包含蛇毒多肽的水凝胶及由该水凝胶制备的修护眼膜的制作方法

本发明属于化妆品领域。具体地，本发明涉及一种以蛇毒多肽为核心活性成分制备而成的水凝胶及用该水凝胶制备而成的修护眼膜。本发明有效地解决了蛇毒多肽易受氧化剂、还原剂、蛋白水解酶类等的分解、破坏以及燕麦仁提取物等植物提取物制剂色泽“土、黄、黑”等问题，并通过缓控释作用持续释放有效活性成分进而显著提高眼膜贴淡化细纹、紧致肌肤及改善眼袋和黑眼圈等功效。

背景技术：

经皮给药系统又称经皮治疗系统，是指通过皮肤贴敷的方式给药，药物以一定的速率通过皮肤经毛细血管吸收进入体循环产生药效的一种给药方式。经皮给药系统与普通剂型相比，可以不经过肝脏的“首过效应”和胃肠道的破坏，提高生物利用度，降低药物毒性，给药方便，操作简单等多种优点。面霜、乳液、棉布式面膜、膜粉型面膜等化妆品均为通过贴敷的方式将其中的活性有效成分通过皮肤，今儿发挥保湿、美白等美容功效。

大多数药物或有效活性成分因自身理化性质及皮肤角质层的限速屏障作用，透皮速率很低，经皮渗入体内的药物或活性有效成分很难达到有效的治疗浓度。巴布剂是将药物或有效活性成分与适宜的亲水基质混合后，涂布于背衬材料上的新型经皮给药贴剂。巴布剂与普通化妆品剂型相比具有独特的优势：(1)由于采用水溶性高分子，贴敷舒适、透气，皮肤无残留，不污染衣物；(2)载药量较大，适用范围广，可用于水溶性或脂溶性药物、中药材粉末等；(3)生产无“三废”，完全避免使用有机溶剂；(4)保湿性好，能促进皮肤水化，利于活性成分经皮吸收；(5)可反复揭帖对皮肤几无刺激性及致敏性。

利用中草药等植物提取物美容护肤在我国具有悠久的历史，植物性化妆品讲求整体调理美容，即促进人体整体新陈代谢，预防衰老等，由于其来源于大自然、纯正温和、毒副作用小等深受广大消费者欢迎。但另一方面，向化妆品中添加植物成分后其产品色泽问题已成为该类产品必须解决的问题。

技术实现要素：

鉴于此，本发明的目的在于提供一种包含蛇毒多肽的水凝胶及由该水凝胶制备的修护眼膜。所述水凝胶及修护眼膜包含蛇毒多肽、植物提取物纳米微胶囊等活性成分。

本发明通过对辅料的配伍组方筛选制备水凝胶，有效地解决了燕麦提取物等植物提取物制剂的色泽问题。此外，制备所得的水凝胶还有效地解决了蛇毒多肽易受氧化剂、还原剂、蛋白水解酶类等的分解破坏的问题，从而得到可持续释放有效活性成分进而显著提高眼膜贴淡化细纹、紧致肌肤及改善眼袋和黑眼圈等功效的眼膜贴。

为实现上述目的，在本发明的第一方面，提供一种水凝胶制剂，其特征在于，包含以蛇毒多肽为主要有效成分的皮肤调理剂、保湿剂、成膜剂、抗氧化剂、螯合剂、清凉剂、ph调节剂和矫味剂。

其中对于所述以蛇毒多肽为核心成分的皮肤调理剂，将金黄洋甘菊提取物、炖叶决明子提取物、甘草根提取物、菊花提取物及燕麦仁提取物制备成植物提取物纳米微胶囊混悬液。通过复凝聚法制备成的纳米微胶囊将各植物提取物包裹于囊材中(图1a)，制备得到浅色透明植物提取物纳米微胶囊，达到掩盖颜色的效果，进而有效地改善植物提取物产品所存在的“黑、土、黄”等缺点。

在本发明中，所述蛇毒多肽可以选自类蛇毒血清蛋白样肽、合成三肽衍生物、蛇毒类似活性化合物中的一种或多种。目前可以通过常规分子生物学技术从粗蛇毒提取、利用化学合成方法合成等技术获得这些类蛇毒血清蛋白样肽、合成三肽衍生物或蛇毒类似活性化合物，也可以商购获得。例如，但不限于，“合成三肽衍生物”可以选自类蛇毒三肽；“蛇毒类似活性化合物”可以选自waglerini活性肽等；“类蛇毒血清蛋白样肽”可以购自成都云希化工有限公司、杭州枷燃生物医药有限公司或杭州拓目科技有限公司等。

其中粗蛇毒可以商购获得。目前国内有多家粗蛇毒生产厂家，例如，湖北远成赛创科技有限公司孝南分公司、黄山蕲蛇科技有限公司、湖北远成赛创科技有限公司孝南分公司、苏州市麒麟生物特种养殖场等。

本领域技术人员根据实际需要，能够选择合适的蛇毒多肽。作为本发明的一种优选的实施方式，所述蛇毒多肽优选为类蛇毒血清蛋白样肽，更优选为二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐(式i)。

另外，一种示例性的类蛇毒血清蛋白样肽的氨基酸序列如下：h-gly-gly-lys-pro-asp-leu-arg-pro-cys-his-pro-pro-cys-his-tyr-ile-pro-arg-pro-lys-pro-arg-oh(seqidno：1)。

进一步地，本发明将蛇毒多肽与甘油混合制备得到蛇毒多肽甘油溶液后，与高分子成膜剂(例如，但不限于，聚丙烯酸钠)、螯合剂(例如，但不限于，甘氨酸铝)等发生交联反应，进而嵌入所制备的水凝胶支架结构中(图1b)。一方面，这种支架结构使蛇毒多肽处于相对密封的环境中，免受氧化剂、蛋白水解酶类诸多因素的影响，起到保护蛋白的作用；另一方面，这种支架结构还可发挥缓控释作用，在产品使用时可持续地释放蛇毒多肽等有效成分，进而发挥淡化细纹、紧致肌肤及改善眼袋等功效。

在本发明的第二方面，提供一种包含蛇毒多肽的水凝胶制剂，所述水凝胶制剂包含如下重量百分比的各组分：2-30重量％的以蛇毒多肽为核心成分的皮肤调理剂，5-25重量％的保湿剂，4-6重量％的成膜剂，0.01-10重量％的抗氧化剂，0.005-2重量％的螯合剂，0.01-2重量％的清凉剂，0.001-0.5重量％的矫味剂，0.01-1重量％的ph调节剂，余量为去离子水。

其中所述以蛇毒多肽为核心成分的皮肤调理剂包含如下重量百分比的各组分：0-0.001重量％的蛇毒多肽、20-50重量％的植物提取物纳米微胶囊混悬液、0.05-0.3重量％的红没药醇、0.5-2重量％的尿囊素、0.5-2重量％的棕榈酰寡肽、0.5-2重量％的乙酰基六肽-8和0.1-2重量％的烟酰胺。

优选地，其中所述植物提取物纳米微胶囊混悬液包含如下重量百分比的各组分：0.04-10重量％的金黄洋甘菊提取物、0.04-10重量％的钝叶决明子提取物、0.04-10重量％的甘草根提取物、0.04-10重量％的菊花提取物、0.04-10重量％的燕麦仁提取物、0.3-3重量％的明胶、0.5-3重量％的壳聚糖、2-10重量％的癸基葡糖苷、5-15重量％的正丁醇、3-20重量％的乙酸乙酯、0.05-0.5重量％的戊二醛、0.01-1重量％的naoh、0.01-1重量％的冰醋酸、余量为去离子水。其中蛇毒多肽的选择如本发明第一方面所定义。

优选地，其中所述保湿剂为包含如下重量百分比的各组分：5-20重量％的甘油、0.5-5重量％的羟乙基脲、0.5-1.5重量％的1，2-己二醇、0.05-5重量％的透明质酸钠、0.05-5重量％的山梨(糖)醇。

优选地，其中所述成膜剂为3-10重量％的聚丙烯酸钠。

优选地，其中所述矫味剂为薰衣草油。

在本发明的一个优选的实施方案中，所述包含蛇毒多肽的水凝胶，包含如下重量百分比的各组分：0.000005重量％的蛇毒多肽、0.1重量％的红没药醇、45重量％的植物提取物纳米微胶囊混悬液、1重量％的尿囊素、1重量％的棕榈酰寡肽、1重量％的乙酰基六肽-8、0.5重量％的烟酰胺、10重量％的甘油、1重量％的1，2-己二醇、1.5重量％的羟乙基脲、1.5重量％的透明质酸钠、0.5重量％的山梨(糖)醇、1重量％的对羟基苯乙酮、0.1重量％的柠檬酸、0.1重量％的薄荷醇乳酸酯、0.5重量％的薰衣草油、5重量％的聚丙烯酸钠、0.2重量％的甘氨酸铝、余量为去离子水。

其中所述植物提取物纳米微胶囊混悬液，包含如下重量百分比的各组分：8重量％的金黄洋甘菊提取物、8重量％的钝叶决明子提取物、8重量％的甘草根提取物、8重量％的菊花提取物、8重量％的燕麦仁提取物、0.375重量％的明胶、0.75重量％的壳聚糖、6重量％的癸基葡糖苷、10重量％的正丁醇、12重量％的乙酸乙酯、0.125重量％的戊二醛、0.08重量％的naoh、0.2重量％的冰醋酸、余量为去离子水。

在本发明的一个优选的实施方案中，所述包含蛇毒多肽的水凝胶，包含如下重量百分比的各组分：0.000005重量％的蛇毒多肽、10重量％的甘油、5重量％的聚丙烯酸钠、1重量％的1，2-己二醇、1.5重量％的羟乙基脲、1重量％的燕麦仁提取物、0.1重量％的红没药醇、1重量％的金黄洋甘菊提取物、1重量％的乙酰基六肽-8、1重量％的对羟基苯乙酮、1重量％的尿囊素、1重量％的棕榈酰寡肽、1重量％的钝叶决明籽提取物、1重量％的菊花提取物、1重量％的甘草根提取物、0.5重量％的薰衣草油、0.5重量％的烟酰胺、1.5重量％的透明质酸钠、0.2重量％的甘氨酸铝、0.5重量％的山梨(糖)醇、0.1重量％的薄荷醇乳酸酯、0.1重量％的柠檬酸、10重量％的正丁醇、6重量％的癸基葡糖苷、0.375重量％的明胶、0.75重量％的壳聚糖、12重量％的乙酸乙酯、0.125重量％的戊二醛、0.08重量％的naoh、0.2重量％的冰醋酸、余量为去离子水。

在本发明的另一个优选的实施方案中，所述包含蛇毒多肽的水凝胶，包含如下重量百分比的各组分：0.00001重量％的蛇毒多肽、12重量％的甘油、5.5重量％的聚丙烯酸钠、1.2重量％的1，2-己二醇、2重量％的羟乙基脲、0.5重量％的燕麦仁提取物、0.2重量％的红没药醇、0.5重量％的金黄洋甘菊提取物、1.5重量％的乙酰基六肽-8、1.5重量％的对羟基苯乙酮、0.5重量％的尿囊素、1.5重量％的棕榈酰寡肽、2重量％的钝叶决明籽提取物、2重量％的菊花提取物、2重量％的甘草根提取物、0.3重量％的薰衣草油、1重量％的烟酰胺、1重量％的透明质酸钠、0.5重量％的甘氨酸铝、1重量％的山梨(糖)醇、0.2重量％的薄荷醇乳酸酯、0.15重量％的柠檬酸、15重量％的正丁醇、8重量％的癸基葡糖苷、1重量％的明胶、1.8重量％的壳聚糖、16重量％的乙酸乙酯、0.4重量％的戊二醛、0.1重量％的naoh、0.8重量％的冰醋酸、余量为去离子水。

在本发明的第三方面，提供一种包含蛇毒多肽水凝胶的巴布剂。优选地，其中所述巴布剂基质为本发明所述的水凝胶，包含如下重量百分比的各组分：2-30重量％的以蛇毒多肽为核心成分的皮肤调理剂、5-25重量％的保湿剂、4-6重量％的成膜剂、0.01-10重量％的抗氧化剂、0.005-2重量％的螯合剂，0.01-2重量％的清凉剂，0.01-1重量％的ph调节剂，0.001-0.5重量％的矫味剂，余量为去离子水。

优选地，其中所述以蛇毒多肽为核心成分的皮肤调理剂包含如下重量百分比的各组分：0-0.001重量％的蛇毒多肽、20-50重量％的植物提取物纳米微胶囊混悬液、0.05-0.3重量％的红没药醇、0.5-2重量％的尿囊素、0.5-2重量％的棕榈酰寡肽、0.5-2重量％的乙酰基六肽-8、0.1-2重量％的烟酰胺。

其中所述植物提取物纳米微胶囊混悬液包含如下重量百分比的各组分：0.04-10重量％的金黄洋甘菊提取物、0.04-10重量％的钝叶决明子提取物、0.04-10重量％的甘草根提取物、0.04-10重量％的菊花提取物、0.04-10重量％的燕麦仁提取物、0.3-3重量％的明胶、0.5-3重量％的壳聚糖、2-10重量％的癸基葡糖苷、5-15重量％的正丁醇、3-20重量％的乙酸乙酯、0.05-0.5重量％的戊二醛、0.01-1重量％的naoh、0.01-1重量％的冰醋酸、余量为去离子水。

在本发明的第四方面，提供一种包含蛇毒多肽的修护眼膜，优选地，其中所述基质为第一方面或第二方面所述的水凝胶制剂或第三方面所述的巴布剂。优选地，所述包含蛇毒多肽的修护眼膜是一种缓释制剂。

优选地，所述修护眼膜包含如下重量百分比的各组分：2-30重量％的以蛇毒多肽为主要有效成分的皮肤调理剂、5-25重量％的保湿剂、4-6重量％的成膜剂、0.01-10重量％的抗氧化剂、0.005-2重量％的螯合剂，0.01-2重量％的清凉剂，0.001-0.5重量％的矫味剂、0.01-1重量％的ph调节剂，余量为去离子水。

其中所述以蛇毒多肽为主要有效成分的皮肤调理剂包含如下重量百分比的各组分：0-0.001重量％的蛇毒多肽、20-50重量％的植物提取物纳米微胶囊混悬液、0.05-0.3重量％的红没药醇、0.5-2重量％的尿囊素、0.5-2重量％的棕榈酰寡肽、0.5-2重量％的乙酰基六肽-8、0.1-2重量％的烟酰胺。

其中所述植物提取物纳米微胶囊混悬液包含金黄洋甘菊提取物、炖叶决明籽提取物、甘草根提取物、菊花提取物、燕麦仁提取物、癸基葡糖苷、正丁醇、乙酸乙酯、壳聚糖、明胶、戊二醛、冰醋酸、naoh、去离子水。

优选地，其中所述保湿剂可以为甘油、羟乙基脲、1，2-己二醇、透明质酸钠、山梨(糖)醇的一种或多种。

优选地，其中所述成膜剂可以为聚丙烯酸钠，适用于本发明的市售产品为上海森磊化工有限公司的ap800或p46n。

此外，该成膜剂还可以选用viscomatenp-700、viscomatenp600、聚乙烯醇等中的一种或几种混合使用。

在本发明的实施方案中，抗氧化剂可以是对羟基苯乙酮，但不限于此。

在本发明的实施方案中，螯合剂可以是甘氨酸铝，但不限于此。

在本发明的实施方案中，清凉剂可以是薄荷醇乳酸酯，但不限于此。

在本发明的实施方案中，矫味剂可以是薰衣草油，但不限于此。在本发明的实施方案中，ph调节剂可以选自柠檬酸、naoh、冰醋酸，但不限于此。

本领域技术人员应该理解，本发明中提到的保湿剂、成膜剂、抗氧化剂、螯合剂、清凉剂、ph调节剂、矫味剂可以为本领域中常规使用的相应试剂，并不仅限于上文列出的那些。

在本发明的第五方面，提供一种制备包含蛇毒多肽修护眼膜的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)将金黄洋甘菊提取物、钝叶决明子提取物、甘草根提取物、菊花提取物、燕麦仁提取物用去离子水溶解得到植物提取物溶液，并与癸基葡糖苷、正丁醇混合均匀得到a相；

(2)将乙酸乙酯滴加至a相中，并5000-12000rpm/min高速剪切乳化0.5-1min，得到b相，并置于35-45℃水浴中；

(3)将壳聚糖、明胶分别用去离子水溶解、分散得到各自水溶液，并依次滴加至b相中，搅拌均匀后naoh调节ph至6.0-6.5，35-45℃恒温反应完全，得到c相；

(4)将c相降温至4℃后，加入戊二醛交联固化50-70min后，升温至35-45℃，并加冰醋酸调节ph至3.5-4.5，制得植物提取物纳米胶囊混悬液；

(5)将除植物提取物纳米微胶囊混悬液外其他皮肤调理剂、抗氧化剂、除甘油外其他保湿剂、抗氧化剂溶解于去离子水中，并与步骤(4)制得的植物提取物纳米微胶囊混悬液混合均匀，得到d相；

(6)将甘油、蛇毒多肽搅拌10-20min，反应完全得到蛇毒多肽甘油溶液，并加入真空搅拌器中，再加入矫味剂、成膜剂、螯合剂、清凉剂，真空搅拌5-10min，得到e相；

(7)将d相一次性加入e相中，继续真空搅拌10-20min，得到交联均匀的包含蛇毒多肽水凝胶；

其中在步骤(7)制得的所述包含蛇毒多肽的水凝胶包含0.04-10重量％的金黄洋甘菊提取物、0.04-10重量％的钝叶决明子提取物、0.04-10重量％的甘草根提取物、0.04-10重量％的菊花提取物、0.04-10重量％的燕麦仁提取物、0.3-3重量％的明胶、0.5-3重量％的壳聚糖、2-10重量％的癸基葡糖苷、5-15重量％的正丁醇、3-20重量％的乙酸乙酯、0.05-0.5重量％的戊二醛、0.01-1重量％的naoh、0.01-1重量％的冰醋酸、0.01-1重量％的柠檬酸、0.05-0.3重量％的红没药醇、0.5-2重量％的尿囊素、0.5-2重量％的棕榈酰寡肽、0.5-2重量％的乙酰基六肽-8、0.1-2重量％的烟酰胺、5-20重量％的甘油、1-2重量％的羟乙基脲、0.5-1.5重量％的1，2-己二醇、0.1-2重量％的透明质酸钠、0.1-2重量％的山梨糖醇、0.001-0.5重量％的矫味剂、0.01-10重量％的抗氧化剂、4-6重量％的成膜剂、0.005-2重量％的螯合剂、0.01-2重量％的清凉剂。

可以看出，上述步骤(1)-至步骤(4)为制备植物提取物纳米胶囊混悬液的方法步骤。参考图1a，通过复凝聚法制备成的纳米微胶囊将各植物提取物包裹于囊材中，制备得到浅色透明植物提取物纳米微胶囊，达到掩盖颜色的效果，进而有效地改善植物提取物产品通常存在的“黑、土、黄”等缺点。

上述步骤(5)至步骤(7)的操作，是将蛇毒多肽与甘油混合制备得到蛇毒多肽甘油溶液后，与高分子成膜剂(例如，但不限于，聚丙烯酸钠)、螯合剂(例如，但不限于，甘氨酸铝)等发生交联反应，进而使蛇毒多肽嵌入所制备的水凝胶支架结构中(图1b)。一方面，这种支架结构使蛇毒多肽处于相对密封的环境中，免受氧化剂、蛋白水解酶类诸多因素的影响，起到保护蛋白的作用；另一方面，这种支架结构还可发挥缓控释作用，在产品使用时可持续地释放蛇毒多肽等有效成分，进而发挥淡化细纹、紧致肌肤及改善眼袋等功效。

在第六方面中，本发明提供第一方面或第二方面的包含蛇毒多肽的水凝胶在制备具有淡化细纹、紧致肌肤等功效的化妆品或护肤品中的应用。优选地，所述化妆品或护肤品用于预防或治疗面部皱纹、眼袋和黑眼圈。

综上所述，通过本发明的技术方案，不但克服了植物提取物制剂色泽“土、黄、黑”等问题，还使蛇毒多肽受水凝胶网状支架结构保护，有效地解决了蛇毒多肽易受氧化剂、还原剂、蛋白水解酶类等的分解破坏的问题，并且这种水凝胶支架结构还可发挥缓控释作用，在产品使用时可持续地释放蛇毒多肽等有效成分，进而发挥淡化细纹、紧致肌肤及改善眼袋等功效。这些都是本发明的技术方案相对于现有技术的有益技术效果。

附图说明

从下面结合附图的详细描述中，本发明的上述特征和优点将更明显，其中：

图1a为植物提取物纳米微胶囊，左图为植物提取物纳米微胶囊整体观图(400×)，右图为左图箭头所指区域的放大图。

图1b为修护眼膜扫描电镜图，左图为修护眼膜表面及切面电镜图(1.47k)，右图为修护眼膜横截面图(3.00k.x)。

图2是实施例6中验证实施例3制得的修护眼膜的肌肤紧致祛皱功效评价效果图(在50倍镜下观察和拍摄)。(a)眼角；(b)眼下。

图3是实施例5、6中检测实施例3制得的修护眼膜祛除黑眼圈及肌肤紧致功效评价visa皮肤成像分析的效果图。(a)受试者1，27岁，使用4周后黑眼圈变淡；(b)受试者2，45岁，使用4周后黑眼圈变淡，眼下细纹变浅。

图4是实施例6中使用实施例4制得的修护眼膜肌肤紧致功效评价visa皮肤成像分析效果。受试者3，44岁，使用4周后，眼下细纹变浅。

图5显示使用本发明的蛇毒多肽修护眼膜(实施例3制备)前后的眼下黑色素、红色素(n＝15)测量结果。

图6显示使用本发明的蛇毒多肽水凝胶制剂产品(实施例3和4制备)前后的眼周皮肤含水量(u，n＝15)。判定标准：皮肤干燥：＜50u；皮肤水分尚可：50～60u；皮肤水分充分：＞60u。(a)使用实施例4的修护眼膜产品眼角皮肤含水量，(b)使用实施例4的修护眼膜产品眼下皮肤含水量，(c)使用实施例3的修护眼膜产品眼角皮肤含水量，(d)使用实施例3的修护眼膜产品眼下皮肤含水量。

图7显示使用本发明的蛇毒多肽水凝胶制剂产品(实施例3和4制备)前后的眼周皱纹特征计数和分值。(a)使用实施例3的修护眼膜产品眼周皱纹特征计数，(b)使用实施例4的修护眼膜产品眼周皱纹特征计数，(c)使用实施例3的修护眼膜产品分值，(d)使用实施例4的修护眼膜产品分值。

具体实施方式

下面参照具体的实施例进一步描述本发明，但是本领域技术人员应该理解，本发明并不限于这些具体的实施例。

本领域技术人员应该理解，如无特别说明，下述实施例中所用的试剂均为市售分析纯级别的试剂。

实施例1.从粗蛇毒多肽提取可用于本发明的“蛇毒多肽”

从粗蛇毒多肽进一步提取可用于本发明的“蛇毒多肽”的方法是常规的方法。例如，一种可行的提取方法包括下述步骤：

(1)取粗蛇毒1g用0.01m乙酸铵缓冲液10ml溶解，并2000rpm/min离心10min后取上清液；

(2)将步骤(1)得到的上清液加到用0.01m乙酸铵缓冲液平衡后的cm-agrose阳离子交换柱中，并用该缓冲液洗脱；

(3)分别用0.05-1.5m的氯化钠-乙酸铵缓冲液作梯度洗脱，流速0.5ml/min，紫外检测器检测，并收集主要蛋白峰，冷冻干燥得到样品a：

(4)用0.15m的乙酸铵缓冲液(ph＝5.0)平衡sephadexg-50凝胶柱；

(5)将样品a用10ml0.15m乙酸铵缓冲液溶解后，加入到步骤(4)平衡的sephadexg-50凝胶柱中，并用0.15m乙酸铵缓冲液以0.5ml/min的流速进行洗脱，紫外检测器检测，并收集主要蛋白峰，冷冻干燥得到样品b；

(6)用0.15m的乙酸铵缓冲液(ph＝5.0)平衡sephadexg-25凝胶柱；

(7)将样品b用10ml用0.15m乙酸铵缓冲液溶解后，加入到步骤(6)平衡的sephadexg-25凝胶柱中，并用0.15m乙酸铵缓冲液以0.5ml/min的流速进行洗脱，紫外检测器检测，并收集主要蛋白峰，冷冻干燥得到蛇毒多肽。

采用梯度洗脱后可得蛋白峰6-10峰，各峰合计产率为18％以上。分离纯化所得蛋白组分sds-page电泳检测最高分子量约13kd，最低约0.4kd。

其中粗蛇毒可以商购获得。目前国内有多家粗蛇毒生产厂家，例如，湖北远成赛创科技有限公司孝南分公司、黄山蕲蛇科技有限公司、湖北远成赛创科技有限公司孝南分公司、苏州市麒麟生物特种养殖场等。

本领域技术人员应该理解，确切地说，上述提取步骤得到的“蛇毒多肽”是“蛇毒多肽提取物”，其是一种混合物。也就是说，经常规提取方法提纯后的“蛇毒多肽提取物”可以满足本发明的要求，能够实现本发明的技术效果。

实施例2.包含蛇毒多肽的水凝胶的制备

本实施例提供制备一种包含蛇毒多肽的水凝胶的方法。

在最终制得的包含蛇毒多肽的水凝胶中，各组分的质量百分比如下表1所示：

表1.最终制得的包含蛇毒多肽的水凝胶中各组分的质量百分比

本领域技术人员应该理解，以下操作步骤中，各组分的实际用量或用量比均可按照表1所示的最终制得的包含蛇毒多肽的水凝胶中各组分的质量百分比依据生产规模(即，实际配制的水凝胶重量)按比例调整。这在本领域技术人员的能力之内。

本实施例中所用的“蛇毒多肽”购自成都云希化工有限公司，或是按照实施例1的方法提取获得。

步骤一：将金黄洋甘菊提取物、钝叶决明子提取物、甘草根提取物、菊花提取物、燕麦仁提取物用去离子水溶解得到植物提取物溶液，并与癸基葡糖苷、正丁醇混合均匀得到a相；

步骤二：将乙酸乙酯滴加至a相中，并10000rpm/min高速剪切乳化40s，得到b相，并置于40℃水浴中；

步骤三：将壳聚糖、明胶分别用去离子水溶解、分散得到各自水溶液，并依次滴加至b相中，搅拌均匀后naoh调节ph至6.0-6.5，35-45℃恒温反应完全，得到c相；

步骤四：将c相降温至4℃后，加入戊二醛交联固化60min后，升温至40℃，并加冰醋酸调节ph至3.5-4.5，即得植物提取物纳米胶囊混悬液；

步骤五：将尿囊素、柠檬酸、烟酰胺、羟乙基脲、1，2-己二醇、红没药醇、透明质酸钠、山梨(糖)醇、乙酰基六肽-8、棕榈酰寡肽、对羟基苯乙酮溶解于去离子水中并与步骤四中所得植物提取物纳米微胶囊悬浮液混合均匀，即得d相；

步骤六：将甘油、蛇毒多肽搅拌15min，反应完全得到蛇毒多肽甘油溶液，并加入真空搅拌器中，再将聚丙烯酸钠、甘氨酸铝、薄荷醇乳酸酯、薰衣草油加入其中，真空搅拌10min，即得e相；

步骤七：将d相一次性加入e相中，继续真空搅拌15min，即得交联均匀的包含蛇毒多肽的水凝胶。

实施例3.包含蛇毒多肽的修护眼膜的制备

本发明提供一种制备包含蛇毒多肽的修护眼膜的方法。

延续实施例2，步骤八：将步骤七制备所得的包含蛇毒多肽的水凝胶均匀铺展于无纺布上，盖衬，40℃烘干3h后剪裁、密封即得蛇毒多肽修护眼膜。

本领域技术人员应该理解，在最终制得的修护眼膜中，各成分的质量百分比实际等于步骤七制得的包含蛇毒多肽的水凝胶中各组分的质量百分比。

实施例4.包含蛇毒多肽的修护眼膜的制备

本发明提供一种制备包含蛇毒多肽的修护眼膜的方法。

在制得的包含蛇毒多肽的水凝胶中，各组分的质量百分比如下表2所示(这也是由该水凝胶制得的修护眼膜中各成分的质量百分比)：

表2.最终制得的包含蛇毒多肽的水凝胶中各组分的质量百分比

本领域技术人员应该理解，以下操作步骤中，各组分的实际用量或用量比均可按照表2所示的最终制得的包含蛇毒多肽的水凝胶中各组分的质量百分比依据生产规模(即，实际配制的水凝胶重量)按比例调整。这在本领域技术人员的能力之内。

本实施例中所用的“蛇毒多肽”购自成都云希化工有限公司，或是按照实施例1的方法提取获得。

除了各组分的实际用量或用量比需要按照表2和实际生产规模按比例调整外，步骤一至步骤七的操作同实施例2；

步骤八：将步骤七制备所得水凝胶均匀铺展于无纺布上，盖衬，40℃烘干3h后剪裁、密封即得蛇毒多肽修护眼膜。

实施例5.蛇毒多肽修护眼膜祛除黑眼圈功效评价

符合条件的受试者签订知情同意书后，visia面部图像采集和ck皮肤检测系统检测黑眼圈改善情况并发放受试眼膜。受试者连续使用本发明的蛇毒多肽修护眼膜(即，实施例3的修护眼膜产品)，洁面后敷用。使用时揭去珠光纸，将眼膜紧密贴在眼周肌肤，约20-40min后取下眼膜，连续4周。在试验期间停用其他美白祛皱化妆品，连续使用1周、2周、4周后，再以同样方法测定各功效指标。此外试用期间询问受试者使用产品后自我感觉及有无过敏现象等，并记录自身前后对比。

1.眼下色度l、a、b值

lab色度中，l反映颜色的亮度，即从白到黑的颜色变化，l值越大，颜色越偏向白色，反之偏向黑色；a值反映从红到绿的颜色变化，+a为红色方向，-a为绿色方向；b反映从黄到蓝的颜色变化，+b为黄色方向，-b为蓝色方向。ita为各值的综合指标，数值越高，就表明皮肤越白。

表3.眼下色度l、a、b值(n＝15)

vs使用前*p＜0.05，**p＜0.01

由表3可见，使用实施例3的修护眼膜4w后眼下l值与使用前比较具有统计学意义(p＜0.05)，表示亮度上升，上升3.06％；a值2w与使用前比较具有统计学意义(p＜0.05)，下降6.17％，表示眼下皮肤向绿色方向发展；b值下降2.58％，表示眼下皮肤向蓝色方向发展，但未有统计学意义；ita值上升10.72％，表示眼下美白度有所增加，但未达到具有统计学意义；δeab值为美白度上升幅度，4w时上升3.13±0.31。以上指标均表明，使用实施例3的修护眼膜4w，有效改善黑眼圈(图3)。

2.眼下黑色素、红色素

实验结果显示在图5中：使用实施例3的修护眼膜4w后眼下黑色素与使用前比较具有统计学意义(p＜0.05)，黑色素下降10.81％；眼下红色素下降6.74％，但未达到统计学意义。黑色素和红色素数值降低，表示黑眼圈有改善(图5)。

实施例6.蛇毒多肽修护眼膜对眼周肌肤紧致祛皱功效评价

符合条件的受试者签订知情同意书后，测定其眼部周围检测指标并发放受试眼膜。受试者连续使用本发明的蛇毒多肽修护眼膜(即，实施例3、实施例4的修护眼膜产品)，洁面后敷用。使用时揭去珠光纸，将眼膜紧密贴在眼周肌肤，约20-40min后取下眼膜，连续4周。在试验期间停用其他美白祛皱化妆品，连续使用1周、2周、4周后，再以同样方法测定各功效指标。此外试用期间询问受试者使用产品后自我感觉及有无过敏现象等，并记录自身前后对比(图2-4)。

1.眼周皮肤弹性

ck检测仪检测结果显示，随着实施例3的修护眼膜产品使用时间的推移，眼周皮肤弹性呈升高趋势(表4)。使用产品后眼下r2值与使用前比较具有统计学意义(p＜0.05)，上升6.49％；眼角r2值与使用前比较具有统计学意义(p＜0.05)，上升7.50％。眼下r5值2w、4w与使用前比较具有显著性差异(p＜0.01)，上升44.44％；眼角r5值2w、4w与使用前比较具有显著性差异(p＜0.01)，上升25.00％。眼下r7值2w、4w与使用前比较具有显著性差异(p＜0.01)，上升33.33％；眼角r7值4w与使用前比较具有统计学意义(p＜0.05)，上升19.35％。表示本发明产品可让眼下和眼角弹性增加，增强眼周紧致效果(图2-3)。

表4.使用实施例3的修护眼膜产品前后眼周皮肤弹性(n＝15)

注：vs使用前*p＜0.05，**p＜0.01

r2值，即无负压时皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸量之比。比值越接近1，说明皮肤弹性越好。

r5值，即在皮肤测试第一次循环中，皮肤恢复过程中的弹性部分与加负压过程的弹性部分之比，比值越接近1，说明皮肤弹性越好。

r7值，即在皮肤测试第一次循环中，皮肤恢复过程中的弹性部分与这次循环过程中皮肤的最大拉升量之比，比值越接近1，说明皮肤弹性越好。

2.眼周皮肤含水量

检测结果显示在图6中，使用实施例3、4的修护眼膜产品后各个测试部位的皮肤水分含量随着时间的推移逐渐增加，均呈现上升趋势。使用前眼下和眼角皮肤水分含量为50～60u，属于皮肤水分尚可状态。眼下皮肤含水量1w、4w与使用前比较具有统计学意义(p＜0.05)，2w具有显著性差异(p＜0.01)，2w均值增加最显著，其中实施例3的修护眼膜产品与使用前相比增加13.19％，实施例4的修护眼膜产品为8.37％。眼角1w、2w、4w与使用前0w比较具有显著性差异(p＜0.01)，2w均值增加最显著，其中实施例3的修护眼膜产品与使用前相比增加12.43％，实施例4的修护眼膜产品为13.76％。眼下和眼角皮肤含水量在＞60u，皮肤水分达到充分状态。

3.眼周皱纹特征计数和分值

特征计数是visia系统对皮肤问题进行数值量化分析，数值越小越好。分值是visia系统对皮肤问题进行深度量化分析，数值越小越好。

实验结果显示在图7中：随着使用时间的推移，其中，使用实施例3的修护眼膜，眼周皱纹的特征计数呈下降趋势，下降24.03％；使用实施例4的修护眼膜，眼周皱纹的特征计数下降32.35％但仍未达到有统计学意义；眼周皱纹分值4w与使用前比较具有统计学意义(p＜0.05)，使用实施例3的修护眼膜，眼周皱纹的特征计数下降34.65％，使用实施例4的修护眼膜，眼周皱纹的特征计数下降39.28％。这些数据充分表示本发明的修护眼膜产品可淡化眼周细纹。

应该理解，尽管参考其示例性的实施方案，已经对本发明进行具体地显示和描述，但是本领域的普通技术人员应该理解，在不背离由后附的权利要求所定义的本发明的精神和范围的条件下，可以在其中进行各种形式和细节的变化，可以进行各种实施方案的任意组合。