一株具有抗氧化活性的副干酪乳杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一株具有抗氧化活性的副干酪乳杆菌。
【背景技术】
[0002] 益生菌是指一类对宿主产生有益作用的活性微生物，通过定植于宿主肠道、生殖 系统内，能够对宿主产生确切的健康功效，从而改善宿主体内微生态平衡、发挥有益作用的 活性微生物的总称。乳酸菌作为益生菌中最具代表性的菌属，具有帮助消化、促进营养物质 的吸收、缓解乳糖不耐症、预防和治疗腹泻、调节肠道菌群和缓解便秘、调节机体免疫功能、 降低血液总的胆固醇、改善食物引起的过敏性疾病、延缓衰老及抗肿瘤等生理活性。
[0003] 氧化是生命必需的过程，氧化过程中产生的活性氧自由基对生理平衡是必需的， 但是过量的自由基在体内会产生危害。人体自身的抗氧化能力随年龄的增长而不断下降， 所以通过辅助手段来清除体内产生的氧自由基是非常必要的。大量试验研究表明，副干酪 乳杆菌具有抗氧化作用。然而，目前中国市场的乳酸菌产品使用的菌株多为国外供应商提 供的菌株，如丹麦科汉森公司的动物双歧杆菌BB12、芬兰维利奥公司的鼠李糖乳杆菌LGG 等，国内研发的具有自主知识产权的抗氧化的菌株少之又少，能够成功上市的菌株更是凤 毛麟角。
[0004] 目前，国内外研究比较多的有双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、 瑞士乳杆菌等菌株。然而，由于乳酸菌的益生活性具有菌株特异性，不同菌株之间的益生活 性差别较大。因此，需要更有针对性的筛选具有特殊生理活性的菌株，特别是我国有大量的 传统发酵食品，其中有大量的乳酸菌亟待研究与开发。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一株具有抗氧化活性的副干酪乳杆菌（Lactobaci I Ius paracasei)NCU622,以便解决中国市场上乳酸菌产品使用的菌株的国产化问题。
[0006] 本发明所述的菌株为副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei)NCU622,该菌株 具有抗氧化活性，已于2015年12月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），其简称为 CGMCC，保藏编号为 CGMCC 11886。
[0007] 本发明同时提供了一种组合物，该组合物包含所述副干酪乳杆菌NCU622。
[0008] 本发明所述的组合物可以是食品。
[0009] 本发明所述的副干酪乳杆菌NCU622为活菌或灭活菌或该菌株的衍生物。
[0010] 所述的食品可以是发酵果蔬、发酵乳、乳酪、含乳饮料、乳粉或其他含有该菌株或 该菌株衍生物的食品的任何一种。
[0011] 本发明所提供的菌株及其组合物具有抗氧化活性。具体包括：
[0012] 具有一定的DPPH自由基的清除能力、轻自由基的清除能力、总还原能力及抗脂质 过氧化能力。
[0013] 在发明所提供的体外试验证实，副干酪乳杆菌NCU622具有较好的胃肠道环境耐 受性及较强的黏附性能，对革兰氏阳性及阴性致病菌均具有较好的抑制作用，具有一定的 抗氧化活性。
[0014] 本发明所属领域技术人员根据上述说明即可利用本发明至最广的程度。因此，以 下说明仅作为示例说明，并非以任何方式限制其余的揭露内容。若本文所述及的明确完整 事物已在与本发明有关的相关技术中出现已知的同等物时，这些已知的同等物将视为独立 事项并入本文中。
[0015] 本发明提供了一株具有抗氧化活性的副干酪乳杆菌NCU622,该菌株或其组合物具 有一定的抗氧化活性。此外，副干酪乳杆菌NCU622还具有较好的胃肠道环境耐受性及较强 的黏附性能，对革兰氏阳性及阴性致病菌均具有较好的抑制作用。本发明菌株可以是食品 形式的组合物，并能发酵大宗果蔬产生酸鲜可口、营养丰富、天然果蔬味浓郁并具有良好保 健功能的益生菌高效发酵果蔬产品（泡菜、饮料、浆料），产品中无需添加任何香精香料、色 素、酸味剂、稳定剂、防腐剂等食品添加剂，所有风味由益生菌发酵果蔬原料产生。
【附图说明】
[0016] 图1为本发明分离菌株副干酪乳杆菌NCU622在MRS液体培养基中发酵的过程中， 发酵液的pH值、酸度的变化情况。
[0017] 图2为本发明分离菌株副干酪乳杆菌NCU622在MRS液体培养基中发酵的过程中， 发酵液中葡萄糖、乳酸及乙酸含量的变化情况。
[0018] 图3为本发明分离菌株副干酪乳杆菌NCU622对Caco-2细胞的黏附情况，（a)为 空白图，（b)为黏附图。
[0019] 图4为本发明分离菌株副干酪乳杆菌NCU622对DPPH自由基清除率的测定情况。
[0020] 图5为本发明分离菌株副干酪乳杆菌NCU622对羟自由基清除率的测定情况。
[0021] 图6为本发明分离菌株副干酪乳杆菌NCU622总还原力的测定情况。
[0022] 图7为本发明分离菌株副干酪乳杆菌NCU622抗脂质过氧化能力的测定情况。
【具体实施方式】
[0023] 下面将结合附图和实施例对本发明进行进一步详细的说明。
[0024] 实施例1 :菌株的筛选和鉴定。
[0025] 本发明分离菌株副干酪乳杆菌NCU622是自中国自然发酵酸牛奶中分离筛选获 得，具体分离鉴定步骤如下：
[0026] (1)菌株的分离与培养。
[0027] 取来源不同的中国自然发酵酸牛奶，采用10倍梯度稀释法，选择适宜稀释度，涂 布在初筛平板培养基（添加有溴甲酚紫的MRS固体培养基）上，37°C静置培养24~48h，比 较培养皿中菌落形态，选择生长快、菌落大、黄色菌圈大的菌株。将初筛挑选得到的菌株转 接到复筛平板培养基上，37°C厌氧培养。挑选在平板上钙圈较大、较明显和变黄色较快的菌 株，分别转接到牛胆盐含量为1. 〇%、PH值为2. 0的复筛液体培养基中，37°C培养20h。分 别取上述复筛液体培养基，采用平板梯度稀释法，涂布在复筛平板培养基上重复筛选，37°C 厌氧培养约48h，选择培养基上黄色、菌圈较大的单菌落，经过划线、分离后得到纯化的乳酸 菌株 NCU622。
[0028] (2)菌株的初步鉴定。
[0029] 形态学鉴定：将菌种活化后涂布于MRS固体平板上培养，取单菌落和革兰氏染色 后的菌落样品镜检。
[0030] 表1平板培养基上的菌落形态和镜检结果
[0032] 生理生化特性鉴定：用乳酸菌微量发酵管对菌株进行生化鉴定，根据菌株NCU622 的形态特征和生理生化特征，并参照伯杰氏细菌鉴定手册中有关乳酸菌的鉴定标准对其进 行分析，这株菌初步鉴定为干酪乳杆菌（Lactobacillus casei)。
[0033] 表2菌株NCU622微量发酵管鉴定结果
[0035] (3)菌株的分子生物学鉴定。
[0036] 取NCU622菌株培养物，离心得到菌体用于基因组的提取。利用细菌16s rDNA通 用引物 27f: 5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3'和 1492r: 5'-TAC GGC TAC CTT GTT ACG ACT T-3'进行PCR扩增，扩增产物测序得到的结果与Gene Bank中相关序列比对，结果确定 NCU622为副干酪乳杆菌。
[0037] 实施例2 :副干酪乳杆菌NCU622生长代谢分析。
[0038] 将副干酪乳杆菌NCU622接种于MRS液体培养基中，置于37°C恒温培养箱中培养， 分别于 0、2、