盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明所采用的技术方案为，一种盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂，所述的脂质体同时包封水溶性药物和脂溶性药物，水溶性药物包裹在脂质体内环境中，脂溶性药物包裹在脂质体的双层磷脂膜之间；其中所述的水溶性药物为盐酸多柔比星，所述的脂溶性药物为多西他赛或紫杉醇。本发明的有益效果是：通过实验证明本发明盐酸多柔比星脂质体-多西他赛或紫杉醇脂质体毒副作用明显减，并增强其抗肿瘤的治疗功能；本发明的脂质体药物包裹率可达90%以上，本发明冻干粉在2℃-8℃下的两年稳定性实验结果表明其平均粒径变化率小于6%，药物包裹率的变化率小于5%，显示了本发明盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂优异的稳定性。
【专利说明】盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种药物脂质体，尤其是一种盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体。
【背景技术】
[0002]盐酸多柔比星(DOX-HCL)为蒽环类广谱抗肿瘤抗生素盐酸多柔比星的盐酸盐，其作用机制主要是盐酸多柔比星分子进入细胞核与DNA结合，从而抑制核酸的合成和有丝分裂。盐酸多柔比星具有广谱的抗实验性肿瘤的作用，对拓扑异构酶也有抑制作用，可适用于急性白血病，恶性淋巴瘤，多发性骨髓瘤，肺癌，乳腺癌，膀胶癌，睾丸癌，甲状腺癌，软组织肿瘤，骨肉瘤，神经母细胞癌等，也可用于胃癌，结肠直肠癌，肝癌，食管癌，卵巢癌，宫颈癌等。虽然盐酸多柔比星抗瘤谱广，疗效好，但是由静脉注射后毒副作用较大，主要包括恶心，呕吐，骨髓抑制，严重脱发等，临床上出现的毒副作用还有厌食、胃炎甚至溃疡、口腔粘膜炎症等。而且，当累积剂量大时会导致严重的心脏损害，表现为心动过速、心律失常及充血性心力衰竭等。上述毒副作用严重限制了盐酸多柔比星的临床应用。
[0003]多西他赛为半合成的紫杉醇类抗肿瘤药，通过干扰细胞有丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的微管网络而起抗肿瘤作用。多西他赛可与游离的微管蛋白结合，促进微管蛋白装配成稳定的微管，同时抑制其解聚，导致丧失了正常功能的微管束的产生和微管的固定，从而抑制细胞的有丝分裂。多西他赛与微管的结合不改变原丝的数目。这一点与目前临床应用的大多数纺锤体毒性药物不同。多西他赛的抗瘤活性强于紫杉醇，并和紫杉醇没有交叉耐药。
[0004]多西他赛(≤10umol/L)诱导人乳腺癌Bcap37细胞凋亡，使细胞周期阻滞在C2和M期，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖。本品在细胞内浓度比紫杉醇高3倍，并在细胞内滞留时间长，这是本品在体外试验中比紫杉醇抗肿瘤活性大的重要原因。在体内试验中，对小鼠的结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢肿瘤移植物等有效。对顺钼、足叶乙苷、5Fu、或紫杉醇耐药的细胞株，本品不产生交叉耐药。
[0005]紫杉醇是一种新型的抗微管药物，具有广谱抗癌作用。当它在载体脂质体的靶向下，离开血循环到达肿瘤组织后，通过与肿瘤细胞中P -微管蛋白N端第31位氨基酸和第217-231位氨基酸结合，促进微管蛋白的聚合，使微管蛋白聚合形成对热和钙稳定的微管聚合物，再以非共价键化学计量地与聚合的微管的亚基结合，阻碍微管束的正常动态再生，并抑制聚合物正常的生理性解聚，从而使游离的微管数量显著减少，起到干扰有丝分裂纺锤体装配的作用，抑制纺锤体向两级分离，阻断肿瘤细胞的有丝分裂(微管是真核细胞的一个组成部分，其功能为构成细胞的网状支架、维持细胞的形态、参与洗白器的位移和胞内物质运输等，纺锤体和纺锤丝的分离需要这些微管的协助)。
[0006]进行有丝分裂的纺锤体和纺锤丝受到冻结，导致肿瘤细胞的分裂和增殖受抑制，停止于G2分裂期和M期(肿瘤细胞的增殖示意图见图1 )，许多研究证实阻滞于M期的细胞有明显的凋亡倾向。最终快速分裂的肿瘤细胞因出现生长抑制进而死亡。换言之，紫杉醇通过停止肿瘤细胞有事分裂过程，终端肿瘤细胞的生长，促使癌细胞萎缩而发生凋亡，最终抑制了肿瘤的生长，起到了抗癌作用。紫杉醇脂质体抑制肿瘤细胞生长的过程示意图如图2所示。
[0007]脂质体(Liposome)最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4纳米。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子层小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和单室脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。Bangham和Standish最初发现的就是多室脂质体,它们较易制备，尺寸一般为佳0.5-5微米。小单室脂质体为球形，尺寸一般为佳20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。目前用作药物载体的脂质体多为大单室脂质体，粒径一般位于100-1000纳米之间。70年代中后期，人们开始研究将脂质体用作蒽环类抗癌药物，包括盐酸多柔比星，的有效载体，80年代末已有临床实验开始进行，到90年代中期欧美已有脂质体药物上市。当盐酸多柔比星被包裹在特定的脂质体再通过静脉注射进入人体后，临床实验结果表明其毒副作用明显减少，药物半衰期显著延长，但其药效却并不减弱反而得到加强。
[0008]目前国内外在肿瘤治疗领域常用盐酸多柔比星与多西他赛或紫杉醇普通制剂联合用药，用于治疗乳腺癌、非小细胞肺癌并且成为医疗规范。但由于多西他赛或紫杉醇普通制剂中存在表面活性剂和有机溶剂，对与盐酸多柔比星复配时存在不稳定因素，且毒副作用大。
【发明内容】
[0009]本发明克服现有技术中盐酸多柔比星与多西他赛或紫杉醇普通制剂联合用药存在毒副作用大的不足，提供一种盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂及其制备方法。
[0010]为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为，一种盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂，所述的脂质体同时包封水溶性药物和脂溶性药物，具体为:水溶性药物包裹在脂质体内环境中，脂溶性药物包裹在脂质体的双层磷脂膜之间；其中所述的水溶性药物为盐酸多柔比星，所述的脂溶性药物为多西他赛或紫杉醇。
[0011]本发明很好利用多西他赛或紫杉醇脂溶性药物包裹在脂质体双层膜之间，水溶性药物盐酸多柔比星类药物包裹在脂质体内环境中，形成一个脂质体球中最里层是盐酸多柔比星类药物的胶体，然后覆盖单层磷脂膜，膜亲水性部分朝向盐酸多柔比星，亲脂性部分朝向多西他赛或紫杉醇层，在 多西他赛或紫杉醇层外层再覆盖一层磷脂膜，此处膜亲脂性部分朝向多西他赛或紫杉醇层，亲水性部分朝向外层的“三明治”结构。能够有效降低盐酸多柔比星、多西他赛和紫杉醇的毒副作用，同时使其药效增加。[0012]进一步地，盐酸多柔比星、多西他赛或紫杉醇、中性磷脂、带电荷磷脂、胆固醇、抗氧剂、糖类和缓冲剂；
[0013]其中所述的盐酸多柔比星与紫杉醇的质量比为1:4~1:8 ;盐酸多柔比星与多西他赛的质量比为1:2~1:3。
[0014]作为优选，所述的盐酸多柔比星和中性磷脂的质量比为0.01:1~2:1，带电荷磷脂和中性磷脂的质量比为0.05:5~2:5 ;胆固醇与中性磷脂质量比为0或0.1:1~1:1 ;抗氧剂与中性磷脂质量比为0~1:50 ;胆固醇可使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低了氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。为了进一步降低形成脂质体的磷脂和脂质体所包裹药物的化学降解，抗氧剂通过与磷脂过氧化自由基反应并猝灭单一态的氧分子和对磷脂的双分子层进行排序(如限制类脂层分子的流动性)等分子机制而发挥其抗氧化作用。
[0015]进一步地，所述的糖为乳糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖或蔗糖中一种或多种。
[0016]进一步地，所述的缓冲剂为氨基酸、无机盐或有机酸碱中一种或多种。
[0017]进一步地，所述的中性磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、双软脂酸卵磷脂或双肉豆寇酸卵磷脂；
[0018]所述的带电荷磷脂为带负电荷磷脂或带正电荷磷脂；其中负电荷磷脂选自双肉豆寇酸磷脂酰甘油、双月桂酸磷脂酰甘油、双软脂酸磷脂酰甘油、双硬脂酸磷脂酰甘油、双肉豆寇酸磷脂酸、双硬脂酸磷脂酸、双月桂酸磷脂酸、双软脂酸磷脂酸、双油酸磷脂酰丝氨酸或双亚油酸磷脂酰肌醇其 中一种或多种；
[0019]所述带正电荷磷脂选自为二棕榈酰基磷脂酰基乙基氨基-L-赖氨酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酸或十八胺中一种或多种。目前脂质体制备主要选用中性的卵磷月旨，但由于含有卵磷脂的脂质体的粒径在贮存期间会发生改变而影响其药效，本发明在配方中加入带电荷的磷脂可使脂质体粒径在贮存期间的变化减小到最小低程度。
[0020]上述的盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体的制备方法，步骤如下:
[0021]I)制备多西他赛或紫杉醇脂质体:根据配方选用多西他赛或紫杉醇、中性磷脂、带电荷磷脂、胆固醇和抗氧剂溶于氯仿或氯仿-甲醇溶剂中，混合均匀；用旋转蒸发仪将溶液中溶剂减压除去，形成脂质薄膜；加入缓冲体系水化，水化温度一般在40°C -70°C之间，得多西他赛脂质体悬浮液；
[0022]2)均化脂质体:水化完全后用高压均粒机制备脂质体至所需粒径和均匀度或通过挤压设备把空白脂质体悬浮液在压力下挤过相应孔径的微孔膜来达到，脂质体的粒径控制在50-300nm，脂质体粒径和均匀度用多角度纳米粒子分析器来检测；
[0023]3)将盐酸多柔比星溶于糖类水溶液中加热至40~50°C，采用硫酸铵梯度方法，对盐酸多柔比星进行包裹；
[0024]4)定容、除菌、分装、保存:用注射用水定容；将盐酸多柔比星脂质体悬浮液用微孔膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2V _8°C下保存或冻干保存至使用。
[0025]本发明的有益效果是:通过实验证明本发明盐酸多柔比星脂质体-多西他赛或紫杉醇脂质体毒副作用明显减，并增强其抗肿瘤的治疗功能；
[0026]本发明的脂质体的粒径位于50nm-300nm之间，药物包裹率可达90%以上，非包裹盐酸多柔比星、多西他赛或紫杉醇含量少，一般小于3%。本发明冻干粉在2°C _8°C下的两年稳定性实验结果表明其平均粒径变化率小于6%，药物包裹率的变化率小于5%，显示了本发明盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂优异的稳定性。
【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1肿瘤细胞增殖示意图；
[0028]图2紫杉醇脂质体抑制肿瘤细胞增殖图。
【具体实施方式】
[0029]以下通过实施例对本发明作进一步阐明，并不只限于下述保护范围。
[0030]实施例1
[0031]制剂处方:
[0032]
【权利要求】
1.一种盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂，其特征在于:所述的脂质体同时包封水溶性药物和脂溶性药物，具体为:水溶性药物包裹在脂质体内环境中，脂溶性药物包裹在脂质体的双层磷脂膜之间；其中所述的水溶性药物为盐酸多柔比星，所述的脂溶性药物为多西他赛或紫杉醇。
2.根据权利要求1所述的盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂，其特征在于:所述的脂质体配方如下:盐酸多柔比星、多西他赛或紫杉醇、中性磷脂、带电荷磷脂、胆固醇、抗氧剂、糖类和缓冲剂； 其中所述的盐酸多柔比星与紫杉醇的质量比为1:4~1:8 ;盐酸多柔比星与多西他赛的质量比为1:2~1:3。
3.根据权利要求2所述的盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂，其特征在于:所述的盐酸多柔比星和中性磷脂的质量比为0.01:1~0.1:1，带电荷磷脂和中性磷脂的质量比为0.01~0.2:1 ;胆固醇与中性磷脂质量比为0~0.3:1 ;抗氧剂与中性磷脂质量比为0~0.02:1。
4.根据权利要求2所述的盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂，其特征在于:所述的糖为乳糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖或蔗糖中一种或多种。
5.根据权利要求2所述的盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂，其特征在于:所述的缓冲剂为氨基酸、无机盐或有机酸碱中一种或多种。
6.根据权利要求2所述的盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂，其特征在于:所述的中性磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、双软脂酸卵磷脂或双肉豆寇酸卵磷脂； 所述的带电荷磷脂为带负电荷磷脂或带正电荷磷脂；其中负电荷磷脂选自双肉豆寇酸磷脂酰甘油、双月桂酸磷脂酰甘油、双软脂酸磷脂酰甘油、双硬脂酸磷脂酰甘油、双肉豆寇酸磷脂酸、双硬脂酸磷脂酸、双月桂酸磷脂酸、双软脂酸磷脂酸、双油酸磷脂酰丝氨酸或双亚油酸磷脂酰肌醇其中一种或多种； 所述带正电荷磷脂选自为二棕榈酰基磷脂酰基乙基氨基-L-赖氨酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酸或十八胺中一种或多种。
7.根据权利要求1~6任一项所述的盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂的制备方法，其特征在于:步骤如下: 1)制备多西他赛或紫杉醇脂质体:根据配方选用多西他赛或紫杉醇、中性磷脂、带电荷磷脂、胆固醇和抗氧剂溶于氯仿或氯仿-甲醇溶剂中，混合均匀；用旋转蒸发仪将溶液中溶剂减压除去，形成脂质薄膜；加入缓冲体系水化，水化温度一般在40°C -70°C之间，得多西他赛或紫杉醇脂质体悬浮液； 2)均化脂质体:水化完全后用高压均粒机制备脂质体至所需粒径和均匀度或通过挤压设备把空白脂质体悬浮液在压力下挤过相应孔径的微孔膜来达到，脂质体的粒径控制在50-300nm,脂质体粒径和均匀度用多角度纳米粒子分析器来检测； 3)将盐酸多柔比星溶于糖类水溶液中加热至40~50°C，采用硫酸铵梯度方法，对盐酸多柔比星进行包裹； 4)定容、除菌、分装、保存:用注射用水定容；将盐酸多柔比星脂质体悬浮液用微孔膜过滤除菌，分装即得成品，成品 可在2V _8°C下保存或冻干保存至使用。
【文档编号】A61K31/704GK103622912SQ201310655454
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】贺明, 贺欣, 朱瑶俊, 代光玉 申请人:常州金远药业制造有限公司