专利名称：含有黄酮的月季及其生产方法
技术领域：
本发明涉及人为地含有黄酮(flavone)的月季(a rose)。本发明涉及通过用基因操作含有黄酮而产生的辅色作用(co-pigmentation effect)来改变月季花色的方法，特别是使花色向蓝色方向变化的方法。
背景技术：
花作为植物的生殖器官，是为了产生作为下一代的种子所必需的。为形成种子，花粉必需附着在雌蕊上进行受精。通常花粉的搬运由蜜蜂、蝴蝶等昆虫、蜂鸟、偶尔由蝙蝠来执行。花瓣的作用是引诱这些传播花粉的生物，植物也因此而设法改变花色、形状、图案。
在鉴赏花时，花色是花卉的最重要的性状，所以从古至今各种颜色的花都是通过杂交来育种。但是，很少有一个植物种的花具有所有的颜色，例如通过杂交培育的月季(rose现代月季(Rosa hybrida))、康乃馨(carnation(Dianthus caryophyllus))、菊花(chrysanthemum(Chrysanthemum morifolium))、百合(lily(Lilium spp.))等中没有从紫到蓝的品种，花菖蒲(Japanese garden iris(Iris ensataThumb.))、龙胆(gentian(Gentiana triflora))中没有鲜红色的品种。
在花色中，从浅黄色到红色、蓝色大多来自类黄酮(flavonoid)及花色素苷(anthocyanin)(属于类黄酮中的有色糖苷)。类黄酮是植物的代表性次级代谢产物，如以下所示，具有C6C3C6的基本骨架，由苯丙氨酸和丙二酰CoA合成。根据C环的氧化状态，分为黄酮、黄酮醇(flavonol)等。
山奈黄素 芹菜素
槲皮素木犀草素
杨梅黄素 五羟黄酮 黄酮醇 黄酮 类黄酮或吸收紫外线、或清除自由基，所以认为其原本担负保护植物体免受各种胁迫的功能。并且近年来作为有益健康的成份受到了关注(参照Harborne and Williams 2000Phytochemistry 55，481-504)。
已知有色的花色素苷中有数百种分子，但如下所示，作为其发色团的花色素(anthocyanidin)中通常有以下6种，即(1)从橙色到红色的花中较多的花葵素(pelargonidin)、(2)从红色到鲜红色的花中较多的花青素(cyanidin)及甲基花青素(peonidin)、以及(3)从紫色到蓝色的花中较多的花翠素(delphinidin)、甲花翠素(petunidin)及二甲花翠素(malvidin)。
花葵素
花青素 甲基花青素
花翠素 甲花翠素二甲花翠素 花色素苷的结构对其颜色影响很大。花色素苷的B环的羟基数量增加时蓝色增加。因此，花翠素型花色素苷比花葵素型花色素苷、花青素型花色素苷更蓝。包含花色素苷的类黄酮的生物合成，已超越了植物的种类而得到很好地保留。类黄酮在细胞质中进行生物合成，在附加糖、酰基后，被输送到液胞内积累起来(参照Tanaka et al.2005 Plant Cell，Tissue andOrgan Culture 80，1-24、及Tanaka and Brugliera 2006 Ainsworth编、Flowering and its manipulation、pp.201-239，Blackwell PublishingLtd.)。
与生物合成相关的酶的结构基因已被全部克隆。如果能够培育出重组植物，通过人为地调整这些基因的表达，则可改变在花中积累的类黄酮的结构和量，可改变花色(参照Tanaka et al.2005 Plant Cell，Tissue andOrgan Culture 80，1-24、及Tanaka and Brugliera 2006 Ainsworth编、Flowering and its manipulation、pp.201-239，Blackwell PublishingLtd.)。例如有以下实例，在花瓣中不能产生花翠素的康乃馨、月季中，为了合成花翠素，通过使必需的类黄酮3’，5’-羟化酶(以下简称为“F3’5’H”。)基因表达来产生花翠素，从而培育出了自然界中没有的蓝色的花(参照Tanaka 2006 Phytochemistry Reviews 5，283-291)。
有时将这样人为地改变植物代谢的方法称为代谢工程学。为了改变代谢，使目的产物积累，虽然可以使产生目的产物的酶基因在重组植物中表达，但由于经常与植物自身携带的内源性酶发生竞争，因此完全或几乎不产生目的物质的积累，大多不具有产业上有用的性状。
例如矮牵牛(Petunia hybrida)，因为其二氢黄酮醇还原酶(以下简称为“DFR”。)的特异性而不能积累花葵素，因此不存在天然的橙色的花色的品种。
虽然已报道了通过导入月季等的DFR基因而使花葵素积累的橙色的矮牵牛，但为了使花葵素积累，必须使用与DFR发生竞争的类黄酮3’-羟化酶(以下简称为“F3’H”。)、F3’5’H、黄酮醇合成酶(以下简称为“FLS”)的基因缺损的矮牵牛品种，在这些基因未缺损的矮牵牛中即使导入月季的DFR基因，也看不出表达型的变化(参照Tanaka and Brugliera 2006 Ainsworth编、Flowering and its manipulation、pp.201-239，Blackwell PublishingLtd.)。因此，仅仅通过导入目的基因，不能预测目的化合物是否积累，是否出现表达型。
而且，在代谢工程学中也会经常出现预测之外的结果。例如抑制黄酮合成酶基因在蝴蝶草(Torenia hybrida)中的表达时，结果发现黄酮量减少，黄烷酮(flavanone)有积累。如果黄烷酮积累那么花色素苷的量应该增加，但是实际上花色素苷量也减少了(Ueyama et al.Plant Science，163，253-263，2002)。这样预测代谢物的增减很困难，为了获得目的表达型还必须进行研究。
花色素苷在结合的芳香族酰基的数量增多时，因分子内辅色作用而变蓝。具有2个以上芳香族酰基的花色素苷被称为聚酰基化花色素苷(Polyacylated anthoCyanin)，呈现稳定的蓝色(参照Harborne andWilliams 2000 phytochemistry 55，481-504)。
除了根据作为必须色素的花色素苷色素本身的结构以外，还根据共存的类黄酮(也称为辅色素)、金属离子、液胞的pH等也使花色发生变化。例如，黄酮、黄酮醇为代表性的辅色素，通过与花色素苷重叠为三明治的形状，具有使花色素苷变蓝，看起来更深的效果(参照Goto(1987)Prog.Chem.Org.Natl.Prod.52)。从这一点上，可以说黄酮是无色的辅助色素成分。例如作为黄酮的一种的异牡荆黄素(isovitexin)在花菖蒲(Japanesegardeniris(Iris ensata Thunb.))中对花色素苷发挥辅色作用，使颜色变蓝。此外还显示，异牡荆黄素通过使花色素苷稳定，从而使花菖蒲的花色稳定(参照Yabuya et al.Euphytica 2000 115，1-5)。
此外，黄酮大多比黄酮醇显示更强的辅色作用。例如在对基因重组康乃馨的分析中，黄酮比黄酮醇显示更强的辅色作用(参照Fukui et al.Phytochemistry，63，15-23，2003)。因此黄酮的积累在使花色变蓝上很重要。但是，并不是所有的植物都能产生黄酮，已知月季、矮牵牛等均不积累黄酮。并且还已知除了花色以外，黄酮还与紫外线的吸收、各种胁迫、与其他的微生物之间的相互作用等有关，通过使黄酮合成，可获得具有新性状的植物(作为与编码黄酮合成酶的基因有关的专利文献，参照日本特开2000-279182)。但是，在月季中使黄酮表达的例子还不得而知。
黄酮通过黄酮合成酶催化的反应由黄烷酮合成。即芹菜素(apigenin)由柚皮素(naringenin)合成，木犀草素(luteolin)由圣草酚(eriodictyol)合成，五羟黄酮(tricetin)由五羟基黄烷酮合成。黄酮合成酶中有黄酮合成酶I和黄酮合成酶II的2种。两者都催化相同的反应，但为不同类型的酶。黄酮合成酶I为2-酮戊二酸依赖性双加氧酶(参照Britsch et al.(1981)Z.Naturforsch 36c pp.742-750、及Britsch(1990)Arch.Biochem.Biophys.282pp.152-160)中的1种，黄酮合成酶II为细胞色素P450型的单加氧酶。黄酮合成酶II的结构基因从蝴蝶草、金鱼草、紫苏(Perillafrutescens)、非洲菊(gerbera(Gerbera hybrida))、龙胆等中获得(参照Tanaka and Brugliera 2006 Ainsworth编、Flowering and itsmanipulation、pp.201-239，Blackwell Publishing Ltd.)。
预测如果使黄酮合成酶基因在不产生黄酮的基因重组植物中表达，即可合成黄酮。但是，也有如下报道，在矮牵牛中使蝴蝶草的黄酮合成酶基因表达时，深蓝紫色的花色变浅了(Tsuda et al.Plant Biotechnology，21，377-386，2004)。此外还有如下报道，使来自龙胆的黄酮合成酶基因在烟草中表达时，虽合成了黄酮，但花色还是变浅了(Nakatsuka et al.2006，Molecular Breeding 1791-99)。这样即使合成黄酮，花色也未必变蓝。换言之，不显示辅色作用的原因，可列举为花色素苷、黄酮的量和比例不适当，花色素苷和黄酮被糖、酰基的修饰不适当等。这些结果表明，单纯使黄酮合成酶基因表达、使黄酮积累并不能使花色变得更蓝。
月季是最受欢迎的花卉植物，有从公元前就开始栽培的记录。且经过了数百年人为的品种改良，其结果得到了含有名为花葵素、花青素、黄酮醇的类黄酮的月季。而且，近年来采用基因重组的方法，还培育出了产生自然月季中所没有的花翠素的月季。但是，通过杂交、通过基因重组还均未能得到积累黄酮的月季。
发明内容
在植物的品种改良中使用基因重组的方法的最大优点在于，与通过杂交进行品种改良不同，可利用不能进行杂交的植物、其他生物的基因来改良植物。也就是说，如使用基因重组的方法时，可将其他种的生物的任意基因导入任意的植物、例如月季中，从而赋予该植物新的能力。但是，已知月季与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、烟草(tobacco(Nicotianatabacum L.))等模型植物不同，导入的基因是否发挥功能，很大程度上依赖于该基因的起源、使用的启动子等。
根据WO2005/017147，将类黄酮3’，5’-羟化酶基因(F3’5’H)导入月季时，在基因重组月季中来自矮牵牛、龙胆的相同基因不表达，也未检测出花翠素，有趣的是来自三色堇的相同基因进行表达，可赋予月季产生花翠素的新的能力。此结果表明，不能简单类推出在月季中导入来自何种植物种的基因可发挥功能。
此外还已知，即使可在菊花中导入某种基因，但很难预测该基因能否在菊花中发挥功能，并且随着重组菊花的增龄，导入的基因也会逐渐失去功能。还有报道显示，在重组植物中，在异种基因的转录中经常使用的花椰菜花叶病毒的35S启动子，在龙胆中不发挥功能(参照Mishiba et al.Plant Journal 2005，44541-556)。
为使黄酮在月季中合成，虽可简单地类推为只要使黄酮合成酶基因表达即可，但是，对于使双加氧酶型或细胞色素P450型的何种黄酮合成酶表达更好、或使何种植物起源的黄酮合成酶基因表达更好等，却不能简单地推断，所以需要进行反复试验。另外，辅色作用是在液胞中，花色素苷和黄酮、黄酮醇在一定的浓度下共存时产生的现象，但也证明，对于作为发色源的花色素苷的糖苷化等的修饰状态，需要对作为辅色素的黄酮、黄酮醇进行更适合的糖苷化等的修饰(参照Nature.2005Aug 11；436(7052)791、及Nature，358，515-518(1992))。
也就是说，为了使必要的色调表达，需要使花色素苷和黄酮·黄酮醇为最佳的结构上的组合，另外，使进行何种修饰的花色素苷和黄酮·黄酮醇共存更好，对于这一点也需要进行反复试验。而且，即使黄酮合成酶在月季中发挥功能，因天然月季中柚皮素等的黄烷酮被黄烷酮3-羟化酶(以下简称为“F3H”)迅速羟基化，所以，由黄烷酮不只限于合成黄酮。
因此，本发明提供为使月季中的目的色调表达而含有适合色素的月季。
为解决上述课题，本发明者进行各种探讨，结果发现通过人为地使月季中含有黄酮，可实现目的色调表达，从而完成了本发明。
具体地说，本发明如下 1.月季(a rose)，其特征在于，通过基因重组方法而含有黄酮。
2.根据所述1所述的月季，其中，所述黄酮通过导入的黄酮合成酶基因的表达而生成。
3.根据所述2所述的月季，其中，所述黄酮合成酶基因为来自玄参科的黄酮合成酶基因。
4.根据所述3所述的月季，其中，所述来自玄参科的黄酮合成酶基因为来自玄参科金鱼草(Scrophulariaceae，Antirrhinum majus)的黄酮合成酶基因。
5.根据所述3所述的月季，其中，所述来自玄参科的黄酮合成酶基因为来自玄参科蝴蝶草(Scrophulariaceae，Torenia hybrida)的黄酮合成酶基因。
6.根据所述4所述的月季，其中，所述来自玄参科金鱼草的黄酮合成酶基因为编码(1)～(4)中任一项的基因 (1)具有序列号2记载的氨基酸序列的黄酮合成酶， (2)具有在序列号2记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶， (3)具有与序列号2记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或 (4)由与具有序列号1所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸所编码的黄酮合成酶。
7.根据所述5中所述的月季，其中，所述来自玄参科蝴蝶草的黄酮合成酶基因为编码(1)～(4)中任一项的基因 (1)具有序列号4记载的氨基酸序列的黄酮合成酶， (2)具有在序列号4记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶， (3)具有与序列号4记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或 (4)由与具有序列号3所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的黄酮合成酶。
8.根据所述2～7任一项所述的月季，其中，与导入黄酮合成酶基因前的宿主相比花色发生了变化。
9.根据所述中所述的月季，其中，所述花色的变化为趋向蓝色的变化。
10.根据所述8或9所述的月季，其中，所述花色的变化为L*a*b表色系统色度图中的色相角度(θ)向接近蓝色方向轴270°的变化。
11.根据所述8所述的月季，其中，所述花色的变化为花瓣的反射光谱的最小吸收波长值向长波长侧移动的变化。
12.月季的部分、后代、组织、营养增殖体或细胞，其与所述1～11中任一项所述的月季具有相同的性质。
13.方法，其中，通过用基因重组方法含有黄酮而产生的辅色作用来改变月季的花色。
14.根据所述13所述的方法，其中，所述辅色作用为使花色向蓝色方向变化的作用。
具体实施例方式 用语的定义 在本说明书中使用时，用语“月季(a rose)”是指作为蔷薇目蔷薇科蔷薇属(Order，Rosales，Family，Rosaceae，Genus Rosa)的落叶灌木的观赏用植物的总称，并不限定于特定的品种，还指植物的整体或通常包括花的部分。
在本说明书中使用时，用语“月季”的“部分、后代、组织、营养增殖体或细胞”，只要保持与本发明有关的“月季”所期望的遗传性状，是指来自该“月季”的一切，而不限定于特定。
在本说明书中使用时，用语“高严谨条件”是指在例如6×SSC(1×SSC的组成0.15M NaCl、0.015M柠檬酸钠、pH7.0)、0.5％SDS和5×Denhardt和100μg/ml经变性并断裂成片段的鲑精子DNA和50％甲酰胺的溶液中，将反义链和对象核酸在55℃下保温一夜，进行在0.1×SSC等的条件及/或60℃以上等的条件下的洗涤的条件，特别是指非特异性背景信号实质上不存在的条件。
在本说明书中使用时，用语“L*a*b表色系统色度图中的色相角度(θ)”是指1976年由国际照明委员会(CIE)规定的、在日本也作为JIS8729采用的色相角度(θ)，0°为红色方向，90°为黄色方向，180°为绿色方向，以及270°为蓝色方向。另外，花色可并用相关的色相角度和RHS(英国皇家园艺协会)色谱标准的数据来表示。
黄酮合成基因的导入 使用公知的方法，在月季中同时导入来自紫苏的黄酮合成酶II的基因与来自三色堇的F3’5’H基因等。其结果，在导入来自紫苏的黄酮合成酶II的基因的月季中未检测出黄酮，表明该基因在月季中未发挥功能。另一方面，在导入了来自蝴蝶草或金鱼草的黄酮合成酶II的基因的月季中，检测出了黄酮，可知该基因在月季中发挥了功能。
这样即可培育出以往不存在的积累了黄酮的月季。黄酮在总类黄酮中的含量(％)为1％以上、优选5％以上、更优选10％以上、并且最优选30％以上即可。同时积累了花色素苷和黄酮两者的月季，与仅含有同样的花色素苷的月季相比，颜色相对地呈现蓝色，可知黄酮的积累对赋予蓝色化这一新的性状发挥了作用。
此外，还可知通过杂交试验，此性状可传递给后代。
与本发明相关的酶类，典型地说为具有序列表中记载的特定氨基酸序列的酶。但是，已充分了解到，在酶中不仅是特定的、例如原有的氨基酸序列，即使与酶活性相关的区域以外的区域中的氨基酸序列被修饰，也可维持所需的酶活性。因此，本发明的酶类为具有在序列号所示的特定的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或由其他氨基酸的取代而进行修饰的氨基酸序列，且维持原有的酶活性的蛋白质，以及具有在与序列号所示的特定的氨基酸序列有90％以上序列同一性的氨基酸序列且维持原有的酶活性的蛋白质，这些也包含在本发明的酶中。
而且，还可知如获得了编码某酶的基因，则与该基因在高严谨条件下杂交的核酸编码与该酶具有相同活性的酶的可能性高。因此，由与具有特定序列号所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码、且具有目的酶活性的酶也包含在本发明的酶中。
因此，作为与本发明有关的酶基因，可列举如下 (A)来自金鱼草(Antirrhinum majus)的黄酮合成酶基因 其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因 (1)具有序列号2记载的氨基酸序列的黄酮合成酶， (2)具有在序列号2记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶， (3)具有与序列号2记载的氨基酸序列有90％以上序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或 (4)由与具有序列号1所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的黄酮合成酶。
(B)来自蝴蝶草(Torenia hybrida)的黄酮合成酶基因 其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因 (1)具有序列号4记载的氨基酸序列的黄酮合成酶， (2)具有在序列号4记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶， (3)具有与序列号4记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或 (4)由与具有序列号3所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的黄酮合成酶。
(C)来自紫苏(Perilla frutescens)的黄酮合成酶基因 其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因 (1)具有序列号6记载的氨基酸序列的黄酮合成酶， (2)具有在序列号6记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶， (3)具有与序列号6记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或 (4)由与具有序列号5所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的黄酮合成酶。
(D)来自三色堇(pansy(Viola x wittrockiana))的3’，5’-羟化酶基因 其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因 (1)具有序列号8记载的氨基酸序列的3’，5’-羟化酶， (2)具有在序列号8记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的3’，5’-羟化酶， (3)具有与序列号8记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的3’，5’-羟化酶，或 (4)由与具有序列号7所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的3’，5’-羟化酶。
(E)来自蝴蝶草(Torenia hybrida)的甲基转移酶基因 其为编码下述(1)～(4)中任一项的基因 (1)具有序列号10记载的氨基酸序列的甲基转移酶， (2)具有在序列号10记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的甲基转移酶， (3)具有与序列号10记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的甲基转移酶，或 (4)由与具有序列号9所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的甲基转移酶。
实施例 通过以下的实施例更具体地说明本发明。本实施例的目的仅仅是举例说明本发明，并非限定本发明的范围。
实施例1黄酮对花色素苷的辅色作用的模拟 为了进行黄酮对花色素苷的辅色作用的模拟，首先制备了花色素苷类。花青苷(Cyanin)是从月季品种“Rote Rose”(rose cv.“Rote Rose”)的花瓣中提取、纯化而成。花翠素二葡糖苷(Delphin)为将从马鞭草品种“Tapien Violet”(vberbena cv.“Tapien Violet”or vberbena varietySunmaref TP-V(“Tapien Violet”)(“Tapien”is a Trade Mark registeredin Japan))的花瓣中提取的色素进行碱水解后纯化而成。二甲花翠苷(Malvin)、及木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin 7-O-glucoside)从日本funakoshi株式会社购入。
在如此制备的各种花色素苷中，将黄酮(木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin 7-O-glucoside))以在pH5.0的缓冲液中为0、1、2、4当量的摩尔浓度比添加，测定吸收光谱。作为花色素苷，使用花青苷(Cyanin)(矢车菊素-3，5-二葡萄糖苷(Cyanidin 3，5-diglucoside))、花翠素二葡糖苷(Delphin)(花翠素3，5-二葡萄糖苷(Delphinidin 3，5-diglucoside))、二甲花翠苷(Malvin)(二甲花翠素3，5-二葡萄糖苷(Malvidin 3，5-diglucoside))。花色素苷的浓度花青苷(Cyanin)、花翠素二葡糖苷(Delphin)及二甲花翠苷(Malvin)为1mM。
如以下表1和2中所示，通过添加黄酮，花色素苷水溶液的吸光度增大，其变化的比例(吸光度比)为二甲花翠苷(Malvin)为最大。且最大吸收波长(λmax)也随着黄酮的添加同时向长波长侧移动。其变化的比例二甲花翠苷(Malvin)为最大，其次为花翠素二葡糖苷(Delphin)。而且，通过L*a*b*表色系统进行色彩值的评价时，发现通过添加黄酮，也观察到色彩趋向蓝色的变化，彩度也上升了。其效果二甲花翠苷(Malvin)最为显著。即可说明，木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin 7-O-glucoside)对二甲花翠苷(Malvin)的辅色作用最大。
表1 黄酮添加时花色素苷水溶液的最大吸收波长 (λmax；单位nm)
表2 λmax处相对于不添加黄酮时的吸光度比
实施例2(参考例)向月季品种“Lavande”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自紫苏的黄酮合成酶基因 将含有日本特开2000-279182中记载的来自紫苏的黄酮合成酶基因的质粒、pYFS3用XbaI酶切后，进行末端平滑化，进一步用BamHI酶切，得到约1.8kb的紫苏黄酮合成酶基因片段。另一方面，将WO2005/017147中记载的pSPB906用XhoI酶切后，进行末端平滑化，进一步用BamHI酶切。在此平滑末端和BamHI切割位点之间，插入前述紫苏的黄酮合成酶基因片段，得到906-pYFS3。906-pYES3在El235S启动子和D8终止子(均如WO2005/017147中记载)之间具有来自紫苏的黄酮合成酶基因。
在Ueyama等的报道(Ueyama et al.Plant Science，163，253-263，2002)中记载的pSPB176的BamHI和SalI位点，插入从WO2005/017147记载的pCGP1961中用BamHI和XhoI的部分酶切而切出的三色堇F3’5’H#40基因的片段，将所得质粒作为pSPB575。在该AscI位点，插入将上述的906-pYFS3用AscI酶切后得到的约3.4kb的紫苏的黄酮合成酶基因表达盒。在所得到的质粒中，将F3’5’H #40基因的表达盒与紫苏的黄酮合成酶的表达盒以相同方向连接的载体作为pSPB1310。本质粒在植物中组成型表达三色堇的F3’5’H#40基因和紫苏的黄酮合成酶基因。
将如此制备的pSPB1310导入紫藤色系月季品种“Lavande”(mauve rosevariety“Lavande”)中，得到55个转化体。在进行色素分析的50个个体中，可确认出49个个体中有花翠素的积累，花翠素含有率最高达70％(平均26％)。但是，完全未检测出黄酮，可推测出来自紫苏的黄酮合成酶基因在月季细胞内未发挥功能。
代表性的转化体的分析值如以下表3中所示。
表3
对照Lavande对照 Del花翠素、Cya花青素、Pel花葵素、M杨梅黄素、Q槲皮素、K山奈黄素、 Tri五羟黄酮、Lut木犀草素、Api芹菜素 Del(％)总花色素中的花翠素的比例 实施例3向月季品种“Lavande”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因 将Akashi等的报告(Plant Cell Physiol 40，1182-1186，1999)中记载的来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因插入质粒pBluescript IISK(-)的EcoRI和XhoI位点后的质粒作为pSPB426。将其用KpnI酶切后进行末端平滑化，进一步用BamHI酶切，得到约1.7kb来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因片段。另一方面，将WO2005/017147中记载的pSPB906用XhoI酶切后，进行末端平滑化，进一步用BamHI酶切。在此平滑末端和BamHI切割位点之间，插入前述的蝴蝶草的黄酮合成酶基因片段，得到906-426。
在Ueyama等的报道(Ueyama et al.Plant Science，163，253-263，2002)中记载的pSPB176的BamHI和SalI位点，插入从WO2005/017147中记载的pCGP1961中用BamHI和XhoI的部分酶切而切出的三色堇F3’5’H#40基因的片段，将所得质粒作为pSPB575。在该AscI位点，插入将上述906-426用AscI酶切后所得到的约3.3kb的蝴蝶草的黄酮合成酶基因表达盒。在所得到的质粒中，将F3’5’H#40基因的表达盒和蝴蝶草的黄酮合成酶的表达盒以相同方向连接的载体作为pSPB1309。本质粒在植物中组成型表达三色堇F3’，5’H#40基因和蝴蝶草的黄酮合成酶基因。
将如此制备的pSPB1309导入紫藤色系月季品种“Lavande”中，获得50个转化体。在进行色素分析的38个个体中，可确认出36个个体中有花翠素的积累，花翠素含有率最高达45％(平均12％)。另一方面，还可确认出由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，而使35个个体中也有新的黄酮(木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为1.68mg的高含量。
代表性的转化体的分析值如以下表4中所示。
表4
对照Lavande对照 Del花翠素、Cya花青素、Pel花葵素、M杨梅黄素、 Q槲皮素、K山奈黄素、Tri五羟黄酮、Lut木犀草素、Api芹菜素 Del(％)总花色素中的花翠素的比例 实施例4向月季品种“WKS124”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因 向橙红色系的月季品种“WKS124”(salmon-pink rose variety“WKS124”)中导入实施例3中记载的pSPB1309，得到40个转化体。在进行色素分析的27个个体中，可确认出26个个体中有花翠素的积累，花翠素含有率最高达96％(平均81％)。另一方面，还可确认出由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，而使26个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为4.41mg的高含量。
代表性的转化体的分析值如以下表5中所示。
表5
对照WKS124对照 Del花翠素、Cya花青素、Pel花葵素、M杨梅黄素、 Q槲皮素、K山奈黄素、Tri五羟黄酮、Lut木犀草素、Api芹菜素 Del(％)总花色素中的花翠素的比例 实施例5在月季品种“Lavande”中来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自金鱼草的黄酮合成酶基因的表达和月季内源性黄酮醇合成酶基因的抑制 将Tanaka等的报道(Encyclopedia of rose science vol.1，pp.341-350，ISBN 0-12-227621-3)中记载的编码月季的黄酮醇合成酶的cDNA克隆到质粒载体pBluescript II SK-后的产物作为pRFLS。使用来自载体的多克隆位点上游的序列的Reverse引物(AACAGCTATGACCATG)(序列号11)、和在月季的黄酮醇合成酶cDNA的序列的从5’末端开始约0.8kb下游的序列上附加HindIII识别序列后的RFLS-HindIII引物(GATCTTGTTAAGCTTGTTGTAGACATAC)(序列号12)，以pRFLS为模板根据通常方法进行PCR。
通过将所得到的片段用HindIII部分酶切，而后用SacI酶切，得到来自月季黄酮醇合成酶cDNA的上游约0.85kb的片段。另一方面，将pRFLS用载体的多克隆位点的BamHI和黄酮醇合成酶cDNA内存在的HindIII切割，得到来自月季黄酮醇合成酶cDNA的上游约0.6kb的片段。将来自黄酮醇合成酶cDNA的这些约0.6kb的片段以及约0.85kb的片段，将WO2005/059141中记载的pSPB184插入用BamHI及SacI酶切后得到的BamHI/SacI位点，得到pSPB1402。
接着，将日本特开2000-279182中记载的来自金鱼草的黄酮合成酶基因ANFNS2从载体pBluescript II中用BamHI和XhoI切出，将其与用BamHI和XhoI酶切WO2005/017147中记载的pSPB906而得到的启动子和终止子连接。将其作为pSPB577。将pSPB577用AscI切割后得到的金鱼草的黄酮合成酶表达盒片段插入实施例2中记载的pSPB575的AscI位点，将其作为pSPB908。
将如此得到的pSPB908用AscI部分酶切，在此处，在此插入将pSPB1402用AscI酶切后得到的约3.5kb的来自月季黄酮醇合成酶cDNA的双链RNA表达盒。所得到的质粒pSPB1403是三色堇F3’5’H#40、金鱼草FNS基因、月季FLS基因的双链RNA表达盒以相同方向连接的双元载体。将本质粒设计成为在植物中组成型表达F3’5’H#40基因和金鱼草黄酮合成酶基因，进一步通过RNAi法抑制内源性的黄酮醇合成酶基因的表达。
向紫藤色系月季品种“Lavande”中导入pSPB1403，得到82个转化体。进行色素分析的82个个体中，可确认出64个个体中有花翠素的积累，花翠素含有率最高达72％(平均19％)。另一方面，还可确认出来自金鱼草的黄酮合成酶基因的作用，而使70个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为2.50mg的高含量。
代表性的转化体的分析值如以下表6中所示。
表6
对照Lavande对照 Del花翠素、Cya花青素、Pel花葵素、M杨梅黄素、 Q槲皮素、K山奈黄素、Tri五羟黄酮、Lut木犀草素、Api芹菜素 Del(％)总花色素中的花翠素的比例 实施例6在月季品种“WKS124”中来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自金鱼的草的黄酮合成酶基因的表达和月季内源性黄酮醇合成酶基因的抑制 将实施例5中记载的pSPB1403导入橙红色系月季品种“WKS124”中，得到20个转化体。在进行了色素分析的20个个体的全部中，均可确认出有花翠素的积累，花翠素含有率最高达89％(平均55％)。另一方面，还可确认出来自金鱼草的黄酮合成酶基因的作用，而使20个个体中全部均有新的黄酮(木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为1.26mg的高含量。
代表性的转化体的分析值如以下表7中所示。
表7
对照WKS124对照 Del花翠素、Cya花青素、Pel花葵素、M杨梅黄素、 Q槲皮素、K山奈黄素、Tri五羟黄酮、Lut木犀草素、Api芹菜素 Del(％)总花色素中的花翠素的比例 实施例7向月季品种“WKS124”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因以及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因 将实施例3中记载的pSPB1309进行PacI处理，通过切割存在于来自蝴蝶草的黄酮合成酶表达盒和来自三色堇的F3’5’H#40基因表达盒的连接位点附近(更加严密地说，存在于黄酮合成酶表达盒的D8终止子3’末端附近)的PacI位点和载体的多克隆位点内的PacI位点，切出三色堇F3’5’H#40基因表达盒。
另一方面，将具有WO2003-062428中记载的蝴蝶草的甲基转移酶基因表达盒的双元载体pSPB1530用PacI切割，在其中将上述三色堇F3’5’H#40表达盒、甲基转移酶基因表达盒以相同方向插入。将本质粒作为TMT-BP40。
另一方面，将pSPB1309用AscI切割，切出蝴蝶草的黄酮合成酶表达盒。将其在TMT-BP40的AscI位点与上述表达盒以相同方向插入，将所得到的质粒作为pSFL535。本质粒在植物中组成型表达三色堇F3’5’H#40基因和蝴蝶草的甲基转移酶基因及蝴蝶草的黄酮合成酶基因。
将如此得到的pSFL535导入橙红色系月季品种“WKS124”中，得到173个转化体。在进行花色素分析的98个转化体中，可确认出88个个体中有二甲花翠素(花翠素的3’位和5’位被甲基化的花色素)的积累，通过生成物，可证实在月季的花瓣中，来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。且二甲花翠素含有率最高达84％(平均50％)。
另一方面，还可确认出由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，而使在77个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为4.58mg的高含量。此外，51个个体中检测出被甲基化的五羟黄酮。
代表性的转化体的分析值如以下表8中所示。
实施例8来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因向月季品种“Lavande”的导入 将实施例7中记载的pSFL535导入紫藤色系月季品种“Lavande”，得到130个转化体。在进行花色素分析的118个转化体中，可确认出37个个体中有二甲花翠素(花翠素的3’位和5’位被甲基化的花色素)的积累，通过生成物，可证实月季的花瓣中，来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。且二甲花翠素含有率最高达55.6％(平均20.5％)。
另一方面，还可确认出由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，而使在78个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为5.11mg的高含量。此外，在产生黄酮的转化体中，20个个体中检测出了被甲基化的五羟黄酮或木犀草素。
代表性的转化体的分析值如以下表9中所示。
实施例9向月季品种“WKS82”中导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因以及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因 将实施例7中记载的pSFL535导入紫藤色系月季品种“WKS82”(mauverose variety“WKS82”)中，得到250个转化体。在进行花色素分析的232个转化体中，可确认出110个个体中有二甲花翠素(花翠素的3’位和5’位被甲基化的花色素)的积累，通过生成物，可证实在月季的花瓣中，来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。此外，二甲花翠素含有率最高达65.2％(平均19.7％)。
另一方面，还可确认出由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，而使125个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为4.71mg的高含量。此外，产生黄酮的转化体中，80个个体中检测出了被甲基化的五羟黄酮或木犀草素。
代表性的转化体的分析值如以下表10中所示。
实施例10来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因向月季品种“WKS140”的导入 将实施例7中记载的pSFL535导入紫藤色系月季品种“WKS140”(mauverose variety“WKS140”)中，得到74个转化体。在进行花色素分析的74个转化体中，可确认出20个个体中有二甲花翠素(花翠素的3’位和5’位被甲基化的花色素)的积累，通过生成物，可证实月季的花瓣中，来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。此外，二甲花翠素含有率最高达51.3％(平均33.5％)。
另一方面，还可确认出由于来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，而使29个个体中有新的黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为3.04mg的高含量。此外，产生了黄酮的转化体中的20个个体中，可检测出了被甲基化的五羟黄酮或木犀草素。
代表性的转化体的分析值如以下表11中所示。
实施例11黄酮及二甲花翠素合成能力向后代的传递-导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因的基因重组月季与栽培月季之间的杂交 为考察赋予月季的黄酮合成能力向后代的遗传模式，使用实施例7培育的产生二甲花翠素及黄酮的月季(表8中、植物No.6)作为花粉亲本来进行杂交。种子亲本使用中轮系栽培月季“Medeo”(florbunda rosevariety“Medeo”)。
对获得的转化体F1杂种后代中的10个个体进行色素分析，结果确认在7个个体中有二甲花翠素的积累，通过生成物，可证实在月季的花瓣中来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因发挥了功能。此外，二甲花翠素含有率最高达68.2％(平均46.6％)。
另一方面，还可确认出来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的作用，而使8个转化体后代中也有黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为7.35mg的极高的含量。此外，在产生黄酮的转化体后代中，在6个个体中检测出了被甲基化的五羟黄酮。
代表性的转化体后代的分析值如以下表12中所示。
实施例12黄酮合成能力向后代的传递 导入来自三色堇的F3’5’H#40基因及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因的月季品种“WKS124”与导入来自三色堇的F3’5’H#40基因和来自蝴蝶草的黄酮合成酶基因的月季品种“Lavande”的杂交 为了考察赋予月季的黄酮合成能力向后代的遗传模式，使用实施例3培育的黄酮生产株(表4中、植物No.4)作为花粉亲本使用进行杂交。种子亲本使用在月季品种WKS124中导入pSPB1532的在来自三色堇的F3’5’H#40基因及来自蝴蝶草的花色素苷甲基转移酶基因的作用下，花瓣中大量积累了二甲花翠素的转化体WKS124/1532-12-1(如WO2003/062428中记载)。
在进行所获得的转化体后代中149个个体的色素分析时，可确认出88个个体中有黄酮(五羟黄酮、木犀草素、芹菜素)的积累。黄酮总量最高在每1g新鲜花瓣重量中为4.09mg的高含量。此外，还检测出了42个个体中被甲基化的五羟黄酮，检测出了11个个体中被甲基化的木犀草素(Chrysoeriol(3’Met-Lut))。此外，在进行色素分析的149个个体中，可确认在129个个体中有二甲花翠素的积累。二甲花翠素含有率最高达79％(平均36％)。
代表性的转化体后代的分析值如以下表13中所示。
实施例13含有黄酮的月季的花色的评价 对于实施例4及7中培育出的转化体(以月季品种“WKS124”为宿主)，分成下述3组，(1)积累的主要色素为花翠素，不含黄酮，(2)积累的主要色素为花翠素，含有黄酮，及(3)宿主(积累的主要色素为花葵素，对于各个花瓣的色彩使用分光测色计进行评价(n＝10)。
在主色素为花翠素型的月季、二甲花翠素型的月季的任一种中，在黄酮共存时花瓣的色相角度均向蓝色方向移动。而且，在主要色素为二甲花翠素型的月季中，其趋势更为显著，反射光谱的最小吸收波长(λMin)也向长波长侧大幅移动。由上述结果可确认出，由于黄酮的共存，花瓣的色彩变蓝。结果如下表14中所示。
表14
色相角度(hue)在L*a*b*表色系统中，将a*(红色方向)的轴作为0。，由此向逆时针方向的色相移动的角度，设计为便于明白颜色位置的方式。90°为黄色方向，180°为绿色方向，270°为蓝色方向，0°(＝360°)为红色方向。即数值越接近270°时色相越蓝。
根据本发明，在作为观赏用植物深受人们喜爱的花卉植物月季中，通过基因重组方法使其含有黄酮，可利用辅色作用使月季的花色向蓝色方向变化。推测具有蓝色花色的月季作为观赏用植物有商品需求。
在此，将本说明书中引用的所有专利文献、非专利技术文献，在本说明书中个別或将其作为整体进行引用。
至此，说明了本发明，但本发明应可以进行并未脱离其本质的修正或变更，本发明的范围，并不是根据实施例的记载，而是根据权利要求书来界定的。
序列表
<110>国际花卉开发有限公司
(International Flower Developments Proprietary Limited)
<120>含有黄酮的月季及其生产方法
(Rose comprising flavone and process for the preparation thereof)
<130>IFD(STY)-V633-PCT，TW
<140>PCT/JP2008/
<141>2008-06-19
<150>JP2007-162845
<151>2007-06-20
<160>12
<210>1
<211>1706
<212>DNA
<213>金鱼草(Antirrhinum majus)
<220>
<221>CDS
<222>(41)...(1557)
<223>编码黄酮合成酶的核苷酸序列(Nucleotide sequence encoding flavone
synthase)
<400>1
gctttacaca cacacacaca cacacacaca caaacaaaa atg tct aca ctt gtc tac 57
Met Ser Thr Leu Val Tyr
1 5
agc aca ctc ttc atc ctc tca acc ctc ctc ctc acc ctc cta acc cgc105
Ser Thr Leu Phe Ile Leu Ser Thr Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Arg
10 15 20
acc cgc cgc aag acc cgc ccg ccc ggc cca tta gcc ctc ccc tta ata153
Thr Arg Arg Lys Thr Arg Pro Pro Gly Pro Leu Ala Leu Pro Leu Ile
25 30 35
ggc cac tta cac ctc ctc ggc cca aag ctc cac cac acc ttc cac caa201
Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Lys Leu His His Thr Phe His Gln
40 45 50
ttc tcc caa cgc tac ggc ccg ctc atc cag ctc tac ctc ggc tcc gtc249
Phe Ser Gln Arg Tyr Gly Pro Leu Ile Gln Leu Tyr Leu Gly Ser Val
55 60 65 70
cca tgc gtc gtc gct tcc acg ccc gaa ctc gcc cgc gaa ttc ctc aag297
Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys
75 80 85
acg cac gaa ctc gac ttc tcg tcc cgc aag cac tcc acc gcc atc gac345
Thr His Glu Leu Asp Phe Ser Ser Arg Lys His Ser Thr Ala Ile Asp
90 95 100
atc gtc acg tac gac tcc tcg ttc gcc ttc gcg ccg tac ggg ccg tac393
Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe Ala Pro Tyr Gly Pro Tyr
105 110 115
tgg aaa ttc atc aag aaa tta tgt act tac gag cta ctg ggt gcc cgg44l
Trp Lys Phe Ile Lys Lys Leu Cys Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg
120 125 130
aac ttg agc cat ttc cag ccc att aga gct ttg gag gtc aac agt ttc489
Asn Leu Ser His Phe Gln Pro Ile Arg Ala Leu Glu Val Asn Ser Phe
135 140 145 150
ttg aga att ttg tac gag aaa aca gag cag aaa cag agt gtt aat gtg537
Leu Arg Ile Leu Tyr Glu Lys Thr Glu Gln Lys Gln Ser Val Asn Val
155 160 165
act gag gag ctt gtg aag ctg acg agt aat gtg atc agt aac atg atg585
Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn Val Ile Ser Asn Met Met
170 175 180
ttg ggg atc agg tgt tcg ggg acg gaa ggg gag gcg gag gtg gcg agg633
Leu Gly Ile Arg Cys Ser Gly Thr Glu Gly Glu Ala Glu Val Ala Arg
185 190 195
acg gtg ata agg gag gtg acg cag ata ttt ggg gag ttt gat gtg tcg681
Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln Ile Phe Gly Glu Phe Asp Val Ser
200 205 210
gag att gtt tgg ttt tgt aag aat ttg gat ctg cag ggg att agg aag729
Glu Ile Val Trp Phe Cys Lys Asn Leu Asp Leu Gln Gly Ile Arg Lys
215 220 225 230
agg tcg gag gat att agg agg agg tat gat gct ttg ttg gag aag att777
Arg Ser Glu Asp Ile Arg Arg Arg Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys Ile
235 240 245
att agt gat agg gag agg ttg agg ttg agg ggg ggt ggt ggt gga ggg825
Ile Ser Asp Arg Glu Arg Leu Arg Leu Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly
250 255 260
ggt gga gag gtg aag gat ttt ttg gat atg ttg ttg gat gtg atg gag873
Gly Gly Glu Val Lys Asp Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu
265 270 275
agt gag aaa tcg gag gtg gag ttt acg agg gag cat ctc aaa gct ttg921
Ser Glu Lys Ser Glu Val Glu Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu
280 285 290
att ctg gat ttc ttc act gcc ggt aca gac aca aca gca atc aca aca969
Ile Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Ile Thr Thr
295 300 305 310
gaa tgg gca ata gca gaa ctc att agc aat cca aat gta ctc aaa aaa1017
Glu Trp Ala Ile Ala Glu Leu Ile Ser Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys
315 320 325
gct caa gaa gag atg gac aaa gtc ata gga tca caa agg ttg ttg caa1065
Ala Gln Glu Glu Met Asp Lys Val Ile Gly Ser Gln Arg Leu Leu Gln
330 335 340
gaa tcc gac gcc cct aac ttg cct tac ctc aac gcg atc ata aaa gaa1113
Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu Asn Ala Ile Ile Lys Glu
345 350 355
acg ttc cgt ctc cac cct cca atc ccc atg ctc act aga aaa tca att1161
Thr Phe Arg Leu His Pro Pro Ile Pro Met Leu Thr Arg Lys Ser Ile
360 365 370
tct gac gtt gtg gtc aac ggg tac acg atc cct gcc aaa acg cta ttg1209
Ser Asp Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Ile Pro Ala Lys Thr Leu Leu
375 380 385 390
ttt gtc aac ctt tgg tcc atg gga agg aat cct aac tac tgg gaa aat1257
Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Asn
395 400 405
ccg atg gag ttc cga ccc gag agg ttt ctc gag aaa ggg acc ggg tcg1305
Pro Met Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Thr Gly Ser
410 415 420
ata gac gtt aaa ggg cag cat ttc gag ttg ctg ccg ttt ggc acg ggc1353
Ile Asp Val Lys Gly Gln His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly
425 430 435
agg cgg ggc tgc ccg ggg atg ttg tta ggc atg cag gag ttg ttt agt1401
Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Gly Met Gln Glu Leu Phe Ser
440 445 450
att atc ggg gct atg gtg cag tgc ttc gat tgg aaa ctg ccc gat ggt1449
Ile Ile Gly Ala Met Val Gln Cys Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asp Gly
455 460 465 470
gtg aag tcg gtc gac atg acc gag cgg ccc ggg ttg acg gct cca cgt1497
Val Lys Ser Val Asp Met Thr Glu Arg Pro Gly Leu Thr Ala Pro Arg
475 480 485
gcc aat gat ttg gtg tgc caa ttg gtg cca cgg att gac ccg gtc gtt1545
Ala Asn Asp Leu Val Cys Gln Leu Val Pro Arg Ile Asp Pro Val Val
490 495 500
gtc tcc gga ccg tgaaccttaa ggtagtatcg ataatctgtt taattaaatt1597
Val Ser Gly Pro
505
gttatttgtt gtgaggattt gatttttgtt atgtatgatt atgcgtggat taagataagc 1657
ctgcaaggac aaattccctt tctttgattg atgtcaatga gtttgtgtc 1706
<210>2
<211>506
<212>PRT
<213>金鱼草(Antirrhinum majus)
<220>
<221>
<222>
<223>黄酮合成酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of flavone synthase)
<400>2
Met Ser Thr Leu Val Tyr Ser Thr Leu Phe Ile Leu Ser Thr Leu Leu
1 5 10 15
Leu Thr Leu Leu Thr Arg Thr Arg Arg Lys Thr Arg Pro Pro Gly Pro
20 25 30
Leu Ala Leu Pro Leu Ile Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Lys Leu
35 40 45
His His Thr Phe His Gln Phe Ser Gln Arg Tyr Gly Pro Leu Ile Gln
50 55 60
Leu Tyr Leu Gly Ser Val Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu Leu
65 70 75 80
Ala Arg Glu Phe Leu Lys Thr His Glu Leu Asp Phe Ser Ser Arg Lys
85 90 95
His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe
100 105 110
Ala Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Phe Ile Lys Lys Leu Cys Thr Tyr
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ser His Phe Gln Pro Ile Arg Ala
130 135 140
Leu Glu Val Asn Ser Phe Leu Arg Ile Leu Tyr Glu Lys Thr Glu Gln
145 150 155 160
Lys Gln Ser Val Asn Val Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn
165 170 175
Val Ile Ser Asn Met Met Leu Gly Ile Arg Cys Ser Gly Thr Glu Gly
180 185 190
Glu Ala Glu Val Ala Arg Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln Ile Phe
195 200 205
Gly Glu Phe Asp Val Ser Glu Ile Val Trp Phe Cys Lys Asn Leu Asp
210 215 220
Leu Gln Gly Ile Arg Lys Arg Ser Glu Asp Ile Arg Arg Arg Tyr Asp
225 230 235 240
Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Ser Asp Arg Glu Arg Leu Arg Leu Arg
245 250v255
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Val Lys Asp Phe Leu Asp Met
260 265 270
Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Glu Lys Ser Glu Val Glu Phe Thr Arg
275 280 285
Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp
290 295 300
Thr Thr Ala Ile Thr Thr Glu Trp Ala Ile Ala Glu Leu Ile Ser Asn
305 310 315 320
Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Met Asp Lys Val Ile Gly
325 330 335
Ser Gln Arg Leu Leu Gln Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu
340 345 350
Asn Ala Ile Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro Pro Ile Pro Met
355 360 365
Leu Thr Arg Lys Ser Ile Ser Asp Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Ile
370 375 380
Pro Ala Lys Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn
385 390 395 400
Pro Asn Tyr Trp Glu Asn Pro Met Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Leu
405 410 415
Glu Lys Gly Thr Gly Ser Ile Asp Val Lys Gly Gln His Phe Glu Leu
420 425 430
Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Gly
435 440 445
Met Gln Glu Leu Phe Ser Ile Ile Gly Ala Met Val Gln Cys Phe Asp
450 455 460
Trp Lys Leu Pro Asp Gly Val Lys Ser Val Asp Met Thr Glu Arg Pro
465 470 475 480
Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Asn Asp Leu Val Cys Gln Leu Val Pro
485 490 495
Arg Ile Asp Pro Val Val Val Ser Gly Pro
500 505
<210>3
<211>1685
<212>DNA
<213>蝴蝶草(Torenia hybrida)
<220>
<221>CDS
<222>(57)...(1592)
<223>编码黄酮合成酶的核苷酸序列(Nucleotide sequence encoding flavone
synthase)
<400>3
atcgaaaccg ctatatcatt acatttacaa cagcgctaaa aaaatatata taaagc atg 59
Met
1
gac aca gtc tta atc aca ctc tac acc gcc ctg ttc gtc atc acc acc107
Asp Thr Val Leu Ile Thr Leu Tyr Thr Ala Leu Phe Val Ile Thr Thr
5 10 15
acc ttc ctc ctc ctc ctc cgc cga agg gga cca ccg tct ccg ccc ggt155
Thr Phe Leu Leu Leu Leu Arg Arg Arg Gly Pro Pro Ser Pro Pro Gly
20 25 30
cct ctc tcc cta ccc ata att ggc cac ctc cac ctc ctc ggc cca aga203
Pro Leu Ser Leu Pro Ile Ile Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Arg
35 40 45
ctc cac cac acg ttc cat gaa ttc tca ctc aaa tac ggc cca ttg atc251
Leu His His Thr Phe His Glu Phe Ser Leu Lys Tyr Gly Pro Leu Ile
50 55 60 65
cag ctc aag ctc ggc tcg atc ccg tgc gtc gtg gcc tcg acg ccc gag299
Gln Leu Lys Leu Gly Ser Ile Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu
70 75 80
ctc gcg aga gag ttt ctt aag acg aac gag ctc gcg ttc tcc tct cgc347
Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys Thr Asn Glu Leu Ala Phe Ser Ser Arg
85 90 95
aag cac tct acg gcc ata gac atc gtc acc tac gac tcg tcc ttt gct395
Lys His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala
100 105 110
ttc tct ccg tac gga ccc tac tgg aag tac atc aag aaa ctg tgt acc443
Phe Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Tyr Ile Lys Lys Leu Cys Thr
115 120v125
tac gag ctg ctc gga gcg agg aac ctc gga cac ttt cag ccc att agg491
Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Gly His Phe Gln Pro Ile Arg
130 135 140 145
aat ctc gag gtc agg tcc ttt ctg cag ctt ctg atg cac aag agc ttt539
Asn Leu Glu Val Arg Ser Phe Leu Gln Leu Leu Met His Lys Ser Phe
150 155 160
aag ggc gag agt gtg aat gtg aca gac gag ctg gtg agg ctg acg agc587
Lys Gly Glu Ser Val Asn Val Thr Asp Glu Leu Val Arg Leu Thr Ser
165 170 175
aat gtg ata tcc cac atg atg ctg agc ata agg tgc tcg gaa gat gaa635
Asn Val Ile Ser His Met Met Leu Ser Ile Arg Cys Ser Glu Asp Glu
180 185 190
ggc gat gct gag gcg gcg aga aca gtg ata cgc gag gtg acg cag ata683
Gly Asp Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln Ile
195 200 205
ttt ggg gaa ttc gat gtt acg gac ata ata tgg ttt tgc aag aaa ttc731
Phe Gly Glu Phe Asp Val Thr Asp Ile Ile Trp Phe Cys Lys Lys Phe
210 215 220 225
gat ctg cag ggg ata aag aag agg tca gag gat att cag agg agg tat779
Asp Leu Gln Gly Ile Lys Lys Arg Ser Glu Asp Ile Gln Arg Arg Tyr
230 235 240
gat gct ttg ctc gag aag att att agt gat aga gag aga tcg agg agg827
Asp Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Ser Asp Arg Glu Arg Ser Arg Arg
245 250 255
caa aat cgt gat aag cat ggt ggc ggt aac aat gag gag gcc aag gat875
Gln Asn Arg Asp Lys His Gly Gly Gly Asn Asn Glu Glu Ala Lys Asp
260 265 270
ttt ctt gat atg ttg ctt gat gtg atg gag agt ggg gac acg gag gtc923
Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Gly Asp Thr Glu Val
275 280 285
aaa ttc act aga gag cat ctc aag gct ttg att ctg gat ttc ttc acg971
Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe Phe Thr
290 295 300 305
gcc ggt acg gac aca aca gcc ata gcc acc gag tgg gcc atc gcc gag1019
Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Ile Ala Thr Glu Trp Ala Ile Ala Glu
310 315 320
ctc atc aac aac ccg aac gtc ttg aag aag gcc caa gaa gaa ata tcc1067
Leu Ile Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Ile Ser
325 330 335
cgg atc atc gga acc aag cgg atc gta caa gaa tcc gac gcc cca gac1115
Arg Ile Ile Gly Thr Lys Arg Ile Val Gln Glu Ser Asp Ala Pro Asp
340 345 350
cta ccc tac ctc cag gcc atc atc aag gag acg ttc cgg ctc cac cca1163
Leu Pro Tyr Leu Gln Ala Ile Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro
355 360 365
ccg atc ccg atg ctc tcg cgt aag tcc acc tcc gat tgc acg gtc aac1211
Pro Ile Pro Met Leu Ser Arg Lys Ser Thr Ser Asp Cys Thr Val Asn
370 375 380 385
ggc tac aaa atc caa gcc aag agc ctc ttg ttc gtg aac ata tgg tcc1259
Gly Tyr Lys Ile Gln Ala Lys Ser Leu Leu Phe Val Asn Ile Trp Ser
390 395 400
atc ggt cga aac cct aat tac tgg gaa agc cct atg gag ttc agg ccc1307
Ile Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Ser Pro Met Glu Phe Arg Pro
405 410 415
gag cgg ttc ttg gag aag gga cgc gag tcc atc gac gtc aag ggc cag1355
Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Arg Glu Ser Ile Asp Val Lys Gly Gln
420 425 430
cac ttt gag ctc ttg cct ttt ggg acg ggc cgc agg ggc tgt ccc ggt1403
His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly
435 440 445
atg ttg ctg gct ata caa gag gtg gtc agc atc att ggg acc atg gtt1451
Met Leu Leu Ala Ile Gln Glu Val Val Ser Ile Ile Gly Thr Met Val
450 455 460 465
cag tgc ttc gac tgg aaa ttg gca gat ggt tcg ggc aat aat gtg gac1499
Gln Cys Phe Asp Trp Lys Leu Ala Asp Gly Ser Gly Asn Asn Val Asp
470 475 480
atg acc gaa cgg tct gga ttg acc gct ccg aga gcg ttc gat ctg gtt1547
Met Thr Glu Arg Ser Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Phe Asp Leu Val
485 490 495
tgc cgg ttg tat cca cgg gtt gac ccg gcc aca ata tcg ggt gct1592
Cys Arg Leu Tyr Pro Arg Val Asp Pro Ala Thr Ile Ser Gly Ala
500 505 510
tgatgtagta gggtgaggcg cgtgttggtg ttttatcttt cggttttgtt ctgttagtat 1652
tattatggtc tgtgttgaag cctcaaggat ttt 1685
<210>4
<211>512
<212>PRT
<213>蝴蝶草(Torenia hybrida)
<220>
<221>
<222>
<223>黄酮合成酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of flavone synthase)
<400>4
Met Asp Thr Val Leu Ile Thr Leu Tyr Thr Ala Leu Phe Val Ile Thr
1 5 10 15
Thr Thr Phe Leu Leu Leu Leu Arg Arg Arg Gly Pro Pro Ser Pro Pro
20 25 30
Gly Pro Leu Ser Leu Pro Ile Ile Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro
35 40 45
Arg Leu His His Thr Phe His Glu Phe Ser Leu Lys Tyr Gly Pro Leu
50 55 60
Ile Gln Leu Lys Leu Gly Ser Ile Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro
65 70 75 80
Glu Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys Thr Asn Glu Leu Ala Phe Ser Ser
85 90 95
Arg Lys His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe
100 105 110
Ala Phe Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys TyrIle Lys Lys Leu Cys
115 120 125
Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Gly His Phe Gln Pro Ile
130 135 140
Arg Asn Leu Glu Val Arg Ser Phe Leu Gln Leu Leu Met His Lys Ser
145 150 155 160
Phe Lys Gly Glu Ser Val Asn Val Thr Asp Glu Leu Val Arg Leu Thr
165 170 175
Ser Asn Val Ile Ser His Met Met Leu Ser Ile Arg Cys Ser Glu Asp
180 185 190
Glu Gly Asp Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln
195 200 205
Ile Phe Gly Glu Phe Asp Val Thr Asp Ile Ile Trp Phe Cys Lys Lys
210 215 220
Phe Asp Leu Gln Gly Ile Lys Lys Arg Ser Glu Asp Ile Gln Arg Arg
225 230 235 240
Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Ser Asp Arg Glu Arg Ser Arg
245 250 255
Arg Gln Asn Arg Asp Lys His Gly Gly Gly Asn Asn Glu Glu Ala Lys
260 265 270
Asp Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Gly Asp Thr Glu
275 280 285
Val Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe Phe
290 295 300
Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Ile Ala Thr Glu Trp Ala Ile Ala
305 310 315 320
Glu Leu Ile Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Ile
325 330 335
Ser Arg Ile Ile Gly Thr Lys Arg Ile Val Gln Glu Ser Asp Ala Pro
340 345 350
Asp Leu Pro Tyr Leu Gln Ala Ile Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu His
355 360 365
Pro Pro Ile Pro Met Leu Ser Arg Lys Ser Thr Ser Asp Cys Thr Val
370 375 380
Asn Gly Tyr Lys Ile Gln Ala Lys Ser Leu Leu Phe Val Asn Ile Trp
385 390 395 400
Ser Ile Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Ser Pro Met Glu Phe Arg
405 410 415
Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Arg Glu Ser Ile Asp Val Lys Gly
420 425 430
Gln His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro
435 440 445
Gly Met Leu Leu Ala Ile Gln Glu Val Val Ser Ile Ile Gly Thr Met
450 455 460
Val Gln Cys Phe Asp Trp Lys Leu Ala Asp Gly Ser Gly Asn Asn Val
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Asp Met Thr Glu Arg Ser Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Phe Asp Leu
485 490 495
Val Cys Arg Leu Tyr Pro Arg Val Asp Pro Ala Thr Ile Ser Gly Ala
500 505 510
<210>5
<211>1770
<212>DNA
<213>紫苏(Perilla frutescens)
<220>
<221>CDS
<222>(21)...(1538)
<223>编码黄酮合成酶的核苷酸序列(Nucleotide sequence encoding flavone
synthase)
<400>5
tgtcgacgga gcaagtggaa atg gca ctg tac gcc gcc ctc ttc ctc ctg 50
Met Ala Leu Tyr Ala Ala Leu Phe Leu Leu
1 5 10
tcc gcc gcc gtg gtc cgc tcc gtt ctg gat cga aaa cgc ggg cgg ccg98
Ser Ala Ala Val Val Arg Ser Val Leu Asp Arg Lys Arg Gly Arg Pro
15 20 25
ccc tac cct ccc ggg ccg ttc cct ctt ccc atc atc ggc cac tta cac146
Pro Tyr Pro Pro Gly Pro Phe Pro Leu Pro Ile Ile Gly His Leu His
30 35 40
ctc ctc ggg ccg aga ctc cac caa acc ttc cac gat ctg tcc caa cgg194
Leu Leu Gly Pro Arg Leu His Gln Thr Phe His Asp Leu Ser Gln Arg
45 50 55
tac ggg ccc tta atg cag ctc cgc ctc ggg tcc atc cgc tgc gtc att242
Tyr Gly Pro Leu Met Gln Leu Arg Leu Gly Ser Ile Arg Cys Val Ile
60 65 70
gct gcc tcg ccg gag ctc gcc aag gaa tgc ctc aag aca cac gag ctc290
Ala Ala Ser Pro Glu Leu Ala Lys Glu Cys Leu Lys Thr His Glu Leu
75 80 85 90
gtc ttc tcc tcc cgc aaa cac tcc acc gcc att gat atc gtc acc tac338
Val Phe Ser Ser Arg Lys His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr
95 100 105
gat tca tcc ttc gct ttc tct ccc tac ggg cct tac tgg aaa ttc atc386
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110 115 120
aag aaa tta tgc acc tac gag ctg ctc ggg gcc cga aat ctc gcc cac434
Lys Lys Leu Cys Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ala His
125 130 135
ttt cag ccc atc agg act ctc gaa gtc aag tct ttc ctc caa att ctt482
Phe Gln Pro Ile Arg Thr Leu Glu Val Lys Ser Phe Leu Gln Ile Leu
140 145 150
atg cgc aag ggt gaa tcg ggg gag agc ttc aac gtg act gag gag ctc530
Met Arg Lys Gly Glu Ser Gly Glu Ser Phe Asn Val Thr Glu Glu Leu
155 160 165 170
gtg aag ctg acg agc aac gtc ata tcg cat atg atg ctg agc ata cgg578
Val Lys Leu Thr Ser Asn Val Ile Ser His Met Met Leu Ser Ile Arg
175 180 185
tgt tca gag acg gag tcg gag gcg gag gcg gcg agg acg gtg att cgg626
Cys Ser Glu Thr Glu Ser Glu Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val Ile Arg
190 195 200
gag gtc acg cag ata ttt ggg gag ttc gac gtc tcc gac atc ata tgg674
Glu Val Thr Gln Ile Phe Gly Glu Phe Asp Val Ser Asp Ile Ile Trp
205 210 215
ctt tgt aag aac ttc gat ttc caa ggt ata agg aag cgg tcc gag gat722
Leu Cys Lys Asn Phe Asp Phe Gln Gly Ile Arg Lys Arg Ser Glu Asp
220 225 230
atc cag agg aga tat gat gct ctg ctg gag aag atc atc acc gac aga770
Ile Gln Arg Arg Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Thr Asp Arg
235 240 245 250
gag aag cag agg cgg acc cac ggc ggc ggt ggc ggc ggc ggg gaa gcc818
Glu Lys Gln Arg Arg Thr His Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Ala
255 260 265
aag gat ttt ctt gac atg ttc ctc gac ata atg gag agc ggg aaa gcc866
Lys Asp Phe Leu Asp Met Phe Leu Asp Ile Met Glu Ser Gly Lys Ala
270 275 280
gaa gtt aaa ttc acg agg gag cat ctc aaa gct ttg att ctg gat ttc914
Glu Val Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe
285 290 295
ttc acc gcc ggc acc gac acg acg gcg atc gtg tgt gaa tgg gcg ata962
Phe Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala Ile Val Cys Glu Trp Ala Ile
300 305 310
gca gaa gtg atc aac aat cca aat gtg ttg aag aaa gct caa gaa gag1010
Ala Glu Val Ile Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu
315 320 325 330
att gcc aac atc gtc gga ttc gac aga att ctg caa gaa tcc gac gcc1058
Ile Ala Asn Ile Val Gly Phe Asp Arg Ile Leu Gln Glu Ser Asp Ala
335 340 345
cca aat ctg ccc tac ctt caa gcc ctc atc aaa gaa aca ttc cgg ctc1106
Pro Asn Leu Pro Tyr Leu Gln Ala Leu Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu
350 355 360
cac cct cca atc cca atg ctg gcg agg aaa tcg atc tcc gac tgc gtc1154
His Pro Pro Ile Pro Met Leu Ala Arg Lys Ser Ile Ser Asp Cys Val
365 370 375
atc gac ggc tac atg att ccg gcc aac acg ctg ctc ttc gtc aac ctc1202
Ile Asp Gly Tyr Met Ile Pro Ala Asn Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu
380 385 390
tgg tcc atg ggg cgg aac cct aaa atc tgg gac tac ccg acg gcg ttc1250
Trp Ser Met Gly Arg Asn Pro Lys Ile Trp Asp Tyr Pro Thr Ala Phe
395 400 405 410
cag ccg gag agg ttt ctg gag aag gaa aag gcc gcc atc gat gtt aaa1298
Gln Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Glu Lys Ala Ala Ile Asp Val Lys
415 420 425
ggg cag cat ttt gag ctg cta ccg ttc gga acg ggc agg aga ggc tgc1346
Gly Gln His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys
430 435 440
cca ggg atg ctt tta gcc att cag gag gtg gtc atc ata att ggg acg1394
Pro Gly Met Leu Leu Ala Ile Gln Glu Val Va1 Ile Ile Ile Gly Thr
445 450 455
atg att caa tgc ttc gat tgg aag ctg ccc gac ggc tcc ggc cat gtt1442
Met Ile Gln Cys Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asp Gly Ser Gly His Val
460 465 470
gat atg gca gaa cgg cca ggg ctc acg gca ccg cga gag acc gat ttg1490
Asp Met Ala Glu Arg Pro Gly Leu Thr Ala Pro Arg Glu Thr Asp Leu
475 480 485 490
ttt tgc cgt gtg gtg ccg cga gtt gat ccg ttg gtt gtt tcc acc cag1538
Phe Cys Arg Val Val Pro Arg Val Asp Pro Leu Val Val Ser Thr Gln
495 500 505
tgatcacccc ctttaaattt attaatgata tatttttatt ttgagaaaaa ataaaaatgc 1598
taattgtttt gtttcatgat gtaattgtta attagtttct attgtgcgct gtcgcgtgtc 1658
gcgtggctta agataagatt gtatcattgg tacctaggat gtattttcat tttcaataaa 1718
ttattttgtg ctgtgtatat taaaaaaaaa aaagaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1770
<210>6
<211>506
<212>PRT
<213>紫苏(Perilla frutescens)
<220>
<221>
<222>
<223>黄酮合成酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of flavone synthase)
<400>6
Met Ala Leu Tyr Ala Ala Leu Phe Leu Leu Ser Ala Ala Val Val Arg
1 5 10 15
Ser Val Leu Asp Arg Lys Arg Gly Arg Pro Pro Tyr Pro Pro Gly Pro
20 25 30
Phe Pro Leu Pro Ile Ile Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Arg Leu
35 40 45
His Gln Thr Phe His Asp Leu Ser Gln Arg Tyr Gly Pro Leu Met Gln
50 55 60
Leu Arg Leu Gly Ser Ile Arg Cys Val Ile Ala Ala Ser Pro Glu Leu
65 70 75 80
Ala Lys Glu Cys Leu Lys Thr His Glu Leu Val Phe Ser Ser Arg Lys
85 90 95
His Ser Thr Ala Ile Asp Ile Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe
100 105 110
Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Phe Ile Lys Lys Leu Cys Thr Tyr
115 120 125
Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ala His Phe Gln Pro Ile Arg Thr
130 135 140
Leu Glu Val Lys Ser Phe Leu Gln Ile Leu Met Arg Lys Gly Glu Ser
145 150 155 160
Gly Glu Ser Phe Asn Val Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn
165 170 175
Val Ile Ser His Met Met Leu Ser Ile Arg Cys Ser Glu Thr Glu Ser
180 185 190
Glu Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val Ile Arg Glu Val Thr Gln Ile Phe
195 200 205
Gly Glu Phe Asp Val Ser Asp Ile Ile Trp Leu Cys Lys Asn Phe Asp
210 215 220
Phe Gln Gly Ile Arg Lys Arg Ser Glu Asp Ile Gln Arg Arg Tyr Asp
225 230 235 240
Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ile Thr Asp Arg Glu Lys Gln Arg Arg Thr
245 250 255
His Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Ala Lys Asp Phe Leu Asp Met
260 265 270
Phe Leu Asp Ile Met Glu Ser Gly Lys Ala Glu Val Lys Phe Thr Arg
275 280 285
Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp
290 295 300
Thr Thr Ala Ile Val Cys Glu Trp Ala Ile Ala Glu Val Ile Asn Asn
305 310 315 320
Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Ile Ala Asn Ile Val Gly
325 330 335
Phe Asp Arg Ile Leu Gln Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu
340 345 350
Gln Ala Leu Ile Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro Pro Ile Pro Met
355 360 365
Leu Ala Arg Lys Ser Ile Ser Asp Cys Val Ile Asp Gly Tyr Met Ile
370 375 380
Pro Ala Asn Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn
385 390 395 400
Pro Lys Ile Trp Asp Tyr Pro Thr Ala Phe Gln Pro Glu Arg Phe Leu
405 410 415
Glu Lys Glu Lys Ala Ala Ile Asp Val Lys Gly Gln His Phe Glu Leu
420 425 430
Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Ala
435 440 445
Ile Gln Glu Val Val Ile Ile Ile Gly Thr Met Ile Gln Cys Phe Asp
450 455 460
Trp Lys Leu Pro Asp Gly Ser Gly His Val Asp Met Ala Glu Arg Pro
465 470 475 480
Gly Leu Thr Ala Pro Arg Glu Thr Asp Leu Phe Cys Arg Val Val Pro
485 490 495
Arg Val Asp Pro Leu Val Val Ser Thr Gln
500 505
<210>7
<211>1781
<212>DNA
<213>三色堇(Viola x wittrockiana)
<220>
<221>CDS
<222>(7)...(1524)
<223>编码类黄酮-3’，5’-羟化酶的核苷酸序列(Nucleotide sequence encoding
flavonoid-3’，5’-hydroxylase)
<400>7
gacaac atg gca att cta gtc acc gac ttc gtt gtc gcg gct ata att 48
Met Ala Ile Leu Val Thr Asp Phe Val Val Ala Ala Ile Ile
1 5 10
ttc ttg atc act cgg ttc tta gtt cgt tct ctt ttc aag aaa cca acc96
Phe Leu Ile Thr Arg Phe Leu Val Arg Ser Leu Phe Lys Lys Pro Thr
15 20 25 30
cga ccg ctc ccc ccg ggt cct ctc ggt tgg ccc ttg gtg ggc gcc ctc144
Arg Pro Leu Pro Pro Gly Pro Leu Gly Trp Pro Leu Val Gly Ala Leu
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cct ctc cta ggc gcc atg cct cac gtc gca cta gcc aaa ctc gct aag192
Pro Leu Leu Gly Ala Met Pro His Val Ala Leu Ala Lys Leu Ala Lys
50 55 60
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Lys Tyr Gly Pro Ile Met His Leu Lys Met Gly Thr Cys Asp Met Val
65 70 75
gtc gcg tcc acc ccc gag tcg gct cga gcc ttc ctc aaa acg cta gac288
Val Ala Ser Thr Pro Glu Ser Ala Arg Ala Phe Leu Lys Thr Leu Asp
80 85 90
ctc aac ttc tcc aac cgc cca ccc aac gcg ggc gca tcc cac cta gcg 336
Leu Asn Phe Ser Asn Arg Pro Pro Asn Ala Gly Ala Ser His Leu Ala
95 100 105 110
tac ggc gcg cag gac tta gtc ttc gcc aag tac ggt ccg agg tgg aag 384
Tyr Gly Ala Gln Asp Leu Val Phe Ala Lys Tyr Gly Pro Arg Trp Lys
115 120 125
act tta aga aaa ttg agc aac ctc cac atg cta ggc ggg aag gcg ttg 432
Thr Leu Arg Lys Leu Ser Asn Leu His Met Leu Gly Gly Lys Ala Leu
130 135 140
gat gat tgg gca aat gtg agg gtc acc gag cta ggc cac atg ctt aaa 480
Asp Asp Trp Ala Asn Val Arg Val Thr Glu Leu Gly His Met Leu Lys
145 150 155
gcc atg tgc gag gcg agc cgg tgc ggg gag ccc gtg gtg ctg gcc gag 528
Ala Met Cys Glu Ala Ser Arg Cys Gly Glu Pro Val Val Leu Ala Glu
160 165 170
atg ctc acg tac gcc atg gcg aac atg atc ggt caa gtg ata ctc agc 576
Met Leu Thr Tyr Ala Met AIa Asn Met Ile Gly Gln Val Ile Leu Ser
175 180 185 190
cgg cgc gtg ttc gtg acc aaa ggg acc gag tct aac gag ttc aaa gac 624
Arg Arg Val Phe Val Thr Lys Gly Thr Glu Ser Asn Glu Phe Lys Asp
195 200 205
atg gtg gtc gag ttg atg acg tcc gcc ggg tac ttc aac atc ggt gac 672
Met Val Val Glu Leu Met Thr Ser Ala Gly Tyr Phe Asn Ile Gly Asp
210 215 220
ttc ata ccc tcg atc gct tgg atg gat ttg caa ggg atc gag cga ggg 720
Phe Ile Pro Ser Ile Ala Trp Met Asp Leu Gln Gly Ile Glu Arg Gly
225 230 235
atg aag aag ctg cac acg aag ttt gat gtg tta ttg acg aag atg gtg 768
Met Lys Lys Leu His Thr Lys Phe Asp Val Leu Leu Thr Lys Met Val
240 245 250
aag gag cat aga gcg acg agt cat gag cgc aaa ggg aag gca gat ttc 816
Lys Glu His Arg Ala Thr Ser His Glu Arg Lys Gly Lys Ala Asp Phe
255 260 265 270
ctc gac gtt ctc ttg gaa gaa tgc gac aat aca aat ggg gag aag ctt 864
Leu Asp Val Leu Leu Glu Glu Cys Asp Asn Thr Asn Gly Glu Lys Leu
275 280 285
agt att acc aat atc aaa gct gtc ctt ttg aat cta ttc acg gcg ggc 912
Ser Ile Thr Asn Ile Lys Ala Val Leu Leu Asn Leu Phe Thr Ala Gly
290 295 300
acg gac aca tct tcg agc ata atc gaa tgg gcg tta acg gag atg atc 960
Thr Asp Thr Ser Ser Ser Ile Ile Glu Trp Ala Leu Thr Glu Met Ile
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aag aat ccg acg atc tta aaa aag gcg caa gag gag atg gat cga gtc 1008
Lys Asn Pro Thr Ile Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Met Asp Arg Val
320 325 330
atc ggt cgt gat cgg agg ctg ctc gaa tcg gac ata tcg agc ctc ccg 1056
Ile Gly Arg Asp Arg Arg Leu Leu Glu Ser Asp Ile Ser Ser Leu Pro
335 340 345 350
tac cta caa gcc att gct aaa gaa acg tat cgc aaa cac ccg tcg acg 1104
Tyr Leu Gln Ala Ile Ala Lys Glu Thr Tyr Arg Lys His Pro Ser Thr
355 360 365
cct ctc aac ttg ccg agg att gcg atc caa gca tgt gaa gtt gat ggc 1152
Pro Leu Asn Leu Pro Arg Ile Ala Ile Gln Ala Cys Glu Val Asp Gly
370 375 380
tac tac atc cct aag gac gcg agg ctt agc gtg aac att tgg gcg atc 1200
Tyr Tyr Ile Pro Lys Asp Ala Arg Leu Ser Val Asn Ile Trp Ala Ile
385 390 395
ggt cgg gac ccg aat gtt tgg gag aat ccg ttg gag ttc ttg ccg gaa 1248
Gly Arg Asp Pro Asn Val Trp Glu Asn Pro Leu Glu Phe Leu Pro Glu
400 405 410
aga ttc ttg tct gaa gag aat ggg aag atc aat ccc ggt ggg aat gat 1296
Arg Phe Leu Ser Glu Glu Asn Gly Lys Ile Asn Pro Gly Gly Asn Asp
415 420 425 430
ttt gag ctg att ccg ttt gga gcc ggg agg aga att tgt gcg ggg aca 1344
Phe Glu Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Ile Cys Ala Gly Thr
435 440 445
agg atg gga atg gtc ctt gta agt tat att ttg ggc act ttg gtc cat 1392
Arg Met Gly Met Val Leu Val Ser Tyr Ile Leu Gly Thr Leu Val His
450 455 460
tct ttt gat tgg aaa tta cca aat ggt gtc gct gag ctt aat atg gat 1440
Ser Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asn Gly Val Ala Glu Leu Asn Met Asp
465 470 475
gaa agt ttt ggg ctt gca ttg caa aag gcc gtg ccg ctc tcg gcc ttg 1488
Glu Ser Phe Gly Leu Ala Leu Gln Lys Ala Val Pro Leu Ser Ala Leu
480 485 490
gtc agc cca cgg ttg gcc tca aac gcg tac gca acc tgagctaatg 1534
Val Ser Pro Arg Leu Ala Ser Asn Ala Tyr Ala Thr
495 500 505
ggctgggcct agttttgtgg gccttaattt agagactttt gtgttttaag gtgtgtactt 1594
tattaattgg gtgcttaaat gtgtgtttta atttgtattt atggttaatt atgactttat 1654
tgtataatta tttatttttc ccttctgggt attttatcca tttaattttt cttcagaatt 1714
atgatcatag ttatcagaat aaaattgaaa ataatgaatc ggaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1774
aaaaaaa1781
<210>8
<211>506
<212>PRT
<213>三色堇(Viola x wittrockiana)
<220>
<221>
<222>
<223>类黄酮-3’，5’-羟化酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of
flavonoid-3’，5’-hydroxylase)
<400>8
Met Ala Ile Leu Val Thr Asp Phe Val Val Ala Ala Ile Ile Phe Leu
1 5 10 15
Ile Thr Arg Phe Leu Val Arg Ser Leu Phe Lys Lys Pro Thr Arg Pro
20 25 30
Leu Pro Pro Gly Pro Leu Gly Trp Pro Leu Val Gly Ala Leu Pro Leu
35 40 45
Leu Gly Ala Met Pro His Val Ala Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Tyr
50 55 60
Gly Pro Ile Met His Leu Lys Met Gly Thr Cys Asp Met Val Val Ala
65 70 75 80
Ser Thr Pro Glu Ser Ala Arg Ala Phe Leu Lys Thr Leu Asp Leu Asn
85 90 95
Phe Ser Asn Arg Pro Pro Asn Ala Gly Ala Ser His Leu Ala Tyr Gly
100 105 110
Ala Gln Asp Leu Val Phe Ala Lys Tyr Gly Pro Arg Trp Lys Thr Leu
115 120 125
Arg Lys Leu Ser Asn Leu His Met Leu Gly Gly Lys Ala Leu Asp Asp
130 135 140
Trp Ala Asn Val Arg Val Thr Glu Leu Gly His Met Leu Lys Ala Met
145 150 155 160
Cys Glu Ala Ser Arg Cys Gly Glu Pro Val Val Leu Ala Glu Met Leu
165 170 175
Thr Tyr Ala Met Ala Asn Met Ile Gly Gln Val Ile Leu Ser Arg Arg
180 185 190
Val Phe Val Thr Lys Gly Thr Glu Ser Asn Glu Phe Lys Asp Met Val
195 200 205
Val Glu Leu Met Thr Ser Ala Gly Tyr Phe Asn Ile Gly Asp Phe Ile
210 215 220
Pro Ser Ile Ala Trp Met Asp Leu Gln Gly Ile Glu Arg Gly Met Lys
225 230 235 240
Lys Leu His Thr Lys Phe Asp Val Leu Leu Thr Lys Met Val Lys Glu
245 250 255
His Arg Ala Thr Ser His Glu Arg Lys Gly Lys Ala Asp Phe Leu Asp
260 265 270
Val Leu Leu Glu Glu Cys Asp Asn Thr Asn Gly Glu Lys Leu Ser Ile
275 280 285
Thr Asn Ile Lys Ala Val Leu Leu Asn Leu Phe Thr Ala Gly Thr Asp
290 295 300
Thr Ser Ser Ser Ile Ile Glu Trp Ala Leu Thr Glu Met Ile Lys Asn
305 310 315 320
Pro Thr Ile Leu Lys Lys Ala Gln Glu Glu Met Asp Arg Val Ile Gly
325 330 335
Arg Asp Arg Arg Leu Leu Glu Ser Asp Ile Ser Ser Leu Pro Tyr Leu
340 345 350
Gln Ala Ile Ala Lys Glu Thr Tyr Arg Lys His Pro Ser Thr Pro Leu
355 360 365
Asn Leu Pro Arg Ile Ala Ile Gln Ala Cys Glu Val Asp Gly Tyr Tyr
370 375 380
Ile Pro Lys Asp Ala Arg Leu Ser Val Asn Ile Trp Ala Ile Gly Arg
385 390 395 400
Asp Pro Asn Val Trp Glu Asn Pro Leu Glu Phe Leu Pro Glu Arg Phe
405 410 415
Leu Ser Glu Glu Asn Gly Lys Ile Asn Pro Gly Gly Asn Asp Phe Glu
420 425 430
Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Ile Cys Ala Gly Thr Arg Met
435 440 445
Gly Met Val Leu Val Ser Tyr lle Leu Gly Thr Leu Val His Ser Phe
450 455 460
Asp Trp Lys Leu Pro Asn Gly Val Ala Glu Leu Asn Met Asp Glu Ser
465 470 475 480
Phe Gly Leu Ala Leu Gln Lys Ala Val Pro Leu Ser Ala Leu Val Ser
485 490 495
Pro Arg Leu Ala Ser Asn Ala Tyr Ala Thr
500 505
<210>9
<211>1014
<212>DNA
<213>蝴蝶草(Torenia hybrida)
<220>
<221>CDS
<222>(69)...(785)
<223>编码甲基转移酶的核苷酸序列(Nucleotide sequence encoding
methyltransferase)
<400>9
cggcacgagt tcaattccgc cattttctcc aataataaca ttcataaata caatcagcag 60
cagcaaaa atg aaa gat aag ttc tat ggc acc att ttg cag agc gaa 107
Met Lys Asp Lys Phe Tyr Gly Thr Ile Leu Gln Ser Glu
1 5 10
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Ala Leu Ala Lys Tyr Leu Leu Glu Thr Ser Ala Tyr Pro Arg Glu His
15 20 25
ccg cag ctc aaa gaa cta agg agc gca act gtg gac aag tat caa tat203
Pro Gln Leu Lys Glu Leu Arg Ser Ala Thr Val Asp Lys Tyr Gln Tyr
30 35 40 45
tgg agc ttg atg aat gtt cca gct gat gag ggg cag ttc att tca atg251
Trp Ser Leu Met Asn Val Pro Ala Asp Glu Gly Gln Phe Ile Ser Met
50 55 60
tta ctg aaa att atg aac gca aaa aag aca att gaa gtt gga gtt ttc299
Leu Leu Lys Ile Met Asn Ala Lys Lys Thr Ile Glu Val Gly Val Phe
65 70 75
aca ggc tac tca ctc cta tca act gct ctg gct cta cct gat gat ggc347
Thr Gly Tyr Ser Leu Leu Ser Thr Ala Leu Ala Leu Pro Asp Asp Gly
80 85 90
aaa atc gtt gcc att gat cct gat aga gaa gct tat gag act ggt ttg395
Lys Ile Val Ala Ile Asp Pro Asp Arg Glu Ala Tyr Glu Thr Gly Leu
95 100 105
cca ttt atc aag aaa gca aac gtg gct cat aaa atc caa tac ata caa443
Pro Phe Ile Lys Lys Ala Asn Val Ala His Lys Ile Gln Tyr Ile Gln
110 115 120 125
tct gat gcc atg aaa gtc atg aat gac ctc att gct gcc aag gga gaa491
Ser Asp Ala Met Lys Val Met Asn Asp Leu Ile Ala Ala Lys Gly Glu
130 135 140
gaa gaa gag ggg agc ttt gac ttt ggg ttc gtg gat gca gac aaa gaa539
Glu Glu Glu Gly Ser Phe Asp Phe Gly Phe Val Asp Ala Asp Lys Glu
145 150 155
aac tac ata aac tac cac gag aaa ctg ttg aag ctg gtt aag gtt gga587
Asn Tyr Ile Asn Tyr His Glu Lys Leu Leu Lys Leu Val Lys Val Gly
160 165 170
ggg atc ata gga tac gac aac act ctg tgg tct gga aca gtt gct gca635
Gly Ile Ile Gly Tyr Asp Asn Thr Leu Trp Ser Gly Thr Val Ala Ala
175 180 185
tct gaa gac gat gag aat aat atg caa gac tac tta aga ggt tgc aga683
Ser Glu Asp Asp Glu Asn Asn Met Gln Asp Tyr Leu Arg Gly Cys Arg
190 195 200 205
ggg cat atc ctc aaa cta aac tcc ttt ctc gca aac gat gat cgg att731
Gly His Ile Leu Lys Leu Asn Ser Phe Leu Ala Asn Asp Asp Arg Ile
210 215 220
gaa ttg gct cac ctc tct att gga gat gga ctc acc ttg tgc aaa cgt779
Glu Leu Ala His Leu Ser Ile Gly Asp Gly Leu Thr Leu Cys Lys Arg
225 230 235
ctc aaa taataatttt caactttatt attattgttt cataaaaagc atttactgct 835
Leu Lys
ggcctggcct ggcctgtttc agcatcttat atttctattg ttctaaatat tttagttatc 895
ttgtttatca acttgtctgt cttatatgtt taaaagaaag atgtcatgta attgtaactc 955
gatcgggctc ttgtaatatt ataatgaatt ttattgattt caaaaaaaaa aaaaaaaaa 1014
<210>10
<211>239
<212>PRT
<213>蝴蝶草(Torenia hybrida)
<220>
<221>
<222>
<223>甲基转移酶的氨基酸序列(Amino acid sequence of methyltransferase)
<400>10
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65 70 75 80
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Asn Tyr His Glu Lys Leu Leu Lys Leu Val Lys Val Gly Gly Ile Ile
165 170 175
Gly Tyr Asp Asn Thr Leu Trp Ser Gly Thr Val Ala Ala Ser Glu Asp
180 185 190
Asp Glu Asn Asn Met Gln Asp Tyr Leu Arg Gly Cys Arg Gly His Ile
195 200 205
Leu Lys Leu Asn Ser Phe Leu Ala Asn Asp Asp Arg Ile Glu Leu Ala
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<211>16
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223>引物(Primer)
<400>11
aacagctatg accatg 16
<210>12
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221>
<222>
<223>引物(Primer)
<400>12
gatcttgtta agcttgttgt agacatac28
权利要求
1.月季，其特征在于，通过基因重组方法而含有黄酮。
2.根据权利要求1所述的月季，其中，所述黄酮通过导入的黄酮合成酶基因的表达而生成。
3.根据权利要求2所述的月季，其中，所述黄酮合成酶基因为来自玄参科的黄酮合成酶基因。
4.根据权利要求3所述的月季，其中，所述来自玄参科的黄酮合成酶基因为来自玄参科金鱼草的黄酮合成酶基因。
5.根据权利要求3所述的月季，其中，所述来自玄参科的黄酮合成酶基因为来自玄参科蝴蝶草的黄酮合成酶基因。
6.根据权利要求4所述的月季，其中，所述来自玄参科金鱼草的黄酮合成酶基因为编码(1)～(4)中任一项的基因
(1)具有序列号2记载的氨基酸序列的黄酮合成酶，
(2)具有在序列号2记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶，
(3)具有与序列号2记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或
(4)由与具有序列号1所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸编码的黄酮合成酶。
7.根据权利要求5中所述的月季，其中，所述来自玄参科蝴蝶草的黄酮合成酶基因为编码(1)～(4)中任一项的基因
(1)具有序列号4记载的氨基酸序列的黄酮合成酶，
(2)具有在序列号4记载的氨基酸序列中通过1个～多个氨基酸的附加、缺失及/或被其他氨基酸取代而被修饰的氨基酸序列的黄酮合成酶，
(3)具有与序列号4记载的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列的黄酮合成酶，或
(4)由与具有序列号3所示的碱基序列的核酸在高严谨条件下杂交的核酸所编码的黄酮合成酶。
8.根据权利要求2～7任一项所述的月季，其中，与导入黄酮合成酶基因前的宿主相比花色发生了变化。
9.根据权利要求8所述的月季，其中，所述花色的变化为趋向蓝色的变化。
10.根据权利要求8或9所述的月季，其中，所述花色的变化为L*a*b表色系统色度图中的色相角度向蓝色方向轴270°接近的变化。
11.根据权利要求8所述的月季，其中，所述花色的变化为花瓣的反射光谱的最小吸收波长值向长波长侧移动的变化。
12.月季的部分、后代、组织、营养增殖体或细胞，其特征在于，其与权利要求1～11中任一项所述的月季具有相同的性质。
13.方法，其特征在于，其通过用基因重组方法含有黄酮而产生的辅色作用来改变月季的花色。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述辅色作用为使花色向蓝色方向变化的作用。
全文摘要
本发明提供以通过基因重组的方法而含有黄酮为特征的月季。具体为，该黄酮典型的是由所导入的黄酮合成酶基因的表达而生成。所述黄酮合成酶基因为例如来自玄参科的黄酮合成酶基因，作为具体实例，为来自玄参科金鱼草的黄酮合成酶基因及来自玄参科蝴蝶草的黄酮合成酶基因。
文档编号C12N15/09GK101679973SQ200880020938
公开日2010年3月24日 申请日期2008年6月19日 优先权日2007年6月20日
发明者田中良和, 胜元幸久, 福井祐子, 水谷正子, 中村典子, 户上纯一 申请人:国际花卉开发有限公司