疟疾的治疗和预防的制作方法
【专利摘要】本发明提供抗原、编码所述抗原的载体、和针对所述抗原的抗体及其他结合化合物及其在预防或治疗疟疾中的应用。具体地，提供这样的组合物，所述组合物包含与SEQ?ID?NO：1具有至少90％同一性的网织红细胞-结合蛋白同源物5(PfRH5)抗原或其片段；或者所述组合物包含表达与SEQ?ID?NO：2具有至少90％同一性的PfRH5抗原或其片段的病毒载体。
【专利说明】疟疾的治疗和预防
[0001]本发明涉及用于治疗或预防疟疾的抗原、抗体和疫苗。
[0002]血液阶段形式的疟原虫属(Plasmodium)寄生虫对红血细胞(RBCs)的感染是造成疟疾临床表现的原因。疟原虫属寄生虫的实例包括下述物种:恶性疟原虫(P.falciparum)，间日痕原虫(P.vivax),卵形痕原虫(P.0vale)和三日痕原虫(P.malariae)。特别感兴趣的寄生虫是恶性疟原虫，原因在于，由于其可以感染所有龄的RBCs并不局限于未成熟的RBCs，故正是这种寄生虫引起大部分的致死性感染。每年仅恶性疟原虫就引起大约一百万例死亡，主要是在儿童中引起死亡。
[0003]因此，开发疫苗是高度合乎需要的。
[0004]基于通过阻断恶性疟原虫在肝脏中的感染起作用的RTS，S蛋白的当前疫苗候选物仅取得了部分功效。因此，存在对于可以通过防护引起疾病的血液阶段的疟原虫属寄生虫而仿效天然免疫性的疫苗的需求。
[0005]之前的研究已经使用标准生长抑制活性(growth inhibitory activity, GIA)测定在体外研究了抗原诱导有效抵抗血液阶段疟疾寄生虫的抗体的能力。一种这样的抗原是顶膜抗原 I (apical membrane antigenl, PfAMAl) ?
[0006]关于参与血液阶段疟原虫属寄生虫侵入RBCs的其他蛋白家族的GIA测定研究已经发现其是无效的或不如PfAMAl有效。
[0007]因此，PfAMAl已经成为关于对抗血液阶段疟疾寄生虫的研究的主要焦点。然而，针对PfAMAl的抗体似乎仅在极高的浓度才有效。另外，PfAMAl诱导品系特异性的抗体，该品系特异性的抗体对疟原虫属寄生虫的遗传多样性品系没有效果(A.L.Goodman，
S.J.Draper, Ann.Trop .Med.Parasi to 1.104,189 (2010))。另外，除了在人受试者中诱导充分的抗体应答的抗原之外，疫苗开发还已经受到对可能的反应原性化学佐剂的需求的阻碍。
[0008]对于能够诱导甚至在较低的免疫球蛋白浓度下有效的抗体的抗原存在需求。对于能够诱导有效抗疟原虫属寄生虫的遗传多样性品系的抗体的抗原存在需求。对于在不需要可能的反应原性化学佐剂的条件下有效的抗原存在需求。
[0009]本发明通过提供抗原、编码所述抗原的载体、和特异性结合所述抗原的抗体(以及抗体样分子，包括适配体和肽)、及其(单独的或组合)在预防或治疗疟疾中的应用解决了上述需求中的一种或多种。
[0010]一方面，本发明提供网织红细胞-结合蛋白同源物5(PfRH5)抗原或其片段。在一个实施方案中，PfRH5抗原或其片段以疫苗制剂的形式存在。
[0011]术语抗原或其片段意指可以被免疫系统识别和/或刺激细胞介导的免疫应答和/或刺激抗体产生的任意基于肽的序列。
[0012]在另一方面，本发明提供表达PfRH5抗原或其片段的载体。在一个实施方案中,所述载体以疫苗制剂的形式存在。
[0013]网织红细胞结合同源物(PfRH)家族包括六个成员(PfRHl、PfRH2a、PfRH2b、PfRH3、PfRH4和PfRH5)，其每种成员参与疟原虫属寄生虫与RBCs的结合，可能的例外是PfRH3，其可能是不表达的假基因。PfRH家族已被鉴定为在裂殖子形式的疟原虫属寄生虫表面上的黏附素，其结合在红细胞表面上的受体并且因此允许处于其血液阶段的寄生虫侵入RBCs。PfRH5抗原具有大约63KDa的分子量。已经报道了大约45KDa和28KDa的体外切割的片段。
[0014]本发明的PfRH5抗原诱导在GIA测定中高度有效抗血液阶段的疟原虫属寄生虫的抗体。这是非常令人惊讶的，因为之前的研究仅表明PfRH5抗原诱导在GIA测定中无效或仅是有效性差(即，基本上不如用PfAMAl-诱导的抗体通常所观察到的那样有效)的抗体，除此之外，没有证明任何作用。
[0015]本发明的抗原令人惊讶地诱导比PfAMAl更有效地中和寄生虫并且在较低的免疫球蛋白浓度保持有效的抗体。另外，所述抗原诱导这样的抗体，已经令人惊讶地发现所述抗体有效抗疟原虫属寄生虫的遗传多样性品系，这在实现针对天然环境中传播的多种品系的疫苗功效方面可能是至关重要的。
[0016]这代表首个使用单一抗原抗疟原虫属寄生虫的高度有效的交叉-品系GIA的实例，并且因此代表在疟疾治疗和预防方面的主要突破。
[0017]因此，在一个实施方案中，PfRH5抗原或其片段提供针对由疟原虫属寄生虫引起的疾病的防护(诸如长期的防护)。
[0018]在一个实施方案中，PfRH5抗原或其片段提供针对疟原虫寄生虫感染的抗体应答(例如，中和抗体应答)。
[0019]本发明人还发现通过将PfHR5抗原与一种或多种其他恶性疟原虫抗原组合可以获得甚至更高的功效。涉及这些组合的GIA测定已经证明高于单种抗体的抑制总和的作用，即，协同作用。由于PfRH家族的其他成员在GIA测定中似乎不是特别有效的，因此这是令人惊讶的。
`[0020]因此，在另一方面，本发明提供网织红细胞-结合蛋白同源物5(PfRH5)抗原或其片段，以及选自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4组成的组的一个或多个抗原或其片段。特别优选的实施方案包括PfRH5抗原或其片段，连同PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4抗原或其片段中的一种或多种。在一个实施方案中，所述抗原或其片段以疫苗制剂的形式存在。
[0021]在一个相关方面，本发明提供表达PfRH5抗原或其片段、以及选自由PfAMAl、Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PFrH2b或PfRH4组成的组的一个或多个抗原或其片段的载体。在另一方面，本发明提供表达PfRH5抗原或其片段的载体，连同表达选自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PFrH2b或PfRH4组成的组的一个或多个抗原或其片段的另一种载体。特别优选的实施方案包括表达PfRH5抗原或其片段、连同PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4抗原或其片段中的一种或多种的一种载体或多种载体。在一个实施方案中，所述一种载体或多种载体以疫苗制剂的形式存在。
[0022]在本发明的一个实施方案中，所述载体是病毒载体。所述病毒载体可以是腺病毒(人血清型如AdHu5，猿血清型如AdCh63，或其他形式)或痘病毒载体(诸如改良型痘苗安卡拉株(modified vaccinia Ankara, MVA))。
[0023]病毒载体通常是不复制的或复制减弱的载体，这意指所述病毒载体不能在正常细胞(例如，正常的人细胞)中复制到任意显著的程度，如通过常规方式测量的-例如，通过测量DNA合成和/或病毒滴度测量。不复制或复制减弱的载体可以通过天然(即，其已经按原样从自然中分离)或是人工(例如，通过在体外培育或通过遗传操作)而变成这样的。通常存在至少一种细胞类型，其中所述复制减弱的病毒载体可以生长-例如，改良型痘苗安卡拉株(MVA)可以在CEF细胞中生长。
[0024]典型地,所述病毒载体不能在动物受试者中、典型地在哺乳动物受试者如人或其他灵长类动物中引起显著的感染。
[0025]在一个实施方案中,所述载体选自人或猿腺病毒载体或痘病毒载体。
[0026]在本发明的另一个实施方案中，所述载体是DNA载体，诸如基于质粒的DNA疫苗。在一个实施方案中，所述DNA载体能够在哺乳动物细胞表达系统中表达。
[0027]在一个实施方案中，所述PfRH5抗原由SEQ ID NO:1定义。备选地，所述抗原可以是该抗原的成熟形式，其中N端信号肽已被去除。例如，所述成熟形式可以包含SEQ ID NO:I的氨基酸残基26-526或由SEQ ID NO:1的氨基酸残基26-526组成。本发明包括其片段，其包含长度为170个或更多个连续的氨基酸残基或由长度为170个或更多个连续的氨基酸残基组成(例如，长度至少为 170，180，190，200，210，220，230，240，250，260，270，280，290，300，310，320，330，340，350，360，370，380，390，400，410，420，430，440，450，460，470，480，490，500，510或520个连续的氨基酸残基)。本发明的片段具有与PfRH5抗原共同抗原交叉反应性。在一个实施方案中，本发明的片段不包含来自N端信号肽的氨基酸。在一个实施方案中，本发明的片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸残基191-359。在一个实施方案中，本发明的片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸残基31-174。在一个实施方案中，本发明的片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸残基304-430。
[0028]所述抗原或其片段可以具有在SEQ ID NO:1的氨基酸残基38处和/或氨基酸残基214处的置换，其中氨基酸N被除N之外的氨基酸替换。在一个实施方案中，氨基酸残基38和氨基酸残基214均被Q替换。
[0029]上述抗原或其片段 包括表现出与SEQ ID NO:1有至少90 %、91 %、92 %、93 %、94%、95%、96%、97%、98%或 99% 的同一性的变体。
[0030]SEQ ID NO:1由526个氨基酸残基组成。SEQ ID NO:1的变体包括如上文列出的那些，并且可以另外或备选地包括具有一个或多个氨基酸置换、缺失或插入的氨基酸序列。可以特别考虑置换，也可以特别考虑N-和C-端缺失。置换包括保守置换。
[0031]因此，在一个实施方案中，SEQ ID NO:1的变体包括长度为至少一个连续氨基酸残基(例如，至少30、35、40、45或50个连续氨基酸残基)的N端缺失。
[0032]因此，在一个实施方案中，SEQ ID NO:1的变体包括长度为至少一个连续氨基酸残基(例如，至少5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个连续氨基酸残基)的C端缺失。
[0033]在一个实施方案中，所述载体表达由SEQ ID NO:2定义的PfRH5，包含来自牛组织纤维酶原激活物的分泌信号，或者可以包含指导抗原的亚细胞运输的另一种信号。备选地，所述抗原可以是该抗原的成熟形式，其中已经去除了 N端信号肽。例如，所述成熟形式可以包含SEQ ID NO:2的氨基酸残基34-534或由SEQ ID NO:2的氨基酸残基34-534组成。本发明包括其片段，所述片段包含下述或由下述组成:长度为170个或更多个连续氨基酸残基(例如，长度为至少 170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500,510或520个连续氨基酸残基)。本发明的片段具有与PfRH5抗原共同抗原交叉反应性。在一个实施方案中，本发明的片段不包含来自N端信号肽的氨基酸。
[0034]上述抗原或其片段包括表现出与SEQ ID NO:2具有至少90%、91 %、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99% 的同一性的变体。
[0035]SEQ ID NO:2由534个氨基酸残基组成。SEQ ID NO:2的变体包括如上文列出的那些，并且可以另外或备选地包括具有一个或多个氨基酸置换、缺失或插入的氨基酸序列。可以特别考虑置换，也可以特别考虑N-和C-端缺失。置换包括保守置换。
[0036]因此，在一个实施方案中，SEQ ID NO:2的变体包括长度为至少一个连续氨基酸残基(例如，至少35、40、45或50个连续氨基酸残基)的N端缺失。
[0037]因此，在一个实施方案中，SEQ ID NO:2的变体包括长度为至少一个连续氨基酸残基(例如，至少5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个连续氨基酸残基)的C端缺失。
[0038]用于确定氨基酸序列同一性的常规方法在本说明书下文中更详细地讨论。
[0039]如上文所述，PfRH5是疟原虫属寄生虫侵入RBCs机构的成分。与PfRH5特异性结合的化合物抑制这一过程并且防止侵入RBCs。
[0040]因此，本发明还提供针对网织红细胞-结合蛋白同源物5 (PfRH5)抗原或其片段的结合化合物。
[0041 ] 本发明还提供针对Pf RH5抗原或其片段的结合化合物，其与针对PFAMA1、Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4的任一种或其片段的结合化合物组合。特别优选的实施方案包括针对PfRH5抗原或其片段的结合化合物，其与针对PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4抗原或其片段中的一种或多种的结合化合物组合。
[0042]所述结合化合物可以是抗体，诸如单克隆抗体或多克隆抗体。所述结合化合物可以是单克隆或多克隆抗体的抗原结合片段、或特异性结合PrRH5的肽。所述抗体可以是Fab> F (ab，) 2、Fv、scFv、Fd 或 dAb。
[0043]在另一个实施方案中，所述结合化合物可以是寡核苷酸适配体。所述适配体可以结合PfRH5或其片段。所述适配体可以特异性结合PfRH5或其片段。
[0044]已经发现在GIA测定中，针对PfRH5的适配体抑制疟原虫属寄生虫生长。所述适配体可以通过已知的方法找至Ij (例如，在D.H.J.Bunka, P.G.Stockley, Nature ReviewsMicrobiology (自然微生物学综述)4, 588 (2006)中所述的方法)。所述适配体可以进行优化以使其适于治疗应用，例如，其可以缀合到单克隆抗体上以改变其药物代谢动力学(例如，半衰期和生物分布)和/或获得Fe-依赖性免疫功能。
[0045]本发明还提供在受试者中刺激或诱导免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用本发明的PfRH5抗原或其片段、或本发明的载体、或本发明的结合化合物(如上文所述)。
[0046]因此,在一个实施方案中，在受试者中刺激或诱导免疫应答的方法包括向受试者施用本发明的PfRH5抗原或其片段、或本发明的载体、或本发明的结合化合物(如上文所述)。
[0047]在治疗应用和方法的情形中，‘受试者’是将从针对疟原虫属寄生虫的免疫应答的刺激或诱导中受益的任何动物受试者。典型的动物受试者是哺乳动物，诸如灵长类动物，例如，人。[0048]在一个实施方案中，本发明提供用于治疗或预防疟疾的方法。
[0049]在一个实施方案中，本发明提供PfRH5抗原或其片段，其用于预防或治疗疟疾。
[0050]在相关方面中，本发明提供PfRH5抗原或其片段，和选自由PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4组成的组的一种或多种其他抗原或其片段；其用于预防或治疗疟疾。
[0051]在另一方面，本发明提供上述载体，其用于预防或治疗疟疾。
[0052]在另一方面，本发明提供上述结合化合物，其用于预防或治疗疟疾。
[0053]在另一方面，本发明提供本发明的抗原或其片段、载体、或结合化合物(如上文所述)单独或组合地用于预防或治疗疟疾的应用。
[0054]在相关方面，本发明提供本发明的抗原或其片段、载体或结合化合物(如上文所述)在制备用于预防或治疗疟疾的药物中的应用。
[0055]在一个实施方案中，所述用于治疗或预防疟疾的方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的PfRH5抗原或其片段、或结合化合物、或载体(如上文所述)。
[0056]当用于本文时，术语“治疗(“treatment”或“treating”)”包括治疗性或防止性/预防性措施，并且包括疟疾的感染后的治疗和减轻。
[0057]当用于本文时，术语“预防”包括防止疟疾的发生和/或减轻疟疾的严重性或强度。
[0058]本发明的PfRH5抗原或其片`段、或结合化合物、或载体(如上文所述)可以施用给已经具有疟疾、与疟疾相关的病症或症状的受试者(典型地是哺乳动物受试者，诸如人或其他灵长类动物)，从而治疗或预防疟疾。在一个实施方案中，怀疑受试者已经与疟原虫属寄生虫接触，或者已经具有与疟原虫属寄生虫的已知的接触，但是尚未显现出暴露的症状。
[0059]当施用给已经具有疟疾、或正显现出与疟原虫属寄生虫感染相关的症状的受试者时(例如，哺乳动物，如人或其他灵长类动物)，本发明的PfRH5抗原或其片段、或结合化合物、或载体(如上文所述)可以治愈、延缓、减轻严重性，或改善一种或多种症状，和/或延长受试者的存活期超过在不进行所述治疗时预测的存活期。
[0060]备选地，本发明的PfRH5抗原或其片段、或结合化合物、或载体(如上文所述)可以施用给最终可能感染疟原虫属寄生虫的受试者(例如，哺乳动物，如人或其他灵长类动物)，从而预防、治愈、延缓、减轻疟疾严重性或改善一种或多种疟疾症状，或者从而延长受试者的存活期超过不进行所述治疗时预测的存活期。
[0061]本发明的治疗和预防性治疗适用于多个不同年龄的不同受试者。在人的情形中，所述治疗适用于儿童(例如，婴儿、5岁以下的儿童、较大的儿童或十几岁的青少年)和成年人。在其他动物受试者(例如哺乳动物如灵长类动物)的情形中，所述治疗适用于未长成的受试者和长成的/成年的受试者。
[0062]本发明的PfRH5抗原或其片段、或载体(如上文所述)可以用作疫苗。
[0063]在一个方面，本发明提供包含本发明的PfRH5抗原或其片段的疫苗组合物。
[0064]在相关的方面，本发明提供包含PfRH5抗原或其片段、以及选自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4组成的组一种或多种其他抗原或其片段的疫苗组合物。特别优选的实施方案提供包含PfRH5抗原或其片段联合PfEBA 175、PfRH2a、PfRH2b或Pf RH4抗原或其片段中的一种或多种的疫苗组合物。
[0065]在另一方面，本发明提供包含表达PfRH5抗原或其片段的载体的疫苗组合物。[0066]在另一方面，本发明提供包含表达PfRH5抗原或其片段以及选自由PfAMAl、Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4组成的组一种或多种其他抗原或其片段的载体的疫苗组合物。备选地，本发明提供包含表达PfRH5抗原或其片段的载体连同表达选自由PfAMAl、Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4组成的组一种或多种其他抗原或其片段的载体的疫苗组合物。特别优选的实施方案提供包含表达PfRH5抗原或其片段联合Ρ--ΒΑ175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4抗原或其片段中的一种或多种的一种载体或多种载体。
[0067]当用在本文中时，“疫苗”是在施用给动物受试者如哺乳动物(例如，人或其他灵长类动物)时刺激针对疟原虫属寄生虫感染的保护性免疫应答的制剂。免疫应答可以是体液和/或细胞介导的免疫应答。例如，本发明的疫苗可以用于保护受试者免受恶性疟原虫感染(即，疟疾)的影响。
[0068]优选地，本发明的疫苗包含PfRH5抗原或其片段，其将导致至少30%、优选至少50%的针对血液阶段的疟原虫属寄生虫的GIA。优选地，所述疫苗将对多个遗传品系血液阶段的疟原虫属寄生虫产生这样的结果。
[0069]术语“疫苗”在本文中可以与术语“治疗性/预防性组合物”、“制剂”或“药物”互
换使用。
[0070]本发明的疫苗(如上文定义)，除了药用载体外，还可以与盐、赋形剂、稀释剂、佐齐U、免疫调节剂和/或抗微生物化合物中的一种或多种组合。
[0071]药用的盐包括与无机酸形成的酸加成盐或与有机酸形成的酸加成盐，所述无机酸诸如例如盐酸或磷酸，所述有机酸诸如乙酸、草酸、酒石酸、马来酸等。与游离羧基形成的盐也可以来源于无机碱，诸如例如，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，和来源于有机碱诸如异丙胺、三乙胺、2-乙基 氨基醇、组氨酸、普鲁卡因等。
[0072]免疫原性组合物、治疗性制剂、药物和预防性制剂(例如疫苗)的施用通常通过常规途径进行，例如，通过静脉内、皮下、腹膜内或黏膜途径进行。施用可以通过肠胃外注射进行，例如，通过皮下或肌内注射。包含中和抗体的制剂可以特别适用于静脉内、肌内、皮内或皮下施用。
[0073]因此，本发明的免疫原性组合物、治疗性制剂、药物和预防性制剂(例如，疫苗)典型地制备成作为液体溶液或混悬液的注射剂。备选地，可以制备适于在注射前制成在液体中的溶液或混悬液的固体形式。制剂还可以被乳化，或者是包封在脂质体或微胶囊中的肽。
[0074]活性免疫原性成分通常与赋形剂混合，所述赋形剂是药用的并且与所述活性成分相容。例如，适宜的赋形剂为水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等以及它们的组合。另外，如果需要，疫苗可以包含少量的辅助物质，如湿润剂或乳化剂、PH缓冲剂，和/或包含增强疫苗的效用的佐剂。
[0075]通常，所述载体是药用载体。药用载体的非限制性实例包括水、盐水和磷酸缓冲的盐水。然而，在一些实施方案中，所述组合物以冻干形式存在，在这种情形中，其可以包含稳定剂，如BSA。在一些实施方案中,用防腐剂如邻乙萊硫基苯酸钠(thiomersal)或叠氮化钠配制组合物以有利于长期存储可能是合乎需要的。
[0076]另外的可能有效的佐剂的实例包括但不限于:完全弗氏佐剂(CFA)，不完全弗氏佐剂(IVA)，皂苷，纯化的皂苷提取物级分如Quil A，皂苷的衍生物如QS-21，基于皂苷的液体颗粒如ISC0M/ISC0MATIX，大肠杆菌(E.coli)不耐热性毒素(LT)突变体如LTK63和/或LTK72，氢氧化铝，N-乙酰-胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr_MDP)，N-乙酰-正-胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺(CGP11637，称为正-MDP)，N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰-L-丙氨酸-2-(1' -2，-二棕榈酰-sn-甘油-3-羟基磷酸基氧基)-乙醇胺(CGP19835A，称为MTP-PE)，和RIBI，其包含在2%角鲨烯/吐温80乳液中的三种提取于细菌的成分，即，单磷酰脂A，海藻糖二霉菌酸酯和细胞壁骨架(MPL+TDM+CWS)。
[0077]缓冲剂的实例包括，但不限于，琥珀酸钠(pH6.5)和磷酸缓冲盐水(PBS ；pH6.5和
7.5)。
[0078]另外适用于其他施用模式的制剂包括栓剂，并且在一些情形中，为口服制剂或适用于作为气雾剂分布的制剂。对于栓剂，常规的结合剂和载体可以包括，例如，聚亚烷基二醇或甘油三酯；这样的栓剂可以由包含范围在0.5% -10%、优选在1% -2%的活性成分的混合物形成。
[0079]口服制剂包括通常所用的赋形剂，诸如例如，药用级别的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这些组合物采用溶液、混悬液、片剂、药丸、胶囊、缓释制剂或粉剂形式。
[0080]本发明包括基本上与基于本申请中鉴定的参照SEQ ID NOs中的任一种的多肽同源的多肽(包括其片段)。术语“序列同一性”和“序列同源性”在本说明书中认为是同义的。
[0081]例如，目的多肽可以包含与参照多肽的氨基酸序列有至少70、75、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、99或100%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
[0082]存在多种已建立的可用于比对两种氨基酸序列的算法。
.[0083]典型地，一种序列作为参照序列，可以将测试序列与其进行比较。序列比较算法基于设定的程序参数计算测试序列相对于参照序列的百分比序列同一性。例如，可以通过计算机执行的算法(例如，GAP, BE, STFIT，FASTA或TFASTA)或BLAST和BLAST2.0算法进行比较目的的氨基酸序列的比对。
[0084]下文所示的BL0SUM62表是来源于代表超过500组相关蛋白的高度保守区的蛋白序列片段的大约2，000次局部多重比对的氨基酸置换矩阵(Henikoff&Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA(美国国家科学院学报)89:10915-10919，1992 ;通过引用结合在本文
中)。氨基酸表示为标准单字母编码。百分比同一性计算为:
[0085]
liiiE'iffd 的总数
I I I—?**** -*......1*.1
[较K序列的K度+为比对两种序列IfIJ I入较K汴列'I>的缺I I数]
[0086]BL0SUM62 表
[0087]
【权利要求】
1.疫苗组合物，所述疫苗组合物包含与SEQID NO:1的氨基酸残基26-526具有至少90%同一性的网织红细胞-结合蛋白同源物5 (PfRH5)抗原或其具有与所述PfRH5抗原共同抗原交叉反应性的片段。
2.权利要求1的组合物，其中所述PfRH5抗原或其片段在SEQID NO:1的残基38和/或在氨基酸残基214具有除N之外的氨基酸。
3.权利要求2的组合物，其中所述PfRH5抗原或其片段在SEQID NO:1的氨基酸残基38和氨基酸残基214具有氨基酸Q。
4.权利要求1-3中任一项的组合物，其中所述组合物还包含来自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4组成的组的一个或多个抗原或其片段。
5.病毒载体或DNA质粒，其表达与SEQID NO:2具有至少90%同一性的PfRH5抗原或其具有与所述PfRH5抗原共同抗原交叉反应性的片段。
6.权利要求5的病毒载体或DNA质粒，其表达与SEQID NO:2的氨基酸残基34-534具有至少90%同一性的PfRH5抗原或其具有与所述PfRH5抗原共同抗原交叉反应性的片段。
7.权利要求5或权利要求6的病毒载体或DNA质粒，其中所述病毒载体或DNA质粒表达来自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4组成的组的一个或多个抗原或其片段。
8.权利要求5或权利要求6的病毒载体或DNA质粒，其还包含表达来自由PfAMAl、PfEBA175、PfRH2a、PfRH2b或PfRH4组成的组的一个或多个抗原或其片段的病毒载体或DNA质粒。
9.权利要求5-8中任一项的病毒载体,其中所述病毒载体是人或猿腺病毒或痘病毒。
10.权利要求9的病毒载体`，其中所述病毒载体是AdHu5、AdCh63或改良型痘苗安卡拉株(MVA)载体。
11.权利要求5-8中任一项的DNA质粒，其中所述DNA载体能够在哺乳动物表达系统中表达。
12.抗体或其结合片段，所述抗体或其结合片段特异性结合与SEQID NO:1的氨基酸残基26-526具有至少90%同一性的网织红细胞-结合蛋白同源物5 (PfRH5)抗原或其具有与所述PfRH5抗原共同抗原交叉反应性的片段。
13.权利要求12的抗体或结合片段，其中所述抗体特异性结合在SEQID NO:1的残基38和/或氨基酸残基214具有除N之外的氨基酸的PfRH5抗原或其片段。
14.权利要求13的抗体或结合片段，其中所述抗体特异性结合在SEQID NO:1的氨基酸残基38和氨基酸残基214具有氨基酸Q的PfRH5抗原或其片段。
15.权利要求12-14中任一项的抗体或结合片段，其中所述抗体是单克隆或多克隆的。
16.权利要求12-15中任一项的抗体或结合片段，其中所述抗体是Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、Fd 或 dAb。
17.寡核苷酸适配体，所述寡核苷酸适配体特异性结合与SEQID NO:1的氨基酸残基26-526具有至少90%同一性的网织红细胞-结合蛋白同源物5 (PfRH5)抗原或其具有与所述PfRH5抗原共同抗原交叉反应性的片段。
18.权利要求17的适配体，其中所述适配体特异性结合在SEQID NO:1的残基38和/或氨基酸残基214具有除N之外的氨基酸的PfRH5抗原或其片段。
19.权利要求18的适配体，其中所述适配体特异性结合在SEQID NO:1的氨基酸残基38和氨基酸残基214具有氨基酸Q的PfRH5抗原或其片段。
20.疫苗组合物，其包含权利要求5-11中任一项的载体和/或DNA质粒。
21.权利要求1-4和/或权利要求20中任一项的疫苗组合物，和/或权利要求5-11中任一项的载体和/或DNA质粒，和/或权利要求12-16中任一项的抗体，和/或权利要求17-19中任一项的适配体，其用于治疗或预防疟疾。
22.权利要求1-4和/或权利要求20中任一项的疫苗组合物，和/或权利要求5-11中任一项的载体和/或DNA质粒，和/或权利要求12-16中任一项的抗体，和/或权利要求17-19中任一项的适配体在制备用于预防或治疗疟疾的药物中的应用。
23.权利要求1-4和/或权利要求20中任一项的疫苗组合物，其用于预防或治疗疟疾，其中所述预防或治疗包括用人或猿腺病毒，例如AdHu5或AdCh63,来致敏受试者。
24.权利要求23的疫苗组合物，其用于预防或治疗疟疾，其中所述预防或治疗还包括用痘病毒，例如MVA，来加强受试者。
25.权利要求1-4和/或权利要求20中任一项的疫苗组合物，其用于免疫受试者，其中所述PfRH5抗原或其片段导致针对血液阶段疟原虫属(Plasmodium)寄生虫至少50%的GIA。
26.权利要求25的应用，其中所述PfRH5抗原或其片段导致针对血液阶段疟原虫属寄生虫多个遗传品系的至少50%的GIA。
27.权利要求1-4和/或权利要求20中任一项的疫苗组合物，和/或权利要求5-11中任一项的载体和/或DNA质粒，和/或权利要求12-16中任一项的抗体，和/或权利要求17-19中任一项的适配 体，其用于赋予针对疟原虫属寄生虫的红细胞前期保护。
28.权利要求25-27中任一项的应用，其中所述疟原虫属寄生虫是恶性疟原虫(P.falciparum)。
【文档编号】A61K39/015GK103442729SQ201280010331
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2012年2月24日 优先权日:2011年2月25日
【发明者】亚历山大·道格拉斯, 西蒙·德雷珀, 阿德里安·希尔, 安德鲁·威廉斯, 约瑟夫·伊林沃恩 申请人:伊西斯创新有限公司