本发明属于医药领域，具体涉及心脑清组合物在制备治疗和/或预防慢性脑缺血导致的脑白质损伤药物中的应用。
背景技术：
随着社会老龄化进程，慢性脑缺血及其相关疾病对社会的影响越来越大，而脑白质损伤与慢性脑缺血的关系十分密切，研究认为脑白质损伤大多是慢性脑缺血作用的结果。临床上脑白质损伤十分常见，痴呆和淀粉样血管病等都可出现弥漫性或多灶性脑白质损伤，因此对脑白质损伤的研究逐渐受到人们的重视。随着对脑白质损伤研究的不断深入，人们已充分认识到脑白质保护的重要性，并提出了脑缺血后全脑保护的概念，即在脑缺血发生后，将大脑作为一个完整的功能体进行保护，不仅要保护神经元核周体，还要保护神经胶质细胞和轴突；不仅要保护灰质还要保护脑白质。对脑白质损伤的研究认为，不仅炎症，一氧化氮与自由基参与了脑白质损伤的过程，脑白质内丰富的胶质细胞(包括星形胶质细胞和小胶质细胞)也参与脑缺血后的炎性反应，因此研究胶质细胞及炎性反应在慢性脑缺血后脑白质损伤中的作用，寻求有效的保护措施具有重要的意义。另外，近年来有关中药对脑白质损伤治疗的研究也取得快速的发展。中药因其具有毒副反应小、作用缓和持久、疗效稳定可靠等特点，在预防和治疗脑血管疾病方面显示出一定的优越性。
心脑清组合物是一种以中药为主的中西药复合组合物。心脑清组合物中的药物活性成分为红花油、冰片、维生素e、维生素b6；其用量配比为红花油390份，冰片3份，维生素e17份，维生素b65份。该组合物活性成分中的红花油中含有多种人体无法自身合成的必需不饱和脂肪酸。它不仅可以降低胆固醇、而且能与胆固醇结合，减少胆固醇在血管壁的沉积，有效防治高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛及中风偏瘫后遗症；冰片具有芳香开窍、醒神作用，能恢复神经系统功能，治疗脑动脉硬化症、脑萎缩、中风后遗症引起的神志不清、健忘、痴呆等；维生素b6参与体内三大营养物质糖、脂肪、蛋白质的代谢，抗动脉血管壁坏死、脱落，防止血栓形成，预防动脉粥样硬化、脑血栓、心肌梗塞的发生；大量维生素e在人体中保护维生素a、维生素c及脂肪酸免遭破坏，使细胞完整，并能抑制自由基的形成，增强人体免疫力，减少疾病，延缓衰老。
心脑清软胶囊收载于《国家中成药标准汇编》内科脑系经络肢体分册，功能主治为活血散瘀，通经止痛，开窍醒神，有十几年的应用历史，临床常用于瘀血阻滞所致的中风、中经络，半身不遂，口眼歪斜，胸痹心痛，脑梗塞，冠心病，心绞痛及高脂血症等病症。由于心脑清软胶囊具有掩盖药物不良气味、便于患者服用的特点，因此深受临床患者的青睐。本发明首次发现心脑清组合物或制剂具有治疗和/或预防慢性脑缺血导致的脑白质损伤的作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供心脑清组合物的新用途。
为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
一种心脑清组合物在制备治疗和/或预防慢性脑缺血导致的脑白质损伤的药物中的应用。
在一些实施方式中，所述心脑清组合物是由以下原料制成：红花油、冰片、维生素e、维生素b6。
在一些实施方式中，所述心脑清组合物是由以下重量份的原料制成的：红花油390份，冰片3份，维生素e17份，维生素b65份。
在一些实施方式中，所述心脑清组合物的制备方法包括如下步骤：取精制红花油130份，加入冰片3份、维生素b65份，混匀，研磨，再加入维生素e17份和精制红花油260份，搅匀。
在一些实施方式中，所述心脑清组合物可以与适当的辅料制备成口服制剂，可采用常规的制备方法制备，例如，范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)记载的制备工艺，制成药剂学可接受的常规剂型。
在一些实施方式中，所述口服制剂包括口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂。
为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：peg6000，peg4000，虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药剂学，需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料(范碧亭《中药药剂学》，上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料)。
在一些实施方式中，所述胶囊剂优选软胶囊制剂。
本发明的有益效果在于：本发明心脑清组合物，能够减轻慢性脑缺血后氧自由基的损害；抑制星形胶质细胞活化增生；减轻髓鞘脱失及轴突损伤，进而减轻慢性脑缺血导致的脑白质损伤，但其对正常脑组织无明显作用。
具体实施方案
下述是结合具体实施例或试验例进一步阐述本发明。但这些实施例或试验例仅限于说明本发明而不是用于限制本发明的范围。下列实施例或试验例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件。
实施例1：心脑清组合物
红花油390g，冰片3g，维生素e17g，维生素b65g
以上四味，取精制红花油130g，加入冰片3g、维生素b65g，混匀，研磨，再加入维生素e17g和精制红花油260g，搅匀，即得。
实施例2：心脑清软胶囊
红花油390g，冰片3g，维生素e17g，维生素b65g，聚乙二醇400400g，乙基纤维素70g，蜂蜡50g；
将130g红花油与冰片、维生素b6和维生素e，一并研磨混匀；将剩余量的红花油与乙基纤维素、蜂蜡一并研磨、混匀；再将二者混匀，过100目筛，制成胶囊内容物；制备囊壳：先将1000g明胶熔化，在明胶内加入500g聚乙烯吡咯烷酮，搅匀；用上述囊壳将内容物压制或滴制为软胶囊，定型，洗丸，烘干，即得。
试验例心脑清组合物对慢性脑缺血大鼠脑白质损伤的保护作用
1.试验动物与分组
健康sd大鼠80只，300～400g，雌雄不限，随机分为4组，每组20只。a组：假手术组(假手术+溶剂)；b组：假手术治疗组(假手术+心脑清组合物+溶剂)；c组：手术组(手术+溶剂)；d组：手术治疗组(手术+心脑清组合物+溶剂)。假手术和手术组给予0.5％羧甲基纤维素钠溶液2ml，假手术治疗组和手术治疗组给予等量的用0.5％羧甲基纤维素钠溶解均匀的心脑清组合物(30mg/kg)溶液灌胃，于术后24h开始，每日一次，连续60d。
2.模型的制作
参照文献(delatorrejc,fortint,parkga,etal.chroniccerebrovascularinsufficiencyinducesdementia-likedeficitsinagedrats.brainres.1992；582(2):186-195)的方法制作慢性脑缺血模型。sd大鼠10％(w/v)水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔注射麻醉，仰卧位固定，颈前部去毛消毒；沿颈正中切开皮肤，小心分离出双侧颈总动脉；分别结扎双侧颈总动脉的远心端与近心端，从中间剪断，以确保阻断颈总动脉血流；缝合皮肤。术中大鼠肛温保持在36.5～37.5℃。假手术组除不结扎，不剪断双侧颈总动脉外，其余过程与手术组相同。切口内注射32万u/ml青霉素注射液0.lml，缝合切口，进行络合碘消毒，腹腔注射上述浓度的青霉素注射液0.3ml，放回原环境中饲养。
3.标本收集与检测
①生化指标：每组取大鼠10只，麻醉后断头取脑，去除脑干和小脑，经视交叉处冠状切，向后取厚约5mm的冠状脑组织，加生理盐水，研磨，制成10％(w/w)脑组织匀浆，测mda、sod吸光光度值。
②病理观察及免疫组化：每组取剩余大鼠10只，用4％多聚甲醛灌注内固定后取脑放入4％多聚甲醛固定，经视交叉处冠状切，向后取厚约3mm的冠状脑组织，常规石蜡包埋，制作脑部冠状石蜡切片(厚度约如4μm)，分别采用he染色、lfb染色及sp免疫组化染色，检测脑组织病理变化、内囊及胼胝体geap阳性细胞数、胼胝体髓鞘染色及轴突显色情况，并进行比较。
4.统计分析
采用统计软件spss10.0处理数据，统计方法用单因素方差分析并用lsd法进行两两比较。取p＝0.05为显著性检验标准。
5.结果
(1)心脑清组合物对大鼠mda及sod的影响
mda是氧自由基引发的生物膜不饱和脂肪酸过氧化反应的代谢产物，mda的含量可以反映体内脂质过氧化的程度并间接反映引起脂质过氧化的氧自由基的水平。因此，通过测定组织内mda含量可以估价组织中氧自由基水平和脂质过氧化反应的强弱。sod是生物体最主要的自由基清除酶，可催化o2—发生歧化反应，通过歧化反应清除体内生成的氧自由基，阻断自由基病理性连锁反应，对保护细胞不受氧自由基损伤有重要作用，通过测定sod活性可以反映组织清除自由基的能力。
表1心脑清组合物对大鼠血清sod活力和mda含量的比较(x±s)
注：*与a组比较：p＜0.05；#与c组比较：p＜0.05
本实验结果发现，a、b组的mda值和sod值之间差异没有统计学意义(p>0.05)，表明心脑清组合物对正常鼠的自由基变化影响不大；c组与a、b组比较，mda值明显升高，sod值明显下降，差异均具有统计学意义(p<0.05)。表明慢性脑缺血后脑组织中氧自由基生成增多，脑组织对氧自由基的清除能力明显下降，抗氧自由基损伤的能力减弱。d组与c组比较，mda值明显降低，sod值明显升高，差异均具有统计学意义(p<0.05)。表明心脑清组合物能够降低慢性脑缺血脑组织氧自由基的水平，并且可以逆转缺血后sod活性的下降，维持缺血脑组织对氧自由基的清除能力，从而减轻脂质过氧化损伤。
(2)心脑清组合物对大鼠gfap免疫组化染色的影响
星形胶质细胞是脑内数量最多、分布最广的一种细胞，它是中枢神经系统的主要支持成份，参与多种生理反应。其生理功能在于维持局部损伤区内微环境的相对稳定，星形胶质细胞可快速摄取和阻止突触间隙释放的神经递质，如兴奋性氨基酸等；同时其参与血脑屏障的形成，另外星形胶质细胞在维持脑内水、电解质平衡方面也具有重要的作用。胶质纤维酸性蛋白(gfap)是一种胶质中间丝的主要蛋白，为星形胶质细胞的特异性标志蛋白，在病理条件下，gfap的表达显著改变，它的过度表达，被认为是病理条件下星形胶质细胞增生的一个标志。
表2心脑清组合物对大鼠gfap的影响(x±s)
注：*与a组比较：p＜0.05；#与c组比较：p＜0.05
本实验中，a、b组内囊区和胼胝体部位gfap阳性细胞数之间比较差异均没有统计学意义((p>0.05)，表明心脑清组合物对正常脑组织内星形胶质细胞没有任何作用；c组两部位gfap阳性细胞数明显增多，且星形胶质细胞的胞体增大、突起增粗，与a、b组比较差异均具有统计学意义(p<0.05)，提示慢性脑缺血后白质内星形胶质细胞发生活化增生反应。d组上述区域内gfap阳性细胞数明显减少，与c组比较差异具有统计学意义(p<0.05),表明心脑清组合物可抑制慢性脑缺血后脑白质内星形胶质细胞的过度活化增生。
(3)心脑清组合物对大鼠lfb染色结果计分的影响
中枢神经系统有髓神经纤维的髓鞘是由少突胶质细胞突起的胞膜包卷轴突而形成的，因此通过观察中枢神经系统的髓鞘可以反映少突胶质细胞的情况。劳克坚牢蓝染色是经典的显示髓鞘的方法，此染料只与髓鞘的磷脂质特异性相结合，着色鲜艳，轴索与其他结构不着色，背景干净，与其他显示髓鞘的方法相比较，是一个操作简便特异性高的方法。本实验中，染色方法是在复染伊红之前加用苏木素复染了细胞核，使脑组织里的结构更加分明。染色结果是有髓神经纤维的髓鞘被染成蓝色，神经元胞体被染成红色，神经细胞核成蓝色，切片背景为红色。
表3心脑清组合物对大鼠lfb染色结果计分情况(x±s)
注：*与a组比较：p＜0.05；#与c组比较：p＜0.05
本实验结果发现，a、b组胼胝体处均没有发现明显的髓鞘脱失等白质改变，评分均为0分，表明心脑清组合物对正常脑组织无任何作用；c组胼胝体处可见有髓鞘脱失及大片空泡形成等白质疏松现象，评分明显增高，差异具有统计学意义(p<0.05)。表明慢性脑缺血脑白质内出现髓鞘脱失，少突胶质细胞受损的现象。d组上述变化明显减轻，胼胝体处的评分降低，与c组比较差异具有统计学意义(p<0.05)，表明心脑清组合物可抑制髓鞘脱失，减轻少突胶质细胞受损从而减轻白质损伤。
(4)心脑清组合物对大鼠β-app免疫组化染色的影响
β-app是β淀粉样蛋白的前体物质，是具有膜受体蛋白样结构的单跨膜蛋白。在生理情况下，其是通过轴突快速转运机制运输的一种神经元正常成分，神经胶质细胞(包括星形胶质细胞,少突胶质细胞和小胶质细胞)也可少量表达β-app。β-app的功能目前还不是十分清楚，综合目前资料认为，可能具有促进细胞粘附生长，刺激神经元轴突长成，维护突触膜稳定性，抑制丝氨酸蛋白酶活性及参与中枢神经系统免疫反应等功能。
表4心脑清组合物对大鼠β-app阳性轴突计分情况(x±s)
注：*与a组比较：p＜0.05；#与c组比较：p＜0.05
本实验β-app免疫组化评分结果发现，a、b组胼胝体处没有轴突着色，评分均为0分，表明心脑清组合物对正常脑白质无任何影响；c组β-app免疫阳性轴突明显增多，胼胝体处可见大量的被染成棕黄色的神经纤维，评分明显增高，差异具有统计学意义(p<0.05)，表明慢性脑缺血后有β-app的聚集及轴突的损伤。d组上述变化明显减轻，胼胝体处的β-app免疫阳性轴突明显减少，与其他各组比较差异均具有统计学意义(p<0.05)，表明心脑清组合物可以减轻β-app聚集，减少慢性脑缺血后轴突的损伤。
应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。