一种降低胆固醇的干酪乳杆菌及其生产益生菌酸奶的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种降低胆固醇干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei)Jl及其生产益生 菌酸奶的方法，干粉发酵剂和普通酸奶干粉发酵剂混合发酵生成益生菌酸奶，适用于发酵 乳制品中降胆固醇的益生菌酸奶、益生菌片、微生态制剂的生产。
【背景技术】
[0002] 益生菌（Probiotics)是指一类通过肠道定殖作用改善宿主特定部位微生态平衡 并兼有若干其他有益生理功能的微生物，其通过改善肠道微生物生态平衡，控制肠道感染， 降低血清胆固醇水平，提高乳糖不耐症人对乳糖的利用，并能刺激特异性或非特异性免疫 反应，具有免疫增强的作用。益生菌制品的活菌应该代谢稳定，活性较强，通过消化道后大 量存活，进入肠道后发挥益生菌作用。目前用于生产益生菌剂的优良菌种有双歧杆菌属、乳 杆菌属、乳球菌属中的乳酸乳球菌乳酸亚种等。
[0003] 本发明所用干酪乳杆菌J1菌株是从藏灵茹中分离纯化出来的一种益生乳酸菌， 可在生长代谢过程中产生大量高活力的胆盐水解酶，经过体外牛津杯试验和动物实验证明 有降低机体血清胆固醇含量的功效。其降低胆固醇机理是缘于干酪乳杆菌J1菌株代谢产 生的胆盐水解酶炬ileSaltHy化olase，BSH)，B甜是肠道中的双歧杆菌属、乳杆菌属、乳球 菌属中的多种乳酸细菌在生长过程中产生的代谢产物。大量实验证明，胆盐水解酶能在肝 肠循环中将结合胆盐分解，产生氨基酸与溶解度较低的游离胆盐。后者能与胆固醇结合形 成沉淀复合物而排出体外，从而降低血清总胆固醇的含量。早在1963年人们就证实摄取含 有某种乳杆菌或双歧杆菌发酵的酸奶具有降低血清胆固醇含量的功效。迄今为止，国内外 学者对乳酸菌降胆固醇作用机理的研究尚存在不同观点，主要集中于W下S点；（1)乳酸 菌菌体细胞直接吸收同化胆固醇；(2)乳酸菌的胆盐水解酶活性使结合态胆盐降解为游离 态胆盐，后者溶解度下降与胆固醇发生共同沉淀作用；（3)其他理论，如吸收同化与共沉淀 联合作用。
[0004] 国内关于干酪乳杆菌的研究主要是在降血脂、抗高血压、治疗过敏性疾病等 保健功效上，如上海光明乳业股份有限公司申请的"干酪乳杆菌Bd-II菌株及其在降 低血脂方面的应用"，专利申请号为；CN03128995.9 干酪乳杆菌LC2W菌株及其在抗 高血压方面的应用"，专利申请号为；CN03129450. 2 ;景岳生物科技股份有限公司申请 的"新的微生物株类干酪乳杆菌GM-080及其治疗过敏相关疾病的用途"，专利申请 号为；CN200410038566.X。虽然国外关于干酪乳杆菌降低血清胆固醇功效的研究也 有--项专利报道：Lactobacilluscaseibd-IIstainandusedtoreduceblood cholesterol(20060127380)，但是，目前国外有关干酪乳杆菌产胆盐水解酶的内容尚无专 利报道。虽然国内有一项"含罗伊氏乳杆菌的功能性酸奶及其制作方法（200310112715. 8)" 的专利报道，但是国内有关利用降胆固醇及高产胆盐水解酶的干酪乳杆菌应用于益生菌酸 奶的生产尚未见相关文献报道和专利报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种降低胆固醇干酪乳杆菌J1及其生产益生菌酸奶的方 法。
[0006] 本发明的技术方案是：一种降低胆固醇的干酪乳杆菌（LactobacilluscaseUjl， 分离普通家庭的藏灵茹（又称开菲尔粒）中，具有优异的产胆盐水解酶及耐受胃肠道逆环 境特性，可W调节肠道菌群的平衡，并有降低血清胆固醇等益生保健功效，该菌株已于2006 年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，保藏地址为；北京市 朝阳区大屯路，保藏号；CGMCCNo. 1808。
[0007] 本发明制备益生菌酸奶是由具有高效降低胆固醇及产胆盐水解酶的干酪乳杆菌 (Lactobacilluscasei)Jl干粉发酵剂和普通酸奶干粉发酵剂制得。
[0008] -种利用降胆固醇的干酪乳杆菌J1生产益生菌酸奶的方法，采用直投法添加干 粉发酵剂生产益生菌酸奶的工艺为；在发酵温度为37~43°C，发酵时间为6~化，庶糖添 加量为5%~8% (W/V，质量体积比浓度）前提下，干酪乳杆菌J1菌株干粉发酵剂接种量为 1%。（W/V，质量体积比浓度），普通酸奶干粉发酵剂的接种量为1%。（W/V，质量体积比浓度）， 干酪乳杆菌J1菌株干粉发酵剂与普通酸奶干粉发酵剂的接种比例为1:1 (W/W，质量分数）。
[0009] 所述方法中，普通酸奶干粉发酵剂为市售保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的混合菌 粉。
[0010] 本发明的效果是：添加干酪乳杆菌J1的干粉发酵剂制备的益生菌酸奶具有良好 的降低血清胆固醇功效。在不改变普通酸奶发酵工艺基础上，既可利用J1菌株产胆盐水 解酶特性制备降低血清胆固醇的酸奶，又解决了酸奶乳清析出问题，还降低了酸奶后酸化 程度，提高了酸奶黏度，产品在4°C条件下贬存21天后干酪乳杆菌J1的活菌数量可达到 106CFU/gW上，仍具有保健功能。
[0011] 本发明制作益生菌酸奶的原料来源方便，发酵工艺简单，发酵周期短，操作简单， 对设备要求低，成本较低，适于工业化生产。
[0012] 下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明。
【附图说明】
[0013] 附图是应用干酪乳杆菌J1(Lactobacilluscasei)Jl和普通酸奶干粉发酵剂生产 益生菌酸奶工艺流程图。
【具体实施方式】
[0014] 下述实施例对本发明作进一步说明而不限制本发明的保护范围。
[0015] 下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
[0016] 下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为质量体积比浓度（W/V)。
[0017] 一种降低胆固醇的干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei)Jl，分离普通家庭的藏灵 茹（又称开菲尔粒）中，具有优异的产胆盐水解酶及耐受胃肠道逆环境特性，可W调节肠道 菌群的平衡，并有降低血清胆固醇等益生保健功效，该菌株已于2006年9月11日保藏于中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，保藏号；CGMCCNo. 1808。
[0018] 本发明制备益生菌酸奶是由具有高效降低胆固醇及产胆盐水解酶的干酪乳杆菌 (Lactobacilluscasei)Jl干粉发酵剂和普通酸奶干粉发酵剂制得。
[0019] 一种利用降胆固醇的干酪乳杆菌J1生产益生菌酸奶的方法，采用直投法添加干 粉发酵剂生产益生菌酸奶的工艺为；在发酵温度为37~43°C，发酵时间为6~化，庶糖添 加量为5%~8% (W/V，质量体积比浓度）前提下，干酪乳杆菌J1菌株干粉发酵剂接种量为 1%。（W/V，质量体积比浓度），普通酸奶干粉发酵剂的接种量为1%。（W/V，质量体积比浓度）， 干酪乳杆菌J1菌株干粉发酵剂与普通酸奶干粉发酵剂的接种比例为1:1 (W/W，质量分数）。
[0020] 所述方法中，普通酸奶干粉发酵剂为市售保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的混合菌 粉。
[0021] 附图中，应用干酪乳杆菌J1(Lactobacilluscasei)Jl和普通酸奶干粉发酵剂生 产益生菌酸奶工艺流程，包括下列步骤：
[0022] (1)原料乳：制作酸奶的原料乳要求不含抗生素和消毒药，菌数低于1〇4个/mL。
[0023] (2)净化；W离屯、机除去牛乳中的白细胞和其他肉眼可见的杂质。
[0024] (3)标准化；原料乳的主要成分指标应符合食品卫生国家标准GB5408-85。其总 干物质应不低于11. 5%，脂肪含量1.0%~3. 2%。
[002引 （4)预热、配料和过滤：将原料乳加热至60°C左右，加入5%~8% (W/V，质量体积 比浓度）的庶糖，溶解后过滤除杂。
[002引 妨均质；在均质机中于8~lOMPa压力下对预热的原料乳进行均质处理。
[0027](6)杀菌；将原料乳加热至90~95°C，保温5~lOmin。
[0028](7)冷却；经杀菌后的原料乳迅速冷却至37~43°C，待接种。
[002引 做接种；干酪乳杆菌J1菌株干粉发酵剂接种量为1.0%。（W/V，质量体积比浓 度），普通酸奶干粉发酵剂的接种量为1. 0%。（W/V，质量体积比浓度），干酪乳杆菌J1菌株 干粉发酵剂与普通酸奶干粉发酵剂的接种比例为1:1 (W/W，质量分数）。
[0030] (9)分装；分装于塑料小容器的操作应在无菌室中快速进行。
[0031] (10)保温发酵；将塑料小容器置于发酵室中保持发酵温度37~43°C，发酵时间为 6 ~3h。
[003引 山）冷却；从发酵室取出，冷却至1(TC臥下。
[003引冷藏与后熟；经冷却处理的酸奶，贬藏于0~5°C冷藏室中保存，直至饮用。 [0034] 1、利用降胆固醇的干酪乳杆菌J1在益生菌酸奶中应用实验
[00巧](1)、干酪乳杆菌J1干粉发酵剂添加量对酸奶后酸化的影响
[0036] 在普通酸奶干粉发酵剂接种量为1. 0%。的前提下，干酪乳杆菌J1干粉发酵剂添加 量分别为1. 〇%。、1. 5%。、2. 0%。，经过37~43°C发酵6~化后，用0.Imol/LNaOH溶液测定 干酪乳杆菌J1干粉发酵剂添加量为1. 〇%。、1. 5%。、2. 0%。贬藏至第ld、W、l如、21d的酸奶酸 度，并W未添加干酪乳杆菌J1干粉发酵剂的普通酸奶为对照组，单位W吉尔涅耳度（°T) 表不，结果见表1。
[0037] 表1不同干酪乳杆菌J1干粉发酵剂添加量对酸奶后酸化的影响
[0038]
【主权项】
1. 一种降低胆固醇的干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei)Jl，分离普通家庭的藏灵葫 中，具有优异的产胆盐水解酶及耐受胃肠道逆环境特性，可以调节肠道菌群的平衡，并有降 低血清胆固醇等益生保健功效，该菌株已于2006年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCCNo. 1808。
2. -种利用如权利要求1所述的降低胆固醇的干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei)Jl 生产益生菌酸奶的方法，其特征在于：发酵温度为37~43°C，发酵时间为6~3h，蔗糖添加 量为5%~8%，益生干酪乳杆菌Jl菌株干粉发酵剂接种量为1 %。，普通酸奶干粉发酵剂的 接种量为1%。，干酪乳杆菌Jl菌株干粉发酵剂与普通酸奶干粉发酵剂的接种比例为1:1。
3. -种如权利要求2所述的利用降低胆固醇的干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei)Jl 生产益生菌酸奶的方法，其特征在于：干酪乳杆菌Jl益生菌酸奶，经动物实验证实具有良 好的降低血清胆固醇功效，可作为功能食品开发应用。
【专利摘要】一种降低胆固醇干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)J1。技术方案是：干酪乳杆菌(Lactobacillus casei J1)分离筛选自普通家庭的藏灵菇(又称开菲尔粒)，并已于2006年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为：CGMCC No.1808。本发明还公开了利用干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)J1生产益生菌酸奶的方法。在不改变普通酸奶发酵工艺基础上，既可利用J1菌株产胆盐水解酶特性制备降低血清胆固醇的酸奶，又解决了酸奶乳清析出问题。本发明制作的益生菌酸奶的发酵工艺简单，发酵周期短，成本较低，适于大规模工业化生产。CGMCC No. 180820060911
【IPC分类】C12N1-20, A23C9-123, C12R1-245
【公开号】CN104774783
【申请号】CN201510090444
【发明人】白永强, 刘慧 , 张红星, 高鹏飞, 熊利霞, 张晶, 谢远红, 高秀芝, 金君华
【申请人】北京和美科盛生物技术有限公司
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年2月28日