一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂及制备方法
【专利摘要】本发明提供一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂及制备方法，由冬虫草、西洋参、鳖甲、穿山甲、石斛、虎仗、砂仁、大黄、黄芪、黄连、黄芹、佛手、金钱草、白芍、三七、桑椹子、山药、黄精等药物组成，分别粉碎成100~200目细粉，混合均匀即可。本发明中药制剂由纯天然药物配制而成，处方简单，经药效试验，配伍的协同效果确切，对肝损伤有很好的治疗作用，毒副作用小，临床症状消失迅速，无任何毒副作用，治疗周期短，治愈后不反弹，治疗成本低，同时减轻患者经济负担，患者恢复正常后，可以停药而不易复发。
【专利说明】一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明提供一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂及制备方法，是用于肝纤维化和肝硬化治疗的中药组合物，属于中医制药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]全世界每年有100余万患者死于肝病，其中，1/3在中国，我国是肝病流行较严重的国家。病毒性肝炎引起的慢性肝损伤在我国最为常见。研究肝损伤肝纤维化的发生机理以及寻找有效的治疗措施是国内外学者共同研究的热门课题。
[0003]肝纤维化，是由于肝细胞受到炎性损伤后，其脂质过氧化产物沉积、炎性浸润细胞所分泌的各种细胞因子等刺激肝星状细胞活化，导致细胞外基质大量增生沉积，纤维结缔组织异常增生，降解和产生之间无法达到平衡，从而引起肝纤维化，肝纤维化是慢性肝病最重要的病理特征，也是慢性肝炎、肝硬化等进一步发展、恶化的重要环节，此时如果病因消除并经适当治疗，纤维化尚可被逐渐吸收，是可复性病变，抗纤维治疗可阻止乃至逆转纤维化进程，故一直受到高度重视。肝硬化是严重危害人类健康的常见病之一，目前我国的发生率仍保持在较高水平.目前有很多疾病包括肝病难以根治，尤其是酒精、病毒感染等原因所致的肝纤维化乃至肝硬化，越来越多的对人类健康造成了威胁。
[0004]一般认为肝纤维化如果发展成为肝硬化后期则是难以恢复的了。但是，在临床上难以将两者截然分开，因为慢性肝病由肝纤维化到肝硬化是一个连续的发展过程。近年的基础和临床研究也表明，如果能给予有效的病因治疗，或能直接抑制细胞外基质的合成和或促进其降解，则己经形成的肝纤维化甚至早期肝硬化也是可以逆转的。所以在纤维化的发生的过程中或者是在肝硬化的早期阶段我们渴望可以寻找到有效的药物或者方法，对抗肝纤维化或者减轻其症状。在纤维化过程中，一些细胞因子如转化生长因子(TGF-β )，血小板衍生生长因子(PDGF)，金属基质蛋白酶组织抑制物-Ι(--ΜΡ-Ι)等是肝纤维化的重要介质，TGF-β升高使纤维化程度加重，--ΜΡ-1可使形成的纤维降解，如能及时调节或阻断肝纤维化，则肝纤维化可以逆转，细胞外基质的沉积和降解也是肝纤维化形成过程中很重要的因素。谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)的含量是临床最常用的检测肝功能的指标，它们的含量的高低又能反映肝损伤的程度。a-平滑肌肌动蛋白(α -SM)在成纤维细胞不表达，是肌成纤维细胞形成的标志，也是肝损伤最显著的特征，成纤维细胞受损伤等刺激后可以向肌成纤维细胞转化从而表达大量的a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)o
[0005]目前，现代医学尚缺乏理想的治疗药物，而肝纤维化的中医药防治研究是我国近年来中西医结合防治慢性肝病研究的一大热点和亮点。多种中药包括单味药在体内和体外表现出肝保护功能，比如、三七、黄芪、山药、西洋参等。冬虫夏草具有补虚损、益精气。在现有技术中，冬虫夏草与上述药方没有合用治疗肝纤维化的文献报道，亦没有这些药方的提取物与冬虫夏草合用可以预防治疗肝纤维化肝硬化的报道。
[0006]常用保肝抗肝损伤药甘利欣有较强抗炎的作用和保肝、护肝降酶的疗效，对于各型肝炎及各种原因引起的转氨酶升高都有很好的疗效。但会出现纳差、恶心、呕吐、腹胀，以及皮肤瘙痒、荨麻疹、口干和浮肿，心脑血管系统有头痛、头晕、胸闷、心悸及血压升高等主要不良反应。
[0007]四氯化碳(Carbon tetrachloride , CCl4)中毒性肝损伤动物模型是一种经典的肝纤维化造模方法，最早最广泛地用于肝纤维化、肝硬化的实验研究上，CCl4诱导的肝纤维化动物模型在形态学、病理生理学等方面与人肝纤维化相似，如二者有肝细胞坏死后的再生；实验动物上引起的中央周围肝坏死，纤维增生，假小叶内以窦隙为主，最后产生结节性肝硬化，有时可出现更严重的结节性肝硬化，与人在慢性肝病发展为肝硬化时很相似。现己广泛用于肝纤维化发生的分子机制，血清学标志物和组织病理的相关性以及抗纤维化物质的药效学评价研究中。通过CCl4造模的不同时间，可建立早期肝纤维化模型、早期可逆性的肝硬化模型、有部分可逆性的肝结节性硬化。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于提供一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂，用于肝纤维化及肝硬化的治疗，具有很好的治疗作用。
[0009]本发明提供的一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂的制备方法，适用于工业化生产。
[0010]本发明提供的一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂，其特征在于是由以下药物按重量份数比制成的:
冬虫草I~5，西洋参10~15，鳖甲15~20，穿山甲5~10，石斛15~20，虎仗20~25，砂仁10~15，大黄10~15，黄芪6~10，黄连6~10，黄芹10~15，佛手15~20，金钱草25~30，白芍20~25，三七3~8，桑椹子15~20，山药10~15，黄精15~20。
[0011]本发明所述的一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂，优选配比为:
冬虫草1，西洋参10，鳖甲15，穿山甲5，石斛15，虎仗20，砂仁10，大黄10，黄芪6，黄连6，黄芹10，佛手15，金钱草30，白芍20，三七3，桑椹子15，山药10，黄精15。
[0012]本发明所述的一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂的制备方法，包括以下步骤:
按比例称取药物，分别粉碎成100-200目细粉，混合均匀即可。
[0013]【用法用量】口服；5~10克/次；3次/日；
【适应症】肝纤维化、肝硬化、肝损伤、肝炎等。
[0014]本发明方解如下:因久罹肝疾，克伐日久，正气必定大亏，故本方取冬虫草，补虚损益精气，先扶其正，固本培元，为君药；配以西洋参补助气血，扶正祛邪，黄芪补中益气，托毒外举，以扶正；任以虎杖，消症散积，破瘀通经；鳖甲，软坚散结，平肝潜阳；穿山甲，通经络，活淤血，消肿痛，三七，散瘀消肿，定痛止血，以祛邪，合以金钱草，清利肝胆湿热；白芍，养血柔肝，定痛止血，大黄，消痛散肿，推陈致新，活血通经，上药攻补兼施，进退有章，辅虫草，扶正祛邪，共为臣药。石斛，滋阴养胃，砂仁，行气调中，黄连，凉肝胆，解热毒，黄芹，清热燥湿，解毒，佛手，理气和中，舒肝解郁，桑椹子，滋阴补血，山药，清热解毒，黄精，补中益气，诸药相佐以缓解肝疾日久，所致脾胃失和，血瘀肝络之症。
[0015]经动物实验证明，将本发明药物用于四氯化碳导致的肝纤维化动物模型和肝硬化动物模型，能明显改善小鼠体重和改善小鼠外周血中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)的含量和改善组织学形态的病理变化和降低细胞浆周围的a -SMA的表达。
本发明的积极效果在于:由纯天然药物配制而成，处方简单，经药效试验，配伍的协同效果确切，对肝损伤有很好的治疗作用，毒副作用小，临床症状消失迅速，无任何毒副作用，治疗周期短，治愈后不反弹，治疗成本低，同时减轻患者经济负担，患者恢复正常后，可以停药而不易复发。
[0016]【专利附图】
【附图说明】:
图1:橄榄油正常对照组。小鼠肝组织无病变，肝组织内肝细胞胞浆丰富，无明显脂肪变性及水变性，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，肝细胞排列整齐。
[0017]图2:肝纤维化动物模型组。肝组织受损，中央静脉周围，汇管区炎症细胞浸润。肝细胞脂肪变性，部分肝细胞水样变性，排列紊乱，纤维组织明显增生形成大量纤维间隔，纤维间隔内有散在炎症细胞浸润。
[0018]图3:本发明药物实施例1治疗肝纤维化组。可见肝细胞脂肪变性不明显，内有少量炎症细胞浸润。肝组织轻度改变。有少量纤维间隔。
[0019]图4:本发明药物实施例2治疗肝纤维化组。肝细胞脂肪变性不明显，炎症细胞浸润减轻，纤维间隔形成数量减少。
[0020]图5:本发明药物实施例3治疗肝纤维化组。肝细胞脂肪变性不明显，基本无炎症细胞浸润减轻，纤维间隔形成数量减少。
[0021]图6:橄榄油正常对照组。肝细胞排列整齐，很少有a-SMA表达的阳性细胞。
[0022]图7:肝纤维化动物模型组。在肝细胞胞浆内和肝组织纤维间隔内，窦周间隙，汇管区较多a-SMA表达。
[0023]图8:本发明药物实施例1治疗肝纤维化组。可见中央静脉周围，纤维间隔和纤维间隔少数间质细胞及汇管区周围少数肝细胞胞浆a -SMA表达。
[0024]图9:本发明药物实施例2治疗肝纤维化组。可见中央静脉周围，纤维间隔和纤维间隔少数间质细胞及汇管区周围少数肝细胞胞浆a -SMA表达。
[0025]图10:本发明药物实施例3治疗肝纤维化组。可见中央静脉周围，纤维间隔和纤维间隔少数间质细胞及汇管区周围少数肝细胞胞浆a -SMA表达。
[0026]图11:橄榄油正常对照组。小鼠肝组织无病变，肝组织内肝细胞胞浆丰富、无明显脂肪变性及水变性，中央静脉呈放射状排列，肝细胞排列整齐。
[0027]图12:肝硬化动物模型组。肝组织严重破坏，多个中央静脉周围炎症细胞浸润，细胞点状坏死。胆管周围胆汁淤积较严重，固缩的核较多，点状坏死多，嗜酸性形成。假小叶形成，肝组织小叶内、小叶间有大量炎性细胞浸润，小叶结构不清，出现肝细胞脂肪变性、部分肝细胞水样变性，排列紊乱，
图13:本发明药物实施例1治疗肝硬化组。肝细胞脂肪出现轻微变性，内有少量炎症细胞浸润。并逐渐恢复整齐排列。
[0028]图14:本发明药物实施例2治疗肝硬化组。可肝细胞脂肪出现轻微变性，内有少量炎症细胞浸润。并逐渐恢复整齐排列。
[0029]图15:本发明药物实施例3治疗肝硬化组。肝细胞脂肪出现轻微变性，内有少量炎症细胞浸润。并逐渐恢复整齐排列。
[0030]图16:橄榄油正常对照组。肝细胞排列较为整齐，结构比较规整，有少量a -SMA表达的阳性细胞。
[0031]图17:肝硬化动物模型组。肝肝组织纤维间隔和胞浆内，窦周间隙，汇管区有大量a-SMA表达的阳性细胞。表达量增多并呈复杂的条索状排列。在假小叶周围有a-SMA的表达。
[0032]图18:本发明药物实施例1治疗肝硬化组。可见中央静脉周围和汇管区周围及肝细胞胞浆表达少量a -SMA。
[0033]图19:本发明药物实施例2治疗肝硬化组。可可见中央静脉周围和汇管区周围及肝细胞胞浆表达少量a -SMA。
[0034]图20:本发明药物实施例3治疗肝硬化组。可见中央静脉周围和汇管区周围及肝细胞胞浆表达少量a -SMA。
【具体实施方式】
[0035]实施例1
称取冬虫草lg，西洋参IOg,鳘甲15g,穿山甲5g,石斛15g,虎仗20g,砂仁IOg,大黄IOg,黄芪6g，黄连6g，黄芹10g，佛手15g，金钱草30g，白芍20g，三七3g，桑椹子15g，山药10g，黄精15g共18味 药，分别粉碎成100-200目细粉，混合均匀即可。
[0036]实施例2
称取冬虫草3g，西洋参13g，鳖甲18g，穿山甲8g，石斛18g，虎仗20g，砂仁12g，大黄13g，黄芪Sg,黄连Sg,黄芹12g，佛手18g，金钱草28g，白芍22g，三七3g，桑椹子18g，山药10g，黄精15g共18味药，分别粉碎成100-200目细粉，混合均匀即可。
[0037]实施例3
称取冬虫草5g，西洋参15g，鳖甲20g，穿山甲10g，石斛20g，虎仗25g，砂仁15g，大黄15g,黄芪10g，黄连10g，黄芹10g，佛手15g，金钱草30g，白芍20g，三七8g，桑椹子20g，山药15g，黄精20g共18味药，分别粉碎成100-200目细粉，混合均匀即可。
[0038]通过以下实验表明本发明药物对肝损伤动物的治疗效果:
实验动物及材料:实验用ICR雄性小鼠由吉林省吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供，六月龄，体重18-22克。本发明药物中各种药材均购自正规中药销售渠道，经超微粉碎机、粉碎成粉末。分析纯CCl4购自北京化学工厂。橄榄油购自山东鲁花集团有限公司。小鼠ALT酶联免疫分析试剂盒、小鼠AST酶联免疫分析试剂盒、小鼠AKP酶联免疫分析试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。羧甲基纤维素钠(CMC)购自潍坊力特复合材料有限公司，0.5%CMC为本实验中药复方的混悬剂,蒸懼水配制。本实验中造模试剂是指按CC14:橄榄油=1:5比例配制。兔抗a-SMA抗体购自Epitomics公司。羊抗兔二抗及相应S-P试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。
[0039]实验方法:
造模方法为模型组及各药物治疗组腹腔注射CCl4造模试剂600 μ 1/kg,对照组腹腔注射等剂量橄榄油；每周造模2次，肝纤维化模型连续造模7周，肝硬化模型连续造模11周，通过病理切片检测模型成功后，采用灌胃方式给予药物治疗。本发明药物的各治疗组剂量为:低剂量组0.75g/kg中药复方；中剂量组1.5g/kg中药复方；:高剂量组2.25g/kg中药复方肝纤维化治疗15天中药复方，肝硬化治疗30天，对照组给予等剂量的中药复方混悬液(0.5%羧甲基纤维素钠)
分别于药物治疗结束后，采集各组小鼠血清，进行APK、ALT、AST肝功能血清学检测；取肝组织用于常规HE染色及免疫组化染色方法进行a-SMA检测。
[0040]外周血清ALT测定原理及方法
谷丙转氨酶(ALT)在37° C及PH7.4的条件下，作用于丙氨酸及a_酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应30分钟以后(固定时间)加入2，4- 二硝基苯肼(DNPH)盐酸溶液，即终止反应，同时DNPH与酮酸中羧基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于505nm比色读取吸光度并计算酶活力。测定方法如表1。
[0041]表1:外周血清ALT测定方法
【权利要求】
1.一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂，其特征在于是由以下药物按重量份数比制成的: 冬虫草I~5，西洋参10~15，鳖甲15~20，穿山甲5~10，石斛15~20，虎仗20~25，砂仁10~15，大黄10~15，黄芪6~10，黄连6~10，黄芹10~15，佛手15~20，金钱草25~30，白芍20~25，三七3~8，桑椹子15~20，山药10~15，黄精15~20。
2.根据权利要求1所述的一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂，其特征在于是由以下药物按重量份数比制成的: 冬虫草1，西洋参10，鳖甲15，穿山甲5，石斛15，虎仗20，砂仁10，大黄10，黄芪6，黄连6，黄芹10，佛手15，金钱草30，白芍20，三七3，桑椹子15，山药10，黄精15。
3.根据权利 要求1或2所述的一种治疗肝纤维化及肝硬化的中药制剂的制备方法，包括以下步骤: 按比例称取药物，分别粉碎成100-200目细粉，混合均匀即可。
【文档编号】A61K36/9064GK104013899SQ201410287152
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年6月25日 优先权日:2014年6月25日
【发明者】乔萍, 陈娟, 杨念, 郑海筝, 石卓, 张铁岭, 祁婧, 孙旭, 温剑平, 温得中, 孙冬梅 申请人:吉林大学