一株植物乳杆菌及其在活性发酵乳中的应用
【专利说明】一株植物乳杆菌及其在活性发酵乳中的应用 发明领域
[0001] 本发明涉及一株乳杆菌属新菌株及其在活性发酵乳中的应用，更准确地说，本 发明描述了植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum)的一个新菌株LP-ONLLY，CGMCC No.1258〇
【背景技术】
[0002] 植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum)分布于多种自然环境，为人体原籍菌。 2005年，以我国66例出生1至7天的新生儿为研宄对象，其肠道细菌DNAPCR扩增克隆多 样性分析表明，植物乳杆菌为我国新生儿肠道中的优势乳杆菌，占所有检测乳杆菌的74% (张和春，杨国，王劲松，杭晓敏等.婴儿肠道细菌及乳杆菌种群多样性研宄.中国微生态学 杂志，2005, 17(4) :276?277)。千百年来，植物乳杆菌广泛地应用于发酵乳制品、肉制品、 植物产品和焙烤食品中。其主要作用在于能够产生乳酸、降低PH，防止腐败菌繁殖，改善产 品风味和质地，延长产品保质期。近年来，研宄发现，植物乳杆菌具有良好的益生菌功能，可 抑制包括幽门螺杆菌等胃肠道致病菌、改善胃肠道功能和代谢、增强肠道屏障功能、降低感 染风险等（ZL2004100933121. 8, 一种含有植物乳杆菌的组合物；ZL200410093213.X，一种 植物乳杆菌）。
[0003] 发酵乳制品是广受消费者喜爱的健康食品，含有益生菌的发酵乳制品，特别是能 够发挥益生菌功能的产品，即具有高活菌和高稳定性能的活性发酵乳，成为市场开发热 点。但已有的研宄表明，植物乳杆菌作为单独发酵剂应用于乳制品，在牛乳中生长极其缓 慢，产酸能力弱，其发酵乳无论从质构和口感上都难以让消费者接受。因此，一般情况下， 植物乳杆菌与嗜热链球菌或与酸奶发酵剂（嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌）联合应用于 发酵乳制品（于志会、张雪、李盛钰等，植物乳杆菌在酸奶中的应用，中国乳品工业，2013， 41(7) :27-30)，但由于嗜热链球菌或酸奶发酵剂在牛乳中生长较快，抑制了植物乳杆菌的 生长，发酵乳制品中植物乳杆菌活菌数低，无法发挥益生菌的健康功能。
【发明内容】
[0004] 鉴于以上问题，本发明的目的是提供一株植物乳杆菌及其在活性发酵乳中应用。 实现上述发明目的的解决方案如下：
[0005] 一 株植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum)LP-0NLLY，该菌株于 1989 年分 离自健康婴儿，原菌株代号为8901，其16SrRNA基因部分序列于GeneBank的登录号 为AY590777。分别于2004年12月6日和2011年3月28日在中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心（ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollection Center，简称CGMCC，地址：北京市海淀区中关村北一条13号中国科学院微生物研宄所， 邮编：100080)和法国微生物菌种保藏中心（CollectionNationaleDeCulturesDe Microorganisms,CNCM)保藏，保藏登记号分别为CGMCCNO. 1258 和CNCM1-4459。
[0006] 具体技术方案如下：
[0007] -株植物乳杆菌，所述植物乳杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心的保藏编号为CGMCCNO. 1258。
[0008] 所述植物乳杆菌包括氨肽酶、半乳糖苷酶、葡萄糖苷酶，所述氨肽酶包括亮氨 酸酰胺酶、缬氨酸酰胺酶和胱氨酸酰胺酶，
[0009] 所述亮氨酸酰胺酶、缬氨酸酰胺酶、胱氨酸酰胺酶、e-半乳糖苷酶、葡萄糖苷酶的 活性均达到40nmols以上。
[0010] 所述植物乳杆菌的凝乳能力为：在牛乳中，16小时内凝乳。
[0011] 所述植物乳杆菌在活性发酵乳中的应用。
[0012] 所述植物乳杆菌单独作为发酵剂使用，形态为冷冻干燥活菌粉，其活菌数大于 1. 0X10nCFU/g〇
[0013] 所述活性发酵乳的制备方法如下：配料、均质灭菌、产品发酵、冷却及冷藏；其中， 产品发酵时温度控制在37?42°C，发酵终点控制滴定酸度为70°T?90°T;
[0014] 所述配料中的原料重量百分比组成为：牛乳84%?94%，氮源0.25%?1.0%，碳 源5. 75%?15% ;所述植物乳杆菌的添加量为1.OX106CFU/ml?1.OX107CFU/ml。
[0015] 所述氮源是酪蛋白水解物、酵母抽提物、蛋白胨中的一种或多种，所述碳源是白砂 糖、葡萄糖、果葡糖浆中的一种或多种。
[0016] 所述活性发酵乳在冷链保存条件下，1个月内活菌可稳定在10亿CFU/g。
[0017] 本发明的植物乳杆菌及其制备的活性发酵乳具有下述优点：具有高氨肽酶活性、 高0 -半乳糖苷酶活性和高葡萄糖苷酶活性，其冷冻干燥活菌粉，作为单独发酵剂可应用 于活性发酵乳的制备。该活性发酵乳不仅含有高益生菌活菌，而且其中的活菌具有高稳定 性能，可补充益生菌，发挥植物乳杆菌LP-0NLLY的健康功能。
【具体实施方式】
[0018] 本发明的植物乳杆菌LP-0NLLY于1989年分离自健康婴儿，原菌株代号为8901， 其16SrRNA基因部分序列于GeneBank的登录号为AY590777。分别于2004年12月6日 和2011年3月28日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（ChinaGeneral MicrobiologicalCultureCollectionCenter,CGMCC)和法国微生物菌种保藏中心 (CollectionNationaleDeCulturesDeMicroorganisms,CNCM)保藏，保藏登记号分别为 CGMCCNO. 1258 和CNCM1-4459。
[0019] 实施例1植物乳杆菌LP-ONLLY的酶活评价
[0020] 酶活是发酵剂的重要指标，采用APIZYM试剂盒（法国梅里埃公司）对植物乳杆 菌LP-0NLLY和实验室保藏菌株一一植物乳杆菌LP6009的酶活进行半定量分析。根据试剂 盒操作说明，收集MRS培养液中生长的菌体细胞，用无菌水制备菌悬液用于下一步的酶活 分析。加入菌体和试剂后，试剂条的色泽深度由浅到深分为0?5共6个等级，0相当于阴 性反应，5为最强的反应。由色泽深度可知近似的菌体酶活，色泽1?5相当于释放的酶活 浓度分别为 5nmoles,lOnmols, 20nmols, 30nmols和 40nmols。
[0021] 由表1可知，植物乳杆菌LP-ONLLY较植物乳杆菌LP6009具有更高的氨肽酶和葡 萄糖苷酶活性，而两者均有较高的0 _半乳糖苷酶活性。
[0022] 氨肽酶活性对乳制品的成熟和风味影响关系密切；0 _半乳糖苷酶主要利用乳糖 产生乳酸，降低乳糖含量，促进凝乳；而葡萄糖苷酶则可利用葡萄糖或葡葡糖类低聚糖等， 另外，也有研宄发现，葡萄糖苷酶有利于乳杆菌合成胞外多糖，而使发酵乳质地细腻光滑。
[0023] 结论：植物乳杆菌LP-ONLLY的高氨肽酶活、高0-半乳糖苷酶活和高葡萄糖苷酶 活，使其能够应用于活性发酵乳制品的制备，从而给消费者带来风味和质地俱佳的益生菌 活性发酵乳。
[0024] 表1API ZYM试剂盒酶活分析（用色泽0?5表示酶活）
[0025]
【主权项】
1. 一株植物乳杆菌LP-ONLLY，其特征在于，所述植物乳杆菌在中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC NO. 1258。
2. 根据权利要求1所述的植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌包括氨肽酶、 0-半乳糖苷酶、葡萄糖苷酶，所述氨肽酶包括亮氨酸酰胺酶、缬氨酸酰胺酶和胱氨酸酰胺 酶， 所述亮氨酸酰胺酶、缬氨酸酰胺酶、胱氨酸酰胺酶、0 _半乳糖苷酶、葡萄糖苷酶的活性 均达到40nmols以上。
3. 根据权利要求1或2所述的植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌的凝乳能力 为：在牛乳中，16小时内凝乳。
4. 权利要求1或2或3所述的植物乳杆菌在活性发酵乳中的应用。
5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述植物乳杆菌单独作为发酵剂使用，形 态为冷冻干燥活菌粉，其活菌数大于1. 〇 X 10nCFU/g。
6. 根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述活性发酵乳的制备方法包括如下 步骤：配料、均质灭菌、产品发酵、冷却及冷藏；其中，产品发酵时温度控制在37?42°C，发 酵终点控制滴定酸度为70?90° T ; 所述配料中的原料重量百分比组成为：牛乳84?94%，氮源0.25?1.0%，碳源 5. 75?15% ;所述植物乳杆菌的添加量为1. OX 106CFU/ml?1. OX 107CFU/ml。
7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述氮源是酪蛋白水解物、酵母抽提物、 蛋白胨中的一种或多种，所述碳源是白砂糖、葡萄糖、果葡糖浆中的一种或多种。
8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述活性发酵乳在冷链保存条件下，1个 月内活菌可稳定在10亿CFU/g。
【专利摘要】本发明公开了一株植物乳杆菌及其在活性发酵乳中的应用，植物乳杆菌LP-ONLLY于2004年12月6日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏登记号为CGMCC NO.1258。该植物乳杆菌具有高氨肽酶活性、高β-半乳糖苷酶活性和高葡萄糖苷酶活性，其冷冻干燥活菌粉作为单独发酵剂可应用于活性发酵乳的制备。该活性发酵乳不仅含有高益生菌活菌，而且其中的活菌具有高稳定性能，可补充益生菌，发挥植物乳杆菌LP-ONLLY的健康功能。CGMCC No.125820041206
【IPC分类】A23C9-123, C12N1-20, C12R1-25
【公开号】CN104531587
【申请号】CN201410857162
【发明人】杭晓敏, 张旻, 张和春
【申请人】上海交大昂立股份有限公司, 上海诺德生物实业有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月30日