一种“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向共传递体的制备及应用的制作方法
【专利摘要】本发明为一种“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向共传递体。该传递体为一种基因和药物的双载药系统，由二硫键交联的聚乙烯亚胺、聚丙交酯乙交酯共聚物及表面修饰的靶向性小分子构成。传递体表面修饰的主动靶向基团可将药物靶向至肿瘤部位并富集；聚合物内部交联的二硫键可在细胞内高还原条件下断裂，载体构架解体从而释放药物。共传递体可有效载入基因和疏水性小分子药物，同时保证基因稳定性；在还原条件下共传递体降解并释放基因和小分子药物；体内实验显示该传递体对肿瘤具有显著靶向性。
【专利说明】一种“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向共传递体的制备及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及高分子聚合物基因载体和基因治疗领疗领域。具体涉及一种用于基因载体的聚合物和以该聚合物为基础设计并构建的一种“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向共传递体。本发明涉及交联型聚乙烯亚胺的合成及表征、共传递体的制备方法及其应用。共传递体涉及疏水性小分子药物、基因与纳米粒形成的复合物、制备方法及应用。
【背景技术】
[0002]据统计，在中国恶性肿瘤是仅次于心脑血管疾病的第二大杀手，而绝大多数患者首选手术切除、放射治疗和化学药物治疗。这些疗法对早期肿瘤患者可获得快速且有效的治疗，但对晚期伴有局部扩散和转移者，并未显著延长患者的生存期和改善病人的生存质量，同时也发现化疗药物巨大的毒副作用以及在使用过程中产生的耐药性问题。近年来，研究者发现癌症是一种基因病，是人体细胞在外环境因素的作用下，内在多种前癌基因被激活和抑癌基因失活的多阶段长期演变的过程。因此，基因治疗对于彻底根治肿瘤具有重要意义。
[0003]基因治疗(gene therapy)是指将外源正常基因借助合适的载体被导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。siRNA(小干扰RNA)是一类特异性和选择性地抑制靶基因表达的双链RNA，因其特异性、高效性以及作为基因治疗药物的巨大潜力而备受青睐。目前，RNAi技术在神经退行性病变、心脑血管系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、遗传性疾病、免疫相关性疾病等多种疾病的病因机制研究、诊断利治疗方面都具有潜在的应用价值。人工合成的siRNA寡聚药物的开发正在成为一个热点。
[0004]对于特异性抑制肿瘤中某种酶的表达而同时不干扰其在正常细胞中表达的siRNA，其载体必须具备肿瘤靶向性。例如，环氧合酶(COX)是花生四烯酸合成前列腺素(PG)的关键限速酶。结构型C0X-1在 组织细胞中表达，催化生理性前列腺素合成而参与机体生理功能的调节；诱生型C0X-2较容易在激素、炎性细胞因子、生长因子和肿瘤启动子引起细胞激活后诱导产生。大量研究表明C0X-2在多种肿瘤形成的早期阶段呈高表达状态，可通过促血管生成、加速肿瘤细胞增殖、抑制细胞凋亡等促进肿瘤的发生发展。采用RNAi技术抑制编码C0X-2的mRNA的表达，进而抑制C0X-2蛋白的翻录，因而可促使肿瘤细胞的凋亡。然而，C0X-2在正常组织中均有表达并且发挥重要的生理作用。因此，构建C0X-2的siRNA必须靶向性地对肿瘤细胞发生作用，而不能干扰正常细胞内C0X-2的表达。
[0005]然而，研究发现基因治疗虽然可以将人的正常基因或有治疗作用的外源基因通过一定方式导入人体靶细胞内进行有效表达，纠正基因缺陷以治疗癌症，并已被公认为是当前根治癌症的有效手段，可是基因治疗过程中容易出现免疫原性问题，因此仍需通过与其他传统疗法，如外科手术、放疗、化疗等结合应用，从而发挥协同增效、综合治疗的优势。由于大部分的抗肿瘤小分子药物存在严重毒副作用、水溶性低及无靶向性等缺点，其临床应用受到了极大限制。近些年研究发现，高分子材料作为抗癌药物载体可有效解决上述问题，达到良好的抑瘤效果，但其连续使用会产生耐药性问题。因此，设计并构建一种基因药物与小分子抗癌药物的靶向共传递体给药系统具有一定意义。
[0006]目前基因的递送技术主要有以下几种:(I)直接转染。即直接注射到组织或细胞内。直接转染过程中基因很容易被降解，需要大剂量应用，可能会激发细胞毒性反应。(2)灭活病毒载体转染。病毒载体转染效率高，但存在很严重的安全问题，而且目的基因容量小，制备复杂，成本高，不能体内反复使用。(3)非病毒载体转染，包括脂质体转染和聚合物纳米粒转染。非病毒载体由于具有低毒、低免疫反应，外源基因整合几率低、无基因插入片段大小限制，以及使用简单、制备方便、便于保存和检验等优势，日益受到人们重视。在生理条件下，核苷酸序列带有一定负电，易于被阳离子片段通过静电作用吸附，从而能够保证基因载递送过程中的完整性。因此阳离子聚合物已经成为非病毒载体中深入研究的重点。聚乙烯亚胺(PEI)分子中每两个碳原子就相应有一个质子化的氮原子，由于这些氮原子构成的伯氨、仲氨和叔氨基团的PKa值不同，使PEI几乎在任何pH条件下都有吸收质子的能力。PEI “质子海绵”特性使其能在细胞内含体的酸性环境中吸收H+，使内含体内渗透压增高，导致膜不稳定甚至破裂，从而使被吞噬的复合物逃逸出来，避免基因降解，保证高效的转染效率。
[0007]还原型谷胱甘肽(GSH)是动物细胞内含量最丰富的含有巯基的生物小分子，还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG)是体内最主要的氧化还原对。在细胞内外不同的环境中GSH/GSSG的含量存在显著的差异。由于还原型辅酶II (NADPH)利谷胱甘肽还原酶的作用，细胞内GSH浓度是细胞外环境的100-1000倍，从而使细胞内环境保持较强的还原性。此外，研究发现，肿瘤组织中GSH浓度比正常组织至少高4倍，因此，比正常组织有更高的还原性。在本发明中，还原环境敏感型纳米粒传递系统是基于二硫键交联的聚乙烯亚胺，将二硫键作为还原环境刺激-响应的开关，使其在细胞外环境下稳定存在，而在肿瘤细胞内还原环境下发生断裂。
[0008]生物可降解材料聚乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)是乳酸与羟基乙酸共聚合而成的，具有良好的稳定性和生物相容性，易于被细胞吞噬，对小分子疏水性药物具有良好的包封率和载药量，可有效解决抗肿瘤药物存在的水溶性不良的问题，同时不仅能增加难溶性药物的溶解度，而且也能增加药物的稳定性和溶出速率，甚至在一定程度上可以改变药物的动力学和药理性质。
[0009]靶向给药系统是一类能使药物浓集定位于病变组织、器官、细胞或细胞内结构的新型给药系统，是抗肿瘤药物的首选给药系统。其靶向机制主要有被动靶向、主动靶向以及物理化学靶向。被动靶向主要是利用肿瘤部位的EPR效应，通过控制制剂粒径大小而积累于肿瘤部位；物理化学靶向是指控制磁场、热、光、PH等，从而使得给药系统在肿瘤部位释放药物；主动靶向是根据肿瘤细胞表面受体而设计的靶向系统。针对肿瘤细胞表面过度表达的膜多糖或者膜蛋白，用多糖对给药系统进行修饰，可以明显增强对肿瘤细胞的亲和力。透明质酸(HA)是一种在细胞外基质、结缔组织和高等动物的器官中广泛分布的天然蛋白多糖。CD44是一类跨膜糖蛋白，是细胞表面最重要的HA受体。目前研究表明多种肿瘤细胞表面高度表达CD44分子。利用HA水溶性和肿瘤细胞靶向性的特点，将其作为药物载体已成为抗肿瘤药物研究热点之一。
【发明内容】
[0010]本发明的目的之一在于提供一种还原敏感型聚合物材料，其特征是低分子量聚乙烯亚胺通过二硫键交联得到；该聚合物与聚丙交酯乙交酯共聚物形成纳米粒，同时在其表面包被透明质酸。这种递送系统可以同时主动靶向递送基因和小分子疏水性药物至肿瘤部位，在肿瘤细胞内二硫键断裂释放药物和基因，从而降低毒性，提高药物和基因在肿瘤内浓度，达到良好的治疗效果。
[0011]本发明的目的之二在于提供一种“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向共传递体的制备方法。
[0012]本发明的目的之三在于提供该“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向共传递体在抗肿瘤领域中的应用。
[0013]本发明提供如下技术方案:
[0014](I)聚乙烯亚胺与二硫键交联试剂反应，得到二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺(PEIss)。该反应需要氮气保护、避光条件下进行。所述聚乙烯亚胺还包括其衍生物。
[0015](2) 二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺与聚丙交酯乙交酯共聚物通过乳化溶剂挥发法制备纳米粒。
[0016](3)透明质酸通过共价键或者非共价键覆盖在纳米粒子表面。所述透明质酸还包括其衍生物。
[0017]本发明中用于合成二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺的交联剂可以为二硫代二丙酸丁二酰亚胺酯，二甲氧基-二硫代丙基亚胺盐酸盐，N, N’ -胱胺双丙烯酰胺，优选N，N’-胱胺双丙烯酰胺；聚乙烯亚胺分子量为1800Da~750，OOODa，优选1800Da ;反应溶剂可以为DMS0、DMF、甲醇、/K，优选甲醇-水(80%);交联剂与聚乙烯亚胺的摩尔比例范围为1:4~1:1，优选1:2 ;反应温度范围为室温~60°C;反应时间为2-10天，优选3天；反应要求在避光、氮气保护条件下进行。合成反应纯化，既可以采用透析袋透析纯化，也可以采用离心浓缩管纯化，优选离心浓缩管，以节约时间，便于冷冻干燥。
[0018]本发明采用乳化溶剂挥发法制备纳米粒，采用的有机相溶剂可以是二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸、丙酮以及上述几种溶剂的混合溶剂，优选二氯甲烷；采用的表面活性剂可以是泊洛沙姆、聚乙烯醇、吐温80等，优选泊洛沙姆188，浓度为1%至10%，优选5% ;乳化方法可以采用超声法或者高速剪切法，优选超声法，乳化时间为5min至30min，优选15min ；聚丙交酯乙交酯共聚物分子量为5000Da至40000Da，嵌段比为50:50、75:25，优选分子量10，OOODa，嵌段比50:50 ;聚丙交酯乙交酯共聚物和二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺质量比为1:1至20:1，优选10:1。
[0019]本发明采用透明质酸通过共价键或者非共价键覆盖于纳米粒表面。共价键修饰优选1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺将透明质酸糖环上的羧基和二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺上氨基进行酰化反应。非共价键修饰优选通过静电作用，将带负电的透明质酸与带正电的二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺孵育一定时间。
[0020]本发明以 多种疏水性小分子抗癌药物(如紫杉醇、多西他赛、阿霉素等)其中一种为模型，按照上述方法制备载药纳米粒，载药量为50% -100%，24-120h可完全释放。
[0021]本发明提供了 “胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向传递体在胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、胆囊癌、直结肠腺癌、食管腺癌、宫颈癌、脑星形细胞瘤中应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0022]图1为本发明中二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺利用AVANCE500MHZ核磁共振仪测定的1HNMR扫描图。
[0023]图2为本发明中纳米粒利用原子力显微镜测定的形态与粒径图。
[0024]图3为本发明中纳米粒与SiRNA利用琼脂糖凝胶电泳测定的结合能力电泳图，左图为电泳条带亮度积分转化为光密度值绘制的结合百分数曲线，右图为电泳成像图，按电泳槽甬道从左到右顺序，N/P = 0,0.25.0.5，1，2，5，10，20。
[0025]图4为本发明中纳米粒与SiRNA结合后利用琼脂糖凝胶电泳考察其抗核酸酶降解能力电泳图，左图为将电泳条带亮度转化为光密度值绘制的降解百分数曲线，右图a，b，c加样分别为裸siRNA，PLGA-PEIss/siRNA复合物及PLGA-PEI/siRNA复合物，电泳槽甬道加样从左到右分别为复合物与Rnase孵育0，5，15，30，45，60，120，240min后的产物。
[0026]图5为本发明中还原敏感型纳米粒与SiRNA结合后利用琼脂糖凝胶电泳考察其还原敏感性，上图加样为PE1-PLGA/siRNA复合物，下图加样为PEIss-PLGA/siRNA复合物，电泳槽甬道加样从左到右分别为U/ug(肝素钠/siRNA) = 0,0.015，0.03，0.0375，0.075，
0.15，0.3。
[0027]图6为本发明中载多西他赛的还原敏感纳米粒体外释放曲线。
[0028]图7为本发明中透明质酸修饰的还原敏感纳米粒在体组织分布。·【具体实施方式】
[0029]下面结合实施例，以二硫键交联试剂:N，N'-双(丙稀酰)胱胺为例，但不限于此，对发明进行详细说明:
[0030]实施例1
[0031 ] 二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺的合成与表征
[0032](I)合成条件
[0033]称取聚乙烯亚胺(Mw = 1800) Ig (0.56mmol)，置于三颈圆底烧瓶中，加入甲醇-水(80%)9ml使溶解。称取N，N'-双(丙稀酰)胱胺0.07g(0.28mmol)，加入甲醇-水(80% ) Iml使溶解，并缓慢滴加至三颈烧瓶中。搅拌，55°C、氮气保护、避光反应3天。透析纯化，冷冻干燥得到二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺。
[0034](2)结构表征
[0035]取二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺干燥纯品适量，溶于D2O中，通过核磁共振(1H-NMR)对其进行结果确证。聚乙烯亚胺的1H-NMR图谱中，特征峰集中在2.5~2.9处；而二硫键交联的低分子量聚乙烯亚胺的1H-NMR图谱中，在δ = 3.47，3.08，2.38出现的峰分别归属CBA的亚甲基峰以及丙烯酰胺双键在Michael加成反应后所生成的亚甲基。结果见图1。
[0036]实施例2
[0037]纳米粒的制备与质量评价
[0038](I)纳米粒的制备[0039]配制20mg/ml 二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺丙酮储备液:称取二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺0.2g，加入0.05g吐温80，溶于IOml丙酮中，避光，超声溶解。[0040]有机相溶液配制:称取聚丙交酯乙交酯共聚物(10，000Da50:50)0.2g，加入0.1g吐温80，溶于2ml 二氯甲烷中，超声溶解。加二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺丙酮储备液1ml,补加丙酮至IOml,混匀。[0041]水相溶液配制:称取0.5g泊洛沙姆188，溶于IOml水中。[0042]将有机相加入到水相中，使用超声波细胞粉碎仪将混合溶液超声15mint)45°C旋蒸5min,除去有机溶剂。0.45 μ m滤膜滤过,得空白纳米粒。[0043]在有机相溶液中，加入一定量的多西他赛丙酮溶液，即得载药纳米粒。[0044](2)纳米粒的质量评价[0045]原子力显微镜分析，将空白纳米粒稀释至适宜浓度，滴加于洁净的盖玻片上，室温静置过夜，风干。置于原子力显微镜下，调节后显微观察纳米粒形态与粒径，结果见图2。[0046]实施例3[0047]透明质酸的修饰与体外内评价[0048](1)透明质酸修饰[0049]非共价结合:取载药纳米粒适量，加入透明质酸溶液，混匀孵育15min，得透明质酸修饰的纳米粒。[0050]共价结合:将适量透明质酸溶液与载药纳米粒混匀，加入1.0moI/L的盐酸，使反应物的PH值到6.5。另取适量1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，溶解于二甲基亚砜-水(50%)中，再缓慢加入反应物溶液中，常温搅拌混合24h后，用1.0mol/L的氢氧化钠调节pH。透析后，冷冻干燥得透明质酸修饰的纳米粒。[0051]取透明质酸修饰后的纳米粒适量，与siRNA溶液按一定比例混匀，孵育15min。即得双载药纳米粒。[0052](2)体内外评价[0053]琼脂糖凝胶电泳分析，取透明质酸修饰的空白纳米粒子，与siRNA按氮磷比(N:P)为O:1，0.25:1,0.5:1，1:1,2:1,5:1,10:1，20:1混匀，孵育后，琼脂糖电泳分析两者静电结合能力，结果见图3。[0054]琼脂糖凝胶电泳分析，按N:P比为10:1配制PLGA-PEI/siRNA和PLGA-PEI_ss/siRNA纳米粒复合物溶液，总体积为10uL，每份溶液含siRNA0.4ug。将RNase溶液(40ug/ml)加入复合物，并在37°C条件下分别孵育0、5、15、30、60、120、240min。反应结束时，立即存放于-20°C冰箱。待全部时间点取样完毕，加入肝素溶液(10%)1111，使得~1^(肝素钠/siRNA) = 0.0375，siRNA从复合物中游离出来。取上述混合液于2%琼脂糖凝胶中进行电泳。电压85V，电泳时间为30min，紫外灯下观察电泳结果。同时做裸siRNA的阴性对照。利用凝胶成像软件将电泳条带亮度转化为光密度值绘制降解动力学曲线，计算复合物在核酸酶中的降解速率常数。结果见图4。[0055]琼脂糖凝胶电泳分析，新鲜配制载基因纳米粒，加入还原型谷胱甘肽(GSH)使得终浓度为20%。纳米粒在还原型谷胱甘肽(GSH)的作用下二硫键断裂，载体架构被破坏，从而释放siRNA。37°C孵育30min后，吸取Iul按照不同U/μ g(肝素钠/siRNA) = 0,0.015，0.03，0.0375，0.075，0.15，0.3加入肝素钠溶液，使得终体积为10ul。琼脂糖凝胶电泳考察还原敏感性，结果见图5。
[0056]取载多西他赛纳米粒适量放入透析袋中，分别以pH7.4，pH5.8的磷酸盐缓冲液为释放介质(含0.5% 1'?的1180，5(%小牛血清)，置于371:恒温振荡箱。分别于不同时间点
0.5h，lh, 2h，4h，8h，12h，18h，24h，72h，取Iml样品冷藏保存，同时再加入Iml乙腈，HPLC法测量游离药物含量，并计算其累计释放率，结果见图6。
[0057]取透明质酸修饰前后的纳米粒子适量，分别载以荧光染料Dir。取H22荷瘤小鼠15只，分别给以0.2ml生理盐水，载Dir的PLGA-PEI纳米粒，载Dir的PLGA-PE1-HA纳米粒以及载Dir的PLGA-PEIss纳米粒，载Dir的PLGA-PE1-HA纳米粒8h后，解剖小鼠各脏器于活体成像仪中进行荧光强度观察并计算平均荧光强度，结果见图7。
【权利要求】
1.一种“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向传递体，其特征是，所述传递体是化学药物和基因联合给药的纳米粒传递系统；聚合物可通过二硫键交联，并且在其表面通过主动靶向基团包被进行修饰。
2.根据权利要求1所述传递体中二硫键的引入包含但不局限于二硫代二丙酸丁二酰亚胺酯，二甲氧基-二硫代丙基亚胺盐酸盐，N, N’ -胱胺双丙烯酰胺。
3.根据权利要求1所述传递体中主动靶向基团的修饰可以是多糖类如透明质酸、甘露糖等，或者多肽蛋白类如RGD序列、转铁蛋白等。其中靶向基团的修饰可以是共价键键合或者非共价键键合。
4.如权利要求1中所述的传递体，其特征是聚乙烯亚胺(polyethylenimines,PEI)或二硫键交联的聚乙烯亚胺(PEIss)与聚丙交酯乙交酯共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid), PLGA)质量比为1:1_1:60，其中主动靶向基团的分子量为3000道尔顿~150万道尔顿；聚乙烯亚胺(或二硫键交联的聚乙烯亚胺)分子量范围为600道尔顿~70，000道尔顿；聚丙交酯乙交酯共聚物分子量范围为5000道尔顿~10，000道尔顿，其中丙交酯:乙交酯的比例为25:75~75:25o
5.权利I中所要求的二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺制备方法，包括以下步骤: (1)将聚乙烯亚胺和交联剂按照一定摩尔比例分别溶于适当的反应溶剂中，一定温度、避光、氮气保护条件下搅拌反应一定时间。 (2)反应结束后，将反应溶液于适当透析液中透析纯化，冷冻干燥即得二硫键交联的聚乙烯亚胺共聚物。
6.如权利要求5中所述的制备方法，其反应溶剂可以是惰性溶剂，如DMSO、DMF、甲醇、水，优选甲醇-水(80%);反应要求在避光、氮气保护条件下进行。交联剂与聚乙烯亚胺的摩尔比例范围为1:4~I 反应温度范围为室温~60°C,反应时间为24~120h,透析液为水或无机盐类，干燥采用冷冻干燥法`。
7.权利I中所要求的纳米粒传递体的制备方法，包括以下步骤: (1)将聚丙交酯乙交酯共聚物和疏水性小分子药物、聚乙烯亚胺(PEI)或二硫键交联的聚乙烯亚胺(PEIss)按照一定的质量比分别溶于适当的有机溶剂或水性溶剂中，并加入一定比例的吐温-80。将上述溶液混合均匀后缓慢加入到一定浓度表面活性剂的水性溶液中。于冰水浴条件下，运用超声波细胞粉碎仪间断超声数分钟后，于旋转蒸发仪上减压蒸掉有机溶剂，得到载小分子药物的PLGA-PEI纳米粒或PLGA-PEIss纳米粒。以不同N:P将纳米粒与基因混合均匀，室温孵育一定时间后通过静电自组装形成基因-小分子药物双载药PLGA-PEI 或 PLGA-PEIss 复合物溶液。 (2)将主动靶向小分子物质溶于去离子水中配制成10%(W/V)的溶液，在搅拌条件下将该溶液与双载药纳米粒混合，室温避光搅拌24h，得主动靶向基团修饰的PLGA-PEI纳米粒或PLGA-PEIss纳米粒。
8.根据权利要求7所述的制备方法，聚丙交酯乙交酯共聚物和聚乙烯亚胺或二硫键交联的聚乙烯亚胺质量比范围为5:1-60:1 ;聚丙交酯乙交酯共聚物浓度范围为0.1mg/ml-10mg/ml ;吐温-80浓度范围为0.01% -1% ;表面活性剂的种类为:泊洛沙姆188，聚乙烯醇，浓度范围为0.1% -5%。
9.根据权利要求7所述的共传递体其特征在于粒径小于2μ m。
10.根据权利要求7所述方法，其特征在于溶解共传递体的溶媒为磷酸盐缓冲液、HEBS(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)缓冲液、氯化钠溶液或葡萄糖溶液；PLGA-PEI纳米粒或PLGA-PEIss纳米粒与基因的浓度范围为0.01mg/ml-10mg/ml, N:P比范围为1:1_1:100 ；主动靶向小分子物质与聚乙烯亚胺或二硫键交联的聚乙烯亚胺的摩尔比范围为1:10-10:I ;疏水性小分子药物的载药量为1% _10%。
11.根据权利I的要求所述的疏水性小分子药物包括紫杉醇、多西他赛、阿霉素等抗肿瘤药物以及激素类药物、中药单体等。
12.根据权利I的要求所述的基因可以是含报告基因、抗癌基因、细胞因子基因能在真核细胞中重组表达的质粒DNA，寡聚核苷酸或是小干扰RNA。
13.根据权利要求9所述的共传递体在转染细胞中的应用，用途在于可成功转染人体以及动物来源的内皮细胞、上皮细胞以及多种肿瘤细胞等。
14.根据权利要求9所述的共传递体在制备治疗相应疾病药品中的应用，该共传递体的给药途径包括:注射、口服和黏膜给药，应用于肿瘤等基因的化学药物联合基因协同治疗 。
【文档编号】A61K48/00GK103566379SQ201310456509
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年9月30日 优先权日:2013年9月30日
【发明者】沈雁, 王珏, 涂家生, 汪步海, 张俊玲 申请人:中国药科大学