一种化妆品组合物的制作方法

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及含成骨生长肽碳端五肽的化妆品组合物。

背景技术：

成骨生长肽(Osteogenic Growth Peptide，简称OGP)，是以色列耶路撒冷大学的I.Bab等人于1988年在人和动物体内发现并于1992年从再生的骨髓细胞中分离出一种多肽，体外实验表明其可刺激成骨细胞和骨髓间充质干细胞增殖和分化、促进成骨，增加I型胶原合成，故命名为成骨生长肽。体内实验表明其可激活造血系统、促进骨伤的愈合。

成骨生长肽普遍存在于哺乳动物血清中，其序列具有高度保守性。成骨生长肽全长含14个氨基酸，分子量1523.8Da，序列为Ala-Leu-Lys-Arg-Gln-Gly-Arg-Thr-Leu-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly，与组氨酸H4蛋白的C-端89-102残基序列一致。在体内由于蛋白酶的作用，游离的OGP很容易就被蛋白酶降解为有生物活性的碳端五肽Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly(OGP(10-14))。OGP(10-14)是OGP的最小活性序列，保留了OGP的促有丝分裂活性和体内效应，其中Tyr10和Phe12的侧链及末端Gly残基对于OGP的最佳生物活性至关重要。

OGP以及OGP(10-14)除了可以刺激成骨细胞增殖，还可以刺激成纤维细胞的增殖。体外实验证明，外源OGP浓度在10^-11～10^-10mol/L时，可使NIH3T3成纤维细胞的增殖达到峰值。

目前未见成骨生长肽及成骨生长肽碳端五肽在制备化妆品中使用。亦未见有文献报道其具有抗炎消肿之功能。本发明基于对成骨生长肽碳端五肽的研究，将其应用于化妆品中。该化妆品组合物在除皱抗衰老的同时，还可以提供抗炎、消除微创导致的红肿的功效。

技术实现要素：

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷，提供了成骨生长肽碳端五肽的新用途，即将其用于制备化妆品。具体地，本发明通过如下技术方案实现：

本发明提供了一种化妆品组合物，包括成骨生长肽碳端五肽，以及载体、助剂和添加剂中的至少一种。

前述的化妆品组合物，以所述化妆品组合物的体积计算，所述成骨生长肽碳端五肽的添加量是0.5μg/ml-10μg/ml，优选是5μg/ml。

前述的化妆品组合物，所述成骨生长肽碳端五肽的氨基酸序列是酪氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸，分子量为499.5道尔顿，等电点为5.52。

前述的化妆品组合物，所述化妆品组合物是化妆水、乳液、膏霜、凝胶或面膜。

前述的化妆品组合物，所述化妆品组合物是化妆水，包括冻干粉和溶媒，冻干粉和溶媒的体积比是1:2-5；

其中，冻干粉是将甘露醇、成骨生长肽碳端五肽和磷酸钠缓冲液的混合物冻干而制成的，其中每毫升混合物包括10mg-50mg甘露醇、0.5μg-10μg成骨生长肽碳端五肽和余量的磷酸钠缓冲液；

其中，每毫升溶媒包括0.5mg-2mg低分子透明质酸钠、0.1mg-1mg透明质酸钠、10mg-80mg乳酸钠、10mg-80mg甘油、0.5mg-5mg甘草酸二钾和余量的磷酸钠缓冲液。

前述的化妆品组合物，所述化妆品组合物是化妆水，包括冻干粉和溶媒，冻干粉和溶媒的体积比是1:2；

其中，冻干粉是将甘露醇、成骨生长肽碳端五肽和磷酸钠缓冲液的混合物冻干而制成的，其中每毫升混合物包括30mg甘露醇、10μg成骨生长肽碳端五肽和余量的磷酸钠缓冲液；

其中，每毫升溶媒包括0.8mg低分子透明质酸钠、0.2mg透明质酸钠、60mg乳酸钠、40mg甘油、3mg甘草酸二钾和余量的磷酸钠缓冲液。

前述的化妆品组合物，所述化妆品组合物是凝胶，其中，每升凝胶包括0.5mg-10mg成骨生长肽碳端五肽、2g-8g卡波姆、2g-10g透明质酸钠、10g-50g甘油、3ml-10ml苯氧乙醇和余量的去离子水。

前述的化妆品组合物，所述化妆品组合物是凝胶，其中，每升凝胶包括5mg成骨生长肽碳端五肽、5g卡波姆、4g透明质酸钠、30g甘油、7ml苯氧乙醇和余量的去离子水。

相对于现有技术，本发明提供的化妆品组合物具有如下有益效果：本发明的化妆品组合物既可以促进成纤维细胞增殖，刺激胶原蛋白合成，促进皮肤细胞的再生，有利于皮肤微小创面的愈合，又可以加速消除因微创导致的皮肤红肿发炎，降低微创术后的不适感。

附图说明

图1是本发明的化妆品组合物促细胞增殖实验结果。

图2是海藻矽针微创术后使用本发明的化妆品组合物的效果。

具体实施方式

为充分了解本发明之目的、特征及功效，借由下述具体的实施方式，对本发明做详细说明。

本发明提供的化妆品组合物包括成骨生长肽碳端五肽，以及载体、助剂和添加剂中的至少一种。其中，成骨生长肽碳端五肽是成骨生长肽的最小活性序列，保留了成骨生长肽的促有丝分裂活性和体内效应，其氨基酸序列是酪氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸，分子量为499.5道尔顿，等电点为5.52。本发明中采用的成骨生长肽碳端五肽采用申请号为201310578687.2中国发明专利申请中公开的方法制备得到，该发明专利申请的内容通过引用而整体并入本申请中。

本发明提供的化妆品组合物含有在制备中常用的化妆品载体、助剂和添加剂，如水、面膜贴、赋形剂、保湿剂、增稠剂、防腐剂、着色剂、乳化剂、稳定剂和香料等。

以本发明提供的化妆品组合物的体积计算，成骨生长肽碳端五肽的添加量是0.5μg/ml-10μg/ml，优选是5μg/ml。

本发明提供的化妆品组合物可以以通常的化妆品的任意表现形式来呈现，例如，化妆水、乳液、膏霜、凝胶或面膜等，本领域技术人员根据化妆品组合物的具体形式可以选择相应的常规方法制备。

在一种优选的具体实施方式中，本发明的化妆品组合物是化妆水，包括：

(1)冻干粉，其是将甘露醇、成骨生长肽碳端五肽和磷酸钠缓冲液的混合物冻干而制成的，其中每毫升混合物包括10mg-50mg甘露醇、0.5μg-10μg成骨生长肽碳端五肽和余量的磷酸钠缓冲液；

(2)溶媒，其中，每毫升溶媒包括0.5mg-2mg低分子透明质酸钠、0.1mg-1mg透明质酸钠、10mg-80mg乳酸钠、10mg-80mg甘油、0.5mg-5mg甘草酸二钾和余量的磷酸钠缓冲液。

上述冻干粉与溶媒的体积比是1:2-5。

其中，磷酸钠缓冲液可以采用本领域常用的浓度和pH值，只要对成骨生长肽碳端五肽的活性能够起到保护作用即可，例如，可以是5mM的pH6.5磷酸钠缓冲液。

本发明采用的透明质酸钠的分子量为120-150万道尔顿，低分子透明质酸钠的分子量为20-40万道尔顿。

上述化妆水所涉及的各物质均可通过常规市购获得或者采用常规方法配制而成。

上述化妆水采用冻干粉剂型配以溶媒作为溶解剂，在使用时以溶媒溶解冻干粉，能够最大程度的保证化妆水中成骨生长肽碳端五肽的活性。同时，溶媒采用上述特定组分与特定配比之后，溶媒的各组分之间具有协同效果，在溶解冻干粉时更有利于分散溶解，在使用时能促进皮肤对营养的吸收，并能够更长时间的保持成骨生长肽碳端五肽的活性。

在一种特别优选的具体实施方式中，上述化妆水包括冻干粉和溶媒，冻干粉和溶媒的体积比是1:2；其中，冻干粉是将甘露醇、成骨生长肽碳端五肽和磷酸钠缓冲液的混合物冻干而制成的，其中每毫升混合物包括30mg甘露醇、10μg成骨生长肽碳端五肽和余量的磷酸钠缓冲液；其中，每毫升溶媒包括0.8mg低分子透明质酸钠、0.2mg透明质酸钠、60mg乳酸钠、40mg甘油、3mg甘草酸二钾和余量的磷酸钠缓冲液。

在另一种优选的具体实施方式中，本发明的化妆品组合物是凝胶，其中，每升凝胶包括成0.5mg-10mg成骨生长肽碳端五肽、2g-8g卡波姆、2g-10g透明质酸钠、10g-50g甘油、3ml-10ml苯氧乙醇和余量的去离子水。

本发明采用的透明质酸钠的分子量为120-150万道尔顿。

上述凝胶所涉及的各物质均可通过常规市购获得。

上述凝胶采用上述特定组分与特定配比之后，各组分之间具有协同效果，在使用时能促进皮肤对营养的吸收，并能够更长时间的保持成骨生长肽碳端五肽的活性。

在另一种特别优选的具体实施方式中，每升上述凝胶包括5mg成骨生长肽碳端五肽、5g卡波姆、4g透明质酸钠、30g甘油、7ml苯氧乙醇和余量的去离子水。

实施例

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例中所使用的物质均为常规市购得到或者采用常规方法配制得到。

实施例1：含成骨生长肽碳端五肽的化妆水及其制备

本实施例的含成骨生长肽碳端五肽的化妆品组合物是化妆水，包括冻干粉和溶媒，每支冻干粉为1ml，每支溶媒为2ml，一支冻干粉配以一支溶媒。其中，每支冻干粉包括30mg甘露醇、10μg成骨生长肽碳端五肽和余量的5mM的pH6.5磷酸钠缓冲液；其中，每支溶媒包括1.6mg低分子透明质酸钠、0.4mg透明质酸钠、120mg乳酸钠、80mg甘油、6mg甘草酸二钾和余量的5mM的pH6.5磷酸钠缓冲液。

上述化妆水的制备方法如下：

(1)用5mM的pH6.5磷酸钠缓冲液溶解30mg甘露醇和10μg成骨生长肽碳端五肽，并定容至1ml溶解，随后进行无菌过滤并用冻干机冻干，从而得到冻干粉。

(2)将1.6mg低分子透明质酸钠、0.4mg透明质酸钠、120mg乳酸钠、80mg甘油、6mg甘草酸二钾依次加入5mM的pH6.5磷酸钠缓冲液中进行溶解，并用5mM的pH6.5磷酸钠缓冲液定容至2ml，120℃高温高压灭菌30分钟，从而得到溶媒。

在使用时，用溶媒溶解冻干粉之后即可使用，一支冻干粉配以一支溶媒。

实施例2：含成骨生长肽碳端五肽的凝胶及其制备

本实施例的含成骨生长肽碳端五肽的化妆品组合物是凝胶，包括成骨生长肽碳端五肽、卡波姆、透明质酸钠、甘油、苯氧乙醇和去离子水，其中，每升凝胶包括5mg成骨生长肽碳端五肽、5g卡波姆、4g透明质酸钠、30g甘油、7ml苯氧乙醇和余量的去离子水。

上述凝胶的制备方法如下：

将4g透明质酸钠缓慢加入400ml去离子水中，搅拌溶解，然后分别加入骨生长肽碳端五肽5mg，甘油30g，苯氧乙醇7ml，搅拌均匀，为A相；将5g卡波姆均匀的撒入400ml水中，搅拌使其完全溶胀，为B相；然后将A相加入B相中，用NaOH调节pH至6.5，用去离子水补足，搅拌均匀，即得成品。

实施例3：含成骨生长肽碳端五肽的化妆品组合物增殖实验

用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养液将培养的人体皮肤中分离的纤维母细胞稀释配成6×10³/ml的单细胞悬液；取3块96孔培养板，每孔接种100μl的细胞悬浮液,每块接种40孔，置含体积分数5％CO₂培养箱中，37℃培养24h；弃去原培养液,每孔加入100μl实验组实施例1中的含成骨生长肽碳端五肽化妆品组合物及阴性对照液(单纯细胞培养液)，每组8孔；将3块培养板移入37℃、体积分数5％CO₂培养箱中，分别于接种后2、4、7天各取出1块培养板，每孔再加入MTT(噻唑蓝)50μl，继续在37℃条件下培养2h，吸弃原培养液，立即加入二甲基亚砜，每孔150μl，室温放置并轻轻震荡10～15min；选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值(A)，并计算细胞相对增殖率RGR(％)＝(实验组吸收值/阴性对照组吸收值)×100％。从图1的结果可看出，含成骨生长肽碳端五肽化妆品组合物随着细胞培养天数的增加细胞相对增殖率逐渐增加。

实施例4：含成骨生长肽碳端五肽的化妆品组合物的皮肤安全实验和抗衰老实验

社会志愿者20名，年龄22-65岁，其中男性8名，女性12名。每天向同一侧脸部及手背部皮肤涂抹实施例1中的含成骨生长肽碳端五肽化妆品组合物2次(成骨生长肽碳端五肽浓度5μg/ml，用量1ml/次)，连续使用14天。结果为：所有受试者均无骚痒，发红或皮肤溃烂等现象。以未涂抹实施例1中的含成骨生长肽碳端五肽化妆品组合物的一侧脸部和手背皮肤为对照，85％的受试皮肤较对照皮肤滋润，光滑有光泽，嘴角及眼角皱纹明显减轻。

实施例5：含成骨生长肽碳端五肽的化妆品组合物的抗炎消肿功效性实验

社会志愿者17名，年龄20-50岁，其中实验组中男性4名，女性6名；对照组男性3名，女性4名。实验组在海藻矽针处理脸部皮肤后涂抹实施例1中的含成骨生长肽碳端五肽化妆品组合物一次(成骨生长肽碳端五肽浓度5μg/ml，用量1ml/次)。对照组只进行海藻矽针处理。结果见图2。图2中，(a)显示了海藻矽针处理脸部的红肿状态，(b)显示了海藻矽针处理脸部皮肤后涂抹实施例1中的含成骨生长肽碳端五肽化妆品组合物24小时之后的状态。由图2可知，所有受试者脸部皮肤的红肿及刺痛感在24小时内即消失，而对照组皮肤的红肿及刺痛感延续了5天以上。

最后，需要注意的是：以上列举的仅是本发明的具体实施例，当然本领域的技术人员可以对本发明进行改动和变型，倘若这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，均应认为是本发明的保护范围。