一种升高白细胞作用的梅花鹿鹿脾提取物的制备及用途
【专利摘要】本发明公开一种鹿脾提取物的新提取方法及在提高免疫力药物中的应用，对传统的鹿脾提取工艺进行了改进，对离心沉淀用复合酶进行进一步提取，多肽和核苷酸的含量均提高了30%，同时提取物中肌苷成分占总核苷酸含量达8%，提高了提取物中肌苷的含量；同时本发明方法的提取物较原工艺提取的转移因子的升高白细胞的活性提高了20%。
【专利说明】一种升高白细胞作用的梅花鹿鹿脾提取物的制备及用途
[0001] 【技术领域】： 本发明公开了一种升高白细胞作用的梅花鹿鹿脾提取物的制备及用途，属于生物制药 【技术领域】。
[0002] 技术背景： 白细胞减少在临床上非常多见，多为继发性。白细胞降低的同时，抵抗力也会降低，会 出现头晕、乏力、心悸、低热、精神萎靡、失眠、食欲减退、咽喉炎及黏膜溃疡等症状，严重影 响人们的生活质量和健康水平。白细胞减少临床上用激素、锂盐治疗，疗效虽有提高，但副 作用大。对于一种疗效好、费用低、无副作用的治疗白细胞减少的保健品，市场需求巨大。
[0003] 转移因子是一种由多肽和低聚核苷酸组成的复合物，对中性粒细胞趋化活性强。 近年来，主要从动物脾脏中进行提取。目前，转移因子的提取方法多为：取新鲜猪或牛脾脏 除结缔组织，用组织捣碎机绞碎，加适量生理盐水后，用高速组织捣碎机高速（12000r/min) 匀浆，得匀浆液；匀浆液进行冻融数次；离心，取上清；将上清置于透析袋内进行透析，收集 透析袋外的透析液即为制备的转移因子，或将离心后上清进行超滤，得转移因子提取物。
[0004] 梅花鹿自古以来具有很高的经济价值，其为仙兽，全身皆为宝，无一废弃，鹿制品 都具有极高的药用价值和保健功效，鹿脾富含多肽、多糖、核酸等人体必须的营养物质。由 梅花鹿的鹿脾为原材料提取的转移因子，具有热原低、营养物质高且安全等特点，通过本发 明方法得到的鹿脾提取物为口服，其在升高白细胞的功能上相比于原有工艺提取的转移因 子具有更显著的效果。
【发明内容】
[0005] 本发明公开了鹿脾提取物在升高白细胞药物中的用途，可用于制备升高白细胞作 用的药物和保健食品，在剂型方面可采用各种剂型，如口服液、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶 囊等剂型或缓释制剂。
[0006] 本发明公开的一种鹿脾提取物是通过以下方法制备的： 1) 称取梅花鹿鹿脾250份，去除表面结缔组织； 2) 加入3~8重量的生理盐水，胶体磨研磨2~5min ; 3) 将鹿脾混悬液升温至5(T55 °C，调PH值至5?6,加入0. 6?4. 6%重量 的复合酶A保温0. 5h~2h，保温完毕后在4000g离心力下进行离心，得上清液 I液； 4) 上一步骤得到的鹿脾沉淀物(约为原鹿脾重量的1/4)继续加入等质量的生理盐水， 升温至6(T65°C，继续加入2?5%重量的复合酶B保温广3h，然后在4000g离心力下离心 IOmin,得上清液II液； 5) 将上清I液和II液进行混合,然后用IOKD超滤膜进行超滤，超滤液进行喷雾干燥即 得具有升高白细胞功能的鹿脾提取物干粉。
[0007] 所述的复合酶A为中性蛋白酶：胰蛋白酶：5' -磷酸二酯酶的质量比为广2 :2~4 : 4?9 ; 所述的复合酶B为中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：5' -磷酸二酯酶的质量比为1~2 :2~9 : 4 ?12 ; 所述的鹿脾提取物中含25~32重量份多肽，1.6~2.2重量份核酸，0. 12~0.25重量份 肌苷。
[0008] 本发明的积极效果在于：对传统的鹿脾提取工艺进行了改进，增加了步骤4,对离 心沉淀用复合酶B进行进一步提取，多肽和核苷酸的含量均提高了 30%，同时提取物中肌苷 成分占总核苷酸含量达8%，提高了提取物中肌苷的含量；同时本发明方法的提取物较原工 艺提取的转移因子的升高白细胞的活性提高了 20%。 【具体实施方式】
[0009] 通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离 本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改 动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
[0010] 实施例1: s .称取梅花鹿鹿脾250g，去除表面结缔组织； t ?加入750ml生理盐水，胶体磨研磨5min ; C.将鹿脾混悬液升温至50°C，调PH值至5,同时加入0. 25g中性蛋白酶，0. 75g胰蛋 白酶和I. 5g 5' -磷酸二酯酶保温2h，保温完毕后在4000g离心力下进行离心，得上清液I 液； c .上一步骤得到的鹿脾沉淀物继续加入等质量的生理盐水，升温至60°C，同时加入 0. 12g中性蛋白酶，0. 48g木瓜蛋白酶和0. 6g 5'-磷酸二酯酶保温3h，然后在4000g离心力 下离心IOmin,得上清液II液； e.将上清I液和II液进行混合，然后用IOKD超滤膜进行超滤，超滤液进行喷雾干 燥即得具有升高白细胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量为28. 32%，核酸含量为 1. 76%〇
[0011] 实施例2: ￡ .称取梅花鹿鹿脾250g，去除表面结缔组织； t ?加入1200ml生理盐水，胶体磨研磨5min; c .将鹿脾混悬液升温至55°C，调PH值至5,同时加入0. 51g中性蛋白酶，1.48g胰蛋 白酶和3. Ig 5' -磷酸二酯酶保温保温2h，保温完毕后在4000g离心力下进行离心，得上清 液I液； c .上一步骤得到的鹿脾沉淀物继续加入等质量的生理盐水，升温至60°C，同时加入 0. 22g中性蛋白酶，0. 78g木瓜蛋白酶和1.05g 5'-磷酸二酯酶保温lh，然后在4000g离心 力下离心IOmin,得上清液II液； e.将上清I液和II液进行混合，然后用IOKD超滤膜进行超滤，超滤液进行喷雾干 燥即得具有升高白细胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量为29. 18%，核酸含量为 1. 85%。
[0012] 实施例3: ￡ .称取梅花鹿鹿脾250g，去除表面结缔组织； t .加入1400ml生理盐水，胶体磨研磨4min ; c .将鹿脾混悬液升温至50°C，调PH值至5,同时加入0. 54g中性蛋白酶，I. 62g胰蛋 白酶和3. 52g 5' -磷酸二酯酶保温lh，保温完毕后在4000g离心力下进行离心，得上清液I 液； c .上一步骤得到的鹿脾沉淀物继续加入等质量的生理盐水，升温至60°C，同时加入 0. 28g中性蛋白酶，0. 89g木瓜蛋白酶和I. 45g 5' -磷酸二酯酶保温2h，然后在4000g离心 力下离心IOmin,得上清液II液； e.将上清I液和II液进行混合，然后用IOKD超滤膜进行超滤，超滤液进行喷雾干 燥即得具有升高白细胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量为28. 79%，核酸含量为 1. 91%。
[0013] 实施例4: S .称取梅花鹿鹿脾250g，去除表面结缔组织； t ?加入1500ml生理盐水，胶体磨研磨3min ; C.将鹿脾混悬液升温至50°C，调PH值至5,同时加入0.70g中性蛋白酶，2. Olg胰蛋 白酶和4. 32g 5' -磷酸二酯酶保温2h，保温完毕后在4000g离心力下进行离心，得上清液I 液； c .上一步骤得到的鹿脾沉淀物继续加入等质量的生理盐水，升温至65°C，同时加入 0. 33g中性蛋白酶，0. 93g木瓜蛋白酶和I. 45g 5' -磷酸二酯酶保温2h，然后在4000g离心 力下离心IOmin,得上清液II液； e.将上清I液和II液进行混合，然后用IOKD超滤膜进行超滤，超滤液进行喷雾干 燥即得具有升高白细胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量为29. 38%，核酸含量为 1. 96%〇
[0014] 实施例5 : s .称取梅花鹿鹿脾250g，去除表面结缔组织； t ?加入2000ml生理盐水，胶体磨研磨5min C.将鹿脾混悬液升温至50°C，调PH值至5,同时加入0.91g中性蛋白酶，1.82g胰蛋 白酶和7. 38g 5' -磷酸二酯酶保温I. 5h，保温完毕后在4000g离心力下进行离心，得上清液 I液 c .上一步骤得到的鹿脾沉淀物继续加入等质量的生理盐水，升温至60°C，同时加入 0. 32g中性蛋白酶，I. 04g木瓜蛋白酶和I. 46g 5' -磷酸二酯酶保温2h，然后在4000g离心 力下离心IOmin,得上清液II液； e.将上清I液和II液进行混合，然后用IOKD超滤膜进行超滤，超滤液进行喷雾干 燥即得具有升高白细胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量为29. 26%，核酸含量为 1. 86%〇
[0015] 对照例1(物理法提取）： a. 称取250g新鲜梅花鹿鹿脾，去除表面结缔组织，剪刀剪碎备用； b. 加入250ml超纯水，制备脾脏匀浆； c. 取匀浆，-20°C反复冻融5次，4°C 4000rpm离心30min，取上清液； d. 上清液放入到透析袋中，按比例加入超纯水，4°C透析，透析外液0. 22 y m微控滤膜 过滤除菌，即得转移因子溶液。喷雾干燥得鹿脾提取物干粉，多肽含量为28. 79%，核酸含量 为 1. 18%。
[0016] 对照例2 (物理法提取）： a. 称取250g新鲜猪脾，去除表面结缔组织，剪刀剪碎备用； b. 加入250ml超纯水，制备脾脏匀浆； c. 取匀浆，-20°C反复冻融5次，4°C 4000rpm离心30min，取上清液； d. 上清液放入到透析袋中，按比例加入超纯水，4°C透析，透析外液0. 22 y m微控滤膜 过滤除菌，即得转移因子溶液。喷雾干燥得猪脾提取物干粉，多肽含量为17. 64%，核酸含量 为 0? 94%。
[0017] 以下试验表明通过工艺改进后采用本发明工艺，梅花鹿鹿脾提取物干粉中多肽和 核苷酸的含量均提高了 30%，同时提取物中肌苷成分占总核苷酸含量达8%。
[0018] 表1各提取方法得到鹿脾提取物干粉中各有效成分的含量结果
【权利要求】
1. 一种梅花鹿鹿脾提取物，是通过以下方法制成的： 1) 称取梅花鹿鹿脾250份，去除表面结缔组织； 2) 加入:Γ8重量的生理盐水，胶体磨研磨2~5min; 3) 将梅花鹿鹿脾混悬液升温至5(T55 °C，调PH值至5?6,加入0. 6?4. 6%重 量的复合酶A保温0.5tT2h，保温完毕后在4000g离心力下进行离心，得上清液 I液； 4) 将步骤3)得到的鹿脾沉淀物继续加入等质量的生理盐水，升温至6(T65°C，继续加 入2?5%重量的复合酶B保温1?3h，然后在4000g离心力下离心lOmin，得上清液II液； 5) 将上清I液和II液进行混合,然后用IOKD超滤膜进行超滤，超滤液进行喷雾干燥即 得具有升高白细胞功能的鹿脾提取物干粉； 所述的复合酶A为中性蛋白酶：胰蛋白酶：5' -磷酸二酯酶的质量比为广2 :2~4 :4~9 ; 所述的复合酶B为中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：5' -磷酸二酯酶的质量比为1~2 :2~9 : 4 ?12。
2. 权利要求1所述的梅花鹿鹿脾提取物可用于制备升高白细胞作用的药物和保健食 品，在剂型方面可采用各种剂型，如口服液、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊等剂型或缓释制 剂。
3. 权利要求1所述的梅花鹿鹿脾提取物在制备升高白细胞药物中的用途。
【文档编号】A61P7/00GK104306401SQ201410614994
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年11月5日 优先权日:2014年11月5日
【发明者】逯家辉, 王迪, 刘洋, 彭小君, 滕乐生, 王贞佐, 滕利荣, 孟庆繁, 刘艳, 贾东旭, 周毓麟, 程瑛琨 申请人:吉林大学