一种酵母菌株、其培养方法以及应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及酵母菌领域，具体而言，设及一种酵母菌株、其培养方法W及应用。
【背景技术】
[0002] 增香酵母是一类能够产生芳香气味物质的酵母，目前增香酵母对酱油、酒类等食 品在酿造过程中风味物质的形成起到重要的作用，但由于风味物质的形成过程非常缓慢， 目前仍了解甚少。日本学者横缘保根据检出的耐盐酵母的发酵性能、香气成分等将所用酵 母分为=类；（1)鲁氏酵母群发酵生长良好的一群；（2)生长发酵均不良的一群；（3)生长 缓慢，最后赋予发酵膠液优良风味的酵母群。属于第一类的主要是鲁氏酵母，而球拟酵母属 于第=类。目前常用的产香酵母为鲁氏接合酵母和球拟酵母，在酱油酿造过程中，此2种酵 母菌可W通过不同的代谢途径产生多种芳香味化合物，进而赋予发酵产品特殊的香味，在 发酵产品的特殊风味形成中发挥重要的作用。
[000引 菌种Myerozymacaribbica无性型为Candidafermentati;曾用名为Candida car;ribica、Pichiacarribica、Torulafermentati，是发酵食品中常见的增香酵母菌株。 Myerozymacaribbica常用于发酵食品，如酱油、醋鱼子酱等，用W增加风味物质W及代谢 合成芳香味化合物W及VB1等功能活性物质。
[0004] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0005] 本发明的第一目的在于提供一种酵母菌株，所述的酵母菌株发酵后具有浓郁的香 蕉香味，对发酵物风味物质的形成起到重要的作用。
[0006] 本发明的第二目的在于提供一种所述的酵母菌株的培养方法，通过筛选最佳的培 养基W及发酵条件，为酵母菌株提供最充足的营养成分，使其快速生长，产香更浓郁。
[0007] 本发明的第S目的在于提供一种所述的酵母菌株的应用。
[000引为了实现本发明的上述目的，特采用W下技术方案：
[0009] 一种酵母菌株，2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中屯、，地址；中国.武 汉.武汉大学，邮编；430072,保藏号为CCTCCNO;M2014330,保藏名称为Myerozyma caribbicaGZUMc6。
[0010] 本发明提供的酵母菌株，菌落形态为圆形、近圆形，直径为0.10-0. 16mm，边缘银齿 状，菌落干燥，表面粗趟，杏白色，具有浓郁的香蕉香味；保藏于中国典型培养物保藏中屯、， 保藏名称为MeyerozymacaribbicaGZUMc6,保藏号为CCTCCM2014330。
[0011] 本发明还提供了所述的酵母菌株的培养方法，所述酵母菌株的发酵培养基的碳源 为葡萄糖，氮源为牛肉膏和酵母膏的混合物，微量元素为化S〇4和MnS〇4。
[0012] 本发明通过对酵母菌株的培养基成分碳源、氮源W及微量元素进行筛选，得到的 培养基能很好的满足酵母菌株生长的需求。
[001引进一步地，所述牛肉膏和酵母膏的质量比为1:0. 9-1. 1。^该配比得到的牛肉膏和 酵母膏的混合物，能更好的满足酵母菌株的生长需求。
[0014] 为了更好的满足菌株发酵生长的需求，优选地，所述发酵培养基包括W下成分：按 重量百分数计，葡萄糖1.9% -2. 1%，牛肉膏和酵母膏1.4% -1.6%，FeS〇4〇. 10-0.llg/L， MnS〇4〇. 06-0. 07g/L。
[0015] 更优选地，所述发酵培养基包括W下成分：按重量百分数计，葡萄糖1.5%，牛肉 膏和酵母膏 2. 5%，FeS〇4〇.llg/L，MnS〇4〇. 07g/L。
[0016] 更优选地，所述发酵培养基包括W下成分：按重量百分数计，葡萄糖2. 5%，牛肉 膏和酵母膏 1. 5%，FeS〇4〇.llg/L，MnS〇4〇. 06g/L。
[0017] 最优选地，所述发酵培养基包括W下成分：按重量百分数计，葡萄糖2%，牛肉膏 和酵母膏 1. 5%，FeS〇4〇.llg/L，MnS〇4〇. 06g/L。
[001引本发明还对该酵母菌株的发酵条件进行了摸索，为了使发酵过程更优化，优选地， 所述酵母菌株的发酵条件为：摇床转速为175-185巧m，培养温度为24-26°C，发酵培养基的 抑为6. 4-6.6,发酵培养基的菌体终浓度为4.8X106-5. 2X106cfu/ml。
[0019] 更优选地，所述酵母菌株的发酵条件为；摇床转速为18化pm，培养温度为25°C，发 酵培养基的抑为6. 5,发酵培养基的菌体终浓度为5X106c化/ml。
[0020] 本发明还提供了所述的酵母菌株在增香发酵中的应用。本发明提供的酵母菌株在 酵素、酱油、醋、果酒等发酵中均取得了很好的增香效果，得到的发酵物风味独特，对发酵物 风味物质的形成起到非常重要的作用。
[0021] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0022] (1)本发明提供的酵母菌株，培养后具有浓郁的香蕉香味，对发酵产物的风味具有 非常重要的作用；
[0023] (2)本发明通过优化酵母菌株发酵培养基的成分，得到的发酵培养基很好的满足 了酵母菌株在发酵过程中对营养需求；
[0024] (3)本发明通过优化酵母菌株发酵条件的摸索，得到的发酵条件很好的满足了酵 母菌株在发酵过程中对生长环境的需求。
【附图说明】
[0025] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，W下将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0026] 图1为本发明实施例3中不同碳源物质的活菌数的曲线图；
[0027] 图2为本发明实施例3中不同氮源物质的活菌数的曲线图；
[002引图3为本发明实施例3中微量元素为Mg"的活菌数的曲线图；
[0029] 图4为本发明实施例3中微量元素为Fe2+的活菌数的曲线图；
[0030] 图5为本发明实施例3中微量元素为Mn2+的活菌数的曲线图。
【具体实施方式】
[0031] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可w通过市售获得的常规产品。
[0032] 实施例1
[0033] 1.酵母菌的分离
[0034] 1. 1原料选择
[0035] 已成熟，无腐烂、病虫害的生姜（新鲜的）、擲猴桃、苹果、金较石解、山桂、巧樣、葡 萄、桂圆、渡萝蜜、芒果、山药、西红柿、萝K草替、鱼腥草、抽子、洋葱、紫馨、花挪菜、包菜、 胡萝h;
[0036] 原料用量；W上所有原料用量均为300g。
[0037] 1. 2制作方法
[003引清洗W上水果和蔬菜等选出烂果、烂叶，去掉泥，去除梗、壳；
[0039] 用自来水清洗干净，转入食盐浓度为5 %的盐水里浸泡1小时，再用清水冲洗干 净，虑干；
[0040] 将清洗干净并虑干的果蔬原料用揽拌机打浆，转入20L的玻璃瓶中；
[0041] 按10-15% (g/g)的比例向打成浆的原料中加入红糖，揽拌均匀；
[0042] 26-30°C培养10-20天得到发酵酷；
[0043] 取发酵酷（即发酵第10、20天）的发酵膠样品各lOg，分别放入盛有90ml无菌水 的=角瓶中，振荡5分钟，充分摇匀，稀释至合适浓度，吸取100y1涂布分离培养基平板。 28 +rC静置培养2d，根据酵母菌的菌落大小、形态和颜色等表型特征挑取单菌落，转接相 应培养基斜面，28±rC静置培养2d，编号保存备用。共分离到308株酵母菌株。
[0044] 将于28±rc静置培养2化左右的酵母斜面菌种，用无菌水洗下菌苔，加入到灭菌 离屯、管中，W1000化pm的速度离屯、15s，将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗漆2次后，备用。 菌株DNA提取按照试剂盒标准抽提步骤进行，得到各菌株的DNA。
[0045] 2.ITS-5.8SrDNAPCR扩增
[0046] WITSU5，-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3，）、ITS4巧，-TCCTCCGCTTATTGA TATGC-3')为引物，W不同酵母菌的提取的总DM为模板进行PCR扩增。在PCR反应管 中加入DNA模版lyl，2XMix13yl，10yMITS1lyiaOyMITS2lyl，（1地2〇 9yl，混 匀后进行PCR反应。PCR扩增反应条件为；94°C预变性