专利名称：续断化学成分的新用途的制作方法
技术领域：
本发明属中药技术领域，涉及中药化学成分的新医药用途特别是用于骨病预防和/或治疗的用途。
背景技术：
骨骼是构成人体的重要组成部分，骨病是困扰人类健康的重大疾病之一。骨损伤和骨质疏松症是两类重要的骨病，其中的骨损伤包括骨折和骨裂，并且其治疗主要是以通过促进骨损伤愈合的方式来进行。骨质疏松症(osreoporosis, 0P)是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征、致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的ー种全身性骨骼疾病，多发于老年人和绝经期妇女。随着人均寿命不断延长，世界老年人口増加，骨质疏松症的发病率随之出现了明显增长的趋势。目前，世界卫生组织WTO已把骨质疏松症列为仅次于心血管疾病的第二大公众健康问题。骨质疏松症己经引起世界各国的极大关注，如何预防和治疗OP已经成为全球性的公共卫生问题。骨质疏松患者的三大症状包括1.临床表现以疼痛最为常见，多为腰背酸疼，其次为肩背、颈部或腕踝部，可因坐位、立位、卧位或翻身时疼痛，时好时坏；2.骨骼变形，脊柱骨变形，弯腰、驼背、身材变矮；3.骨折，常见骨折部位是脊椎骨(压缩性、楔型)、腕部(桡骨头)和髋骨(股骨颈)。骨损伤中常见的骨折是骨质疏松症的一种并发症，股骨颈骨折10-20%在住院的第一年死亡，余下一半生活不能自理。诊断主要依靠双能X线骨密度测量仪，中晩期可依靠X线片诊断。目前临床预防依靠晒太阳、运动、补钙。治疗用维生素D、ニ磷酸盐、降钙素、雌激素等。有报道骨碎补、肉苁蓉等补肾中药，有促进骨愈合的作用。骨质疏松症的治疗方法包括药物疗法、营养疗法、手术疗法等，其中，药物疗法为主要手段。随着对其病因、发病机制研究的深入和分子生物学技术的发展，骨质疏松症的治疗药物研究有了很大进展。由于目前临床上应用的化学合成药物，绝大多数存在一定的副作用，利用天然中草药及其制剂治疗骨质疏松症已成为当今研究的热点。成骨能力下降是骨质疏松症的主要病理基础之一，提高成骨细胞功能及促进骨形成对治疗骨质疏松症有直接意义，因此研究药物对成骨细胞的作用成为阐明药物治疗骨质疏松症作用机制的重要内容。目前，评定促进成骨细胞功能药物的主要药效指标有成骨细胞增埴率评定，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性检测等,例如使用MC3T3-E1成骨细胞以考察成骨细胞増殖和ALP活性是评价药物治疗骨病例如骨质疏松症和其它形式的骨损伤例如骨折、骨裂的典型模型。另外，现已证实，骨形态发生蛋白-2 (bonemorphogenetic protein-2, BMP-2)是重要的骨形成调节因子,能够促进新骨形成,在成骨细胞分化过程中起关键作用，有可能成为骨质疏松症防治药物的重要靶点。目前，在细胞水平上观察中药对成骨细胞功能的调节作用，已经成为探讨其对骨质疏松症药理作用机制的新手段之一，中药成分也已成为研究防治骨质疏松症药物的热点。从既有中药中寻找并发现新的骨质疏松症治疗药物对于中药的深度开发和有保护中药资源的ー个重要手段。续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C. Y. cheng et T. M. Ai的干燥根，《神农本草经》将其列为上品，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、行血脉、止崩漏、安胎等功效，为补肝肾疗骨伤之要药，临床多用于治疗肝肾不足所致腰膝酸痛、足软无カ及跌打损伤、骨折等证。研究证实续断提取物具有抑制子宫自发收缩活性、提高免疫能力、抗衰老、抗菌消炎等药理活性。续断具有复杂和多祥的化学成分，包括皂苷类、环烯醚萜类、生物碱类、挥发油类等。近年对续断的化学成分进行了系统研究，发现皂苷类和环烯醚萜类是续断中的两大主要成分。本领域仍然需要有新的预防和/或治疗骨病的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的预防和/或治疗骨病的方法。本发明进一歩的目的是基于上述目的而提供某些化学成分例如得自续断的化学成分或续断提取物用于预防和/或治疗骨病的新用途，本发明再进ー步的目的是基于上述目的而提供用于预防和/或 治疗骨病的包含续断化学成分或续断提取物的药物组合物。本发明第一方面提供了续断化学成分在制备用于预防和/或治疗骨病的药物中的用途。根据本发明第一方面的用途，其中所述续断化学成分是选自下列的ー种或多种葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-0 -D-卩比喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A。根据本发明第一方面的用途，其中所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤。在ー个实施方案中，其中所述的骨损伤选自骨折、骨裂。在一个实施方案中，其中所述预防和/或治疗骨损伤包括促进骨损伤愈合。相应地，本发明第二方面提供了选自下列的ー种或多种的化合物在制备用于预防和/或治疗骨病的药物中的用途葳岩仙皂苷A、3-0_a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0-D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A0根据本发明第二方面的用途，其中所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤。在ー个实施方案中，其中所述的骨损伤选自骨折、骨裂。在一个实施方案中，其中所述预防和/或治疗骨损伤包括促进骨损伤愈合。进ー步地，本发明第三方面提供了ー种续断提取物，其包含至少ー种选自下列的化合物葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-0 -D-卩比喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含葳岩仙皂苷A、3-0_a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素音、和 triplostoside A。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含葳岩仙皂苷A。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷。
根据本发明第三方面的续断提取物，其包含马钱子苷。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含裂马钱素苷。根据本发明第三方面的续断提取物,其包含triplostoside A。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含葳岩仙皂苷A，和至少ー种选自下列的化合物3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、和f 10000重量份的3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、和f 10000重量份的马钱子苷。 根据本发明第三方面的续断提取物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、和f 10000重量份的裂马钱素苷。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、和I 10000 重量份的 triplostoside A。根据本发明第三方面的续断提取物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、f 10000重量份的3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、广10000重量份的马钱子苷、f 10000重量份的裂马钱素苷、和f 10000重量份的 triplostoside A0根据本发明第三方面的续断提取物，其中葳岩仙皂苷A、3-0_a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A(如果它们存在的话)的总重量占该提取物重量的5%以上。由于这几个化合物是可以単独发挥生物学效果的，因此以上各化合的总重量可以达到占该提取物重量的100%，此时例如可以是单独葳岩仙皂苷A或其它化合物的纯品。然而作为ー种植物提取物，上述5种化合物的总重量优选占该提取物重量的5 95%，优选10、5%，优选20、0%，优选30 90%，优选40 90%，优选50 90%。上述优选一方面表明期待在此范围内产生更好的生物学效果，或者在一方面表明期待具有更好的制药效益/成本比。根据本发明第三方面的续断提取物，其可用于预防和/或治疗骨病。在一个实施方案中，所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤。在一个实施方案中，其中所述的骨损伤选自骨折、骨裂。在一个实施方案中，其中所述预防和/或治疗骨损伤包括促进骨损伤愈合。根据本发明第三方面的续断提取物，其基本上是通过包括以下步骤的方法制备的⑴将药材续断用含水こ醇(例如50 90%こ醇，优选60 80%こ醇，更优选65 75%こ醇，再更优选70%こ醇)提取，回收こ醇得到浸膏为总提取物；再任选地，将该总提取物加适量水分散，再用こ酸こ酯萃取，得到こ酸こ酯部分；(ii)将步骤(i)所得浸膏加2-5倍量的水或者步骤(i)的こ酸こ酯部分用碱水溶液(例如氢氧化钠、氢氧化钾、或碳酸氢钠、碳酸钠，例如这些碱的用量为加至该水溶液的I 10%或1 5%)在50-80。C处理1-5小时(例如1-3小时)，加适量盐酸中和；(iii)浓缩，干燥，即得本发明的续断提取物；或者使上述中和液过大孔树脂(例如D101、D201或AB-8大孔树脂)用含水こ醇洗脱，浓缩，干燥，即得本发明的续断提取物。在上述方法的一个实施方案中，步骤(iii)用大孔树脂洗脱是用50%_80%こ醇洗脱。在上述方法的一个实施方案中，步骤(iii)用大孔树脂洗脱是依次用15 25%乙醇、45 55%こ醇、和75 85%こ醇洗脱[优选依次用20%こ醇、50%こ醇、80%こ醇洗脱]得到三个级分，其中7515%こ醇洗脱得到的级分经浓缩，干燥，即为本发明的续断提取物。本发明第四方面提供了一种药物组合物，其包含本发明第三方面任ー项所述续断提取物，以及药学可接受的载体。根据本发明第四方面的药物组合物，其可用于预防和/或治疗骨病。在一个实施方案中，所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤。在一个实施方案中，其中所述的骨损伤选自骨折、骨裂。在一个实施方案中，其中所述预防和/或治疗骨损伤包括促进骨损伤愈合。
本发明第五方面提供了本发明第三方面任一项所述续断提取物在制备用于预防和/或治疗骨病的药物中的用途。根据本发明第五方面的用途，其中所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤。在ー个实施方案中，其中所述的骨损伤选自骨折、骨裂。在一个实施方案中，其中所述预防和/或治疗骨损伤包括促进骨损伤愈合。本发明第六方面提供了ー种药物组合物，其包含至少ー种选自下列的化合物葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A，以及药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含葳岩仙皂苷A、3-0_a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A,和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含葳岩仙皂苷A，和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷，和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含马钱子苷，和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含裂马钱素苷，和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物,其包含triplostoside A,和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含葳岩仙皂苷A，至少ー种选自下列的化合物3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A,和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、f 10000重量份的3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷，和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、f 10000重量份的马钱子苷，和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、f 10000重量份的裂马钱素苷，和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、f 10000重量份的triplostoside A,和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、f 10000重量份的3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、广10000重量份的马钱子苷、f 10000重量份的裂马钱素苷、和f 10000重量份的triplostoside A,和任选的药学可接受的载体。根据本发明第六方面的药物组合物，其可用于预防和/或治疗骨病。在一个实施方案中，所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤。在一个实施方案中，其中所述的骨损伤选自 骨折、骨裂。在一个实施方案中，其中所述预防和/或治疗骨损伤包括促进骨损伤愈合。本发明第七方面提供了一种在有需要的哺乳动物(特别是人)中治疗和/或预防骨病的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗和/或预防有效量的续断化学成分，所述续断化学成分是选自下列的ー种或多种葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A0或者，本发明第七方面提供了一种在有需要的哺乳动物(特别是人)中治疗和/或预防骨病的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗和/或预防有效量的一种或多种选自下列的化合物葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-0 -D-卩比喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A。或者，本发明第七方面提供了一种在有需要的哺乳动物(特别是人)中治疗和/或预防骨病的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗和/或预防有效量的本发明第三方面任一项的续断提取物。或者，本发明第七方面提供了一种在有需要的哺乳动物(特别是人)中治疗和/或预防骨病的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗和/或预防有效量的本发明第四方面任一项的药物组合物。或者，本发明第七方面提供了一种在有需要的哺乳动物(特别是人)中治疗和/或预防骨病的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗和/或预防有效量的本发明第六方面任一项的药物组合物。根据本发明第七方面任一实施方案的方法，其中所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤。在一个实施方案中，其中所述的骨损伤选自骨折、骨裂。在一个实施方案中，其中所述预防和/或治疗骨损伤包括促进骨损伤愈合。此外，本发明第八方面还提供了制备本发明任一方面所述续断提取物的方法，其基本上包括以下步骤⑴将药材续断用含水こ醇(例如50 90%こ醇，优选60 80%こ醇，更优选65 75%こ醇，再更优选70%こ醇)提取，回收こ醇得到浸膏为总提取物；再任选地，将该总提取物加适量水分散，再用こ酸こ酯萃取，得到こ酸こ酯部分；(ii)将步骤⑴所得浸膏或者步骤⑴的こ酸こ酯部分用碱水溶液(例如氢氧化钠、氢氧化钾、或碳酸氢钠、碳酸钠，例如这些碱的用量为加至该水溶液的f 10%或f 5%)在50-80° C处理1-5小时(例如1-3小时)，加适量盐酸中和；(iii)浓缩，干燥，即得本发明的续断提取物；或者使上述中和液过大孔树脂(例如D101、D201或AB-8大孔树脂)用含水こ醇洗脱，浓缩，干燥，即得本发明的续断提取物。在本发明第八方面方法的一个实施方案中，步骤(iii)用大孔树脂洗脱是用50%-80%こ醇洗脱。在本发明第八方面方法的一个实施方案中，步骤(iii)用大孔树脂洗脱是依次用15 25%こ醇、45 55%こ醇、和75 85%こ醇洗脱[优选依次用20%こ醇、50%こ醇、80%こ醇洗脱]得到三个级分，其中7515%こ醇洗脱得到的级分经浓缩，干燥，即为本发明的续断提取物；本发明任一方面的任一实施方案所具有的特征同样适用于该方面的其它任ー实施方案，本发明任一方面或其任一实施方案所具有的特征同样适用于其它任一方面或该其 它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾；当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进ー步的描述。本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致吋，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。在本发明中，任一数值范围均包括该数值范围的任一子范围或该数值范围内的任一具体数值。例如在提及“包含100重量份的葳岩仙皂苷A、和f 10000重量份的裂马钱素苷”吋，所述广10000重量份包括该数值范围内的任一子集或任一具体数值，例如rioooo重量份包括但不限于广10000重量份、f 1000重量份、f 100重量份、f 10重量份、10 10000重量份、100 10000重量份、1000 10000重量份、5 5000重量份、10 2500重量份、10 2000重量份、1(T1000重量份、20 2000重量份、250 1000重量份、约I重量份、约10重量份、约25重量份、约50重量份、约100重量份、约250重量份、约500重量份、约1000重量份、约2000重量份、约5000重量份、约10000重量份，等等。在本发明任一方面的一个实施方案中，所述提取物或组合物中包含100重量份的葳岩仙皂苷AJP 1(T200重量份(例如10-100重量份)的3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0-D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-P-D-吡喃葡萄糖苷。在本发明任一方面的ー个实施方案中，所述提取物或组合物中包含100重量份的葳岩仙皂苷AjP 1(T200重量份(例如10-100重量份)的马钱子苷。在本发明任一方面的一个实施方案中，所述提取物或组合物中包含100重量份的葳岩仙皂苷AJP 1(T200重量份(例如10-100重量份)的裂马钱素苷。在本发明任一方面的一个实施方案中，所述提取物或组合物中包含100重量份的葳岩仙皂苷A、和1(T200重量份(例如10-100重量份)的triplostoside A。在本发明任一方面的一个实施方案中，所述提取物或组合物中包含100重量份的葳岩仙皂苷A、1(T200重量份(例如10-100重量份)的3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I— 6)-P-D-吡喃葡萄糖苷、1(T200重量份(例如10-100重量份)的马钱子苷、1(T200重量份(例如10-100重量份)的裂马钱素苷、1(T200重量份(例如10-100重量份)的 triplostoside A。本文中使用的术语“骨病”可以是任何骨病及其并发症，包括但不限于骨质疏松症、骨损伤，其中骨损伤包括但不限于骨折、骨裂，由此本发明预防和治疗骨病包括促进骨损伤愈合。
由于本发明已经用単体化合物发现了葳岩仙皂苷A、3-0_a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostosideA各自对于骨病治疗的有益效果，因此这些化合物各自可以是任何来源的，例如它们可以各自独立地是化学合成的(包括全合成或半合成)或者是通过从植物中提取得到的，例如从续断中提取得到，亦可以从其它植物中提取得到。本文中使用的术语“约”，例如在修饰制备产物的产率或者时含量时，其通常是指本领域允许的误差范围，例如土 10%，例如土5%，例如土2%。在本发明的任一方面，所述的化合物或提取物或组合物用于发挥治疗和/或预防骨病的目的吋，无论如何其是以治疗和/或预防有效量的剂量使用或配制的。例如对于本发明第四方面的药物组合物，其中的有效剂量可以根据本领域技术人员公知的医药情境作适当处理，例如对于单位剂量的药剂，对于每个单位剂量药剂中活性成分较少时，可以通过使用多个单位剂量药剂而得到期望的效果；又如在本发明第七方面提及的“有效量”，该有效量是这些化合物、提取物或组合物以足以产生期待效果的量提供给所述哺乳动物。在本发明的一个实施方案中，达到有效的治疗和/或预防的剂量，不论给予的是単一化学、多个化合组合、提取物或药物组合物，此剂量折算成续断药材，相当于药材0. 01-50g/kg体重/天，优选0. l-25g/kg体重/天，更优选0. l-10g/kg体重/天。在本发明的一个实施方案中，为达到有效的治疗和/或预防的剂量，当以任ー化学単体计时，它们可以各自独立地是 0. 001-100mg/kg 体重 / 天，优选 0. 01-100mg/kg 体重 / 天，或者优选 0. l-100mg/kg 体重/天,或者优选0. OOl-lOmg/kg体重/天，或者优选0. 001-lmg/kg体重/天，或者优选0. 01-10mg/kg体重/天，或者优选0. 1-lmg/kg体重/天，或者优选l-10mg/kg体重/天。此外，临床医生会根据诸多因素来确定具体的使用剂量，这些因素例如年龄、性別、一般健康状况、疾病的种类和严重程度等。无论如何，本领域技术人员根据本发明公开可以容易地确定具体情况下的使用剂量。本文中使用的术语“续断提取物”，是指由植物药材续断经提取而得到的提取物，其中至少包含葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - ^ -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A中的ー种。需要说明的是，该续断提取物中还可以包含续断中原本存在的其它物质，这些其它物质是本领域已知的。本领域技术人员已知，测定续断药材、续断提取物中的葳岩仙皂苷A、3-0_a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A任一成分的含量，以及测定葳岩仙阜苷A、3_0_a-L-卩比喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A任ー产品的纯度，这些測定方法是容易获得的，例如可以參考现有技术文献报道的方法或者适当作些调整。在本发明中，采用以下条件的HPLC法可以使上述5种化合物以及它们与提取物中存在的其它杂质有效分离达分离度2. O以上色谱柱Hypersil-C18色谱柱(250mmX4. 6mm, 5 μ m);流动相为乙睛/水的梯度条件乙睛10%(Omin)-10%(5min)-25%(12min)-55%(30min)-84%(31min)-86%(38min)-90%(45min)；流速1. OmLXmin-I ;检测波长212nm ;进样量10 μ L ;柱温30°C。此分析色谱法作适当修改可用于制备型色谱法。在本发明中，当需要定性或定量表征物质时，或者需要以制备型HPLC法进行单体化合物的制备时，如未另有说明，均是采用该HPLC方法。尽管本发明对所涉及的活性成分作了详细描述，本发明人仍然愿意在此强调，这些活性成分(其包括，但不限于，葳岩仙皂苷A、3-0_a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-i3_D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-β- -吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A)具有本领域技术人员已知的化学结构、物理化学性质。如本文所述的，术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。
如本文所述的，术语“药物组合物”，是指可用于在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病、病症、症状的物质，该“药物组合物”可以与“组合物”互换使用。如本文所述的，术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明组合物和提取物以治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病、病症、症状的动物，特别是哺乳动物，例如人、狗、猴、牛、马等。如本文所述的，术语“疾病或症状”是指所述受试者的一种身体状态，该身体状态与本发明所述疾病或症状有关。如本文所述的，“％”，如未特别指明，对于总物料是固体时一般是指重量/重量的百分比，对于总物料是液体时一般是指重量/体积的百分比。当然，对于总物料是液体并且溶质是液体时，表征该液态溶质的百分比一般是指体积/体积的百分比。本发明药物组合物中使用的“药学可接受的载体”可以是药物制剂领域中任何常规的载体。特定载体的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润齐U、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。本发明的药物组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂、注射乳剂(注射用无菌粉针)等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。本研究采用MC3T3-E1成骨细胞为模型，以成骨细胞的增殖分化活性为检测指标，观察续断单体化合物对成骨细胞功能的作用，通过本发明研究明确续断单体化合物对成骨细胞增殖分化的影响以及BMP-2通路与续断对成骨细胞分化作用之间的关系，为续断发挥促进骨形成继而防治骨病例如骨质疏松症和骨损伤的作用提供有效的依据。本发明人发现，从续断中提取得到的葳岩仙阜苷A(Cauloside A)和3_0-a_L-卩比喃阿拉伯糖_齐墩果酸-28-0- β -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷两个单体皂苷类化合物，以及从续断中提取得到的马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A三个单体环烯醚職类化合物，或者含有它们的一种或多种的续断提取物均具有显著的治疗和/或预防骨病的效果。
具体实施例方式通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。在下文中，为描述上的方便，各单体化合物可以以简称表示，其中葳岩仙皂苷A可以简称为化合物①、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸_28_0- β -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - β -D-吡 喃葡萄糖苷可以简称为化合物②、马钱子苷可以简称为化合物③、裂马钱素苷可以简称为化合物④、和triplostoside A可以简称为化合物⑤。A、提取物制备和含暈测定部分实施例I :续断提取物的制备和含暈测定制备方法步骤⑴取10千克续断药材(购自河北安国祁新中药颗粒饮片有限公司)粉碎成粗粉(不加筛网)，用10倍量70%乙醇提取，回收乙醇得到浸膏；步骤(ii):取步骤⑴所得浸膏配制的水溶液用氢氧化钠(加至水相量的2%)在60° C处理2小时，加适量盐酸中和；步骤(iii):使上述中和液过DlOl大孔树脂分离，50%乙醇洗脱，洗脱液干燥，即为本发明的续断提取物。经HPLC法测定，其中包含12. 6%化合物①、3. 6%化合物②、4. 2%化合物③、4. 3%化合物④、和3. 5%化合物⑤。实施例2 :续断提取物的制备和含量测定制备方法步骤(i):取I千克续断药材(购自河北安国祁新中药颗粒饮片有限公司)粉碎成粗粉(不加筛网)，用10倍量60%乙醇提取，回收乙醇得到浸膏；步骤(ii):取步骤⑴所得浸膏配制的水溶液用氢氧化钠(加至水相量的2%)在60° C处理2小时，加适量盐酸中和；步骤(iii):使上述中和液过DlOl大孔树脂分离，80%乙醇洗脱，洗脱液干燥，即为本发明的续断提取物。经HPLC法测定，其中包含9. 8%化合物①、3. 7%化合物②、2. 9%化合物③、3. 4%化合物④、和6. 1%化合物⑤。实施例3 :续断提取物的制备和含量测定制备方法步骤(i):取10千克续断药材(购自河北安国祁新中药颗粒饮片有限公司)粉碎成粗粉(不加筛网)，用10倍量80%乙醇提取，回收乙醇得到浸膏；步骤(ii):将该浸膏加适量水分散，再用乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯部分；步骤(iii):萃取乙酸乙酯部分用氢氧化钠水溶液(加至水相量的2%)在60° C处理2小时，加适量盐酸中和；步骤(iv):使上述中和液过DlOl大孔树脂分离，依次用20%乙醇、50%乙醇、80%乙醇洗脱，取80%乙醇洗脱级分，干燥，即为本发明的续断提取物。经HPLC法测定，其中包含17. 6%化合物①、6. 6%化合物②、9. 2%化合物③、14. 7%化合物④、和8. 3%化合物⑤。实施例4 :续断提取物的制备和含暈测定
制备方法基本上参考提取物例3，不同之处是步骤(i)用10倍量50%乙醇，步骤(iii)用氢氧化钾(加至水相量的1%)在50° C处理5小时，步骤(iv)用D201大孔树脂并依次用15%乙醇、55%乙醇、75%乙醇洗脱。75%乙醇洗脱级分经干燥，即得本发明续断提取物。经HPLC法测定，其中包含15. 4%化合物①、7. 2%化合物②、3. 1%化合物③、4. 7%化合物④、和7. 4%化合物⑤。实施例5 :续断提取物的制备和含暈测定制备方法基本上参考提取物例1，不同之处是步骤(i)用10倍量90%乙醇，步骤(iii)用碳酸氢钠(加至水相量的5%)在80° C处理2小时，步骤(iv)用AB-8大孔树脂并依次用25%乙醇、85%乙醇洗脱。85%乙醇洗脱级分经干燥，即得本发明提续断提取物。经HPLC法测定，其中包含16. 3%化合物①、5. 6%化合物②、7. 2%化合物③、11. 8%化合物④、和6. 9%化合物⑤。照实施例5的方法，适当改变提取条件。在一个实例中得到的提续断提取物包含16. 3%化合物①，并且化合物①、化合物②、化合物③、化合物④、化合物⑤的重量比为100 72. I :10.8 98. 4 :41. 2。在一个实例中得到的提续断提取物包含24. 5%化合物①，并且化合物①、化合物②、化合物③、化合物④、化合物⑤的重量比为100 12. I 96. 8 11. 4 :94. 2。在一个实例中得到的提续断提取物包含19. 6%化合物①，并且化合物①、化合物②、化合物③、化合物④、化合物⑤的重量比为100 94. 6 96. 8 11. 4 13. 6。B、单体化合物制备和表征部分实施例6 :单体化合物的制备取上文实施例I所得续断提取物，采用制备型HPLC法并参考上文测定提取物含量的HPLC法，分别制得化合物①、化合物②、化合物③、化合物④、和化合物⑤。五种化合物的纯度分别为 98. 8%, 99. 8%, 97. 3%, 97. 8%、和 99. 1%。实施例7 :单体化合物的表征各化合物的结构确证委托天津大学分析测试中心进行检测，结果如下化合物①，经鉴定为葳岩仙阜苷A(cauloside A),白色粉末(丙酮)，mp239-241°C，易溶于丙酮和甲醇，IH-NMR(吡啶 _d5) δ 5. 47 (1H, brs, H-12)，4. 99 (1H, d, J=8Hz, H-I' )，1.22、1.02、0.99、0.93、0.92、0.91(3H，s，6XCH3) ; 13C-NMR δ 38. 8 (C-I), 26.
I(C-2)，82. 0 (C-3)，43. 5 (C_4)，47. 6 (C_5)，18. 2 (C_6)，32. 9 (C_7)，39. 8 (C_8)，48. 2 (C_9)，37. 0 (C-IO)，23. 7 (C_l I)，122. 6 (C-12)，144. 9 (C-13)，42. 2 (C-13)，28. 3 (C-14)，28. 3 (C-15),23. 9 (C-16)，46. 7 (C-17)，42. O (C-18)，46. 5 (C-19)，30. 9 (C-20)，34. 2 (C-21)，33. 2 (C-22),64. 5 (C-23)，13. 6 (C-24)，16. I (C-25)，17. 5 (C-26)，26. 2 (C-27)，180. 3 (C-28)，33. 2 (C-29),23.6(030),106.6(01' ),73.1(02' ),74.7(03' ),69.6(04' ),66.9(05')。以
上理化数据及波谱数据与文献基本一致。结构如下式。
权利要求
1.ー种续断提取物，其包含至少ー种选自下列的化合物葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A。
2.根据权利要求I的续断提取物，其包含葳岩仙皂苷A，和至少ー种选自下列的化合物3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A。
3.根据权利要求I至2任一项的续断提取物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、I 10000重量份的3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、f 10000重量份的马钱子苷、f 10000重量份的裂马钱素苷、和 I 10000 重量份的 triplostoside A。
4.根据权利要求I至3任一项的续断提取物，其中葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A的总重量占该提取物重量的5%以上。在一个实施方案中，所述续断提取物如本发明第三方面任一实施方案所述。
5.ー种药物组合物，其包含权利要求I至4任一项所述续断提取物，以及药学可接受的载体。
6.权利要求I至4任一项所述续断提取物在制备用于预防和/或治疗骨病的药物中的用途；进ー步地，所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤。
7.—种药物组合物，其包含至少ー种选自下列的化合物葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A,以及药学可接受的载体。
8.根据权利要求7的药物组合物，其包含葳岩仙皂苷A，至少ー种选自下列的化合物3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A,和任选的药学可接受的载体。
9.根据权利要求7至8任一项的药物组合物，其包含100重量份的葳岩仙皂苷A、I 10000重量份的3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6) - P -D-吡喃葡萄糖苷、f 10000重量份的马钱子苷、f 10000重量份的裂马钱素苷、和1 10000重量份的triplostoside A,和任选的药学可接受的载体。在一个实施方案中，所述药物组合物如本发明第六方面任一实施方案所述。
10.制备续断提取物的方法，其包括以下步骤 (i)将药材续断用含水こ醇提取，回收こ醇得到浸膏为总提取物；再任选地，将该总提取物加适量水分散，再用こ酸こ酯萃取，得到こ酸こ酯部分； (ii)将步骤(i)所得浸膏或者步骤(i)的こ酸こ酯部分用碱水溶液在50-80°C处理1-5小时，加适量盐酸中和； (iii)浓缩，干燥，即得续断提取物；或者使上述中和液过大孔树脂用含水こ醇洗脱，浓缩，干燥，即得续断提取物。在一个实施方案中，所述续断提取物是本发明第三方面所述续断提取物。在一个实施方案中，制备续断提取物的方法如本发明第八方面任一实施方案所述。
11.选自下列的ー种或多种的化合物在制备用于预防和/或治疗骨病的药物中的用途葳岩仙皂苷A、3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖-(I — 6)-0 -D-卩比喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A ;进ー步地， 所述的骨病选自骨质疏松症、骨损伤；进ー步地，所述的骨损伤选自骨折、骨裂。
全文摘要
本发明涉及续断化学成分的新用途。具体涉及续断化学成分在制备用于预防和/或治疗骨病的药物中的用途，其中所述续断化学成分是选自下列的一种或多种葳岩仙皂苷A、3-O-a-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、马钱子苷、裂马钱素苷、和triplostoside A。本发明发现这些化学成分具有令人期待的生物学效果。
文档编号A61P19/08GK102861044SQ20121020968
公开日2013年1月9日 申请日期2012年6月25日 优先权日2011年6月30日
发明者高秀梅, 刘二伟, 王虹, 樊官伟, 刘志东, 张伯礼 申请人:天津中医药大学