一种植物乳杆菌发酵人参液方法
【专利摘要】本发明公开了一种植物乳杆菌发酵人参液方法，它包括：将保藏编号为CGMCC.NO.11172植物乳杆菌的种子发酵液，按3%接种量接种于人参液，发酵条件为：30?42℃摇床培养，转速为50?150r/min，发酵24?72h；所述的人参液为人参加水打浆。与普通植物乳杆菌相比，人参发酵液的抗氧化能力以及Rg3、F2含量都有很大的提高。CGMCC No.1117220150807
【专利说明】
_种植物乳杆菌发酵人参液方法
技术领域
[0001]本发明属于发酵食品技术领域，尤其涉及植物乳杆菌LP1046及一种植物乳杆菌发酵人参液方法。
【背景技术】
[0002]作为百草之王的人参在中国已有至少3000年的历史，人参一直作为名贵中草药，其营养价值丰富，具有补益元气，生津止渴，安神健脑的特点。现代医学研究进一步证明，人参具有抗癌、抗肿瘤、强心、补肾、健体、安神、治疗心脑血管疾病和糖尿病、抗心脑缺血、抗疲劳、抗辐射、抗衰老、美容等多种功效。在人参的化学成分方面，人参皂苷、人参多糖、人参多肽是人参中的主要有效成分，除此之外，它还含有多种氨基酸、微量元素、脂肪酸和维生素等营养成分。
[0003]其中，人参皂苷具有良好的药理活性和保健功效，特别是一些含量甚微的稀有人参皂苷，具有极高的药用价值。
[0004]生物氧化是机体新陈代谢的重要生理过程，但此过程中会产生自由基等各种活性氧分子(R0S)。尽管正常情况下，机体存在着自由基清除系统，但如果机体受到某些因素影响，自由基清除系统出现故障导致体内自由基过度产生，则会作用于机体内的蛋白质、核酸等分子，造成细胞损伤，给机体健康带来很大威胁。通过膳食中补充抗氧化物质可以增强机体的抗氧化能力，但许多化学合成的抗氧化剂存在安全问题。而人参本身具有抗氧化能力，很利用人参这个特点，也研制出了一些抗衰老的美容产品，但由于人参本身表现的抗氧化水平不高，抗氧化效果不显著。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提高人参的抗氧化水平和稀有皂苷的含量，而提供一种植物乳杆菌发酵人参液方法。
[0006]植物乳杆菌LP1046株，它的保藏编号为:CGMCC N0.11172。
[0007]植物乳杆菌LP1046株在提高发酵人参液抗氧化水平中的应用。
[0008]植物乳杆菌LP1046株在提高发酵人参液稀有皂苷的含量中的应用。
[0009]—种植物乳杆菌发酵人参液方法，它包括:将保藏编号为CGMCC.N0.11172植物乳杆菌的种子发酵液，按2-5%接种量接种于人参液，发酵条件为:30-42 V摇床培养，转速为50-150r/min，发酵24_72h;所述的人参液为人参加水打浆。
[0010]本发明提供了一种植物乳杆菌发酵人参液方法，它包括:将保藏编号为CGMCC.N0.11172植物乳杆菌的种子发酵液，按3%接种量接种于人参液，发酵条件为:30-42°C摇床培养，转速为50-150r/min，发酵24-72h;所述的人参液为人参加水打浆。与普通植物乳杆菌相比，人参发酵液的抗氧化能力以及Rg3、F2含量都有很大的提高。
【附图说明】
[0011]图1LP1046菌株的革兰氏染色形态；
图2 LP1046菌株的PCR扩增片段图谱；
图3 LP1046菌株的同源性比对数据分析；
图4人参皂苷的薄层鉴别；
图5人参总皂苷中Rg3含量比较；
图6人参总皂苷中F2含量比较；
图7人参液在发酵后pH的变化示意图；
图8人参液在发酵后的DPPH自由基清除率；
图9人参液在发酵后T-AOC总抗氧化活性示意图；
图10人参液在发酵后超氧离子自由基能力变化示意图；
图11人参液在发酵后羟自由基能力变化示意图。
【具体实施方式】
[0012]实施例1乳酸菌的分离与鉴定 (I)乳酸菌的分离
将朝鲜族泡菜，浸泡于液体灭菌MRS培养基中，37 °C恒温培养20-24h，将菌液用划线法涂于MRS固体培养基，37°C恒温培养2d，挑选出疑似乳酸菌的单独菌落，经筛选得到LP1046株，经生理生化鉴定及16srRNA鉴定，确定为植物乳杆菌(Lactobaci I Ius plantarum)，于2015年8月7日，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码:100101，编号为CGMCCN0.11172；将植物乳杆菌CGMCC N0.11172接种于灭菌的液体MRS培养基，在37 °C温度下培养20-24h，活化后继续传代两次，每次接种量为3%，待菌种充分活化后，4°C冷藏待用。
[0013](2)乳酸菌的鉴定
从泡菜中筛选的菌株革兰氏染色结果为革兰氏阳性菌，如图1所示形态为短杆状;通过上海申工公司对菌液进行PCR，扩增后的产物经过琼脂糖凝胶电泳，如图2所示，在1200bp至1500处存在特异性条带。然后对扩增、纯化后的16S rDNA进行测序鉴定，测定该序列长为1488bp(见序列表I )，该菌株的16S rDNA序列在核糖体数据库http://rdp.cme.msu.edu/index.jsp上进行同源性比对，结果如图3所示，该菌株的16S rDNA与Lactobaci I Iusplantarum strain P215(EF204952)的16S rDNA具有较高的同源性，证实该LP1046株为植物乳杆菌。
[0014]实施例2利用菌株发酵提取人参皂苷 (I)鲜人参液的制备
选取新鲜人参清洗后晾干，置于高压灭菌锅内，121°C维持40min，打开灭菌锅取出人参;按人参:水=1: I打浆，121°C，20min灭菌冷藏。
[0015](2)利用植物乳杆菌发酵人参液
将实施例1中获取的植物乳杆菌CGMCC.N0.11172种子发酵液按3%接种量接种于人参液，进行发酵。发酵条件为:30-42°(:摇床培养，转速为50-15(^/1^11，时间为24-7211。人参发酵液冻干成粉末，待用。
[0016](3)人参皂苷的提取取发酵人参粉末约lg，精密称定，置索氏提取装置中，加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷溶液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入10ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50Hz )30分钟，过滤，精密称取滤液25ml，置于蒸发皿中蒸干，残渣加95%甲醇溶液4ml，溶解并转移至5ml容量瓶中，加入95%甲醇稀释至刻度，摇匀，既得人参皂苷样品。
[0017](4)人参皂苷含量测定
利用上述方法，对未发酵的人参液和利用植物乳杆菌ATCC8014发酵的人参液进行皂苷提取，将提取的皂苷与上述植物乳杆菌CGMCC.N0.11172种子发酵液提取的皂苷样品一起点于薄层层析板。点样步骤:点样位置为距薄层板底端Icm处，间距为7-8mm，吹干后置于展开剂中使其上行展层，展开剂是体积比为三氯甲烷:甲醇:水=10:5:1溶液，展层完毕后用10%硫酸溶液喷洒染色，并在烘箱中于105°C加热5min使皂苷显色，实验结果如图4所示，植物乳杆菌CGMCC.N0.11172发酵人参液后，其稀有皂苷Rg3和F2的含量显著增加。上述三种人参皂苷中Rg3的含量，如图5所示，植物乳杆菌CGMCC.N0.11172发酵人参液中Rg3含量较原人参液中含量提高了 I倍，标准株ATCC8014发酵后人参液中Rg3含量没有显著变化。同样用上述方法测量上述三种人参皂苷中F2的含量，如图6所示，植物乳杆菌CGMCC.N0.11172发酵人参液中F2含量达高到5.4mg/g，原人参液中没有检测到，标准株ATCC8014发酵后人参液中Rg3含量仅为0.53mg/g。
[0018]实施例3菌株发酵人参产品抗氧化能力测定
(I)人参液的制备:方法采用实施例2中(I)的制备方法制得，4°C保存备用。
[0019]植物乳杆菌CGMCC.N0.11172人参发酵液的制备:采用实施例2中(2)的制备方法；标准株植物乳杆菌ATCC8014人参发酵液的制备方法同上，得到的发酵液，4°C保存备用。
[0020 ] (2 )采用pH计直接测定pH值。实验结果如图7所示。
[0021](3 )采用DPPH法测定人参提取液与发酵液对DPPH自由基的清除能力，实验结果如图8所示。
[0022](4)按照T-AOC总抗氧化能力试剂盒的测定步骤，对人参提取液与发酵液的总抗氧化活性测定，结果如图9所示。
[0023](5)采用抑制与产生超氧阴离子自由基能力试剂盒的测定步骤，对人参提取液与发酵液超氧离子的清除能力测定，结果如图10所示。
[0024](6)采用羟自由基试剂盒的测定步骤，对人参提取液与发酵液羟自由基的清除能力测定，结果如图11所示。
【主权项】
1.植物乳杆菌LP1046株，它的保藏编号为:CGMCCN0.11172。2.植物乳杆菌LP1046株，其特征在于:提高发酵人参液抗氧化水平中的应用。3.植物乳杆菌LP1046株，其特征在于:提高发酵人参液稀有皂苷的含量中的应用。4.一种植物乳杆菌发酵人参液方法，其特征在于:它包括:将保藏编号为CGMCC.N0.11172植物乳杆菌的种子发酵液，按2_5%接种量接种于人参液，发酵条件为:30-42°C摇床培养，转速为50-150r/min，发酵24-72h;所述的人参液为人参加水打浆。
【文档编号】C12N1/20GK105861381SQ201610324485
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月17日
【发明人】王玉华, 南博, 游颖, 王雨珊, 王心哲, 朴春红, 刘俊梅, 于寒松
【申请人】吉林农业大学