一种可预防胃溃疡的发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum Lee及其保健用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种可预防胃溃疡的发酵乳杆菌 LactobacillusfermentumLee及其用途。
【背景技术】
[0002] 乳杆菌与人类生活关系密切，是广泛应用于食品发酵、工业乳酸发酵及医疗保健 领域中的有益微生物之一。现已认识的乳杆菌属和双歧杆菌属中的许多种都具有特定的优 良性质和遗传性状，表现出极强的益生菌特性。乳杆菌不仅能够提高食品营养价值，改善并 赋予食品风味，减少香精香料等在食品中的添加，延长保存时间，还可以改善食品的功能性 质。它能够通过分解食物中的蛋白质、糖类、合成维生素，提高食物的消化率和生物价，促进 消化吸收，防治便秘，防治细胞老化。还能够减少人体胆固醇含量，改善血脂，增强免疫功 能、抗变异原性、抗肿瘤、抗高血压等。近年来，乳杆菌以其特殊的生理活性和营养功能而成 为益生菌的主要来源，正日益引起人们的重视。
[0003] 胃溃疡是消化性溃疡中最常见的一种，在我国发病率较高，可发生于任何年龄，尤 以青壮年居多。胃溃疡表现为胃粘膜组织损伤，也会引发组织出现炎症。胃溃疡的临床表 现为上腹疼痛呈反复周期性发作，多表现为钝痛、灼痛或饥饿样痛，绝大部分人可出现各种 消化不良的症状，但是有的也无任何症状，直至出现并发症。严重的并发症主要有出血、穿 孔、癌变等，若不及时处理，可导致2. 5%~8.0%的病死率。出现胃溃疡的症状下由于胃部 不适，患者进食困难，慢性胃溃疡患者长期进食困难，还会引起营养不良、免疫力下降等问 题。部分患者可出现溃疡恶化，严重影响患者身体健康和生活质量。一般来说胃溃疡本身 不会引起患者死亡，一般经药物治疗后，症状缓解或消失，但溃疡愈合质量差，停药后极易 复发，给患者的身心健康带来极大的危害。因此，寻找一种能够代替药物来预防胃溃疡的生 物制品有很大的现实意义，微生态疗法恰是以一个崭新的手段解决了传统疗法存在的多种 问题。
[0004] 国内外对乳酸菌的生理功能有大量的研究报道，但对乳酸菌预防胃溃疡的功能性 研究报道很少。关于乳酸菌预防胃溃疡的研究对食品科学、预防医学和微生态学等许多学 科都有很大价值。发酵乳制品是人们摄入乳酸菌的一条重要渠道，筛选优良的具有预防胃 溃疡和安全的乳酸菌菌株，对于开发功能性乳制品、丰富现有乳制品种类、提高乳品的附加 值将具有重要意义。因此，具有预防胃溃疡的乳酸菌具很大的研究和应用价值。
[0005] 在目前已经公开的文献与专利或专利申请中，例如CN104489687A公开了一株副 干酪乳杆菌与中药材提取物复配，可用于预防和治疗非酒精性脂肪肝。CN104450586A公开 了一种干酪乳杆菌及其组合物，所提供的干酪乳杆菌对糖肽类、单环内酰胺类和碳青 霉烯类抗生素及磺胺具有耐受性，适用于食品、药品和/或保健品中。CN103333847A公开一 株发酵乳杆菌，能够促进体内胆固醇的转化和分解，能有效降血脂。CN103756926A公开了一 株具有耐酸性，在体内外对铜离子有较好的耐受能力的植物乳杆菌，可用于制备缓解铜毒 性的药物组合物和发酵食品中。CN1796540A公开了具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧 杆菌及其用途，用于制备食品组合物或药物组合物，杀死或抑制幽门螺旋杆菌或大肠杆菌， 治疗由其引起的各种疾病。CN104430847A和CN104381440A采用相同发酵乳预防便秘保健 用途。但是，这些专利或专利申请没有完全涉及具有预防胃溃疡性能的微生物或其功能。因 此，目前还需要有一种具有预防胃溃疡的微生物及其含有它们的食品。
【发明内容】
[0006] 为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种可预防胃溃疡的发酵乳杆菌及其用 途，主要提供一种可预防胃溃疡的发酵乳杆菌菌株和提供一种所述发酵乳杆菌在发酵食品 中的用途。
[0007] 本发明提供的一种可预防胃溃疡的发酵乳杆菌（LactobacillusfermentumLee) 已于2013年10月25日保藏于中国典型培养物保藏中心（中国.武汉.武汉大学），保藏 编号CCTCCN0:M2013512。
[0008] 从自然发酵牦牛酸乳中筛选出一株发酵乳杆菌（Lactobacillusfermentum Lee)，利用形态特征、培养性状和生理生化特征等微生物学特性对该乳酸杆菌 (LactobacillusfermentumLee)鉴定为发酵乳杆菌，该菌株已于2013年10月30日保藏 于中国典型培养物保藏中心（CCTCC)，保藏编号CCTCCM2013512。
[0009] 所述发酵乳杆菌的形态学特征具体为：
[0010] 菌体特征：呈革兰氏染色阳性，细胞杆状，菌体约0. 5-1. 0ym宽，1. 5-4ym长，成 单、成对或者成链，不形成芽孢，两端圆形。
[0011] 菌落特征：在MRS培养基上形成明显的菌落，直径在0. 5-2. 0mm之间，圆形，边缘整 齐，乳白色，透明，表面湿润光滑，不产生色素。
[0012] 所述发酵乳杆菌体内耐受特征为：发酵乳杆菌的菌株耐酸性较强，在pH3. 0的人 工胃液下3h后存活率为40. 48±1. 84% ;在0. 3%浓度胆盐下存活率达到60% ;发酵乳杆 菌细胞的疏水性为15. 17±6. 20%。
[0013] 本发明的目的还在于提供可预防胃溃疡LactobacillusfermentumLee发酵乳杆 菌的保健用途：所述发酵乳杆菌制得的发酵乳杆菌工作发酵剂添加到乳制发酵食品中，所 述发酵乳杆菌工作发酵剂的制备步骤包括：将所述发酵乳杆菌的原始菌种接种于MRS液体 培养基中，在37°C条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4% (体积）接种于MRS培养基中，培养16-18h，在4°C条件下4000r/min离心15min，去除上清 夜，得到细胞沉淀，将沉淀用无菌脱脂乳制成悬浮液，得到工作发酵剂。
[0014] 所述乳制发酵食品包含乳酸菌奶饮料、乳粉、胶囊制品和发酵乳。
[0015] 所述含有发酵乳杆菌的乳酸菌奶饮料是按照下述步骤制备得到的：
[0016] 所述发酵乳杆菌的原始菌种在温度_75°C下以30% (重量）甘油悬液形式保存， 或者在温度4°C下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；
[0017] 原料乳在95°C下加热杀菌20min或在140°C下高温热杀菌2s，冷却到4°C，加入所 述发酵乳杆菌工作发酵剂，使其浓度达到106cfu/mL以上，在4°C冷藏保存。
[0018] 所述含有发酵乳杆菌的乳粉是按照下述步骤制备得到的：
[0019] 所述发酵乳杆菌的原始菌种在温度_75°C下以30% (重量）甘油悬液形式保存， 或者在温度4°C下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；
[0020] 原料乳在95°C下加热杀菌20min或在140°C下高温热杀菌2s，然后冷却到37°C， 再以原料乳体积的4%接菌量接种所述的发酵乳杆菌工作发酵剂，37°C下发酵16h，得到发 酵乳杆菌发酵乳；所述发酵乳杆菌发酵乳和灭菌后的原料乳按照1:3(V:V)配比加入，进行 均质，真空浓缩、喷雾干燥得到含发酵乳杆菌的乳粉。
[0021] 所述含有发酵乳杆菌的胶囊制品是按照下述步骤制备得到的：
[0022] 所述发酵乳杆菌的原始菌种在温度_75°C下以30% (重量）甘油悬液形式保存， 或者在温度4°C下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；
[0023] 将原料乳在140°C高温热杀菌2s，然后冷却至37°C，以原料乳体积的4%接菌量接 种所述发酵乳杆菌工作发酵剂，在37°C下发酵16h，得到发酵乳杆菌发酵乳；将所述发酵乳 杆菌发酵乳和灭菌后的原料乳按照以1:3(V:V))配比加入，均质，真空浓缩、喷雾干燥处理 后得到乳粉，将得到含有发酵乳杆菌的胶囊制品。
[0024] 所述含有发酵乳杆菌的发酵乳是按照下述步骤制备得到的：
[0025] 所述发酵乳杆菌的原始菌种在温度_75°C下以30% (重量）甘油悬液形式保存， 或者在温度4°C下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用；
[0026] 原料乳在95°C下加热杀菌20min或在140°C下高温热杀菌2s，然后冷却到37°C， 再按照3-5% (体积）加入发酵乳杆菌工作发酵剂，再加入3-5% (体积）可共生的用于制 备发酵乳制品的发酵剂，混匀后在37°C下混菌发酵至滴定酸度以乳酸计0. 6-0. 7%，然后 冷却至4°C，再进行冷藏保存得到含有发酵乳杆菌的发酵乳。
[0027] 所述发酵乳杆菌工作发酵剂的制备方法包括：
[0028] 将所述发酵乳杆菌的原始菌种接种于12% (重量）的脱脂乳中，110°C灭菌 lOmin，在37°C条件下培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂；将所述母 发酵剂按3-5% (体积）接种于灭菌乳中，培养14-16h至凝乳，此时该凝乳中的活菌数约 109cfu/mL，得到工作发酵剂，可以直接将这种工作发酵剂添加到食品中，或者与可共生的 制备发酵乳的商业发酵剂如保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌一起使用制备发酵乳；或
[0029] 将所述发酵乳杆菌的原始菌种接种于MRS液体培养基中，在37°C条件下培养 12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4% (体积）接种于