本发明属于组织修复材料制备技术领域，尤其涉及一种罗非鱼皮胶原蛋白复合再生纤维修复材料的制备方法。
背景技术：
纤维素作为天然的生物高聚物，具有生物可降解性、生物相容性以及独特的物理、化学和机械性能，已成为新型生物医学材料领域的研究热点。而现有技术多是采用再生纤维素与其他材料共混，冷冻干燥制备复合膜，采用此方法制得的复合膜均匀性、稳定性较差，且组织修复能力及药物附着性有待进一步的提高。
技术实现要素：
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种具有良好的组织修复能力及药物附着性的罗非鱼皮胶原蛋白复合再生纤维修复材料的制备方法。
本发明采用以下技术方案：
一种罗非鱼皮胶原蛋白复合再生纤维修复材料的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：罗非鱼皮去鱗，去离子水反复冲洗干净后用滤纸吸干表面水分，脂肪酶脱脂处理罗非鱼皮，脱脂后的鱼皮用0.1mol/lnaoh浸泡，除去杂蛋白，再用去离子水反复清洗鱼皮，直至洗液呈中性；
步骤二：将经步骤一处理后的鱼皮加入到4℃、ph2.3、质量浓度80％的乳酸溶液中，料液比为1:20，充分提取12h后，4℃、5000r/min离心处理40min，取上清液，加入nacl至0.9mol/l，盐析10h，待胶原蛋白沉淀析出后，4℃、5000r/min离心处理20min，取沉淀，弃去上清液；
步骤三：将沉淀复溶于0.1mol/l乳酸溶液中，料液比为1:10，4℃、5000r/min离心处理20min，弃去沉淀，取上清液进行透析，先用0.1mol/l乳酸溶液透析2d，每4h换一次透析液，再用蒸馏水透析，每4h换一次蒸馏水，直到透析液中不存在氯离子且透析液为中性时，停止透析，最后经冷冻干燥后得罗非鱼皮胶原蛋白；
步骤四：称取20g竹纤维，投入到400g、质量分数为17.5％的naoh溶液中，并放置到温度为100℃的恒温水浴锅中，沸煮60min，再用去离子水对竹纤维反复清洗至中性；
步骤五：取16glicl投入到装有40℃、184g二甲基乙酰胺的容器中，在恒温磁力搅拌器的作用下使licl充分溶解，配制成质量分数为8％的溶剂，取溶剂100g、竹纤维15g，60℃恒温水浴锅中、混合搅拌8h，过滤得竹纤维溶液；
步骤六：将蚕茧去蛹，置入煮沸的质量浓度为0.5％的碳酸钠水溶液中，浴比为1:50，除去蚕茧表面丝胶,将已成丝状的蚕茧捞出并拧干，再重复上述操作一次后，用去离子水洗净，风干后得到脱胶丝素；
步骤七：将cacl2在室温状态下溶解于甲酸中，搅拌30min，制得浓度为5wt.％的cacl2-fa溶液，然后将脱胶丝素溶解于cacl2-fa溶液中，磁力搅拌3h，获得再生丝素蛋白溶液，室温下干燥成膜，将膜用去离子水浸泡3h，再干燥，获得再生丝素蛋白膜，将再生丝素蛋白膜在室温状态下二次溶解于甲酸中，浴比为1:10，溶解时间为2h，得再生丝素蛋白纺丝液；
步骤八：取棉短绒5g，将其溶解在甲酸中，配制成质量浓度4％的纤维素溶液；
步骤九：将再生丝素蛋白纺丝液与纤维素溶液按重量比4:1混合均匀得再生纤维素纺丝液；
步骤十：将罗非鱼皮胶原蛋白、竹纤维溶液、再生纤维素纺丝液按质量比2:4:19混合均匀，使用超声波震荡对其进行分散，50℃条件下磁力搅拌1h，再在室温下继续搅拌8h，得到粘稠溶液置于与高压装置连接的医用针管中，通过静电纺丝制得修复材料，高压装置电压为20kv，纺丝流量2ml/h，将制得的材料置于体积浓度75％乙醇中浸泡30min，在40℃下真空干燥。
优选的，步骤十中所述的医用针管的容量为30ml。
优选的，步骤十中所述的医用针管的针头固定在距离静电纺丝接收板30cm处。
优选的，步骤十中所述的医用针管的针头内径为0.41mm。
本发明的有益效果在于：
1)罗非鱼皮胶原蛋白中含有促细胞生长因子和表皮生长因子，对修复机体和护养皮肤大有好处。
2)丝素蛋白及竹纤维具有良好的抗菌性及生物相容性。
3)纤维素具有良好的生物相容性、可降解性及优良的机械性能。
4)纤维素可以改善材料的机械性能，丝素蛋白可以改善材料的组织修复能力。
5)采用静电纺丝技术制备的材料，进一步提高了材料的孔隙率，有利于药物的附着。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述。
实施例1
一种罗非鱼皮胶原蛋白复合再生纤维修复材料的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：罗非鱼皮去鱗，去离子水反复冲洗干净后用滤纸吸干表面水分，脂肪酶脱脂处理罗非鱼皮，脱脂后的鱼皮用0.1mol/lnaoh浸泡，除去杂蛋白，再用去离子水反复清洗鱼皮，直至洗液呈中性；
步骤二：将经步骤一处理后的鱼皮加入到4℃、ph2.3、质量浓度80％的乳酸溶液中，料液比为1:20，充分提取12h后，4℃、5000r/min离心处理40min，取上清液，加入nacl至0.9mol/l，盐析10h，待胶原蛋白沉淀析出后，4℃、5000r/min离心处理20min，取沉淀，弃去上清液；
步骤三：将沉淀复溶于0.1mol/l乳酸溶液中，料液比为1:10，4℃、5000r/min离心处理20min，弃去沉淀，取上清液进行透析，先用0.1mol/l乳酸溶液透析2d，每4h换一次透析液，再用蒸馏水透析，每4h换一次蒸馏水，直到透析液中不存在氯离子且透析液为中性时，停止透析，最后经冷冻干燥后得罗非鱼皮胶原蛋白；
步骤四：称取20g竹纤维，投入到400g、质量分数为17.5％的naoh溶液中，并放置到温度为100℃的恒温水浴锅中，沸煮60min，再用去离子水对竹纤维反复清洗至中性；
步骤五：取16glicl投入到装有40℃、184g二甲基乙酰胺的容器中，在恒温磁力搅拌器的作用下使licl充分溶解，配制成质量分数为8％的溶剂，取溶剂100g、竹纤维15g，60℃恒温水浴锅中、混合搅拌8h，过滤得竹纤维溶液；
步骤六：将蚕茧去蛹，置入煮沸的质量浓度为0.5％的碳酸钠水溶液中，浴比为1:50，除去蚕茧表面丝胶,将已成丝状的蚕茧捞出并拧干，再重复上述操作一次后，用去离子水洗净，风干后得到脱胶丝素；
步骤七：将cacl2在室温状态下溶解于甲酸中，搅拌30min，制得浓度为5wt.％的cacl2-fa溶液，然后将脱胶丝素溶解于cacl2-fa溶液中，磁力搅拌3h，获得再生丝素蛋白溶液，室温下干燥成膜，将膜用去离子水浸泡3h，再干燥，获得再生丝素蛋白膜，将再生丝素蛋白膜在室温状态下二次溶解于甲酸中，浴比为1:10，溶解时间为2h，得再生丝素蛋白纺丝液；
步骤八：取棉短绒5g，将其溶解在甲酸中，配制成质量浓度4％的纤维素溶液；
步骤九：将再生丝素蛋白纺丝液与纤维素溶液按重量比4:1混合均匀得再生纤维素纺丝液；
步骤十：将罗非鱼皮胶原蛋白、竹纤维溶液、再生纤维素纺丝液按质量比2:4:19混合均匀，使用超声波震荡对其进行分散，50℃条件下磁力搅拌1h，再在室温下继续搅拌8h，得到粘稠溶液置于与高压装置连接的医用针管中，通过静电纺丝制得修复材料，高压装置电压为20kv，纺丝流量2ml/h，将制得的材料置于体积浓度75％乙醇中浸泡30min，在40℃下真空干燥。
步骤十中所述的医用针管的容量为30ml，所述的医用针管的针头固定在距离静电纺丝接收板30cm处，针头内径为0.41mm。