含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品的制作方法

本发明属于保健品领域，具体的涉及一种具有抗乳腺癌功能的含有米糠黄酮的保健品。

背景技术：

近年来女性恶性肿瘤乳腺癌的发病率持续上升,发病年轻化趋势十分明显，目前乳腺癌的主要治疗手段有手术治疗、放射治疗、内分泌治疗、化学药物治疗等手段，如何更有效地治疗乳腺癌是目前巫待解决的问题。中药是祖国医学用来防治疾病的有力武器，中药治疗肿瘤强调调节与平衡的原则，恢复和增强机体内部的抗病能力，从而达到阴阳平衡治疗肿瘤的目的。黄酮类化合物具有多种生物活性,包括心血管保健、抗病毒、抗菌、抗炎、镇痛、肝保健以及抗肿瘤等活性,是目前国内外研究的热点。大量研究表明,黄酮类化合物用于肿瘤的预防及治疗，具有天然、低毒、高效的特点,具抗肿瘤机制涉及肿瘤发生、发展的各个阶段。如槲皮素具抗氧化作用,可抑制相关酶的活性,降低肿瘤细胞耐药性,诱导肿瘤细胞凋亡；水飞蓟素也具抗氧化及抑制相关酶活性,可诱导细胞周期阻滞；藤黄酸可抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制肿瘤血管生成,抑制端粒酶活性,调控相关癌症基因/抑癌基因的表达和转录等。鉴于上述原因，人们把目光转向天然抗肿瘤药物的研发上。

技术实现要素：

本发明目的是以我国广泛种植的禾本科粮食作物水稻的加工副产物米糠出发，制备米糠黄酮和其他中药提取物混合，提供一种抗乳腺癌的天然保健品。

本发明采用的技术方案是：

含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

米糠黄酮50-70％，巴戟天提取物5-10％，青木香提取物5-10％，

猪苓提取物5-10％，淫羊藿提取物5-10％，柴胡提取物5-10％。

所述含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，所述米糠黄酮的制备方法如下：

1)纤维素酶酶解提取：料液比按质量比1:10-1:30，将米糠粉末溶于水，纤维素酶加入量为120-150u/g，进行热水浸提，控制温度为50-60℃，ph范围值4.0-5.0，酶解时间为2-3h，离心，过滤，得纤维素酶酶解提取液备用，沉淀物a继续进行乙醇辅助提取；

2)乙醇辅助提取：料液比按质量比1:20-1:30，将沉淀物a溶于乙醇，乙醇体积分数为50-60％，提取时间为2-3h，离心，过滤，得乙醇辅助提取液备用，沉淀物b继续进行超声浸提；

3)超声浸提：料液比按质量比1:20-1:30，将沉淀物b溶于乙醇，乙醇体积分数为50-60％，超声波功率为160-200w，超声时间为20-40min，抽滤，得超声浸提提取液备用；

4)合并纤维素酶酶解提取液、乙醇辅助提取液和超声浸提提取液，将总提取液旋转蒸发浓缩，滤纸初过滤后，用滤膜进行超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得到粗米糠黄酮干粉。

所述含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，所述巴戟天提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的巴戟天固体粉末；分别按质量比1:10比例称取巴戟天固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得巴戟天提取物。

所述含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，所述青木香提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的青木香固体粉末；分别按质量比1:10比例称取青木香固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得青木香提取物。

所述的含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，所述猪苓提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的猪苓固体粉末；分别按质量比1:10比例称取猪苓固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得猪苓提取物。

所述含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，所述淫羊藿提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的淫羊藿固体粉末；分别按质量比1:10比例称取淫羊藿固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得淫羊藿提取物。

所述含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，所述柴胡提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的柴胡固体粉末；分别按质量比1:10比例称取柴胡固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得柴胡提取物。

本发明的有益效果是：米糠粉末是稻谷脱壳后精碾米时的副产物，但因外观差、有异味至今未得到充分利用，且大量的米糠堆积也造成了环境的污染，本发明以米糠中提取的黄酮作为活性物质，制备抗乳腺癌保健品或药品，提取方法简单，不存在合成药剂的毒副作用，中间产物及终产物均无毒，安全性高，生产成本低，既有助于医疗卫生产业的发展，又能解决环境污染的问题，因此拥有十分广阔市场前景，适合工业生产。

本发明以米糠中提取的黄酮作为抗乳腺癌的核心功能性原料，集多味抗乳腺癌类中药为一体，解决了传统中药原料单一、疗效差等缺点，是一味较为理想的治疗乳腺癌的中药制剂，既符合营养学合理搭配规律，又使得所选原料之间能够协同作用，形成具有抗乳腺癌的黄酮、中草药混合保健品。本发明通过对人体外乳腺癌细胞的实验研究，发现米糠黄酮的组合物对体外肿瘤细胞具有较好的抑制作用，对于乳腺癌的防治有着非常显著的效果，可按常规制剂工艺制成各种剂型，治疗乳腺癌疗效显著。

附图说明

图1是米糠黄酮组合物对人乳腺癌细胞株mcf-7细胞生长影响。

图2是米糠黄酮组合物抑制mcf-7细胞集落形成的集落试验结果。

图3是米糠黄酮组合物抑制mcf-7细胞迁移试验结果。

具体实施方式

实施例1含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品

(一)米糠黄酮的制备

采用纤维素酶酶解—乙醇浸提—超声波分步法的工艺组合提取米糠黄酮，步骤如下：

1)纤维素酶酶解：将米糠去除杂质，干燥，经粉碎机粉碎，过60目筛，制成米糠粉末。料液比按质量比1:20，将米糠粉末溶于水，纤维素酶加入量为150u/g，进行热水浸提，控制温度为50℃，ph4.5，酶解时间为2h，4000r/min进行离心15min，过滤，得纤维素酶酶解提取液备用，沉淀物a继续进行乙醇辅助提取；

2)乙醇辅助提取：料液比按按质量比1：20，将沉淀物a溶于乙醇，乙醇体积分数为60％，提取时间为3h，离心，过滤，得乙醇辅助提取液备用，沉淀物b继续进行超声提取；

3)超声浸提：料液比按质量比1:20，将沉淀物b溶于乙醇，乙醇体积分数为60％，超声波功率为180w，超声时间为30min，抽滤，得超声浸提提取液备用；

4)合并纤维素酶酶解提取液、乙醇辅助提取液和超声浸提提取液，将总提取液旋转蒸发浓缩，滤纸初过滤后，用滤膜进行超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得到粗米糠黄酮干粉。

(二)巴戟天提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的巴戟天固体粉末；按质量比1:10比例称取巴戟天固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得巴戟天提取物。

(三)青木香提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的青木香固体粉末；按质量比1:10比例称取青木香固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得青木香提取物。

(四)猪苓提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的猪苓固体粉末；按质量比1:10比例称取猪苓固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得猪苓提取物。

(五)淫羊藿提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的淫羊藿固体粉末；按质量比1:10比例称取淫羊藿固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得淫羊藿提取物。

(六)柴胡提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的柴胡固体粉末；按质量比1:10比例称取柴胡固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得柴胡提取物。

(七)含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品组合物(简称米糠黄酮组合物)

由以下原料按重量百分比组成：

米糠黄酮60％，巴戟天提取物10％，青木香提取物5％，

猪苓提取物10％，淫羊藿提取物10％，柴胡提取物5％。

(八)mtt实验

本实施例使用人乳腺癌细胞株mcf-7细胞，采用mtt法检测米糠黄酮组合物体外抗癌活性，实验步骤如下：

1)取对数生长期的乳腺癌癌细胞系(mcf-7)细胞接种于96孔板，过夜培养使其贴壁；

2)米糠黄酮组合物的浓度(12.5、25和50mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后将96孔板放在37℃恒温培养箱中继续培养4h；

5)处理结束后，将mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓒晶体完全溶解；

6)通过测量每个孔在490nm处的吸光度值来评估mcf-7细胞的增值；结果如图1所示。

如图1所示，不同浓度的米糠黄酮组合物(12.5、25和50mg/ml)分别孵育mcf-7细胞24h，然后利用mtt比色法检测。结果显示，处理乳腺癌细胞一段时间后，浓度为25和50mg/ml的米糠黄酮组合物均表现出显著的抑制作用，浓度为50mg/ml组抑制率在24h后达到了71％，结果表明，米糠黄酮组合物在体外可抑制人乳腺癌细胞生长。

(九)集落形成实验

不同的处理组的乳腺癌细胞以每孔1000个细胞的密度接种于孔板上，培养过夜使其贴壁。分别加入25和50mg/ml的米糠黄酮组合物培养10d，吸出培养基，每孔用pbs仔细洗两次。使用甲醇将集落固定20min，然后用0.5％结晶紫染色15min，用清水冲洗并拍照，结果如图2所示。

如图2所示，米糠黄酮组合物抑制乳腺癌细胞集落形成的集落试验结果。米糠黄酮组合物孵育mcf-7细胞一段时间后，集落数量与对照组相比明显降低。24小时后浓度为25mg/ml时能够显著减少乳腺癌细胞形成的集落，浓度为50mg/ml时集落的减少极显著。

(十)transwell实验

肿瘤细胞迁移实验采用直径为6.5mm的transwell小室，其中内孔大小为8.0μm。将mcf-7细胞血清饥饿24h，然后使用胰蛋白酶消化，计数，并用无血清dmem培养基重悬。大约1×10⁵细胞被接种到上层小室，下层小室加入含有10％胎牛血清的dmem培养基。细胞放在37℃培养24h。培养后，上层小室内表面的细胞被迁移。将穿过小室的细胞固定和染色并在显微镜下统计。每个实验组做三个平行取其平均值，结果如图3所示。

由图3可见，肿瘤细胞的一个重要特点是他们具有入侵和迁移到远端器官的能力，这是几乎所有癌症死亡的主要原因，利用transwell实验分析米糠黄酮组合物对mcf-7细胞的迁移影响。如图3所示，与对照组相比，米糠黄酮组合物处理组mcf-7细胞跨膜迁移的数量大幅下降，结果显示米糠黄酮组合物可以显著抑制mcf-7细胞迁移。

实施例2含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品

含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

米糠黄酮70％，巴戟天提取物5％，青木香提取物5％，

猪苓提取物5％，淫羊藿提取物5％，柴胡提取物10％。

实施例3含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品

含有米糠黄酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比组成：

米糠黄酮50％，巴戟天提取物10％，青木香提取物10％，

猪苓提取物10％，淫羊藿提取物10％，柴胡提取物10％。