修复伤口用医药组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明所述的修复伤口用医药组合物及其制备方法，该方法是不须再额外添加市售合成凝血酶或非人类凝血酶，而可直接将血液制备成为可用以修复伤口的医药组合物。本发明所述修复伤口用医药组合物具有避免患者产生排斥反应，并且本发明所述方法是可用于大量制备医药组合物以降低制造成本，进而使医疗成本减少，可减轻患者负担。
【专利说明】修复伤口用医药组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种医药组合物的制备方法，具体涉及一种修复伤口用医药组合物及 其制备方法。
【背景技术】
[0002] 血小板在人体中提供凝血与止血的功能，并且于活化的状态下，能释放生长因子， 因此，血小板对于止血、组织修复及再生的过程中扮演十分重要的角色。目前临床上，多使 用富含血小板血浆（Platelet Rich Plasma，PRP)治疗伤口，达到促进组织细胞再生修复的 功效，例如将富含血小板血浆用于因糖尿病而导致的伤口、溃烂性伤口或是手术后的患者 等。
[0003] 有文献指出将患者血液加入柠檬酸钠抗凝血剂后，进行离心，取得中间层的血浆， 其为富含血小板血浆。而后将该富含血小板血浆加入适当浓度的生理食盐水以及牛凝血 酶，用以促进其释放出生长因子，而得有效地用以促进组织生长。但是，由于上述制造方法 中所制备的富含血小板血浆是含有血浆或血液等物，使得患者被用于该富含血小板血浆， 导致免疫反应，造成二度发炎的情形。而为了改善上述缺陷，则有研究是将取得的血液先经 离心后，取得上层液，再将该上层液进行离心而搜集其中层液；将该中层液与如凝血酶之活 化剂加以混合，形成一混合液；将该混合液进行离心，过滤获得上清液，该上清液是具有富 含血小板血浆的生长因子。
[0004] 上述研究中所述方法是能增加富含血小板血浆的纯度，然而仍存在着以下缺点， 其一、制造成本高昂，相对地对于患者来说，是一笔沉重的医疗支出，因而造成临床上无法 全面性地应用于有需求的患者；其二、需要较长的时间始能完成制备富含血小板血浆；其 三、过早加入凝血酶，造成含血小板血浆于使用前已凝结；其四、须添加非自体取得的酵素， 可能会使患者产生不适反应；其五、所获得富含血小板血浆产量过小，对于大面积伤口应用 不易。
【发明内容】
[0005] 本发明的主要目的是在于提供一种修复伤口用医药组合物的制备方法，其是不须 再额外添加市售合成凝血酶或非人类凝血酶，而可制备出用以修复伤口的医药组合物，其 是用以降低制造成本，并且可大量制备修复伤口用医药组合物。
[0006] 本发明采用以下技术方案：
[0007] -种修复伤口用医药组合物的制备方法，包含有下列步骤：
[0008] 步骤a :取至少两管血液，其中一管血液中含有抗凝剂。
[0009] 步骤b :离心未含有抗凝剂的该管血液，收集除该管血液离心后至少一部红血球 层的上层。
[0010] 步骤c :离心含有抗凝剂的另一管血液，该管血液形成三分层，其中，第一层至少 含有红血球，第二层至少含有富含血小板血楽（Platelet rich plasma, PRP)，第三层至少 含有缺乏血小板血菜(Platelet poor plasma，PPP)。
[0011] 步骤d :收集步骤C的三分层中至少第二层，并且将之进行离心而得到一分层物。
[0012] 步骤e :收集步骤d分层物的一部分至少含有富含血小板血浆。
[0013] 步骤f :自由步骤c的第三层及步骤d的分层物中收集缺乏血小板血浆。
[0014] 步骤g :将步骤b总该上层的一部分、步骤d收集的该分层物的一部分、步骤f收 集的缺乏血小板血浆与含钙溶液混合，获得修复伤口用组合物。
[0015] 其中：步骤b是将该上层分离为一由富含血小板的纤维蛋白（Platelet-Rich Fibrin，PRF)组成的膜套和一由凝血酶组成的液状物。
[0016] 该步骤d是收集步骤c中第一层的一部分、第二层和第三层的一部分而进行离心。
[0017] 步骤g是将该液状物、步骤d收集的该分层物的一部分、步骤f收集的缺乏血小板 血浆与含钙溶液混合，其中，步骤f收集的缺乏血小板血浆用以进行混合的体积为最大，而 该液状物、步骤d收集的该分层物的一部分与浓度为0. 5?ImEq/ml的含钙溶液是以相同 体积进行混合，又以步骤f收集的缺乏血小板血浆、该液状物、步骤d收集的该分层物的一 部分与含钙溶液为5 :1 :1 :1或6 :1 :1 :1的组成体积比予以混合最佳。
[0018] 更进一步来说，步骤g中是先将步骤d收集的该分层物的一部分、步骤f收集的缺 乏血小板血浆与含钙溶液予以混合后，再加入该液状物进行混合。
[0019] 此外，本发明所述方法还包含将该膜套加入步骤f所得的该修复伤口用医药组合 物。
[0020] 本发明的另一目的是在于提供一种修复伤口用医药组合物，其是可有效地避免患 者产生排斥反应放入情形，而该修复伤口用医药组合物是由缺乏血小板血浆、凝血酶、富含 血小板血浆与含钙溶液混合而成，其中：
[0021] 凝血酶是由血液中所分离。
[0022] 而缺乏血小板血浆、凝血酶、富含血小板血浆与浓度为0. 5?ImEq/ml的含钙溶液 以5 :1 :1 :1或6 :1 :1 :1的体积比予以混合。
[0023] 本发明的有益效果在于：
[0024] 本发明所制备而得的修复伤口用医药组合物，是用于放置于病患患部，而促进患 者患部的组织生长，以有效地缩短复原时间。
【专利附图】
【附图说明】
[0025] 图1是为本发明较佳实施例的流程示意图。
[0026] 图2是为本发明较佳实施例的使用示意图。
[0027] 图3是为含抗凝剂的血液经一次离心后所得的结果。
[0028] 图4是为含抗凝剂的血液经二次离心后所得的结果。
[0029] 符号说明：以血液制备修复伤口用医药组合物的方法10,血液20、30,红血球层 21，上层22,膜套221，液状物222,第一层31，第二层32,第三层33,分层物40,分层物的一 部41，缺乏血小板血浆331，修复伤口用医药组合物50。
【具体实施方式】
[0030] 以下，列举本发明的较佳实施例，并配合图式说明如后。
[0031] 请参阅图1，本发明所述修复伤口用医药组合物的制备方法10,包含下列步骤：
[0032] 步骤a :取至少两管血液20、30,其中一管血液30中含有抗凝剂。
[0033] 步骤b :离心未含有抗凝剂的一管血液20,收集除该管血液离心后至少一部红血 球层21的上层22。将该上层22置于一如培养皿的容器上，以加压方式将该上层22分离为 一由富含血小板的纤维蛋白组成的膜套221及一由凝血酶组成的液状物222。
[0034] 步骤c :离心含有抗凝剂的另一管血液30而形成三分层31、32、33,其中，由下而 上，第一层31至少含有红血球，第二层32至少含有富含血小板血浆，第三层33至少含有缺 乏血小板血浆。
[0035] 步骤d :收集步骤c的第一层31的一部分、第二层32及第三层33的一部分，并且 将之进行离心而得到一分层物40。
[0036] 步骤e :收集步骤d分层物的一部分41而至少含有富含血小板血浆。
[0037] 步骤f :自步骤c的第三层33中收集缺乏血小板血浆331。
[0038] 步骤g :将步骤b的该液状物222、步骤d收集的该分层物的一部分41、步骤f收 集的缺乏血小板血楽331与浓度为0. 5?ImEq/ml的含I丐溶液以一预定比例混合，而以获 得一修复伤口用医药组合物50。
[0039] 据此，由本发明所示方法制备而得的修复伤口用组合物50,其是得被用以与伤口 接触，才能达到促进患者伤口生长及加速伤口复原的效果。更进一步而言，制备完成的该修 复伤口用组合物50于凝固后置于一纱布上，予以加压形成一膜状物，再该膜状物置于患部 上；或将制备完成的该修复伤口用组合物50与该膜套221混合，待其凝固后，将含有该膜套 221的该修复伤口用组合物50置于一纱布50上，予以加压而形成一膜状物，该膜状物也得 直接置于患部，达到上述功效。
[0040] 以下将更进一步列举一些实施例并配合图示，用以说明本发明。
[0041] 实施例1以血液制备修复伤口用医药组合物
[0042] 首先，取10管8C. C.的血液，将其中2管血液内是分别未加入抗凝剂，对称地平放 入离心机中，以3400rpm离心约15分钟。将离心后的下层红血球以剪刀去除，仅保留呈淡 黄色而为凝胶状的上层。将呈凝胶状的该上层放入小圆盘中，均匀按压，使该上层分离成为 由凝血酶所组成的液状物以及由富含血小板的纤维蛋白所组成的膜套。
[0043] 再者，将其余加入抗凝剂的8管血液以2400rpm进行第一次离心约5分钟，分别将 各该管血液中含有红血球的下层予以去除后，先自各该血管中收集总体积约5ml的缺乏血 小板血浆，再将剩余部份以3400rpm进行第二次离心约15分钟而形成三层分离层。自该三 层分离层收集包含有富含血小板血浆的中间层。其中，第一次离心的结果是如图3所示，第 二次离心的结果是如图4所示。
[0044] 将缺乏血小板血楽5ml、含有富含血小板血楽的中间层Iml与浓度为0. 898mEq/ml 黑葡萄糖钙注射液（Glucal bladOlml先予以混合，再加入Iml由凝血酶所组成的液状物， 均匀混合后获得本发明所述修复伤口用医药组合物。并且将由富含血小板的纤维蛋白所组 成的膜套加入该修复伤口用医药组合物，待其凝固后倒于纱布上，再以加压方式将含有富 含血小板的纤维蛋白的该修复伤口用医药组合物压制成为膜状，以供后续实施例用。
[0045] 实施例2修复伤口试验
[0046] 在本实施例中是将实施例1中所完成的修复伤口用医药组合物与市售血小板凝 胶套组(星沛有限公司）分别置于具开放伤口患者的患部上，经由一预定时间后，再观察各 该患者的复原状况，其中，投予本发明所述修复伤口用医药组合物的患者共39人，而投予 市售血小板凝胶套组的患者共77人。投予后的复原结果是如下表一所示。
[0047] 表一：投予不同修复伤口的医药组成物的结果
[0048]
【权利要求】
1. 一种修复伤口用医药组合物的制备方法，其特征在于，包含有下列步骤： 步骤a :取至少两管血液，其中一管血液中含有抗凝剂； 步骤b :离心未含有抗凝剂的该管血液，收集除该管血液离心后至少一部红血球层的 上层； 步骤c:离心含有抗凝剂的血液，该管血液形成三分层，其中，第一层至少含有红血球， 第二层至少含有富含血小板血浆，第三层至少含有缺乏血小板血浆； 步骤d :收集步骤c中的三分层中至少第二层，并且将之进行离心而得到一分层物； 步骤e :收集步骤d分层物的一部分至少含有富含血小板血浆； 步骤f :自由步骤c的第三层及步骤d的分层物中收集缺乏血小板血浆； 步骤g :将步骤b中该上层的至少一部分、步骤d收集的该分层物的至少一部分、步骤f 收集的缺乏血小板血浆与含钙溶液混合，获得一修复伤口用医药组合物。
2. 如权利要求1所述的修复伤口用医药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤b是 将该上层分离为一由富含血小板的纤维蛋白组成的膜套及一由凝血酶组成的液状物。
3. 如权利要求2所述的修复伤口用医药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤g是 将该液状物、步骤d收集的该分层物的一部分、步骤f?收集的缺乏血小板血浆与含钙溶液混 合。
4. 如权利要求3所述的修复伤口用医药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤f收 集的缺乏血小板血浆用以进行混合的体积为最大，而该液状物、步骤d收集的该分层物的 一部分与含钙溶液是以相同体积进行混合；其中，所述含钙溶液浓度为〇. 5?ImEq/ml。
5. 如权利要求4所述的修复伤口用医药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤f收 集的缺乏血小板血浆、该液状物、步骤d收集的该分层物的一部分与含钙溶液是以选自由 5 :1 :1 :1及6 :1 :1 :1所组成的体积比予以混合。
6. 如权利要求3所述的修复伤口用医药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤g中 是先将步骤d收集的该分层物的一部分、步骤f收集的缺乏血小板血浆与含钙溶液予以混 合后，再加入该液状物进行混合。
7. 如权利要求3所述的修复伤口用医药组合物的制备方法，其特征在于，还包含将该 膜套加入该修复伤口用医药组合物中。
8. 如权利要求1所述的修复伤口用医药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤d是 收集步骤c中第一层的一部分、第二层及第三层的一部分而进行离心。
9. 一种修复伤口用医药组合物，其特征在于，该组合物是由缺乏血小板血浆、凝血酶、 富含血小板血浆与含钙溶液所混合而成，其中，凝血酶是由血液中所分离。
10. 如权利要求9所述的修复伤口用医药组合物，其特征在于，所述缺乏血小板血浆、 凝血酶、富含血小板血浆与含钙溶液是以选自由5 :1 :1 :1或6 :1 :1 :1所组成的体积比予 以混合；其中，所述含I丐溶液浓度为〇. 5?ImEq/ml。
【文档编号】A61K38/48GK104436177SQ201310438971
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年9月24日 优先权日:2013年9月24日
【发明者】蔡新中 申请人:卫生福利部台中医院