本发明属于医药技术领域，尤其涉及人参皂苷rh4的用途。
背景技术：
人参为五加科植物人参panaxginsengc.a.meyer的干燥根，作为珍贵药材，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺之功能。研究表明，人参皂苷具有人参的主要生理活性和有效成分。人参皂苷属三萜皂苷，根据皂苷元结构不同，可分为三类：一类为齐墩果烷型五环三萜皂苷，另两类均为达玛烷型的四环三萜类皂苷。
第一类皂苷的皂苷元为齐墩果酸，主要存在于含三萜类皂苷的植物中，自然界中不多见。后两类在人参皂苷中占大多数。在达玛烷型人参皂苷中，根据皂苷元的不同可进一步分为两类：人参二醇型皂苷和人参三醇型皂苷。其皂苷元分别为：20(s)-原人参二醇和20(s)-原人参三醇。一般人参中含原人参二醇类皂苷为45％～60％，含原人参三醇类皂苷为12％～20％，含齐墩果酸类皂苷为7％～10％。人参二醇组皂苷包括人参皂苷rb1、rb2、rc、rd、rh2、rg3、c-k、ppd等，人参三醇组皂苷包括人参皂苷rg1、rg2、re、f1、rh1、ppt等。人参中的主要皂苷是rb1、rb2、rc、rd、re、rg1。人参稀有皂苷主要为rg3、rg5、rg2、rh1、rh2、rh3、rh4，主要存在于红参中，是其生理活性不同于白参的物质基础。
目前，对人参稀有皂苷的药物活性主要几种在具有较强的抗癌抗肿瘤等药理作用上，而对其他作用研究较少。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种人参皂苷rh4的新用途。
本发明提供了一种人参皂苷rh4在抑制脂肪酶活性中的应用。
优选的，所述人参皂苷rh4的剂量为15～60μg/ml。
优选的，所述脂肪酶为胰脂肪酶。
本发明还提供了一种人参皂苷rh4在制备脂肪酶抑制剂中的应用。
本发明还提供了一种人参皂苷rh4在制备减肥药中的应用。
优选的，所述人参皂苷rh4的剂量为12.5～50mg/kg。
本发明还提供了一种人参皂苷rh4在制备降血脂药物中的应用。
优选的，所述人参皂苷rh4的剂量为12.5～50mg/kg。
本发明提供了一种人参皂苷rh4在抑制脂肪酶中的应用。通过实验证明，人参皂苷rh4对脂肪酶有一定的抑制作用，尤其是胰脂肪酶，可通过与胰脂肪酶活性部位共价结合而使其失活，抑制甘油三酯水解，并使单甘酯与游离脂肪酸的摄入减少，从而达到减肥与降血脂的作用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种人参皂苷rh4在抑制脂肪酶活性中的应用。其中，所述脂肪酶为本领域技术人员熟知的脂肪酶即可，并无特殊的限制，在本发明的一些实施例中，所述脂肪酶优选为胰脂肪酶。
人参皂苷rh4用于抑制脂肪酶活性的剂量优选为15～60μg/ml，更优选为30～60μg/ml。
本发明还提供了一种人参皂苷rh4在制备脂肪酶抑制剂中的应用。
脂代谢在人体能量平衡中至关重要。脂代谢失衡便会导致肥胖和高血脂症，进而引起一系列对健康有严重威胁的疾病，包括动脉粥样硬化、高血压、糖尿病以及器官功能性衰退等。因此通过药物控制脂代谢可以治疗以上相关疾病。脂肪酶是用来消化包括三酯酰甘油以及磷酸酯等脂肪的酶类，而对脂肪酶的抑制可减少脂肪的吸收。
本发明还提供了一种人参皂苷rh4在制备减肥药中的应用；优选还包括药学上可接受的辅料。
人参皂苷rh4可单独使用，也可将其与任何用于制备临床药剂的赋形剂混 合使用，制备成口服剂、外用制剂、注射剂等临床可接受的药物剂型使用，优选为口服制剂。
本发明中，所述人参皂苷rh4用于制备减肥药使用时，其剂量优选为12.5～50mg/kg。
本发明还提供了一种人参皂苷rh4在降血脂药物中的应用；优选还包括药学上可接受的辅料。
人参皂苷rh4可单独使用，也可将其与任何用于制备临床药剂的赋形剂混合使用，制备成口服剂、外用制剂、注射剂等临床可接受的药物剂型使用，优选为口服制剂或注射剂。
所述人参皂苷rh4制备降血脂药物使用时，其剂量优选为12.5～50mg/kg，更优选为25～50mg/kg。
本发明提供了一种人参皂苷rh4在抑制脂肪酶中的应用。通过实验证明，人参皂苷rh4对脂肪酶有一定的抑制作用，尤其是胰脂肪酶，可通过与胰脂肪酶活性部位共价结合而使其失活，抑制甘油三酯水解，并使单甘酯与游离脂肪酸的摄入减少，从而达到减肥与降血脂的作用。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的人参皂苷rh4的用途进行详细描述。
以下实施例中所用的试剂均为市售。
实施例1人参皂苷rh4对脂肪酶的抑制作用
1.药物、材料与方法
1.1药物
人参皂苷rh4，由江苏康缘药业股份有限公司提供。
1.2材料
猪胰脂肪酶、4-硝基苯棕榈酸酯、阿拉伯树胶粉、奥利司他，sigma公司；
tris，amersco；
异丙醇，国药集团化学试剂有限公司；
脱氧胆酸钠，国药集团化学试剂有限公司；
dmso，国药集团化学试剂有限公司；
盐酸，南京化学试剂有限公司。
酶标仪，moleculardevicesspectramaxm2e；
天平，mettlertoledoal104；
离心机，eppendorf5424。
1.3方法：
(1)试剂配制
药品配制：称取样品溶于dmso中配制成200mg/ml母液，-20℃保存。缓冲液配制：50mmol/ltris-hcl溶液，含0.1％阿拉伯树胶粉和0.2％脱氧胆酸钠，ph值为10.0。酶溶液配制：用缓冲液配制1.2mg/ml酶，混匀，5000rpm离心5分钟，取上清，分装，-70℃保存。底物溶液配制：称取0.302gpnpp(4-硝基苯棕榈酸酯)，加入32ml异丙醇，超生乳化，即为25mmol/lpnpp，分装，4℃保存。
(2)脂肪酶抑制剂活性测定
在96孔细胞培养板中，加入198μl缓冲液，再加入9.6μl50mg/ml样品母液，混匀，使其初浓度为2.4mg/ml。再用缓冲液进行倍比稀释使其浓度依次为1.2mg/ml、0.6mg/ml、0.3mg/ml、0.15mg/ml。脂肪酶用缓冲液稀释120倍，底物用缓冲液稀释50倍。以上稀释后的试剂待用。取96孔细胞培养板，按照表1中不同的分组分别加入缓冲液、抑制剂和脂肪酶，37℃孵育10分钟。脂肪酶和抑制剂预孵育10分钟后，每孔加入100μl底物，37℃反应60分钟。在酶标仪od405nm处测量各孔的吸光值。
表1脂肪酶抑制剂筛选反应体系
注：a为未加抑制剂的酶活；a为未加抑制剂的空白对照(未加酶)；b为加抑制剂的酶活；b为加抑制剂的空白对照(未加酶)。
2.结果处理及分析
脂肪酶抑制率的计算公式：inhibitionrate％＝[1-(b-b)/(a-a)]×100。
对脂肪酶抑制作用的检测结果如表2所示。由表2可见，人参皂苷rh4各剂量组均可不同程度的抑制脂肪酶活性。
表2脂肪酶的抑制作用检测结果
注：**p<0.01，与对照组比较具有极显著差异。
实验结果表明，人参皂苷rh4对脂肪酶具有体外抑制作用，且呈现量效关系。
实验例2：人参皂苷rh4对高脂血症大鼠的降血脂作用
1.药物、材料与方法
1.1药物
人参皂苷rh4，由江苏康缘药业股份有限公司提供
1.2材料
辛伐他汀，sigma公司；
天平，mettlertoledo；
离心机，eppendorf5424；
酶标仪，moleculardevicesspectramaxm2e；
总胆固醇(tc)测定试剂盒、甘油三酯(tg)测定试剂盒、低密度脂蛋白(ldl-c)测定试剂盒及高密度脂蛋白(hdl-c)测定试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司；丙氨酸氨基转移酶(alt)测定试剂盒、天门冬氨酸氨基转移酶(ast)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。
动物：雄性sd大鼠，体重(50±10)g，购自浙江省实验动物中心提供，许可证号：scxk(浙)2008-0033。
饲料：基础营养饲料和高脂营养饲料(含3％胆固醇、0.2％胆酸、0.5％丙硫氧嘧啶、10％猪油)由江宁青龙山动物繁殖场提供，
1.3方法：
(1)造模
sd大鼠120只，随机选取15只作为空白对照组。空白对照组给予基础营养饲料，其余105只给予高脂营养饲料，第1周每日给予15g/d高脂营养饲料，自由饮水。造模期间，每周末次给予高脂营养饲料16h后取血检测tc或tg的水平。6周后大鼠的tc或tg水平超过正常组大鼠(p<0.05)为造模成功。
(2)分组与给药
造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照(辛伐他汀)组、人参皂苷rh4高剂量组、人参皂苷rh4中剂量组、人参皂苷rh4低剂量组，每组15只。给药组与模型组继续给食高脂饲料，空白对照组投喂基础饲料。给药剂量分别为：辛伐他汀10mg/kg、人参皂苷rh4高剂量组50mg/kg、人参皂苷rh4中剂量组25mg/kg、人参皂苷rh4低剂量组12.5mg/kg。用纯净水配成混悬液，灌胃给药体积为10ml/kg，连续6周。给药时间为每日16:00。模型组灌胃给予等体积的纯净水，空白对照组不作任何处理。
(3)检测方法
每周用电子天平测体重(精确到0.1g)一次，每周检测tc或tg的水平以大致观察大鼠的造模及治疗情况。对给药6周的动物处死前((处死前12h空腹)，称体重，用1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，取肝脏组织并称取湿重。
打开胸腔，自心脏直接采血4～6ml，肝素抗凝，分离血清，按照试剂盒要求的测定条件和程序测定血清总胆固醇(tc)、甘油三脂(tg)、低密度脂蛋白(ldl-c)、高密度脂蛋白(hdl-c)、丙氨酸氨基转移酶(alt)、天门冬氨酸氨基转移酶(ast)的含量。
2.结果处理及分析
2.1对大鼠血脂的影响
结果如表3所示。由表3可知，与空白对照组相比，模型组大鼠的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白的含量明显升高(p<0.01即具有极显著差异)，高密度脂蛋白的含量显著降低(p<0.01)；人参皂苷rh4各剂量组均可不同程度的降低肥胖大鼠的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白含量；人参皂苷rh4高剂量组还可升高高密度脂蛋白的含量(p<0.05即具有显著差异)。
表3人参皂苷rh4对大鼠血脂的影响(
注：**p<0.01，与对照组比较具有极显著差异；#p<0.05具有显著差异，##p<0.01具有极显著差异，与模型组比较；
2.2对大鼠体重以及肝功能的影响
结果如表4所示。由表4可知，与空白对照组相比，模型组大鼠的体重、肝重、ast、alt的值显著增加(p<0.01)；人参皂苷rh4高、中、低剂量组均可明显减轻大鼠的体重，降低ast及alt(p<0.01)；人参皂苷rh4高、中剂量组均可明显降低大鼠的肝重(p<0.01)。
表4人参皂苷rh4对大鼠体重、肝功能的影响(
注：**p<0.01，与对照组比较；#p<0.05，##p<0.01，与模型组比较；
上述实验结果显示，人参皂苷rh4各剂量组可以不同程度的减轻高脂血症大鼠的体重及肝重，并降低tc、tg、ldl-c、ast以及alt的含量；高剂量人参皂苷rh4还可升高高密度脂蛋白的含量。表明人参皂苷rh4具有一定的降血脂、减肥作用，可用于高脂血症，且以人参皂苷rh4高剂量组效果较优。