一种促消化道粘膜修复材料及其制备方法和用途
【专利摘要】本发明公开了一种促消化道粘膜修复的材料，它是由京尼平交联小肠黏膜下层制备而成，小肠黏膜下层经过京尼平交联后的交联指数为30%～100%。本发明还公开前述促消化道粘膜修复材料的制备方法及其用途。本发明促消化道粘膜修复的材料具有良好的抗酸、抗胃蛋白酶降解性能，溶血性低，无细胞毒性，力学性能优良。
【专利说明】一种促消化道粘膜修复材料及其制备方法和用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种修复材料，特别是消化道粘膜修复材料。
【背景技术】
[0002] 消化道溃疡，主要指发生在胃和十二指肠的慢性溃疡，亦可发生于食管下段、胃空 肠吻合口周围及含有异位胃粘膜的美克尔（MECKEL)憩室，这些溃疡的形成与胃酸和胃蛋白 酶的消化作用有关，故称消化性溃疡。消化道溃疡是临床上消化系统常见病症之一，近年来 随着生活节奏的加快，饮食结构的改变以及进食时间的不规律，发病率逐渐上升。消化道溃 疡的发生与很多因素有关，临床上常见的病因有胃酸分泌过多、胆汁反流、HP(幽门螺旋杆 菌）感染、胃黏膜防御能力下降等。该病病程漫长，若不能给予有效治疗，长期发展可导致 胃癌，严重影响患者生命安全。
[0003] 临床上治疗消化道溃疡的方式主要有保守治疗方式和手术治疗方式。保守治疗方 式的药效温和，痛苦小，但见效较慢，治疗常常不彻底，而且复发率较高，每一次复发，病情 一般比上一次更为严重，因此患者不得不加大用药剂量，或换用其他药物治疗，长此以往， 机体耐药性增加，临床效果却并不一定有显著改善。手术治疗方式见效快，治疗较为彻底， 但创伤较大，并发症较为明显。近年来随着材料学以及内镜技术的不断发展，国内外研究 者已将重点转移到利用内镜技术将生物材料送至消化道溃疡处，来达到修复损伤黏膜的目 的，这将有望既彻底地治愈消化道溃疡，又减少手术巨大创伤带来的痛苦，同时达到诊断治 疗一体化。
[0004] 小肠黏膜下层（small intestinal submucosa，SIS)是一种天然的细胞外基质类 生物材料，通常由猪小肠制备。SIS主要含有胶原、氨基多糖、糖蛋白等成分，适宜上皮细 胞的黏附和生长，其所包含的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF)、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factors,FGF)等还能促进修复组织的血 管化，诱导宿主细胞和组织的迁移。SIS是当前广泛用于组织工程研究的天然细胞外基质类 生物材料，具有良好的细胞相容性、含有多种生长因子、无免疫原性、具有抗微生物活性、各 向异性、组织特异性诱导再生等特点，是较为理想的黏膜修复材料。然而，将SIS用于消化 道黏膜的修复材料仍存在一些明显的缺陷，如遇水易变形，容易被强酸和胃蛋白酶降解，摩 擦系数低等，导致SIS难以用内镜输送，到达病灶处容易过早降解而失去功能。
【发明内容】
[0005] 为了克服上述缺陷，本发明提供了一种新的促消化道粘膜修复材料及其制备方 法。
[0006] 本发明促消化道粘膜修复材料，它是含有京尼平的小肠黏膜下层，具体是由京 尼平交联小肠黏膜下层制备而成，小肠黏膜下层经过京尼平交联后的交联指数为30%? 100%。
[0007] 交联指数，表征高分子链的交联程度。
[0008] 优选地，所述交联指数为30. 63%?86. 52%。进一步优选地，所述交联指数为 67. 28%?86. 52%。再进一步优选地，所述交联指数为67. 28%?85. 22%。最优选地，所述交 联指数为83. 74?85. 22%或者67. 28?69. 92%。
[0009] 所述修复材料由如下方法制备而成：
[0010] (1)取京尼平溶于缓冲液，制成浓度不低于〇· 01% (w/v)的京尼平溶液；
[0011] (2)将小肠黏膜下层浸泡于步骤（1)制得的京尼平溶液中，浸泡时间不低于3h ;
[0012] ( 3 )取出小肠黏膜下层，清洗，冷冻干燥，即得。
[0013] 步骤（1)中，所述缓冲液的pH为4?11。优选地，所述缓冲液的pH为7. 2。
[0014] 步骤（1)中，所述缓冲液为PBS溶液。
[0015] 骤（1)中，京尼平溶液的浓度为0. 01?0. 6% (w/v)。优选地，所述京尼平溶液的 浓度为〇. 05?0. 6%(w/v)。进一步优选地，所述京尼平溶液的浓度为0. 05?0. 3%(w/v)。 再进一步优选地，所述京尼平溶液的浓度为〇. 3% (w/v)。
[0016] 步骤（2)中，小肠黏膜下层表面积与京尼平溶液体积的比值为（200?3) :1。
[0017] 步骤（2)中，浸泡时间为3?24h。
[0018] 步骤（2)中，浸泡的温度为4°C?65°C。优选地，所述浸泡的温度为37°C。
[0019] 本发明促消化道粘膜修复材料的方法，包括如下步骤：
[0020] (1)取京尼平溶于缓冲液，制成浓度不低于〇· 01% (w/v)的京尼平溶液；
[0021] (2)将小肠黏膜下层浸泡于步骤（1)制得的京尼平溶液中，浸泡时间不低于3h ;
[0022] ( 3 )取出小肠黏膜下层，清洗，冷冻干燥，即得。
[0023] 步骤（1)中，所述缓冲液的pH为4?11。优选地，所述缓冲液的pH为7. 2。
[0024] 步骤（1)中，所述缓冲液为PBS溶液。
[0025] 骤（1)中，京尼平溶液的浓度为0. 01?0. 6% (w/v)。优选地，所述京尼平溶液的 浓度为〇. 05?0. 6%(w/v)。进一步优选地，所述京尼平溶液的浓度为0. 05?0. 3%(w/v)。 再进一步优选地，所述京尼平溶液的浓度为0.3% (w/v)或者0.05% (w/v)。
[0026] 步骤（2)中，小肠黏膜下层表面积与京尼平溶液体积的比值为（200?3) :1。
[0027] 步骤（2)中，浸泡时间为3?24h。
[0028] 步骤（2)中，浸泡的温度为4°C?65°C。优选地，所述浸泡的温度为37°C。
[0029] 本发明还提供了前述修复材料在制备修复消化道损伤的材料中的用途。
[0030] 本发明促消化道修复材料，具有抗胃液中强酸和胃蛋白酶分解的特性，力学性能 优良，无细胞毒性，溶血率低，组织相容性性好，孔径大小合适，适于细胞生长，同时含有大 量生长因子，体内修复无明显钙化现象，使用安全，为消化道粘膜修复提供了一种新的选 择，制备方法简单，具有广阔的应用前景。
[0031] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0032] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0033] 图ISIS膜。其中，A :新鲜制备的SIS膜呈半透明状；B :冻干后SIS膜呈白色纸 状；
[0034] 图2京尼平交联SIS后交联指数。（*P< 0.05表示各组与SIS相比较有统计学差 异；#P < 0. 05,表示各交联组与0. 01%交联组相比较有统计学差
[0035] 异）。
[0036] 图3京尼平交联后SIS在人工胃液中不同时间段降解情况。1 :SIS+人工胃液；2 : SIS+PBS ;3 :0. 01%GP 交联 SIS+ 人工胃液；4 :0. 05%GP 交联 SIS+ 人工胃液；5 :0. 1%GP 交联 SIS+人工胃液；6 :0· 3%GP交联SIS+人工胃液；7 :0· 5%GP交联SIS+人工胃液；8 :0· 6%GP交 联SIS+人工胃液
[0037] 图4京尼平交联后SIS在人工胃液中2周，4周，8周降解的宏观观察。
[0038] 图5SIS交联指数与京尼平交联时间的关系。（*P〈0. 05表示在京尼平溶液中交联 24h组与京尼平溶液中交联12h组的交联指数有统计学差异）
[0039] 图6SIS交联指数与交联温度的关系。（*P〈0. 05表示37°C京尼平溶液交联组与 25°C京尼平交联组的交联指数有统计学差异）
[0040] 图7SIS及不同浓度京尼平交联SIS的溶胀率。（*P〈0. 05表示与未交联SIS组相 比有统计学差异；#P〈〇. 05表示与0. 05%组相比存在统计学差异）
[0041] 图8SIS及不同浓度京尼平交联SIS的红外扫描图谱。
[0042] 图9京尼平交联后SIS极限抗张强度测试。（*P < 0. 05表示各组与SIS相比较有 统计学差异，#P < 〇. 05,表示各交联组与0. 5%交联组相比较有统计学差异)。
[0043] 图10SIS及不同浓度京尼平交联SIS在人工胃液中浸泡0周，2周，4周和8周后 极限抗张强度测试。（*P < 〇. 05表示各组与SIS相比较有统计学差异，#P〈0. 05表示与对 应0周组有统计学差异)。
[0044] 图11SIS及不同浓度京尼平交联SIS在人工胃液中浸泡0周，2周，4周和8周后 刚度测试。
[0045] 图12ELISA法检测SIS及浓度为0. 3%京尼平交联组SIS中VEGF和TGF- β 1在14 天内释放情况。
[0046] 图13京尼平交联后SIS扫描电镜图。Α:未交联SIS;B:0.05%GP交联材料；C: 0. 1%GP交联材料；D :0. 3%GP交联材料；E :0. 5%GP交联的材料。
[0047] 图14人胃粘膜上皮细胞GES-1接种到SIS及不同浓度京尼平交联的SIS上3天后 活细胞染色。a-e为40倍下观察到的细胞。a:未交联SIS;b:0. 05%GP交联材料；c :0. 1%GP 交联材料；d :0. 3%GP交联材料；e :0. 5%GP交联的材料。f-j为100倍下观察到的细胞。f: 未交联SIS ;g:0. 05%GP交联材料；h :0. 1%GP交联材料；i :0. 3%GP交联材料；j :0. 5%GP交联 的材料。
[0048] 图15促消化道粘膜修复材料浸提液溶血情况。1 :阴性对照；2 :阳性对照；3 :未交 联SIS浸提液；4 :0. 05%GP交联材料浸提液；5 :0. 1%GP交联材料浸提液；6 :0. 3%GP交联材 料浸提液；7 :0. 5%GP交联材料浸提液。
[0049] 图16SD大鼠背部皮下植入SIS及不同浓度京尼平交联SIS材料组织学观察。图 (a)-(e)材料第2周时炎性细胞情况。（a):未交联SIS; (b) :0. 05%GP交联材料；（c) :0. 1%GP 交联材料；（d) :0. 3%GP交联材料；（e) :0. 5%GP交联的材料。图（f)-(j)材料第2周时炎性 细胞情况。（f):未交联SIS; (g) :0. 05%GP交联材料；(h) :0. 1%GP交联材料；（i) :0. 3%GP交 联材料；（j) 5%GP交联的材料。*表示SIS所在位置，#表示京尼平交联SIS所在位置。
[0050] 图17SD大鼠背部皮下植入复合材料，应用Image - Proplus6. 0软件炎性细胞计 数。（* :同一时间点内与SIS组比较，P < 0. 05有统计学差异；# :同一时间点内与SIS组比 较，P < 0. 05有统计学差异；☆:同一时间点内与SIS组比较，P < 0. 05有统计学差异）。
【具体实施方式】
[0051] 缩略语：
[0052] SIS :小肠黏膜下层；GP :京尼平；DMEM :DulbeCC〇改良的Eagle培养基；FBS:胎牛 血清；MTT :3_ (4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴盐
[0053] 实施例1本发明促消化道粘膜修复材料的制备
[0054] -、本发明促消化道粘膜修复材料的制备
[0055] 1、SIS 的制备
[0056] 本发明SIS可以购买市售品，也可以按照如下方法制备。
[0057] (1)清洗整理：取屠宰后半个小时的新鲜猪小肠，用水冲去小肠内容物，翻转小肠， 加入盐揉搓后用水反复冲洗3次，用手术刀剖开小肠，然后剪成15厘米长的肠段。
[0058] (2)分离出SIS :用压舌板刮除肌层，浆膜层，置于生理盐水中4°C保存过夜。
[0059] (3)脱脂：用去离子水漂洗干净后用纱布滤干水。浸入三氯甲烷-甲醇的混合液 中，三氯甲烷：甲醇的比值为1 :1，置于通风橱里4小时，平均2小时换一次液，并且每半个 小时搅拌一次。
[0060] (4)脱细胞：将脱脂后的SIS用去离子水漂洗20次，反复清洗，漂至无味。然后放 入浓度为〇. 25%的胰蛋白酶液里，4°C脱细胞处理过夜。
[0061] (5)用去离子水漂洗10次后用0. 5%的SDS处理至少4小时，清洗，制得新鲜的SIS 膜，如图1A所示。
[0062] (6)冻干：清洗后依次置于-20°C，-40°C，-80°C中依次预冻后在真空冷冻干燥机 中冻干保存，制得冻干后的SIS膜，如图1B所示。
[0063] 2、本发明消化道粘膜修复材料的制备
[0064] (1)称取粉末状GP溶于PBS (pH=7. 2)溶液中，充分搅拌，使GP完全溶解，分别制 成质量体积比为 〇. 01%，〇. 05%，0. 1%，0. 3%，0. 5%，0. 6% 的 GP 溶液。
[0065] (2)将制备的SIS浸泡到GP溶液中，在37°C的恒温摇床上交联24h。
[0066] (3)将交联后的SIS从GP溶液中取出，用PBS溶液反复冲洗，至少5次，并浸泡在 PBS溶液中24h。
[0067] (4 )将交联后的SIS从PBS溶液中取出，用蒸馏水反复冲洗，至少5次，并浸泡在蒸 馏水中24h。
[0068] (5)将SIS从蒸馏水中取出，冷冻干燥即得本发明消化道粘膜修复材料。
[0069] 二、本发明促消化道粘膜修复材料的检测
[0070] 1、检测方法
[0071] (1)交联指数（CI)的测定：
[0072] ①茚三酮反应液的制备：将1. 05g的柠檬酸和10ml (1. 0M)的NaOH和0. 04g的氯 化亚锡（SnC12 ·2Η20)混合，加去离子水调至25ml，另将lg的茚三酮加入25ml乙二醇甲醚 中，再将上述两液体混合搅拌45min，制成茚三酮溶液，存于黑瓶中备用。
[0073] ②分别称取各交联组SIS以及未交联SIS样品1. 5mg，加入茚三酮溶液1ml，100°C 下水浴加热20min，冷却至室温，加15ml异丙醇（isopropyl glyeohol)，用分光光度计在 570nm下测量吸光度。样品中的自由氨基加热后与茚三酮发生反应，生成的蓝紫色色素与吸 光度成正比。在不同浓度的甘氨酸制得的标准曲线中查得不同样本中自由氨基的含量。所 有反应均在暗室中进行。以M SIS组表示未交联的SIS中含自由α-氨基酸摩尔数，MeP组表 示各组样品中α-氨基酸摩尔数，按以下公式计算各组材料的交联度：
[0074] CI=(MSIS - Mgp)/MsisX 100%
[0075] (2 )抗酸抗酶解性能检测
[0076] 为进一步确定适宜的GP交联浓度，将制得的不同浓度GP交联的SIS浸泡到人工 胃液中，观察其抗酸抗酶解的情况。
[0077] ①人工胃液的配制
[0078] 称取2. 0g的NaCl和3. 2g的胃蛋白酶(来自于猪的胃粘膜，胃蛋白酶的酶活为 800-2500U/mg)，溶于7ml的浓盐酸，加水稀释至1000ml，pH约为L 2。
[0079] ②整体降解情况
[0080] 将未交联的SIS以及各交联组的SIS制成2cmX 2cm的样品，每组选取3片，浸泡 在人工胃液中，每隔两天换液，37°C条件下观察3周的降解情况。
[0081] 结果如图3所示，1组：SIS+人工胃液；2组：SIS+PBS ;3组：0. 01%GP交联SIS+人 工胃液；4组：0. 05%GP交联SIS+人工胃液；5组；0. 1%GP交联SIS+人工胃液；6组：0. 3%GP 交联SIS+人工胃液；7组：0. 5%GP交联SIS+人工胃液；8组：0. 6%GP交联SIS+人工胃液。
[0082] ③降解率测定
[0083] 将未交联的SIS以及浓度为0. 05%，0. 1%，0. 3%和0. 5%京尼平交联的SIS制成直 径为16mm的圆片，每3片浸泡在人工胃液中，每隔两天换液，37°C条件下处理8周。分别测 定2周，4周，8周时材料的剩余质量百分比。
[0084] 统计方法：采用SPSS16. 0软件，用独立样本T检验统计。
[0085] 2、检测结果
[0086] 结果如图2?4和表1所示：
[0087] 表1本发明促消化道粘膜修复材料的交联指数和抗酸抗酶解性能
[0088]
[0089] 通过统计学分析交联指数，各个交联组与未交联的SIS相比，均有统计学差异（P < 0. 05);在交联组中，0. 05%至0. 6%交联组与0. 01%组相比均具有统计学差异（P < 0. 05)。 "一"表示未检测。"#"表示与与0. 5%组相比有统计学差异（P〈0. 05)。
[0090] 从图2和表1可以看出，采用本发明方法制备的修复材料，小肠黏膜下层的交联指 数为30. 63%?86%，随着京尼平浓度的增加，交指数先增加后降低，京尼平浓度为0. 5%时， 受联指数最1?。
[0091] 从图3?4和表1可以看出，单纯的SIS在1天内就全部降解，而本发明经过京 尼平交联的修复材料在处理2周时，材料残留率为49. 93%?96. 5%，可以有效抗酸抗酶解。 其中，京尼平浓度为0. 05%?0. 6%时，交联指数为67. 28%?86. 52%，材料的抗酸抗酶解 性能优良，处理8周时，材料残留率高达89. 91%?93. 51% ;京尼平浓度为0. 05%?0. 3% 时，交联指数为67. 28%?85. 22%，材料的抗酸抗酶解性能优良，处理8周时，材料残留率 也高达89. 91%?93. 51%，而且用的京尼平的量较少；京尼平浓度为0. 05%时，交联指数为 68. 6±1. 32%，修复材料的抗酸抗酶解性能优良，京尼平用量很少；京尼平浓度为0. 3%时， 交联指数为84. 48±0. 74%，修复材料的抗酸抗酶解性能最佳。
[0092] 实验结果说明，本发明促消化道修复材料可以有效抗酸抗酶解，可用于制备消化 道修复材料。
[0093] 实施例2本发明促消化道粘膜修复材料的制备
[0094] -、本发明促消化道粘膜修复材料的制备
[0095] 1、SIS 的制备
[0096] 本发明SIS可以购买市售品，也可以按照如下方法制备。
[0097] (1)清洗整理：取屠宰后半个小时的新鲜猪小肠，用水冲去小肠内容物，翻转小肠， 加入盐揉搓后用水反复冲洗3次，用手术刀剖开小肠，然后剪成15厘米长的肠段。
[0098] (2)分离出SIS :用压舌板刮除肌层，浆膜层，置于生理盐水中4°C保存过夜。
[0099] (3)脱脂：用去离子水漂洗干净后用纱布滤干水。浸入三氯甲烷-甲醇的混合液 中，三氯甲烷：甲醇的比值为1 :1，置于通风橱里4小时，平均2小时换一次液，并且每半个 小时搅拌一次。
[0100] (4)脱细胞：将脱脂后的SIS用去离子水漂洗20次，反复清洗，漂至无味。然后放 入浓度为0. 25%的胰蛋白酶液里，4°C脱细胞处理过夜。
[0101] (5)用去离子水漂洗10次后用0. 5%的SDS处理至少4小时，清洗，制得新鲜的SIS 膜，如图1A所示。
[0102] (6)冻干：清洗后依次置于_20°C，-40°C，-80°C中依次预冻后在真空冷冻干燥机 中冻干保存，制得冻干后的SIS膜，如图1B所示。
[0103] 2、本发明消化道粘膜修复材料的制备
[0104] (1)称取粉末状GP溶于PBS (pH=4. 0)溶液中，充分搅拌，使GP完全溶解，分别制 成质量体积比为〇. 3%的GP溶液。
[0105] (2)将制备的SIS浸泡到GP溶液中，小肠黏膜下层表面积与京尼平溶液体积的比 值为200:1 (cm2: ml)，在37 °C的恒温摇床上交联24h。
[0106] (3)将交联后的SIS从GP溶液中取出，用PBS溶液反复冲洗，至少5次，并浸泡在 PBS溶液中24h。
[0107] (4)将交联后的SIS从PBS溶液中取出，用蒸馏水反复冲洗，至少5次，并浸泡在蒸 馏水中24h。
[0108] (5)将SIS从蒸馏水中取出，冷冻干燥即得本发明消化道粘膜修复材料。
[0109] 实施例3本发明促消化道粘膜修复材料的制备
[0110] 一、本发明促消化道粘膜修复材料的制备
[0111] 1、SIS 的制备
[0112] 本发明SIS可以购买市售品，也可以按照如下方法制备。
[0113] (1)清洗整理：取屠宰后半个小时的新鲜猪小肠，用水冲去小肠内容物，翻转小肠， 加入盐揉搓后用水反复冲洗3次，用手术刀剖开小肠，然后剪成15厘米长的肠段。
[0114] (2)分离出SIS :用压舌板刮除肌层，浆膜层，置于生理盐水中4°C保存过夜。
[0115] (3)脱脂：用去离子水漂洗干净后用纱布滤干水。浸入三氯甲烷-甲醇的混合液 中，三氯甲烷：甲醇的比值为1 :1，置于通风橱里4小时，平均2小时换一次液，并且每半个 小时搅拌一次。
[0116] (4)脱细胞：将脱脂后的SIS用去离子水漂洗20次，反复清洗，漂至无味。然后放 入浓度为〇. 25%的胰蛋白酶液里，4°C脱细胞处理过夜。
[0117] (5)用去离子水漂洗10次后用0. 5%的SDS处理至少4小时，清洗，制得新鲜的SIS 膜，如图1A所示。
[0118] (6)冻干：清洗后依次置于-20°C，-40°C，-80°C中依次预冻后在真空冷冻干燥机 中冻干保存，制得冻干后的SIS膜，如图1B所示。
[0119] 2、本发明消化道粘膜修复材料的制备
[0120] (1)称取粉末状GP溶于碱性缓冲液（pH=ll)溶液中，充分搅拌，使GP完全溶解，分 别制成质量体积比为〇. 3%的GP溶液。
[0121] (2)将制备的SIS浸泡到GP溶液中，小肠黏膜下层表面积与京尼平溶液体积的比 值为3:1 (〇112:1111)，在371€的恒温摇床上交联2411。
[0122] (3)将交联后的SIS从GP溶液中取出，用PBS溶液反复冲洗，至少5次，并浸泡在 PBS溶液中24h。
[0123] (4)将交联后的SIS从PBS溶液中取出，用蒸馏水反复冲洗，至少5次，并浸泡在蒸 馏水中24h。
[0124] (5)将SIS从蒸馏水中取出，冷冻干燥即得本发明消化道粘膜修复材料。
[0125] 实施例4本发明促消化道粘膜修复材料的参数筛选
[0126] 1、实验方法
[0127] (1)促消化道粘膜修复材料交联时间的筛选
[0128] 本发明促消化道粘膜修复材料的制备方法，除SIS浸泡在浓度为0. 3%的京尼平溶 液中，浸泡时间分别为〇h，3h，6h，12h，24h，48h，72h，96h和120h以夕卜，其余条件同同实施例 1〇
[0129] (2)促消化道粘膜修复材料交联温度的筛选
[0130] 本发明促消化道粘膜修复材料的制备方法，除SIS浸泡在浓度为0. 3%的京尼平溶 液中，浸泡温度分别为4°C，16°C，25°C，37°C和56°C以外，其余条件同同实施例1。
[0131] 2、实验结果
[0132] (1)交联时间
[0133] 结果如图5和表2所示，
[0134] 表2不同交联时间下SIS的交联指数
[0135]
【权利要求】
1. 一种促消化道粘膜修复材料，其特征在于：它是由京尼平交联小肠黏膜下层制备而 成，其中，交联指数为30%?100%。
2. 根据权利要求1所述的修复材料，其特征在于：所述交联指数为30. 63%?86. 52% ; 优选地，所述交联指数为67. 28%?86. 52% ; 进一步优选地，所述交联指数为67. 28%?85. 22% ; 再进一步优选地，所述交联指数为83. 74?85. 22%或者67. 28?69. 92%。
3. 根据权利要求1所述的修复材料，其特征在于：它由如下方法制备而成： (1) 取京尼平溶于缓冲液，制成浓度不低于0. 01% (w/v)的京尼平溶液； (2) 将小肠黏膜下层浸泡于步骤（1)制得的京尼平溶液中，浸泡时间不低于3h ; (3 )取出小肠黏膜下层，清洗，冷冻干燥，即得。
4. 根据权利要求3所述的修复材料，其特征在于： 步骤（1)中，所述缓冲液的pH为4?11 ;优选地，所述缓冲液的pH为7. 2 ; 步骤（1)中，所述缓冲液为PBS溶液。
5. 根据权利要求3所述的促消化道粘膜修复材料，其特征在于：步骤（1)中，京尼平溶 液的浓度为〇. 01?〇. 6% (w/v); 优选地，所述京尼平溶液的浓度为0. 05?0. 6% (w/v); 进一步优选地，所述京尼平溶液的浓度为〇. 05?0. 3% (w/v); 再进一步优选地，所述京尼平溶液的浓度为0.3% (w/v)或者0.05% (w/v)。
6. 根据权利要求3所述的促消化道粘膜修复材料，其特征在于： 步骤（2)中，小肠黏膜下层表面积与京尼平溶液体积的比值为（200?3) :1 ; 步骤（2)中，浸泡时间为3?24h ; 步骤（2)中，浸泡的温度为4°C?65°C ;优选地，所述浸泡的温度为37°C。
7. -种制备促消化道粘膜修复材料的方法，其特征在于：包括如下步骤： (1) 取京尼平溶于缓冲液，制成浓度不低于0. 01% (w/v)的京尼平溶液； (2) 将小肠黏膜下层浸泡于步骤（1)制得的京尼平溶液中，浸泡时间不低于3h ; (3 )取出小肠黏膜下层，清洗，冷冻干燥，即得。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于： 步骤（1)中，所述缓冲液的pH为4?11 ;优选地，所述缓冲液的pH为7. 2 ; 步骤（1)中，所述缓冲液为PBS溶液。
9. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤（1)中，京尼平溶液的浓度为0. 01? 0. 6% (w/v)； 优选地，所述京尼平溶液的浓度为0. 05?0. 6% (w/v); 进一步优选地，所述京尼平溶液的浓度为〇. 05?0. 3% (w/v); 再进一步优选地，所述京尼平溶液的浓度为0.3% (w/v)或者0.05% (w/v)。
10. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于： 步骤（2)中，小肠黏膜下层表面积与京尼平溶液体积的比值为（200?3) :1 ; 步骤（2)中，浸泡时间为3?24h ; 步骤（2)中，浸泡的温度为4°C?65°C，优选地，所述浸泡的温度为37°C。
11. 权利要求1?6任意一项所述修复材料在制备修复消化道损伤的材料中的用途。
【文档编号】A61L31/00GK104107458SQ201410143074
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2014年4月10日 优先权日:2013年4月17日
【发明者】解慧琪, 王旻, 龚梅 申请人:四川大学华西医院