胺的氨基酸(例如，天冬酰胺和谷氨酰胺)的互相替代；芳香族氨基酸(例如，苯丙氨酸和酪氨酸)的互相替代；基本氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)的互相替代；以及小氨基酸(例如，丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和甘氨酸)的互相替代。功能性变体可以通过肝素结合细胞因子家族蛋白在氨基酸侧链、氨基酸手性和(或)肽骨架的水平上进行化学修饰获得。这些变化是为了使蛋白质具有相似或改良的治疗特性。技术人员将获知可以提高功效、延长活性、有利于纯化和/或延长半衰期的修饰。肝素结合细胞因子家族蛋白的功能性变体可以通过改变蛋白质序列，然后分析改变后的蛋白质是否具有与肝素结合细胞因子家族蛋白相似的功能而得到鉴定，例如增强细胞增殖、抑制细胞凋亡、结合肝素、促进细胞迁移或诱导细胞分化。肝素结合细胞因子家族蛋白可以通过技术人员熟知的重组DNA突变技术化学合成。例如，肝素结合细胞因子家族蛋白可以按照实施例JP-A-H09-95454中公开的方法制成。配方肝素结合细胞因子家族蛋白可以用来制成任何形式的配方，用于药物、准药或化妆品领域，更适合于局部用药。例如，组分可以是一种毛发生长剂、毛发或头皮美容品(例如，香波、护发素、头皮洗液、头皮霜、头发滋养品，等等)、护肤品(例如，洗液、乳霜、面霜、洁面乳、乳液、面膜、洗面液、肥皂，等等)、身体护肤品(例如，身体乳霜、沐浴露、肥皂、液体洗液、沐浴添加物，等等)、紫外线保护剂(例如，遮阳物、防晒霜、晒黑油，等等)或化妆品(例如，眼线膏、眉笔、乳霜、乳液，等等)。肝素结合细胞因子家族蛋白可以方便地制成注射用配方，例如，通过静脉注射一种或多种化疗药物。赋形剂通常以配药的形式包含在内，例如，提高溶解度和/或生物黏着。合适的赋形剂包含溶剂、助溶剂、乳化剂、增塑剂、表面活性剂、增稠剂、PH调节剂、润滑剂、抗氧化剂、螯合剂、润湿剂和吸水剂。配方还可以包含一种或多种添加剂，例如，染料、彩色色素、发光剂、除臭剂及掩臭剂。稀释液或填充物增加了固体剂型的体积，因此药片的压缩或药珠和药粒的形成确定了实际大小。合适的稀释液包括但不局限于二水磷酸氢二钙、硫酸钙、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素、微晶纤维素、瓷土、氯化钠、干淀粉、水解淀粉、预胶凝淀粉、二氢化硅、氧化钛、硅酸铝镁和糖粉。配方还可以包含一种或多种分散剂，例如，磷酸盐缓冲液(PBS)、盐溶液、葡萄 糖、月桂基磺酸钠(SLS)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)0配方还可以包括一种或多种粘合剂，给一种固体剂型配方提供粘附力，从而使一种药片、药珠或药粒在剂型形成之后保持完整。合适的粘合剂原料包括但不局限于淀粉、预凝胶淀粉、凝胶、糖(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖和山梨醇)、聚乙二醇、蜡质、天然的和合成的树胶(如阿拉伯树胶、黄芪胶、海藻酸钠、纤维素(包括羟丙基甲基纤维素(“HPMC”)、微晶纤维素(“MCC”)、羟丙基纤维素、乙基纤维素)以及硅酸镁铝)，及合成的聚合物如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸氨烷基酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。配方还可以包括一种或多种有利于固体剂量单位(例如一种药片)生产和服用的润滑剂。合适的润滑剂包括但不局限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、山嵛酸甘油、聚乙二醇、滑石和矿物油。配方还可以包含一种或多种有利于剂型在服用后分解的分解质，通常包括但不局限于淀粉、羟基乙酸淀粉钠、羟甲基淀粉钠、羟甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、预凝胶淀粉、粘土、纤维素、藻蛋白碱、树胶或交错连接的聚合物，例如交错连接的PVP。配方还可以包含一种或多种稳定剂和/或防腐剂(例如，E216、E218和水合三氯叔丁醇)，防止或减缓药物的分解反应，例如，通过氧化或细菌作用。配方还可以包含以一种或多种表面活性剂。表面活性剂可以是阴离子的、阳离子的、两性的或非离子的表面活性剂。合适的阴离子表面活性剂包括但不局限于那些含有羧酸盐、磺酸盐和硫酸根离子的物质。阴离子表面活性剂的例子包括钠、钾、铵的长链烷基磺酸盐以及烧基芳基横酸盐，例如十~■烧基苯横酸纳；烧基玻拍酸双酷横酸纳，例如十~■烧基苯磺酸钠；烷基琥珀酸双酯磺酸钠，例如2-乙基亚硫酸基双酯磺酸钠；以及烷基磺酸盐，例如月桂基磺酸钠。阳离子表面活性剂包括但不局限于季铵化合物，例如杀藻胺、苄索氯铵、西曲溴铵、硬脂双甲苯甲基氯化铵、聚氧乙烯及椰子胺。非离子表面活性剂的例子包括乙二醇单硬酯酸酯、丙二醇豆蘧酸盐、甘油基单硬酯酸酯、甘油基硬酯酸酯、聚甘油-4-油酸酯、酰化山梨聚糖、酰化蔗糖、聚乙二醇-150月桂酸酯、聚乙二醇-00单月桂酸酯、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯基醚、聚乙二醇-1000鲸蜡基醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚丙二醇丁基醚、硬脂酰单异丙醇胺以及聚氧乙烯氢化牛脂胺。两性表面活性剂的例子包括N-十二烷基-β -丙酰胺钠，N-月桂酰-β -亚氨基二丙酸钠、肉豆蘧酰两性基乙酸钠、月桂酰甜菜碱及月桂酰磺基甜菜碱。如有需要，固体配方,例如,药片、药珠、药粒或微药粒,也可以含有一定量的无毒辅料，例如一种润湿剂或乳化剂、染料或PH缓冲剂。药方可以是单位剂量的形式，每个单位剂量包含预定量的活性药物，即肝素结合细胞因子家族蛋白或它的一种衍生物或同源蛋白。根据配方是否用于预防或治疗目的、用药方法、按所选方法用药后化合物的半衰期以及年龄、体重和治疗期间病人的身体状况(例如，酗酒问题的严重性)，活性药物的浓度可以不同。例如，一个单位剂量可以包含大约
Iμ g-io μ g、0. Olmg-IOOOmg或0. lmg_250mg的肝素结合细胞因子家族蛋白或它的一种衍生物或同源蛋白。在另一个实施例中，肝素结合细胞因子家族蛋白或它的一种衍生物或同源蛋白可以制成活性药物浓度为药物成分总重量的至少1% (w/w)左右或至少5% (w/w)左右或至少10% (w/w)左右或25% (w/w)左右。为了准备药方，将一种或多种肝素结合细胞因子家族蛋白与一种药剂学上可接受的载体或赋形剂混合起来，例如，与一种药剂学上可接受的载体、赋形剂或以冻干粉、浆状、水溶液或悬浮液等形式存在的稳定剂混合(参考，例如Hardman，et al. (2001)Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, NewYork,N.Y. ;Gennaro(2000)Remington : The Science and Practice of Pharmacy,Lippincottj Williams,and Wilkins, New York,N. Y. ;Avis, et al. (eds.) (1993)Pharmaceutical Dosage Forms:Parenteral Medications,Marcel Dekkerj NY ；Liebermanj et al. (eds.) (1990)Pharmaceutical Dosage Forms : Tablets, MarcelDekker，NY ;Lieberman，et al. (eds.) (1990)Pharmaceutical Dosage Forms:DisperseSystems, Marcel DekkerjNY ；Weiner and Kotkoskie (2000)Excipient Toxicity andSafety, Marcel Dekker, Inc.，New York, N. Y.)。在用于治疗脱发的配方中，根据各方面的参数，例如，治疗中哺乳动物的年龄、性别和身体状况，肝素结合细胞因子家族蛋白的量可能不同。例如，肝素结合细胞因子家族蛋白可以制成终浓度为0. 001比药物总重量的50%、10%、5%或l%(w/w)。在液体配方中，肝素结合细胞因子家族蛋白的浓度可以是，例如，0. 0001 μ g/ml至2mg/ml、0. 001 μ g/ml至lmg/ml、0. 01 μ g/ml 至 500 μ g/ml、0. I μ g/ml 至 100 μ g/ml、0. I μ g/ml 至 50 μ g/ml、0. I μ g/ml至 10 μ g/ml 或 I μ g/ml 至 2 μ g/ml。含有肝素结合细胞因子家族蛋白和药剂学上接受的载体或稀释液的配方还可以含有一种或多种附加治疗药物，该药物可以治疗相同的症状并适合于肝素结合细胞因子家族蛋白的用药方法。例如，一种肝素细胞因子家族蛋白可以制成与雌激素和/或氧雄龙和/或米诺地尔一起局部使用的配方。附加药物在配方中的使用浓度通常与它已知的处方量一致。熟练的技工将体会到这样的组分可以加强病人的治疗效果，并且可能不仅仅是加强效果。
、
药物复合物的配方根据所选的用药方法不同(例如，溶液、乳剂、胶囊)而不同。对于溶液或乳剂，合适的载体包括，例如水溶液或酒精/水溶液、乳剂或悬浮液(包括盐溶液和缓冲液)。注射赋形剂可以包括氯化钠溶液、林格式葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格或固定油。注射赋形剂可以包括多种添加物、防腐剂、或流体(营养物或电解质补充物及类似物)Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack PublishingCo.，Pa.，1985)。为了便于吸收，可以使药剂溶解并装于一种合适的分散器中(例如，喷瓶、喷雾器或加压喷雾器)。药方可以根据适合的用药方法改变。例如通过口服的(包括口腔的或舌下的)、局部的(包括口腔的、舌下的或经皮肤给药的)、或注射的(包括皮下的、肌肉的、静脉的或皮内的)方法。这种配方可以用药学领域的任何方法制备，例如通过将活性成分和载体、稀释液或赋形剂联合在一起。例如，将肝素结合细胞因子家族蛋白制成局部配方。局部组分包括通过直接作用于接受治疗的皮肤表面外敷肝素结合细胞因子家族蛋白的那些药物形式。为此，传统药物类型包括软膏、涂抹油、乳霜、洗发齐 、乳液、泥膏齐 、凝胶齐 、喷雾齐 、气溶胶和它们的类似物，根据需要治疗的身体部分可以进行部分涂抹或浸溃敷料。术语“软膏”包含具有油质 的、水溶性的和乳状液类型的基础成分的配方(包括乳霜在内)，例如，凡士林、羊毛脂、聚乙二醇以及它们的混合物。为了局部用于眼睑或眉，活性成分肝素结合细胞因子家族蛋白可以通过加入药理学上可接受的缓冲液和盐而制成具有生理可接受的容积渗克分子浓度的乙醇水溶液、乳霜、软膏或油。视药剂师而定，这样的配方可以包含或不包含防腐剂(如杀藻胺)、氯已定、氯丁醇、对羟基苯甲酸和苯汞基盐(例如硝酸盐、氯化物、醋酸盐和硼酸盐)，或抗氧化剂，以及添加物(例如乙二胺四乙酸、山梨醇、硼酸等作为添加物)。此外，尤其是水溶液可以包含粘性增强剂，例如多糖(如甲基纤维素、粘多糖(如透明质酸、软骨素或多元醇(如聚乙烯醇)))。许多缓释凝胶和基质也可用于可溶的和不可溶的眼用嵌入剂，例如，基于形成原位凝胶的物质。根据使用的实际配方和肝素结合细胞因子家族蛋白，可以采用不同的药量和不同的服药方法。为了局部用于皮肤和头皮，肝素结合细胞因子家族蛋白可以用软膏、乳霜、涂抹油或药膏作为活性物质的载体很方便地制成配方。此外，取决于药剂师和用途性质，这些配方可以含有或不含有防腐剂。这样的防腐剂包含上面提到的那些化合物，以及甲基、丙烷基或丁基对羟基苯甲酸、甜菜碱、氯已定、杀藻胺，以及类似物。许多用于缓释的基质也可以使用。在另一个实施例中，含有一种或多种肝素结合细胞因子家族蛋白的配方适于注射用药，例如，皮下注射或静脉注射。这种配方包括水性和非水性无菌注射溶液，可以包含抗氧化剂以及缓冲液、抑菌剂和使配方等压于受者血压的溶质；以及可以含有悬浮剂和增稠剂的水性的和非水性无菌注射溶液。这些配方可以装在单剂量或多剂量的容器中，例如密封的一次用量的针剂安瓿和小瓶，也可以储存在一个冻干(使其冻干)的条件下，只需在临用前加入无菌的液体载体进行注射，例如水。临时用的注射溶液和悬浮液可以用无菌药粉、药粒和药片制备。在一个实施例中，一种或多种肝素结合细胞因子家族蛋白可以制成一种用于注射的静脉注射脂质乳剂或一种表面活性剂胶团或聚合胶团(参考，例如，Jones et al. , Eur J. Pharmaceutics Biopharmaceutics 48，101—111，1999;TorchilinJ. Clin, release 73,137-172,2001)。
制备持续释放的注射配方，例如通过将一种或多种肝素结合细胞因子家族蛋白装入多孔的含有一种药物和一种基质物质的微粒中而制成，这种微粒具有大约Iym至150 μ m的体积平均直径，例如，大约5 μ m至25 μ m之间的直径。在一个例子中，多孔微粒具有一个约体积5%至90%之间的平均多孔性。在另一个例子中，多孔微粒还包含一种或多种表面活性剂，例如一种磷脂。这种微粒可以分散在一种药剂学上接受的水性的或非水性的赋形剂中用于注射。适合这种配方的基质物质包含一种生物相容的合成多聚物、一种脂质、一种疏水分子或它们的一种组合。例如，合成多聚物可以包含，例如从一组含聚羟基酸(如聚乳酸、聚羟基乙酸及聚乳酸-羟基乙酸)的化合物中挑选的一种多聚物、聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-乙交酯、聚酐类、多正酯类、聚酰胺、聚碳酸酯、聚亚烃基(例如聚乙烯和聚丙烯)、聚亚烃基二醇(例如聚乙二醇)、聚亚烃基氧化物(例如聚环氧乙烷)、聚亚烃基对苯二酸盐(例如聚对苯二甲酸乙二酯)、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯卤化物(例如聚氯乙烯)、聚乙烯吡咯烷酮、聚硅氧烷、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚苯乙烯、聚亚安酯以及它们的共聚物、衍生的纤维素(例如烷基纤维、羟烷基纤维、纤维素醚类、纤维素脂类、硝化纤维、甲基纤维素、乙基纤维素、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羟基丁基甲基纤维素、醋酸纤维素、丙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、羧乙基纤维素、三乙酸纤维素、硫酸钠纤维素(这里提到的都是“合成纤维素”)、聚合物或丙烯酸、甲基丙烯酸或它们 的共聚物或衍生物(包括酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸异丁酯、聚甲基丙烯酸己酯、聚甲基丙烯酸异癸酯、聚甲基丙烯酸月桂酯、聚甲基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸异丙酯、聚丙烯酸异丁酯及聚丙烯酸硬脂酯)(这里提到的都为“聚丙烯酸”)、聚丁酸、聚戊酸、以及聚丙交酯-己内酯、共聚物、它们的衍生物和混合物。在一个推荐的实施例中，合成多聚物包含一种聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乳酸-羟基乙酸或聚丙交酯-乙交酯。在另一个实施例中，药方改成了口服配方，例如胶囊、软凝胶或药片；粉末或颗粒、溶液或在水性或非水性液体中的悬浮物、可食用的泡沫或起泡物、或水包油乳状液或油包水乳状液。一种口服配方可以包含一种晶内相，其中含有有效剂量的肝素结合细胞因子家族蛋白和至少一种糖醇和一种水性粘合剂。该药方可以不含有乳糖。适合这种配方的糖醇可以从甘露醇、麦芽糖醇、山梨醇、乳糖醇、赤藻糖醇和木糖醇中选择。糖醇最好在大约15%-90%浓度范围内。一种较好的水性粘合剂可以从羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、凝胶及类似物中选择。粘合剂的重量最好在大约1%-15%的范围内。晶内相还可以包含一种或多种稀释液，例如，从微晶纤维素、粉末状纤维素、二碱式磷酸钙、硫酸钙、葡萄糖结合剂、糊精、藻酸盐和葡萄糖赋形剂中选择。这种稀释液的重量也在大约15%-90%的范围内。这种晶内相还可以包含一种或多种分解质，例如，从一种低取代羟基丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、羟基乙酸淀粉钠、交聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、淀粉、晶体纤维素、羟丙基淀粉以及部分预凝胶淀粉中选择一种分解质。分解质的重量通常在5%-20%的范围内。这种配方还可以包含一种或多种润滑剂，例如，从滑石、硬脂酸镁、硬脂酸、氢化植物油、甘油山嵛酸酯、聚乙二醇及它的衍生物、十二烷基硫酸钠及硬脂酰醇富马酸钠中选择一种润滑剂。润滑剂的重量通常在O. 5%-5%的范围内。将这种配方制成一种药片、胶囊或软凝胶，例如，通过将肝素结合细胞因子家族蛋白和至少一种糖醇混合，形成一种干的混合物，再用一种水性粘合剂对干的混合物进行湿法造粒，获得一种晶内相，然后进一步将晶内相制成配方的工序。药片或胶囊通常制成一个适量的单位剂量，例如，O. OOlmg-lOOOmg。或者，一种液体或半固体的口服药方，例如，可以将一种或多种肝素结合细胞因子家族蛋白制成硬胶囊或软胶囊。该配方可以含有一种第一载体成分和可选的第二载体成分，包括一种或多种大粒凝胶月桂酸甘油酯、大粒凝胶辛酰己酰甘油酯、大粒凝胶硬脂酰甘油酯、大粒凝胶亚油酸甘油酯、大粒凝胶油酸甘油酯、聚亚烷基二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、脂肪醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸、聚乙氧基脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、脂肪酯、月旨肪酸甘油酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚氧丙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇甘油酯、聚丙三醇甘油酸酯、山梨糖醇酯、聚乙氧基山梨醇酐酯、聚乙氧基胆固醇、聚乙 氧基蓖麻油、聚乙氧基固醇、卵磷脂、甘油、山梨酸、山梨醇或聚乙氧基植物油。该配方还可以包含一种乳化剂/增溶剂，含有一种或多种烷基硫酸盐、季胺类化合物、脂肪酸盐、磺基琥珀酸盐、牛磺酸类、氨基酸、聚乙二醇月桂酰甘油酯、聚乙二醇癸酰己酰甘油酯、聚乙二醇硬脂酰甘油酯、聚乙二醇亚油酰甘油酯、聚乙二醇油酰甘油酯、、聚亚烷基二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸、聚乙氧基脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇甘油酯、聚丙三醇甘油酸酯、山梨糖醇酯、聚乙氧基山梨糖醇酯、聚乙氧基胆固醇、聚乙氧基蓖麻油、聚乙氧基固醇、卵磷脂、或聚乙氧基植物油。该配方还可以包含一种抗结晶/增溶的成分，如果含有这种成分，通常是一种或多种烷基硫酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇月桂酰甘油酯、聚乙二醇癸酰己酰甘油酯、聚乙二醇硬脂酰甘油酯、聚乙二醇亚油酰甘油酯、聚乙二醇油酰甘油酯、聚亚烷基二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、脂肪醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸、聚乙氧基脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、脂肪酯、脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇甘油酯、聚丙三醇脂肪酸酯、山梨糖醇酯、聚乙氧基山梨糖醇酯、聚乙氧基胆固醇、聚乙氧基蓖麻油、聚乙氧基固醇、卵磷脂、或聚乙氧基植物油。肝素结合细胞因子家族蛋白可以和疏水多聚物一起制成配方，最好是一种生物粘附多聚物，并且随意封装于或分散于整个微粒或纳米粒中。这种生物粘附多聚物可以通过将配方粘附于胃肠道壁而延长药物在胃肠的停留。合适的生物粘附多聚物包括聚乳酸、聚苯乙烯、聚(二羧基甲基丙烷-癸二酸酐)(20:80)(聚CCP:SA)、藻酸盐(新制备的);以及聚(反丁烯二酸酐-癸二酸酐)(20:80)(聚FA :SA)，A型(含有苏丹红染料)和B型(未染色的)。其它的高粘性多聚物包括P (FAiSA) (50 :50)和非水溶的聚丙烯酸酯和聚丙烯酰胺。较好的生物粘附多聚物通常是足够疏水而不溶于水的，但含有一个足够量的暴露表面的羧基基团促进粘附，例如非水溶性的聚丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸酯；羟基酸的多聚物，例如聚交酯和聚乙醇酸交酯；聚酐类；多正酯类；含有这些多聚物的混合物；以及含有单体和多聚物的共聚物。较好的生物多聚物是生物可蚀性高分子，分子质量在1000-15000kDa更好，最好在2000-5000Da。聚酐类特别合适，例如，聚己二酸酐(“p (AA)”)、聚反丁烯二酸酐、聚癸二酸酐、聚马来酸酐、聚苹果酸酐、聚邻苯二酸酐、聚异邻苯二酸酐、聚天冬氨酸酐、聚对苯二酸酐、聚邻苯二酸酐、聚羧基苯氧基丙烷酸酐及其与其它聚酐类以不同摩尔比形成的共聚物。也可以用疏水多聚物和生物粘附疏水多聚物的混合物。合适的疏水多聚物包括，例如，羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮及聚乙二醇。其它的粘膜粘附剂多聚物，包括二羟苯丙氨酸-马来酸酸酐共聚物、异邻苯二甲酸酐多聚物、二羟苯丙氨酸-异丁烯酸多聚物、二羟苯丙氨酸-纤维素多聚物以及二羟苯丙氨酸-丙烯酸多聚物。或者，用于口服的肝素结合细胞因子家族蛋白可以装入或呈分子状态分散在一种多聚物中，减小颗粒大小并提高溶解性。多聚物可以包含聚酯，例如聚乳酸(P (LA))、聚辛内酯、聚交酯-乙交酯(P (LGA))、聚羟基丁酸、聚苹果酸；聚酐类，例如，聚己二酸酐(P(ΑΑ))、聚反丁烯二酸-癸二酸酸酐(P (FA :SA))、聚癸二酸酸酐(P (SA));纤维素多聚体如乙基纤维素、醋酸纤维素、邻苯二酸乙酸纤维素，等等；丙烯酸及甲基丙烯酸多聚物如丙烯酸树脂RS100、RL100、E100P0、L100-55、L100、SlOO (由美国罗姆分类)或技术人员熟知的通常用于包装和制药的其它多聚物。合适的还有疏水多聚物如聚酰亚胺。能够提供一定的亲水性质的混合物或共聚物有利于改善原料的润湿能力。例如，大约5%-20%的单体可以是亲水的单体。亲水多聚物如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素(CMC)通常用于改善原料的润湿能力。
口服配方可以是“即释”配方，例如，在体外60分钟内释放至少85% (wt/wt)的肝素结合细胞因子家族蛋白。或者，配方可以是一种“控释”配方，它比即释配方释放药物更缓慢，即它在体外需要60分钟以上的时间释放至少85% (wt/wt)的药物。为了延长释放的时间，可以提高活性药物与多聚物的比例。相信提高的药物相对浓度具有增加多聚物基质中有效化合物域大小的作用，从而减慢药物的溶解。在一种多聚物基质含有确定类型的疏水多聚物的情况下，多聚物将作为一种粘膜粘附剂发挥作用，延长活性化合物在胃肠道中的保留时间。提高的药物溶解速度与多聚物基质的粘膜粘附剂性质的结合提高了活性成分的摄入并减少了该化合物在服用和断药状态下的差别。这里所述的成分还可以包含通常用于化妆品的组分，例如，润滑油、去垢剂、紫外线吸收材料、醇类、螯合剂、PH调节剂、防腐剂、增稠剂、色素、香水以及皮肤营养补充物。确切地说，该组分可以包含用于皮肤化妆品的活性成分，例如氧化锌微粒、三氧化钛、紫外线吸收材料(如Parsol MCX及Parsol 1789)、维他命(如抗坏血酸)、保湿剂(如透明质酸钠、凡士林、甘油和尿素)、荷尔蒙剂、皮肤增光剂(如曲酸、熊果苷、胎盘素和噜忻喏)、留醇类药物、产品的抑制剂或一种类似花生四烯酸代谢物和组胺(例如，吲哚美辛和布洛芬)这类的化学介质、抗炎药物(如受体拮抗剂)、抗雄激素药物、皮脂分泌抑制剂(如维A酸、蜂王浆提取物以及蜂王浆酸)、外部血管扩张器(如烟酸维生素E、前列地尔、盐酸异克舒令及盐酸苄唑啉)、具有外部血管扩张活性的二氧化碳、活血剂(例如米诺地尔、卡普氯胺、辣椒酊、维生素E变体、银杏萃取物及日本当药萃取物)、细胞兴奋剂(如十五酸甘油酯和烟碱酸酰胺)、抗菌剂(如日扁柏素、L-薄荷醇和异丙基甲基苯酚)、甘草酸和它的变体或盐类、神经酰胺和神经酰胺类似物。药的剂量单位和使用频率肝素结合细胞因子家族蛋白或药物的使用剂量和频率可以随情况而适当改变。一般而言，肝素结合细胞因子家族蛋白或含有肝素结合细胞因子家族蛋白的药物可以在任何频率下使用。通常在一段持续时间里将肝素结合细胞因子家族蛋白局部地反复涂抹于需要治疗的身体部分，例如眼睑、眉、皮肤或头皮。较好的给药方案通常包括定期地(例如每天一次、每周一次、每周两次或每周三次)用药治疗至少一个月，至少三个月会更好，最好是至少六个月。例如，肝素结合细胞因子家族蛋白或药物可以每周使用I次、2次、3次、4次、5次、6次或7次，相应的每天使用一次肝素结合细胞因子家族蛋白或药物涂抹。每天，肝素结合细胞因子家族蛋白或药物可以按每天敷用I次、2次、3次、4次或5次的方法使用。在一个实施例中，哺乳动物每天敷用肝素结合细胞因子家族蛋白或药物一次，每周3-5 次。通常情况下，含有肝素结合细胞因子家族蛋白的局部配方可以按O. OOl-IOOOyg/cm2/ 天、O. 005-500 μ g/cm2/ 天、O. 01—100 μ g/cm2/ 天、O. 05-50 μ g/cm2/ 天或 0· 1-10 μ g/cm2/天的量敷用。通常，根据肝素结合细胞因子家族蛋白和配方的情况，局部敷于头皮的剂量为每天大约O. Ing-IOOmg,每天大约Ing-IOmg会更好,最好是每天大约10ng-lmg。通常情况下，用于治疗眼睑的肝素结合细胞因子家族蛋白的每日用量可以是每个眼睑大约
O.1ng-100ng。肝素结合细胞因子家族蛋白可以作为活性成分单独使用，也可以和其它的活性成分一起使用。类似的，药物除了含有肝素结合细胞因子家族蛋白外还可以包含其它活性成 分。除了肝素结合细胞因子家族蛋白，这样的活性成分可以是但不局限于细胞兴奋剂、活血剂、抗雄性激素药物、皮脂分泌抑制剂、免疫抑制剂、抗组胺药、抗菌剂、病灶兴奋剂、润滑齐U、消炎剂或低分子抗细胞凋亡剂。确切的说，所述的其它活性成分可以是泛酸或它的变体、胎盘素、光敏剂、人参萃取物、生物素、一硝基愈创木酚、卡普氯胺或它的水合物、维他命E或它的变体、日本当药萃取物、辣椒酊、西法安生、烟酸或它的变体、雌二醇、乙炔雌二醇、兰迪奇酸、米诺地尔或它的类似物/变体、5 α -还原酶抑制剂、12-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯、草药(例如，黄精属根茎、钩藤属、水飞蓟属、指甲花及甘草属)、雌二醇苯甲酸酯、苯海拉明、间苯二酚、日扁柏素、I-薄荷醇、水杨酸、寥属根萃取物、竹节参根茎萃取物、泛酰醇、二硫化硒、盐酸吡哆醇、二吡啶硫酮锌、吡啶硫酮锌、硫磺、吡罗克酮乙醇胺、吡啶硫酮锌、硫磺、硬脂酰甘草次酸、甘草酸钾、尿囊素、二烃基一元胺变体、白苏子萃取物、茯苓菌核萃取物、甘草次酸、硝酸咪康唑、苯甲酸、水杨酸钠、植物留醇、葡萄酒酵母抽提物、6-[2-[ (5-漠基-2卩比唳)氛基]乙烯]-1-乙基一 2 一甲基卩比唳盒鹏化物(takanal)、乙块雌二醇、异丙基甲基苯酚、西法安生生物素、D-泛酰醇、芍药属萃取物、椴树属萃取物、槐树萃取物、苦参萃取物、姜(生姜)根萃取物、6-苄胺嘌呤、十五酸甘油酯、t-黄烷酮、甜八仙花属叶片萃取物、腺苷及泛酰乙醚。在一个实施例中，含有肝素结合细胞因子家族蛋白的配方和用于治疗相同症状的附加治疗物(例如，雌二醇和/或氧雄龙和/或米诺地尔和/或非那司提或一种阻碍睾酮转变成二氢睾酮的药物)相继或同时用药。这种附加的治疗药物是按照这种药物的标准治疗方法同时使用的。熟练的技工将体会到这样的组分可以加强病人的治疗效果，并且可能不仅仅是加强效果。或者，除此之外，含有一种肝素结合细胞因子家族蛋白的配方和可引起毛发脱落的细胞毒素或细胞生长抑制剂相继或同时使用，例如，在一个患者正接受化疗或放射性治疗或治疗HIV-I感染或AIDS的情况下。在这样的情况下，肝素结合细胞因子家族蛋白的效应中和了细胞毒素或细胞生长抑制剂引起的毛发脱落效应。细胞毒素或细胞生长抑制剂通常按照该药物的标准治疗方法使用。方便的是，肝素结合细胞因子家族蛋白和细胞毒素或细胞生长抑制剂是按照相同的方法用药的，例如通过注射。
使用对象本发明的成分适合于医治人类和其它哺乳动物，包括治疗宠物(如狗和猫)以及家畜(如马)、动物园的动物(如猫科动物、犬科动物、牛科动物、有蹄类动物和灵长目动物)或实验动物(如啮齿目动物、兔类动物和灵长目动物)。这种组分特别适合于治疗任何一种患有任何形式的脱发的哺乳动物，尤其是人类、灵长目动物、狗、猫或马。接受治疗的对象可能忍受着毛发稀少、毛发脱落或秃发的折磨，或者可能不受毛发稀少、毛发脱落或秃发的折磨(即不患有可检测到的疾病)，但有发展为毛发稀少、毛发脱落或秃发的倾向。肝素结合细胞因子家族蛋白或含有肝素结合细胞因子家族蛋白的药物，可以用于治疗由细胞毒素或细胞生长抑制剂引起的毛发稀少、毛发脱落或秃发。细胞毒素或细胞生长抑制剂可以是内生的，例如对压力做出反应时产生的，或者可以是外生的，例如化疗治疗癌症过程中使用的。
本发明特别适合于治疗和预防正接受这里所述的细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗或处方中已经包含这种治疗的患者所出现的脱发。正如本文所举的实施例，治疗对象可以在接受细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗开始之前，或这种治疗开始之前或之后。本发明还允许肝素结合细胞因子家族蛋白的治疗开始于细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗开始之后。例如，患者可以在化疗(例如，亚德里亚霉素、环磷酰胺及特素，或5-氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸及奥沙利钼)开始之前涂抹本文所述的成分，在每个眼睑皮肤和睫毛交界处的边缘涂一条细实线以及作为乳霜涂抹在头皮上，每天一次，治疗几周(例如，两周或三周)。患者可以在化疗期间及化疗结束后持续涂抹该成分。患者一般不会经历通常与化疗相关的全部毛发脱落，并且，当化疗结束后可以更快地恢复。化疗结束后几周，患者可以停止使用这种成分。如果在这个时期毛发脱落，可以重新开始治疗。接下来将参照实施例对本发明进行详细说明，但并不局限于实施例中的说明。实施例I用于生产重组肝素结合细胞因子家族蛋白的方法。将含有人类MK开放阅读框(核苷酸位置1-432 ；SEQ ID NO 4)的cDNA片段插入酵母表达载体pPIC9 (Invitrogen)中。将重组质粒转入酵母(Pichia pastoris GS115 ；Research Corporation Technologies)中，然后用组氨酸和G418筛选阳性克隆。采用下列柱层析法按照下面的步骤纯化酵母分泌至培养基中的人类MK蛋白I. SP Steamlines (Pharmacia (法玛西亚公司);用20mM pH 5· 5的醋酸盐缓冲液吸附和清洗，用20mM pH3. 5含有NaCl的醋酸盐缓冲液洗脱)；2. Sulfated Cellulofine (纤维素硫酸酯)(日本 Seikagaku Kogyo 公司；用 IOmMPH 7. 2的磷酸盐缓冲液吸附，然后用含有O. 7M NaCl的缓冲液清洗，最后用含有2. OM NaCl的缓冲液洗脱);3. Superdex 75pg (Pharmacia (法玛西亚公司)；用盐溶液进行凝胶过滤)；4. Poly Sulfoethyl A (多聚磺基乙基 A) (Poly LC 公司；用含有 O. 6M NaCl 的20mM缓冲液吸附，然后用含有O. 88MNaCl的缓冲液清洗，最后用含有2MNaCl的缓冲液洗脱)；以及
5. Superdex 75pg (法玛西亚公司；用盐溶液进行凝胶过滤)。用盐溶液对肝素结合细胞因子进行透析。以MK促进初期神经元细胞存活的活性指标检测纯化后的MK蛋白的活性。实施例2外敷肝素结合细胞因子(MK)和多效生长因子(PTN)的毛发生长效应。准备好浓度为I μ g/ml的溶于40%甘油/磷酸缓冲液(PBS)( ν/ν)中的MK或ΡΤΝ。每周三次将10 μ I的MK或PTN溶液直接涂抹于老年Black 6小鼠的脱发区域(I. 5岁，MK杂合敲除(+/-))。用药后对MK和PTN是否分别具有毛发生长效应观察了 25天。图I显示了观察结果。正如对图I及其简要说明的清楚理解，MK或PTN的使用促进了老年小鼠脱发区域的毛发生长。在这个实验中，MK和PTN的使用在第15天停止，因为MK和PTN的毛发生长效应在第15天就已经得到证实。从第15天至第25天，即使MK和PTN停止使用，毛发的数量也在增加(图I)。由此表明MK和PTN的毛发生长效应在停药后可以持续一段时间。 实施例3皮下注射MK和PTN的毛发生长效应。准备好溶于PBS的I μ g/ml的MK或PTN。对老年Black 6小鼠(I. 5岁，MK纯合敲除(-/_))皮下注射50 μ I的MK或PTN溶液。在这些情况下，皮下注射MK和PTN对这种动物模型在第15天没有表现出毛发生长效应(图2)。在第15天将皮下注射换成与实施例2 一样的MK或PTN外敷后，在第25天观察到MK或PTN的毛发生长效应(图2)。实施例4静脉注射MK的毛发生长效应。准备好溶于PBS的I μ g/ml的MK。对老年Black 6小鼠(I. 5岁，MK纯合敲除(-/-))静脉注射100 μ I的MK溶液。在这些条件下，静脉注射MK对这种动物模型没有表现出毛发生长效应(数据没有显示)。实施例5外敷MK和PTN的毛发生长效应。准备好溶于10%甘油/PBS (ν/ν)的2 μ g/ml的MK或PTN。每周5次将100 μ I的MK或PTN溶液直接涂抹于老年Black 6小鼠的脱发区域(I. 5岁，MK杂合敲除(+/-))。敷药开始后对MK和PTN是否分别具有毛发生长效应观察了 35天。图3和图4显示了观察结果。用米诺地尔(例如，l%w/v ；RiUPS, Taisho Pharmaceutical Co. , Ltd.)作为阳性对照(图 5)。正如对图3和图4及其简要说明的清楚理解，在这些情况下，在老年小鼠的脱发区域外敷MK和PTN都表现出毛发生长效应。实施例6外敷MK和PTN的毛发生长效应与米诺地尔的效应不同。准备好溶于10% 甘油 /PBS(v/v)的 2 μ g/ml 的 MK 或 PTN。将 100 μ I 的 MK 或 PTN溶液直接涂抹于C3H/HeJ小鼠(雄性，9周大)的剃毛区域。10%甘油/PBS (ν/ν)和米诺地尔(如.,l%w/v; RiUP , Taisho Pharmaceutical Co. , Ltd.)分别作为阴性和阳性对照(图6和图7)。敷药开始后对MK和PTN是否分别表现出在毛发生长初期促进毛发生长观察了21天。图8和图9显示了观察结果。涂抹米诺地尔(RiUP )后表现出促进毛发生长(图7)。相比之下，MK和PTN没有表现出这样的促进作用(图8和图9)。现有的数据表明，在仅同步于毛发生长初期而并不表现出脱发特征的动物中，MK与米诺地尔具有一种不同的作用模式。实施例7外敷MK在急剧脱发中的效应动物伦理学所有的程序经过澳大利亚墨尔本市皇家墨尔本理工大学(RMIT)动物实验和伦理委员会批准(AEEC项目号1042)。动物
在本研究中总共用了 35只小鼠。无菌雌性C57B1/6J小鼠从澳大利亚西澳洲坎宁谷动物资源中心获得。动物被安置在RDDT动物设备(201. 01)中具有合格的清洁的常规的动物住所条件的一个单独的房间中，保持目标值为22±2° C的温度以及30-70%的相对湿度，12小时的光照黑暗周期。给动物喂养经过放射性照射灭菌的大鼠和小鼠的鼠食(澳大利亚西澳洲格伦福里斯特特制饲料)，对其适应性喂养城镇水。每周至少两次补充新鲜水。定期测试饲料、垫草和水，鉴定出可能影响研究结果的任何污染物。动物们被随机分成实验组，在每个笼子中群居2-3天后接受至少两天隔离期的调查。通过在动物肩胛骨之间皮下注射微晶片发射机应答器来识别小鼠。对每个笼子中的小鼠的次级鉴别可以在尾巴上做持久的标记。如果去毛的小鼠皮肤被笼中伙伴过度理毛，这些小鼠在治疗开始之前将被单独安置。当治疗开始时，小鼠有5周至7周大，其重量在不高于平均体重20%的范围内不
坐寸ο急剧脱发的诱导按照Paus et al. , Am. J. Pathol. 144，719-734 (1994)所述步骤诱导急剧脱发，即通过对C57BL/6小鼠进行一次环磷酰胺的腹腔注射来诱导。研究中包括35只雌性C57B1/6小鼠，将其分为7个实验组，每组5只，如下表所示
环磷酰胺肝素结合细胞因子处理动物
实验组 -
mg/kg 研究天数P g/mL 研究天数数量
1O9O2-295
2509O2-2953509102-295
45091010-295
51509O2-295
61509102-295
715091010-295采用以下治疗方案研究第I天通过腹腔注射克他命(50mg/kg)、甲苯噻嗪(5mg/kg)和乙酰丙嗪(0.8mg/kg)的混合物麻醉小鼠。通过电动剪刀剃去小鼠背部大约2x 4cm受试面积的毛发。用温水将皮肤冲洗干净并拍干。剩下的软毛用商品化的毛发脱落剂蜡条除去。研究第2-9天通过对受试区域的皮肤涂抹O. 5ml溶液的方法，对实验组1、2、3、
5、6的小鼠使用终浓度为每天每只小鼠5μ g的肝素结合细胞因子或对照用磷酸盐缓冲液(PBS)0通过对受试区域的皮肤涂抹O. 5ml溶液的方法，对实验组4和7使用对照用磷酸缓冲盐溶液(PBS)。研究第9天对所有的实验组通过腹腔注射10mL/kg剂量的赋形剂(水)或环磷酰胺进行处理。研究第10-29天通过对受试区域的皮肤涂抹O. 5ml溶液的方法，对实验组4和7的小鼠施加终浓度为每天每只小鼠5μ g的肝素结合细胞因子。通过对受试区域的皮肤涂抹O. 5ml溶液的方法，对实验组1、2、3、5和6的小鼠施加终浓度为每天每只小鼠5 μ g的肝 素结合细胞因子或对照用磷酸盐缓冲液(PBS)。实验组1、2、3、5和6中在第2-9天接受对照溶液的小鼠在第10-29天仍然接受对照溶液。实验组1、2、3、5和6中在第2_9天接受肝素结合细胞因子的小鼠在第10-29天仍然接受肝素结合细胞因子。研究第30天将小鼠暴露在二氧化碳浓度升高的环境中处死。收集目标区域皮肤的一部分，将其保存在10%中性福尔马林缓冲液中，用于宏观和微观检查。从研究第I天至第29天每天监视小鼠毒性临床症状。这些观察将包括对以下任何变化的评估皮肤和软毛(粗糙、立毛、缺乏梳理、毛发脱落)；眼睛和粘膜 出物、混浊度、眼睛周围的伤)；呼吸的、循环的、自主或中枢神经系统功能；体运动活力和行为方式(检查反常姿势、步态及任何反常的活动)；任何震颤、抽搐、分泌唾液、腹泻、无精打采、过度的睡眠或昏迷。皮肤/软毛观察从研究第9-29天起，小鼠每天表现出脱发症状(软毛脱落)及皮肤色素沉着的变化。软毛脱落的程度由脱发(软毛脱落)的目标区域的百分率决定，而皮肤色素沉着用黑色、灰色或粉红色记录。实验组出现脱发和皮肤色素沉着变化的发生率由运行于Windows环境下的GraphPad Prism 5. O软件(GraphPad软件,美国加利福尼亚圣迭哥)通过对对照组和测试组的单向方差分析决定。软毛脱落/再生的程度也通过每周两次的照片存档。为了便于摄影过程，用克他命(50mg/kg)、甲苯噻嗪(5mg/kg)、乙酰丙嗪(O. 8mg/kg)麻醉剂使小鼠镇静。末期测量收集每个动物目标区域的皮肤样品，将其保存在10%中性福尔马林缓冲液中，用于组织病理学评估。图11中的数据表明在环磷酰胺处理之前和(或)紧接着环磷酰胺处理之后肝素结合细胞因子蛋白减少了环磷酰胺诱导的软毛脱落，并且肝素结合细胞因子蛋白提高了由环磷酰胺处理中断后的皮毛生长所决定的毛囊恢复比率。图12中的数据表明用PBS处理的小鼠表现出广泛的软毛脱落及灰色或粉色的皮肤颜色，尤其是在它们的颈部，与大部分毛囊处于毛发生长中期(灰色)或毛发生长终期(粉红色)相一致。与PBS处理的小鼠相比，在CYP处理之前和之后用肝素结合细胞因子蛋白处理的小鼠(MK2-29)表现出减少的软毛脱落面积，并且皮肤颜色呈均一的黑色或深灰色，与大部分毛囊处于毛发生长初期(黑色)及较小比例的毛囊处于毛发生长中期相一致。在这个实验组中几乎没有明显的粉红色皮肤，表明处于毛发生长终期的毛囊所占比例有一个很大程度的减小。类似的，与PBS处理的小鼠相t匕，仅在紧接着CYP处理后用肝素结合细胞因子蛋白处理的小鼠(MK10-29)表现出减少的 软毛脱落面积，并且宏观上与化疗之前或之后接受肝素结合细胞因子蛋白的动物相似。仅在化疗后接受肝素结合细胞因子蛋白的小鼠的皮肤颜色呈均一的深灰色，与大部分毛囊处于毛发生长初期或中期相一致。
权利要求
1.含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白及局部载体的局部配方，所述局部载体为赋形剂或润滑剂，所述局部配方能有效治疗或预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。
2.权利要求I中的局部配方，其中所述配方用于对易脱发或有脱发危险的对象的真皮或皮肤给药。
3.权利要求I中的局部配方，其中所述配方用于对毛发脱落对象的真皮或皮肤给药。
4.根据权利要求I中的局部配方，所述局部配方用于治疗或预防脱发。
5.根据权利要求4中的局部配方，所述脱发是一种急剧形式的脱发。
6.根据权利要求4中的局部配方，所述配方用于治疗或预防接受细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗或处方中已经含有一种细胞毒素或细胞生长抑制剂疗法的对象的脱发。
7.根据权利要求4中的局部配方，所述脱发是男性型脱发。
8.根据权利要求1-7中任一所述的局部配方，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子、多效生长因子、肝素结合细胞因子类似蛋白或截短的肝素结合细胞因子蛋白。
9.根据权利要求1-7中任一所述的局部配方，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是多效生长因子。
10.根据权利要求1-7中任一所述的局部配方，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子。
11.肝素结合细胞因子家族蛋白在制备治疗或预防人类或其它哺乳动物受试者脱发的药物的应用。
12.根据权利要求11中的应用，所述药物是一种局部敷用的配方。
13.根据权利要求11或12中的应用，所述脱发是一种急剧形式的脱发。
14.根据权利要求13中的应用，所述急剧脱发通过细胞毒素或细胞生长抑制剂的处理来诱导。
15.根据权利要求11中的应用，所述人类或哺乳动物受试者是接受细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗或处方中已经含有细胞毒素或细胞生长抑制剂疗法的受试者。
16.根据权利要求11-15中任一所述的应用，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子、多效生长因子、肝素结合细胞因子类似蛋白或截短的肝素结合细胞因子蛋白。
17.根据权利要求11-15中任一所述的应用，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是多效生长因子。
18.根据权利要求11-15中任一所述的应用，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子。
19.一种治疗或预防毛发脱落的方法，所述方法包括对有需要的受试者使用含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白和局部载体的局部配方，所述局部载体为赋形剂或润滑齐U，所述局部配方能有效预防受试者毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长。
20.根据权利要求19中的方法，所述配方是一种局部配方，所述方法包括在对象毛发已经脱落的皮肤感染区域或毛发可能脱落的皮肤区域使用该局部配方。
21.根据权利要求19中的方法，所述方法包括在能够减少其毛发脱落和/或引起毛发生长的条件下对脱发一段时间的对象使用该配方。
22.根据权利要求19中的方法，所述方法包括在能够预防或减少其毛囊细胞凋亡的条件下对脱发一段时间的对象使用该配方。
23.根据权利要求19中的方法，所述方法包括在能够延长其毛囊毛发生长初期阶段的条件下对脱发一段时间的对象使用该配方。
24.根据权利要求19中的方法，所述方法包括在能够促进或推进其正常的毛发生长终期毛囊进入下一个毛发周期的条件下对脱发一段时间的对象使用该配方。
25.根据权利要求19中的方法，所述方法包括对脱发对象使用该配方。
26.根据权利要求13中的方法，所述方法包括对易发展成脱发的受试者使用该配方。
27.根据权利要求25或26中的方法，所述脱发是脱发的一种急剧形式。
28.根据权利要求27中的方法，所述方法包括对接受细胞毒素或细胞生长抑制剂治疗或处方中已经含有细胞毒素或细胞生长抑制剂的对象使用该配方。
29.根据权利要求25或26中的方法，所述脱发是男性型脱发。
30.根据权利要求19-29中任一所述的方法，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子、多效生长因子、肝素结合细胞因子类似蛋白或截短的肝素结合细胞因子蛋白。
31.根据权利要求19-29中任一所述的方法，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是多效生长因子。
32.根据权利要求19-29中任何任一所述的方法，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子。
33.一种促进或增强毛发脱落对象的毛发生长或生发的方法，所述方法包括对对象使用能有效预防个体毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长的含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白和局部载体的局部配方，局部载体为赋形剂或润滑剂。
34.根据权利要求33中的方法，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子或多效生长因子。
35.一种使接受化疗或处方中已经含有化学疗法的对象毛发脱落减少的方法，所述方法包括在能够预防或减少化疗引起的毛发脱落的条件下，对对象使用含有一定量的肝素结合细胞因子家族蛋白和载体的配方一段时间，所述载体为赋形剂或润滑剂。
36.根据权利要求35中的方法，所述方法包括对经过化学疗法治疗的对象局部使用所述配方。
37.根据权利要求35中的方法，所述方法包括对化疗开始之前处方中已经含有化学疗法的对象局部地使用所述配方。
38.根据权利要求35中的方法，所述方法包括对化疗开始之前处方中已经含有化学疗法及化疗开始之后的对象局部地使用所述配方。
39.根据权利要求35-38中任一所述的方法，所述肝素结合细胞因子家族蛋白是肝素结合细胞因子。
40.一种鉴定或筛选预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生长的化合物的方法，其中所述方法包括对小鼠使用被测化合物；所述小鼠年龄大于一年且患有毛发脱落，并且其体内编码一种肝素结合细胞因子蛋白的基因的等位基因及该基因的另一个功能等位基因被敲除；然后测定小鼠身上的毛发生长和/或减少的毛发脱落，其中，与没有该测试化合物相比，在测试化合物存在时小鼠身上的毛发脱落减少和/或毛发生长增加和/或毛发开始生长表明该被测化合物能预防毛发脱落和/或促进毛发生长和/或增强毛发生 长。
全文摘要
本发明涉及肝素结合细胞因子家族蛋白在促进哺乳动物毛发生长，或在制备促进哺乳动物毛发生长，尤其是治疗或预防不同形式脱发的药物中的应用。
文档编号A61K38/18GK102791284SQ201180011114
公开日2012年11月21日 申请日期2011年2月23日 优先权日2010年2月24日
发明者佐久间贞利, 玛丽亚·哈拉斯, 达伦·琼斯 申请人:艾德宛金国际私人有限公司