本发明涉及一种中药组合物，具体涉及具有防治结直肠癌前病变的中药组合物及其应用。
背景技术：
：大肠癌(colorectalcancer,crc)又称结肠直肠癌，是最常见的消化道恶性肿瘤之一，全球每年有超过一百万人惟患结直肠癌并造成大约五千万人的死亡，占世界恶性肿瘤死亡第四位，目前我国结直肠癌的发病率呈上升趋势，国内发病的上升速度超过国际水平2％。目前用于crc治疗的药物主要为化学药物，如包括奥沙利铂、氟尿嘧啶、伊立替康、叶酸和贝伐单抗等，然而crc根治术后五年生存率仍徘徊在50％左右，晚期不到30％。早期诊断和癌前预防成为防治结直肠癌的主要策略。防治肠道炎癌转变成为结直肠癌化学预防的主要环节，中医药在防治肠癌疾病方面具有其独特的疗效。因此，立足祖国医学，在现有技术的基础上，通过大量实验筛选，采用辨证论治的方法，筛选出具有很好的防治肠癌疾病的中药组方具有重要的临床价值。技术实现要素：发明目的：本发明在现有技术的基础上，通过大量实验筛选，采用辨证论治的方法，筛选出具有很好的防治肠癌疾病的中药组方。技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：一种具有防治结直肠癌前病变的中药组合物，它由下列重量份数的原料制成：白花蛇舌草20至60份，苦参9至27，党参15至45份，白术12至36份，乌梅12至36份，黄连3至9份，炮姜6至18份，薏苡仁30至90份。作为优选方案，以上所述的具有防治结直肠癌前病变的中药组合物，它由下列重量份数的原料制成：白花蛇舌草20至40份，苦参9至18份，党参15至30份，白术12至24份，乌梅12至24份，黄连3至6份，炮姜6至12份，薏苡仁30至60份，仙鹤草15至30份、半枝莲15至30份、椿皮9至18份、山慈菇9至18份。作为优选方案，以上所述的具有防治结直肠癌前病变的中药组合物，它包括下列重量份数的原料制成：白花蛇舌草20份，苦参9份，党参15份，白术12份，乌梅12份，黄连3份，炮姜6份，薏苡仁30份，仙鹤草15份、半枝莲15份、椿皮9份、山慈菇9份。本发明所述的具有防治结直肠癌前病变的中药组合物在制备预防和治疗肠癌药物中的应用。作为优选方案，本发明所述的具有防治结直肠癌前病变的中药组合物在制备预防和治疗肠道炎性息肉、腺瘤、粘膜增生和/或炎症性肠病转变成的结肠癌或直肠癌药物中的应用。一种具有防治结直肠癌前病变的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：按权利要求2或3所述的重量份数，取白花蛇舌草，苦参，党参，白术，乌梅，黄连，炮姜，薏苡仁，仙鹤草，半枝莲，椿皮和山慈菇，加6至12倍量的水，提取1至3次，过滤，合并提取液，浓缩得到。作为优选方案，所述的提取方法为煎煮法，回流提取法，超声提取法等。一种具有防治肠癌功效的中药制剂，它由本发明所述中药组合物的提取物和药学上可接受的载体制备成合剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂或口服液制剂。本发明中药组合物的方解规律为，本发明申请人通过大量临床实验，研究结果表明，脾气亏虚、湿痰毒蕴，导致结直肠腺瘤息肉病机，创造性的采用健脾益气、化痰祛湿、解毒散结的治疗机理，方中重用薏苡仁化痰祛湿，臣以党参、白术健脾益气，佐以乌梅，仙鹤草和椿皮收敛止血，加以白花蛇舌草、半枝莲，椿皮和山慈菇解毒散结，配以苦参、黄连和椿皮，清热燥湿，并使以炮姜辛散温通，温助阳气，温通经脉，散寒止痛。全方达到健脾化湿浊，清热燥湿、解毒消癌散结和补益扶正为一体的功效。有益效果：本发明和现有技术相比具有以下优点：(1)本发明根据辨证论治的中医药理论，根据肠癌疾病的发病机理进行中药组方筛选，提供的中药复方配比科学合理，用药严谨，实验结果表明，本发明提供的中药复方组合物能明显改善aom-dss诱导的结肠肿瘤模型小鼠体重下降的状况，显著改善肠病癌变小鼠不断进展的体质量下降、稀便及便血等症状；且能显著降低肠病癌变小鼠结肠肿瘤发生率，表明，本发明提供的中药组合物能显著预防和治疗肠病癌变，临床上可以用于防治肠癌疾病。(2)并且体内外抗结肠癌实验结果表明，本发明提供的中药组合物具有显著的抗实体瘤和细胞瘤的活性，并且拆方实验结果表明，本发明的药味缺一不可，是一个科学的配方。(3)本发明提供的中药组合物，可以方便和药学载体制备成多种剂型，临床上服用方便，且实验结果表明本发明提供的组合物，疗效可靠，使用安全，长期服用无毒副作用。具体实施方式根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。实施例1一种具有防治结直肠癌前病变的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：取白花蛇舌草20份，苦参9份，党参15份，白术12份，乌梅12份，黄连3份，炮姜6份，薏苡仁30份，分别加8倍量的水，采用煎煮法提取3次，每次2小时，过滤，合并提取液，浓缩得到浸膏。实施例2一种具有防治结直肠癌前病变的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：取白花蛇舌草20份，苦参9份，党参15份，白术12份，乌梅12份，黄连3份，炮姜6份，薏苡仁30份，仙鹤草15份、半枝莲15份、椿皮9份和山慈菇9份，分别加12倍量的水，采用回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并提取液，浓缩得到浸膏。实施例3一种具有防治结直肠癌前病变的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：白花蛇舌草40份，苦参18份，党参30份，白术24份，乌梅24份，黄连6份，炮姜6份，薏苡仁60份，仙鹤草30份、半枝莲30份、椿皮18份、山慈菇18份。分别加10倍量的乙醇，采用超声提取3次，每次40分钟小时，过滤，合并提取液，浓缩得到浸膏。实施例4对aom-dss诱导的小鼠结肠肿瘤预防和治疗作用研究。1.实验材料1.1实验用药物及试剂中药组合物：本发明实施例2制备得到的中药组合物提取物；氧化偶氮甲烷(azoxymethane,aom)购自sigma公司，批号：slbd6763v；葡聚糖硫酸钠(dextransodiumsulfate,dss)购自mpbio公司，批号：m8667。1.2实验动物及饲养昆明种小鼠，18至22g，雄性，由南京中医药大学中心提供，合格证号：scxk(苏)2016-0004。饲养条件：室温20±2℃，湿度55至65％，明暗交替，光照适度，通风洁净良好。2.实验方法2.1aom-dss诱导的炎性肠病癌变小鼠模型造模方法：采用昆明种小鼠，预先饲养两周，给予单次小剂量偶氮氧甲烷(aom10mg/kg)腹腔注射联合三个循环dss喂饲(2％dss饮水1周+正常饮水2周为一个循环)，复制aom-dss诱导的炎性肠病相关的结直肠癌小鼠模型。2.2对aom-dss诱导的炎性肠病癌变小鼠结肠肿瘤预防和治疗作用。昆明种小鼠小鼠30只，随机分为3组，每组10只。分别为正常对照组，模型组，中药组合物组6g/kg。空白对照组给予等量的生理盐水；模型组，中药组合物组采用上述方法造模，小剂量aom10mg/kg腹腔注射一周后，中药组合物组每天口服给予中药组合物6g/kg，模型组给予等量的生理盐水。记录小鼠体重，大便性状及便血情况。实验终点时处死小鼠，取血，取结直肠组织测量长度和重量。记录肿瘤个数，多发性及肿瘤大小。部分用10％中性福尔马林固定，进行病理检查并统计评分；部分保存于液氮供westernblot检测。2.3小鼠疾病活动指数(dai)计算[1]小鼠体重变化：每日对各组小鼠称体重并记录观察值,利用公式计算体质量下降百分比。其公式如下：第n天体质量下降(％)＝(第n-1天体质量-第n天体质量)/第n-1天体质量×100％。小鼠体质量增加者记0分。[2]小鼠粪便性状：观察各实验组小鼠肛门口以及其周围体毛变化：①正常粪便：成形的球块状、周围体毛干净；②半稀便：糊状便，但不粘附在肛周；③稀便：水样便，粘附肛周体毛。[3]小鼠便血情况：采用大便隐血试纸检测判定为小鼠粪便正常者，为粪便隐血阴性；小鼠粪便不正常者，观察粪便颜色改变情况：①颜色显现为红色或褐色者，可认定为肉眼血便；②对肉眼血便不明显或粪便性状不正常而可疑隐血者，使用大便隐血胶体金检测试纸，按使用说明书检测大便隐血情况(酶联免疫吸附法)。综合以上观察，对小鼠疾病活动指数(diseaseactivityindex,dai)进行评估。表1小鼠疾病活动指数(体质量下降、粪便性状、大便隐血/血便)评分标准评分体质量下降(％)粪便性状隐血/血便0无正常阴性11-5--26-10半稀便阳性311-15--4>15稀便肉眼血便注：dai＝(体质量下降分数+粪便性状分数+隐血分数)/3，体质量下降5％记分为1分，以此类推，以造模当日体质量为基础体质量。2.4统计分析数据采用表示，采用单因素方差分析(anova)进行检验，p<0.05为差异有统计学意义。3.实验结果3.1中药组合物对aom-dss诱导的肠病癌变小鼠体重的影响。表2中药组合物对aom-dss诱导的肠病癌变小鼠体重的影响组别造模前(g)第一循环(g)第二循环(g)第三循环(g)对照组21.13±1.0124.32±1.0525.78±1.3632.13±1.64模型组21.65±1.0321.55±1.17##22.26±1.21##23.78±1.25##中药组合物组21.79±1.0522.67±1.14*24.17±1.02*26.72±1.35*##p<0.01与正常对照组比较；*p<0.05,**p<0.01与模型组比较。造模前各组小鼠体重相当，各组比较无显著性差异；第一循环，与对照组比较，模型组小鼠体重显著降低(##p<0.01)；与模型组比较，中药组合物组小鼠体重显著升高(*p<0.05)。第二循环，与对照组比较，模型组小鼠体重显著降低(##p<0.01)；中药组合物组小鼠体重显著升高，与模型组比较有显著性差异(*p<0.05)。第三循环，与正常对照组比较，模型组小鼠体重显著降低(##p<0.01)，中药组合物组与模型组比较无显著性差异。上述结果提示：中药组合物显著改善肠病癌变过程中模型小鼠体重下降的状况。3.2中药组合物对aom-dss诱导的肠病癌变小鼠疾病活动指数(dai)的影响，具体实验结果见表3所示：表3中药组合物对aom-dss诱导的肠病癌变小鼠dai的影响组别第一循环第二循环第三循环对照组0.00±0.000.00±0.000.00±0.00模型组1.14±0.87###2.05±0.62###2.62±034###中药组合物组0.21±0.17**0.35±0.13***0.65±0.21**###p<0.001与正常对照组比较；**p<0.01,***p<0.001与模型组比较。dai反映小鼠肠病--癌变疾病进展状况，模型组小鼠随着造模次数的增加，dai相应增加；三个循环模型组dai显著增高，与对照组比较，具有显著性差异(###p<0.001)；中药组合物组小鼠随着造模次数的增加，dai稍有增加，但是与模型组比较，三个循环dai均显著降低(**p<0.01,***p<0.001)。上述结果证明本发明提供的中药组合物显著改善肠病癌变小鼠不断进展的体质量下降、稀便及便血等症状，显示出很好的预防和治疗肠病癌变的发生和进展。3.3中药组合物对aom-dss诱导的肠病癌变小鼠结肠重量/长度比值的影响，具体实验结果如表4所示。表4中药组合物对aom-dss诱导的肠病癌变小鼠结肠重量/长度比值的影响组别小鼠结肠重量/长度比(mg/cm)正常对照组37.91±2.76模型组58.24±3.17##中药组合物组40.17±2.12**##p<0.01与正常对照组比较；*p<0.05,**p<0.01与模型组比较。实验结束后，与正常对照组比较，模型组小鼠结肠重量长度比值显著升高(##p<0.01)；中药组合物组小鼠结肠重量长度比值降低，与模型组比较有显著性差异(**p<0.01)。结果表明，本发明提供的中药组合物显著改善模型组小鼠结直肠炎性水肿和异常增生。3.4中药组合物对aom-dss诱导的肠病癌变小鼠肠道肿瘤的影响。表5中药组合物对aom-dss诱导的炎性肠病癌变小鼠炎症和肿瘤病理评分的影响#p<0.05与正常对照组比较；**p<0.01与模型组比较。以上表5的实验结果表明。正常组小鼠显微镜下固有层未见炎症，未见隐窝损伤；小鼠结肠壁粘膜上皮细胞未见不典型增生，未见肿瘤组织；模型组小鼠光镜下见重度炎症；结肠壁粘膜层查见肿瘤组织。而本发明提供的中药组合物组，所有小鼠未查见肿瘤。病理研究结果进一步证明，本发明提供的中药组合物具有很好的防治肠病癌变的功效。实施列5抗结直肠癌实验研究(1)对裸鼠体内人直肠癌的抑制作用取瘤源裸鼠，取出瘤组织，切成0.3-0.4mm的小块，将瘤组织接种在裸鼠的背部皮下，共接种20只，于接种后24天，随机分成治疗组(本发明实施例2提供的具有抗肿瘤活性的中药组合物，灌胃给药，6g/kg)和空白组(等容量生理盐水)，每组10只，连续用药21天，于末次给药后24h处死动物，剖取瘤组织称重，计算抑制率(％)，具体实验结果见表6。表6中药组合物对裸鼠体内人肠粘液腺癌的抑制作用(2)体外抗人结直肠癌实验细胞株：人结直肠癌细胞株sw480；96孔板购自costar公司；rmpi1640培养基购自gibco公司；dmem培养基购自gibco公司；新生牛血清购自杭州四季青公司；噻唑蓝(mtt)和dmso购自amresco公司。以下实施例所使用的实验仪器如下：实验仪器：超净工作台(苏州净化型号sw-cj-ifd)，co2培养箱(sanyo型号：xd-101)，酶标仪bio-rad(modelno.550serialno.16971)。以下实施例所使用的实验方法如下：实验方法：使用改良mtt法对本发明实施例2制备得到的中药组合物进行体外抗结直肠癌细胞实验：将人结直肠癌细胞sw480用胰酶进行消化、计数、制成浓度为5×104个/ml的细胞悬液。将96孔板中每孔加入100μl细胞悬液(每孔5×103个细胞)，然后置于37℃，5％co2培养箱中培养24小时；用非完全培养基稀释药物至所需的不同梯度浓度，每孔加入100μl相应的含药培养基，同时设立阴性对照组，溶媒对照组和阳性对照组，再将96孔板置于37℃，5％co2培养箱中培养72小时。然后每孔加入20μlmtt(5mg/ml)，继续培养4小时，终止培养，弃去培养基，每孔加入150μldmso溶解，摇床10分钟轻轻混匀。在λ＝4570nm、620nm两波长下用酶标仪检测每孔的吸光度即od值，以各复孔的平均值作为该组细胞的od值，计算各药物的抑制率。实验结果显示本发明实施例2制备得到的中药组合物，对人结直肠癌细胞均具有较强的抑制作用，各剂量组呈现了较好的量效关系。实验结果如表7所示。表7对人结直肠癌细胞的作用结果由以上实验结果表明：本发明提供的具有抗结直肠癌活性的中药组合物对人结直肠癌裸鼠体内移植具有明显的抑制作用，并且体外具有明显抑制人结直肠癌细胞生长的作用。表明本发明提供的具有抗结直肠癌活性的中药组合物具有很强的抗结直肠癌的作用，可以用于结直肠癌疾病的治疗。本发明经过对比实验研究表明，本发明实施例1制备得到的中药组合物也具有明显的防治结直肠癌变和抗结直肠癌的作用。并且本发明经过了大量拆方对比实验筛选结果表明，白花蛇舌草，苦参，党参，白术，乌梅，黄连，炮姜，薏苡仁等均为本发明组合物必不可少的药味，缺少任何一药味后，体内外抗肿瘤效果高浓度均低于68％的肿瘤抑制率。说明本发明组合物配方科学，相辅相成，缺一不可。以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本
发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。当前第1页12