专利名称：一种含人参多糖的梅花鹿细管冻精稀释液配方及应用方法
技术领域：
本发明涉及梅花鹿繁育中一种含人參多糖的梅花鹿细管冻精液稀释液配方及应用方法。
背景技术：
我国梅花鹿存栏100万头，因其产茸量高茸质好而闻名世界。梅花鹿属于单胎动物，季节性发情，而且产茸量个体间差异很大，高产鹿数量很少，且高产种公鹿配种能力差屡见不鲜，与健康母鹿交配不育或少育，直接影响着鹿的繁育，鹿群质量下降，造成目前良种扩繁工作的难度较大。人工授精技术应用于梅花鹿的生产，推广鹿的人工授精与冷冻精液进行鹿的品种培育和改良，可遏制这种退化趋势。在梅花鹿的繁育工作中，提高精液品
质，是充分发挥良种公鹿配种潜カ的重要步骤。因此，采用先进的繁殖技术对其种群进行改良和扩繁显得尤为重要。我国梅花鹿的人工授精技术己应用于生产，在鹿的繁育工作中，提高精液品质，是充分发挥良种公鹿配种潜カ及提高受胎率的重要步骤。但在鹿业生产实践中，梅花鹿人工授精所用精液多为冷冻精液，有时虽然采用鲜精，由于路途远，且多数养鹿户居住山区道路不好，所以到达现场时，往往精液质量下降，精子活力低于标准(鲜精活カ低于O. 6 ;冻精活力低于O. 3)，照样输精，其结果必然产仔率低。尽管甘油已经被广泛应用于各种细胞的冷冻保存，但甘油在提高梅花鹿精子活率的同时也降低了精子的顶体完整性，所以不能大量使用。为推动鹿人工授精工作，促进鹿的品种选育和杂交改良，进ー步提高鹿群质量和鹿的生产能力，促进鹿业发展和有利于野生动物资源的保护利用。研制有效、简便、安全的的梅花鹿细管冻精稀释液配方已成为必然。
发明内容
鉴于梅花鹿繁育技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种含人參多糖的梅花鹿细管冻精稀释液配方，以提高梅花鹿精液质量，提高人工授精梅花鹿的繁殖率。该稀释液配方为人參多糖20毫克，Tris I. 94克，果糖O. 8克，柠檬酸I. 08克，卵黄20晕升，GSH23晕克，BSA 91晕克，ATP 23晕克，维生素C 284晕克.，青霉素40万IU,链霉素20万IU，甘油6毫升，加蒸馏水定容到100毫升。实例I含人參多糖的梅花鹿细管冻精稀释液制备化学法保定梅花鹿，用电刺激法采集的梅花鹿精液，检测活力在O. 8以上的梅花鹿精液用做冷冻，根据精子密度确定稀释倍数，将精液与等温的的稀释液在降温前I次混匀(甘油终浓度保证在3%以上)。在(TC冰箱中水浴降温平衡5小吋。在冰箱中将平衡好的精液吸入O. 25毫升细管，聚こ烯醇粉封ロ，置于液氮面约2厘米处，冷冻5分钟，投入液氮中。抽样并在37°C的水浴锅中解冻20秒，镜检，活率O. 35以上的精液标记装入纱布袋保存。试验例I不同配方稀释液对梅花鹿精液品质和产仔率的影响用不同配方(配方I :Tris 3. 63克，果糖O. 5克，柠檬酸I. 99克，卵黄14毫升，青霉素40万IU，链霉素20万IU，甘油6毫升，加蒸馏水定容到100毫升。磁力搅拌，O. 22微米滤过灭菌冷藏。配方II =Tris 2. 75克，果糖I. 14克，柠檬酸I. 52克，卵黄23毫升，GSH23毫克，BSA91毫克，ATP23毫克，维生素C 284毫克，青霉素40万IU，链霉素20万IU，甘油6毫升，加蒸馏水定容到100毫升，磁力搅拌。O. 22微米滤过灭菌冷藏。配方III =Tris
I.94克，果糖O. 8克，柠檬酸I. 08克，卵黄20毫升，人參多糖20毫克，GSH 23毫克，BSA 91晕克，ATP 23晕克,维生素C 284晕克.，青霉素40万IU,链霉素20万IU,甘油6晕升，カロ蒸馏水定容到100毫升。磁力搅拌，O. 22微米滤过灭菌冷蔵)稀释液，对相同精液用同样方法经行稀释、冷冻、复苏和人工授精，检测精子表观活力、精子染色活率、精子存活指数、产仔率。结果显示细管冻精稀释液III能显著提高梅花鹿精液精子活力、精子存活指数(P < O. 05):显著降低了精子畸形率(P < O. 05)，提高梅花鹿精液品质和产仔率，有利于鹿的繁育。表I稀释液对梅花鹿精液品质和产仔率的影响
权利要求
1.一种含人參多糖的梅花鹿细管冻精稀释液配方及应用方法，由以下步骤完成 一种含人參多糖的梅花鹿细管冻精稀释液配方及制备方法，该稀释液配方为人參多糖20毫克，Trisl. 94克，果糖O. 8克，柠檬酸I. 08克，卵黄20毫升，GSH 23毫克，BSA91毫克，ATP23晕克，维生素C 284晕克.，青霉素40万IU,链霉素20万IU,甘油6晕升,加蒸馏水定容到100毫升。磁力搅拌，O. 22微米滤过灭菌冷蔵。根据活力在O. 8以上的梅花鹿精子密度确定稀释倍数，将精液与等温的的稀释液在降温前I次混匀(甘油终浓度保证在3%以上)。在0°C冰箱中水浴降温平衡5小吋。在冰箱中将平衡好的精液吸入O. 25毫升细管，聚こ烯醇粉封ロ，置于液氮面约2厘米处，冷冻5分钟，投入液氮中。抽样并在37°C的水浴锅中解冻20秒，镜检，活率O. 35以上的精液标记装入纱布袋保存。
(1)梅花鹿细管冻精稀释液配方为以人參多糖20毫克，TrisI. 94克，果糖O. 8克，柠檬酸I. 08克，卵黄20毫升，GSH 23毫克，BSA 91毫克，ATP 23毫克，维生素C 284毫克·，青霉素40万IU,链霉素20万IU,甘油6毫升为原料构成。
(2)梅花鹿细管冻精稀释液制备按上述(I)配方，准确称量或量取各原料，加去离子水定容到100毫升,磁力搅拌均勻,O. 22微米滤过灭菌冷藏。
(3)细管冻精制备将新采集的活力在O.8以上的梅花鹿精子，根据密度确定稀释倍数，与等温的的稀释液在降温前I次混匀(甘油终浓度保证在3%以上)。在0°C冰箱中水浴降温平衡5小吋。在冰箱中将平衡好的精液吸入O. 25毫升细管，聚こ烯醇粉封ロ，置于液氮面约2厘米处，冷冻5分钟，投入液氮中。抽样并在37°C的水浴锅中解冻20秒，镜检，活率O. 35以上的精液标记装入纱布袋保存，即为梅花鹿细管冻精。
2.如权利要求I所述的梅花鹿细管冻精稀释液配方为上述各原料的组合，人參多糖浓度是20mg/100ml。稀释液灭菌是采用O. 22微孔滤膜过滤办法进行。
3.如权利要求I所述的细管冻精制备，精液是新采集的活力在O.8以上的梅花鹿精子。稀释时稀释液甘油终浓度保证在3%以上。细管冻精经镜检，活率在O. 35以上的精液标记装入纱布袋保存。
全文摘要
本发明为一种含人参多糖的梅花鹿细管冻精稀释液，该稀释液配方为人参多糖20毫克，Tris 1.94克，果糖0.8克，柠檬酸1.08克，卵黄20毫升，GSH 23毫克，BSA 91毫克，ATP 23毫克，维生素C 284毫克，青霉素40万IU，链霉素20万IU，甘油6毫升，加蒸馏水定容到100毫升。该稀释液有利于梅花鹿精液的冷冻和低温保存，对提高梅花鹿人工授精的繁殖力有着重要的意义，对开发人参的新用途，也有着重要的价值。含人参多糖的梅花鹿细管冻精稀释液生产方法简单、生产成本低，便于推广应用。
文档编号A01N1/02GK102657150SQ20121016948
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月29日 优先权日2012年5月29日
发明者何忠梅, 张爱华, 张连学, 李 学, 李萍, 杨鹤, 王立岩, 臧埔, 蔡恩博, 赵岩, 郜玉钢, 雷锋杰 申请人:吉林农业大学