一种大鼠动静脉分流肺高压模型的建立方法与流程

本发明涉及肺高压模型建立领域，具体涉及一种大鼠动静脉分流肺高压模型及建立方法。

背景技术：

肺动脉高压(PH)是一类以肺小动脉的血管痉挛、内膜增生及重构、微血栓病灶形成、肺血管阻力进行性增高为主要特征的一种疾病,能够导致右心衰竭、功能受限、最终死亡的疾病。PH动物模型的制作方法包括慢性低氧法、野百合碱注射法、分流手术等方法。现有的动静脉分流模型存在血管阻断时间长、损伤大、存活率低等缺点。

技术实现要素：

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供大鼠动静脉分流肺高压模型及建立方法，从而改进了原有动静脉分流模型，建立更实用的动静脉分流造模方法，本发明另外一个目的，是提供一种可吸收止血凝胶的制备方法。

为了实现上述目标，本发明的技术方案为：

一种大鼠动静脉分流肺高压模型建立方法，包括如下步骤：

(1)大鼠麻醉后，取腹正中切口，暴露腹主动脉和下腔静脉，将海绵垫于左肾动脉起始部，并用血管钳将腹主动脉夹闭；

(2)以腹主动脉的左肾动脉起始部至其末端段的下2/3处之左侧壁为穿刺点，用针头以45°角穿透腹主动脉壁进入相邻的下腔静脉内，撤出针头，用粘合剂封闭腹主动脉破口，并压迫止血，之后移走血管钳，整个腹主动脉阻断时间控制在5～10分钟以内；缝合腹壁。

优选的，大鼠为雄性大鼠。

优选的，麻醉是指腹腔内注射2.5％水合氯醛麻醉。

优选的，步骤(2)中的穿刺针头为12号针头。

优选的，步骤(1)海绵为可吸收止血海绵。

所述的可吸收止血海绵还可以为一次性使用的可吸收止血海绵。

优选的，所述的可吸收止血海绵的制备方法，包括如下步骤：

1)将壳聚糖乙酸酯溶解于0.5％(v/v)的醋酸溶液得到0.5％的壳聚糖溶液；

2)将猪胶原蛋白溶解在0.5％(v/v)的醋酸溶液得到5％的猪胶原蛋白溶液；

3)将以上2个步骤的溶液混合，室温高速搅拌30min后置于止血海绵模具中，冷冻干燥后形成止血海绵，经消毒射线照射20min后得到成品。

优选的，所述的壳聚糖的脱乙酰化程度为86％。

步骤(2)中粘合剂优选为：纤维蛋白粘合剂。

步骤(2)中粘合剂为：猪源纤维蛋白粘合剂。

本发明的有益效果为：

该造模方法能够有效的引起大鼠肺动脉高压，该模型稳定。

其存活率及有效率明显优于现有的动静脉造模方案。

原有的手术造模模型需手术缝合动脉破口，其腹主动脉阻断时间需20分钟以上，难以避免腹主动脉以下组织的缺血再灌注损伤，且手术损伤较大，开腹时间较长，常伴有肠道血供不足，其存活率约为60％～80％，明显低于我组的存活率，且手术缝合常会造成腹主动脉的狭窄，其造模成功率约为85％，低于我组100％的成功率。故本实验的造模方法在存活率及造模成功率方面均优于原有的造模方法，有一定的创新性和实用性。

本发明使用的可吸收止血海绵，制备方法简单，吸收止血效果快，成本低，效果好。

本发明使用的猪源纤维蛋白粘合剂的效果显著，优于其他纤维蛋白粘合剂。

附图说明

图1：B超示腹主动脉向下腔静脉的分流存在；

图2：B超所示的动静脉造口；

图3：分流量约300mm/s

具体实施方式

下面结合实施例对发明涉及的技术方案进行进一步说明，以便有助于本发明的理解，但不作为对技术方案的限制，该技术领域的技术工程师可根据上述发明的内容作出一些非本质性的改进和调整。

实施例1：大鼠动静脉分流肺高压模型的建立：

雄性SD大鼠只，体重180～280g，随机分为3周对照组(n＝10)、假手术组(n＝10)和手术组(n＝20)组。手术组大鼠腹腔内注射2.5％水合氯醛(40mg/kg体重)麻醉后，取腹正中切口，暴露腹主动脉和下腔静脉，将海绵垫于左肾动脉起始部，并用血管钳将腹主动脉夹闭。以腹主动脉的左肾动脉起始部至其末端段的下2/3处之左侧壁为穿刺点，用12号一次性针头以45°角穿透腹主动脉壁进入相邻的下腔静脉内，撤出针头，用猪源纤维蛋白粘合剂胶封闭腹主动脉破口，并压迫止血，之后移走血管钳，整个腹主动脉阻断时间控制在5～10分钟以内。并缝合腹壁，腹腔注射无水头孢唑林钠(100mg/kg体重)预防感染。假手术组大鼠仅单纯开腹，暴露腹主动脉和下腔静脉，不作分流手术。术后3组均饲养6周。6周后手术组存活18只(存活率90％)，假手术组存活9只，对照组存活10只。三组6周后均行动物B超检查，导管测压，病理切片。手术组大鼠B超检查示：腹主动脉向下腔静脉分流存在，肺动脉瓣轻到中度返流，右心室肥厚；漂浮导管测压示大鼠肺动脉压力大于25mmHg；病理示肺血管增生，微血栓存在，右心室肌细胞增粗。对照组及假手术组未见肺动脉高压及相关病理改变。

猪源纤维蛋白粘合剂的从市场购买，批准文号：国药准字S20100007，生产厂家：广州倍绣生物技术有限公司。

所述的可吸收止血海绵是采用如下的制备方法制得，包括如下步骤：

1)将壳聚糖乙酸酯溶解于0.5％(v/v)的醋酸溶液得到0.5％的壳聚糖溶液；

2)将猪胶原蛋白溶解在0.5％(v/v)的醋酸溶液得到5％的猪胶原蛋白溶液；

3)将以上2个步骤的溶液混合，室温高速搅拌30min后置于止血海绵模具中，冷冻干燥后形成止血海绵，经消毒射线照射20min后得到成品。

所述的壳聚糖的脱乙酰化程度为86％。

实施例2：大鼠动静脉分流肺高压模型的建立：

(1)大鼠麻醉后，取腹正中切口，暴露腹主动脉和下腔静脉，将海绵垫于左肾动脉起始部，并用血管钳将腹主动脉夹闭；

(2)以腹主动脉的左肾动脉起始部至其末端段的下2/3处之左侧壁为穿刺点，用针头以45°角穿透腹主动脉壁进入相邻的下腔静脉内，撤出针头，用粘合剂封闭腹主动脉破口，并压迫止血，之后移走血管钳，整个腹主动脉阻断时间控制在5～10分钟以内；缝合腹壁。

术后3组均饲养6周。6周后手术组存活18只(存活率90％)，假手术组存活9只，对照组存活10只。三组6周后均行动物B超检查，导管测压，病理切片。手术组大鼠B超检查示：腹主动脉向下腔静脉分流存在，肺动脉瓣轻到中度返流，右心室肥厚；漂浮导管测压示大鼠肺动脉压力大于25mmHg；病理示肺血管增生，微血栓存在，右心室肌细胞增粗。对照组及假手术组未见肺动脉高压及相关病理改变。

猪源纤维蛋白粘合剂的从市场购买，批准文号：国药准字S20100007，生产厂家：广州倍绣生物技术有限公司。

所述的可吸收止血海绵是采用如下的制备方法制得，包括如下步骤：

1)将壳聚糖乙酸酯溶解于0.5％(v/v)的醋酸溶液得到0.5％的壳聚糖溶液；

2)将猪胶原蛋白溶解在0.5％(v/v)的醋酸溶液得到5％的猪胶原蛋白溶液；

3)将以上2个步骤的溶液混合，室温高速搅拌30min后置于止血海绵模具中，冷冻干燥后形成止血海绵，经消毒射线照射20min后得到成品。

实施例3：大鼠动静脉分流肺高压模型的建立：

雄性SD大鼠只，体重180～280g，随机分为3周对照组(n＝10)、假手术组(n＝10)和手术组(n＝20)组。手术组大鼠腹腔内注射2.5％水合氯醛(40mg/kg体重)麻醉后，取腹正中切口，暴露腹主动脉和下腔静脉，将海绵垫于左肾动脉起始部，并用血管钳将腹主动脉夹闭。以腹主动脉的左肾动脉起始部至其末端段的下2/3处之左侧壁为穿刺点，用12号一次性针头以45°角穿透腹主动脉壁进入相邻的下腔静脉内，撤出针头，用猪源纤维蛋白粘合剂胶封闭腹主动脉破口，并压迫止血，之后移走血管钳，整个腹主动脉阻断时间控制在5～10分钟以内。并缝合腹壁，腹腔注射无水头孢唑林钠(100mg/kg体重)预防感染。假手术组大鼠仅单纯开腹，暴露腹主动脉和下腔静脉，不作分流手术。术后3组均饲养6周。6周后手术组存活18只(存活率90％)，假手术组存活9只，对照组存活10只。三组6周后均行动物B超检查，导管测压，病理切片。手术组大鼠B超检查示：腹主动脉向下腔静脉分流存在，肺动脉瓣轻到中度返流，右心室肥厚；漂浮导管测压示大鼠肺动脉压力大于25mmHg；病理示肺血管增生，微血栓存在，右心室肌细胞增粗。对照组及假手术组未见肺动脉高压及相关病理改变。

猪源纤维蛋白粘合剂的从市场购买。

所述的可吸收止血海绵是采用如下的制备方法制得，包括如下步骤：

1)将壳聚糖乙酸酯溶解于0.5％(v/v)的醋酸溶液得到0.5％的壳聚糖溶液；

2)将猪胶原蛋白溶解在0.5％(v/v)的醋酸溶液得到5％的猪胶原蛋白溶液；

3)将以上2个步骤的溶液混合，室温高速搅拌30min后置于止血海绵模具中，冷冻干燥后形成止血海绵，经消毒射线照射20min后得到成品。

以上实施例说明了本发明的详细步骤和优点。本行业的技术人员应该了解，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。