C-RAF抑制剂的治疗用途的制作方法

本申请含有已经以ascii格式电子递交的序列表并且该序列表通过引用以其全文并入本文。所述ascii副本创建于2017年6月7日，名称为pat057346_sl.txt并且大小为190,381字节。本发明涉及c-raf(c-raf或craf)抑制剂用于治疗癌症的用途，该癌症是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，如kras突变型肿瘤、nras突变型肿瘤、和某些braf突变型肿瘤。特别地，提供该c-raf抑制剂用于在癌症的治疗中使用，该癌症选自kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)、braf突变型nsclc(非小细胞肺癌)、kras和braf突变型nsclc(非小细胞肺癌)、kras突变型卵巢癌、braf突变型卵巢癌、kras和braf突变型卵巢癌、以及nras突变型黑素瘤。本发明还提供了用于治疗复发性或难治性brafv600突变型黑素瘤的c-raf抑制剂。本发明还涉及如下药物组合，该药物组合包含(a)结合程序性死亡1(pd-1)的至少一种抗体分子(例如，人源化抗体分子)，和(b)c-raf(c-raf或craf)抑制剂，所述组合用于同时、分开或顺序给予，用于在增殖性疾病的治疗中使用；包含这种组合的药物组合物；治疗患有增殖性疾病的受试者的方法，该方法包括将所述组合向对其有需要的受试者给予；这种组合用于治疗增殖性疾病的用途；以及包含这种组合的商业包装；所述增殖性疾病是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，如kras突变型肿瘤和nras突变型肿瘤，并且具体地是kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)和nras突变型肿瘤，并且具体地是nras突变型黑素瘤。
背景技术：
：ras/raf/mek/erk或mapk途径是驱动细胞增殖、分化和存活的关键信号传导级联。该途径的失调是许多肿瘤发生实例的基础。mapk途径的异常信号传导或不当活化已显示于多种肿瘤类型(包括黑素瘤、肺癌和胰腺癌)中，并且可以通过几种不同的机制发生，包括活化ras和braf中的突变。ras是gtp酶的超家族，并且包括kras(v-ki-ras2kirsten大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物)，它是一种受调节的信号传导蛋白，可以由被称为功能获得性突变的多种单点突变发动(活化)。mapk途径频繁在人类癌症中发生突变，其中kras和braf突变是最常见的(近似30％)。ras突变，特别是功能获得性突变，已在9％-30％的所有癌症中检测到，其中kras突变的患病率最高(86％)，其次是nras(11％)，而且不常发生的是hras(3％)(coxad,fesiksw,kimmelmanac等人(2014),natrevdrugdiscov.[自然评论药物发现]11月；13(11):828-51)。虽然选择性braf抑制剂(brafi)，以及在较小程度上，mek抑制剂(meki)已证明在braf突变型肿瘤中具有良好活性，但目前尚无针对kras突变型肿瘤的有效疗法(cantwell-dorriser,o'learyjj,sheilsom(2011)molcancerther.[分子癌症治疗学]3月；10(3):385-94.)。例如，发现在具有brafv600e突变的黑素瘤中有效的brafi(如维莫非尼(vemurafenib)和依那可尼(encorafenib))在ras突变型癌症中无效。变构mek抑制剂(meki)在患具有ras突变的肿瘤的患者中未证明稳健的临床功效，这可能是由于窄治疗指数和反馈介导的途径再活化。因此，(k)ras突变型肿瘤仍然是未被满足的医疗需求，仍不存在对其的有效治疗。关于c-raf在介导kras信号传导和kras突变型非小细胞肺癌(nsclc)发展中发挥作用的新证据使其成为治疗干预的合适靶标(blascorb,francozs,santamaríad等人(2011)c-raf,butnotb-raf,isessentialfordevelopmentofk-rasoncogene-drivennon-smallcelllungcarcinoma[c-raf而不是b-raf对于k-ras致癌基因驱动的非小细胞肺癌的发展至关重要].cancercell.[癌细胞]2011年5月17日；19(5):652-63.)。据显示，在kras突变型癌症中，在用meki治疗后，c-raf促进反馈介导的途径再活化(litop,saborowskia,yuej等人(2014)disruptionofc-raf-mediatedmekactivationisrequiredforeffectivemekinhibitioninkrasmutanttumors.[破坏c-raf介导的mek活化是kras突变型肿瘤中有效的mek抑制所需的]cancercell[癌细胞]25,697-710.，lamba等人2014)。此外，c-raf在介导brafi治疗后的反常活化中发挥重要作用(poulikakospi,zhangc,bollagg等人(2010),nature[自然].mar18；464(7287):427-30.，hatzivassiliou等人2010，heidorn等人2010)。因此，有效抑制c-raf和braf活性的选择性泛raf抑制剂可有效阻断braf突变型肿瘤和ras突变体驱动的肿瘤发生，并且还可减少反馈活化。t细胞介导针对抗原的免疫应答的能力需要两种不同的信号传导相互作用(viglietta,v.等人(2007)neurotherapeutics[神经治疗学]4:666-675；korman,a.j.等人(2007)adv.immunol.[免疫学进展]90:297-339)。首先，将已经排列在抗原呈递细胞(apc)的表面上的抗原呈递至抗原特异性原初cd4+t细胞。这种呈递通过t细胞受体(tcr)递送信号，该信号指导t细胞启动对所呈递的抗原具有特异性的免疫应答。然后，通过apc与不同的t细胞表面分子之间的相互作用所介导的多种共刺激性以及共抑制性信号触发t细胞的活化和增殖并且最终触发它们的抑制。程序性死亡1(pd-1)蛋白是t细胞调节子的扩展的cd28/ctla-4家族的抑制成员(okazaki等人(2002)curropinimmunol[当代免疫学观点]14:391779-82；bennett等人(2003)j.immunol.[免疫学杂志]170:711-8)。cd28家族的其他成员包括cd28、ctla-4、icos和btla。它是许多肿瘤用来逃避免疫系统攻击的免疫检查点通路中的靶标位点之一。建议pd-1作为单体存在，其缺乏其他cd28家族成员特有的未配对半胱氨酸残基。pd-1在活化的b细胞、t细胞和单核细胞上表达。鉴于免疫检查点途径在调节对肿瘤的免疫应答方面的重要性，需要开发调节免疫抑制蛋白(如pd-1)活性从而导致免疫系统的活化的新型联合疗法。此类试剂可以用于例如癌症免疫疗法和其他病症的治疗，并且可以与包括激酶抑制剂在内的其他治疗剂组合使用。肺癌是一种影响全球男性和女性的常见癌症类型。nsclc是最常见的肺癌类型(大致85％)，其中近似70％的患者在诊断时呈现出疾病晚期(iiib期或iv期)。约30％的nsclc含有活化kras突变，并且这些突变与对egfrtki的抗性相关(paow,wangty,rielygj等人(2005)plosmed[公共科学图书馆医学]；2(1):e17)。目前处于开发中的免疫疗法已开始为肺癌患者提供显著益处，包括常规治疗对其无效的患者。最近，已经批准pd-1/pd-l1相互作用的两种抑制剂，派姆单抗(pembrolizumab)和纳武单抗(nivolumab)，商品名分别为和用于在nsclc中使用。然而，结果表明许多用单一药剂pd-1抑制剂治疗的患者不能从治疗中充分受益。黑素瘤是一种影响全球男性和女性的常见癌症类型。约15％-20％的黑素瘤含有活化nras突变，并且这些突变被确定为在诊断为iv期黑素瘤后具有较短存活期的独立预测因子(jakobja等人(2012),cancer[癌症],卷118,第16期,第4014-4023页)。目前处于开发中的免疫疗法已开始为黑素瘤癌患者提供显著益处，包括常规治疗对其无效的患者。最近，已经批准pd-1/pd-l1相互作用的两种抑制剂，派姆单抗(pembrolizumab)和纳武单抗(nivolumab)，商品名分别为和用于在黑素瘤中使用。然而，结果表明许多用单一药剂pd-1抑制剂治疗的患者不能从治疗中充分受益。已证明直接抑制kras和nras是具有挑战性的。例如，迄今为止还不存在可用于治疗kras突变型nsclc患者或nras突变型黑素瘤患者的经批准靶向疗法。因此需要安全和/或良好耐受的靶向疗法。还需要一种在这样的临床环境中产生持久和持续应答的疗法。技术实现要素：本发明提供了化合物a或其药学上可接受的盐，用于在癌症的治疗中使用，该癌症是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，如kras突变型肿瘤和nras突变型肿瘤。这些包括nras突变型黑素瘤、kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)、braf突变型nsclc、kras和braf突变型nsclc、kras突变型卵巢癌、braf突变型卵巢癌、以及kras和braf突变型卵巢癌、以及复发性或难治性brafv600突变型黑素瘤(例如，所述黑素瘤在brafi/meki联合疗法失败后复发或对于brafi/meki联合疗法来说是难治的)。化合物a是具有以下结构的化合物：本发明还提供了药物组合，该药物组合包含(a)结合程序性死亡1(pd-1)的至少一种抗体分子(例如，人源化抗体分子)，尤其如下所述的示例性抗体分子，和(b)作为化合物a的c-raf抑制剂或其药学上可接受的盐。该药物组合可用于同时、分别或顺序给予，用于治疗增殖性疾病，特别是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，如kras突变型肿瘤和nras突变型肿瘤。这些肿瘤包括kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)、nras突变型黑素瘤、kras和/或braf突变型nsclc、或kras和/或braf突变型卵巢癌和对brafi/meki联合治疗具有抗性的braf突变型黑素瘤。本发明还涉及一种药物组合，该药物组合包含：(a)作为化合物a的c-raf抑制剂，或其药学上可接受的盐；和(b)能够结合人类程序性死亡-1(pd-1)的分离的抗体分子，该分离的抗体分子包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，该重链可变区(vh)包含bap049-克隆-b或bap049-克隆-e的如表1中所述的hcdr1、hcdr2和hcdr3氨基酸序列，该轻链可变区(vl)包含bap049-克隆-b或bap049-克隆-e的如下表1中所述的lcdr1、lcdr2和lcdr3氨基酸序列。还提供了包含这种组合的药物组合物；治疗患有增殖性疾病的受试者的方法，该方法包括将所述组合向对其有需要的受试者给予；这种组合用于治疗增殖性疾病的用途；以及包含这种组合的商业包装。pd-1抑制剂是抗pd-1抗体分子，如题为“pd-1的抗体分子及其用途”的ussn14/604,415和wo/2015/112900中所述，两者均通过引用以其全文并入。在一个实施例中，该抗pd-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个抗原结合区(例如可变区或其抗原结合片段)，包括来自重链的三个互补决定区(cdr)和来自轻链的三个cdr，例如选自以下中任何一项的抗体：bap049-hum01、bap049-hum02、bap049-hum03、bap049-hum04、bap049-hum05、bap049-hum06、bap049-hum07、bap049-hum08、bap049-hum09、bap049-hum10、bap049-hum11、bap049-hum12、bap049-hum13、bap049-hum14、bap049-hum15、bap049-hum16、bap049-克隆-a、bap049-克隆-b、bap049-克隆-c、bap049-克隆-d、或bap049-克隆-e；或如表1所述，或由表1中核苷酸序列所编码的；或者与前述序列中任何一项基本相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。例如，该抗pd-1抗体分子可包括根据kabat等人所述的vhcdr1、或根据chothia等人所述的vh高变环1、或其组合，例如如表1中所示。在一个实施例中，vhcdr1的kabat和chothiacdr的组合包含氨基酸序列gytfttywmh(seqidno:224)，或与其基本相同的氨基酸序列(例如，具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代))。该抗pd-1抗体分子可进一步包括例如根据kabat等人所述的vhcdr2-3和根据kabat等人所述的vlcdr1-3，例如如表1中所示。因此，在一些实施例中，框架区基于根据kabat等人定义的cdr和根据chothia等人定义的高变环的组合来定义。例如，该抗pd-1抗体分子可包括基于根据chothia等人的vh高变环1定义的vhfr1和基于根据kabat等人的vhcdr1-2定义的vhfr2，例如如表1中所示。该抗pd-1抗体分子可进一步包括例如基于根据kabat等人的vhcdr2-3定义的vhfr3-4和基于根据kabat等人的vlcdr1-3定义的vlfr1-4。在本发明的组合中结合程序性死亡1(pd-1)的优选抗体分子(例如人源化抗体分子)是作为bap049-克隆-e的示例性抗体分子，并且优选的氨基酸序列描述于本文的表1中(vh：seqidno:38；vl：seqidno:70)。优选的抗体分子在本文中也称为抗体b。本发明进一步提供了用于同时、分开或顺序给予的药物组合，该药物组合包含作为化合物a的c-raf激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，和如本文所述的抗pd-1抗体分子，用于在增殖性疾病的治疗中使用。本发明特别涉及用于在增殖性疾病的治疗中使用的本发明组合，其特征在于活化mapk途径中的突变，并且特别是kras或nras中的一个或多个突变。本发明还提供了本发明组合用于治疗增殖性疾病(特别是癌症)的用途。具体地，本发明的组合可用于治疗癌症，该癌症选自kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)、nras突变型黑素瘤、kras和/或braf突变型nsclc、kras和/或braf突变型卵巢癌和对brafi/meki联合治疗具有抗性的braf突变型黑素瘤。本发明还提供了本发明组合用于制备用于治疗增殖性疾病的药物的用途，该增殖性疾病特别是癌症，特别是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，例如kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)、nras突变型黑素瘤、kras和/或braf突变型nsclc、kras和/或braf突变型卵巢癌以及对brafi/meki联合治疗具有抗性的braf突变型黑素瘤。本发明还提供了治疗增殖性疾病的方法，该方法包括同时、分开或顺序向对其有需要的受试者给予本发明的组合，该给予量对于所述增殖性疾病具有联合治疗有效性。本发明还提供了药物组合物或组合制剂，其包含一定量的本发明组合(其对增殖性疾病具有联合治疗有效性)，和任选地至少一种药学上可接受的载体。本发明还提供了组合制剂，其包含(a)一个或多个剂量单位的作为化合物a的c-raf抑制剂或其药学上可接受的盐，和(b)抗pd-1抗体分子，用于在增殖性疾病的治疗中使用。本发明还提供了一种商业包装，其包含作为活性成分的本发明组合，以及用于将本发明组合同时、分开或顺序向对其有需要的患者给予以用于在增殖性疾病的治疗中使用的说明书，该增殖性疾病特别是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，例如kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)、nras突变型黑素瘤、kras和/或braf突变型nsclc、kras和/或braf突变型卵巢癌以及对brafi/meki联合治疗具有抗性的braf突变型黑素瘤。本发明还提供了一种商业包装，该商业包装包含作为化合物a的c-raf抑制剂或其药学上可接受的盐，和抗pd-1抗体分子，以及用于在增殖性疾病的治疗中同时、分开或顺序使用的说明书。在另一方面，本发明的特征在于诊断或治疗试剂盒，其包括本文所述的抗体分子和使用说明书。本文所提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献均通过引用以其全文并入。根据说明书和附图并且根据权利要求书，本发明的其他特征、目标和优点将是显而易见的。附图说明图1描绘了鼠抗pd-1mabbap049的轻链和重链可变区的氨基酸序列。上面和下面的序列来自两个独立的分析。基于kabat编号的轻链和重链cdr序列加了下划线。基于chothia编号的轻重链cdr序列以粗体斜体显示。轻链序列的位置102处的未配对的cys残基加了框。序列按出现的顺序分别公开为seqidno:8、228、16和229。图2a描绘了与种系序列比对的鼠抗pd-1mabbap049的轻链和重链可变区的氨基酸序列。上面和下面的序列分别是种系(gl)和bap049(mumab)序列。基于kabat编号的轻链和重链cdr序列加了下划线。基于chothia编号的轻重链cdr序列以粗体斜体显示。“-”表示相同的氨基酸残基。序列按出现的顺序分别公开为seqidno:230、8、231和16。图2b描绘了鼠κj2基因的序列和鼠抗pd-1mabbap049中的相应突变。“-”表示相同的核苷酸残基。序列按出现的顺序分别公开为seqidno:233、232、234和235。图3a-3b描绘了荧光标记的鼠抗pd-1mabbap049(mumab)和三种嵌合版本的bap049(chimab)之间的竞争结合。实验进行两次，并且结果分别显示在图3a和3b中。三种嵌合bap049抗体(chimab(cys)、chimab(tyr)和chimab(ser))在轻链可变区的位置102处分别具有cys、tyr和ser残基。chimab(cys)、chimab(tyr)和chimab(ser)也分别称为bap049-chi、bap049-chi-y和bap049-chi-s。图4是显示十六个人源化bap049克隆(bap049-hum01至bap049-hum16)的facs结合分析结果的条形图。对于每种测试的mab，从最左边的条到最右边的条的抗体浓度依次为200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml、25ng/ml和12.5ng/ml。图5描绘了人源化bap049克隆的结构分析(a、b、c、d和e代表各种类型的框架区序列)。还显示了这些样品中mab的浓度。图6a-6b描绘了在竞争结合测定中使用恒定浓度的alexa488标记的鼠mabbap049、测试抗体的连续稀释物和表达pd-1的300.19细胞测量的人源化bap049mab的结合亲和力和特异性。实验进行两次，并且结果分别显示在图6a和6b中。图7描绘了基于facs数据、竞争结合和结构分析的人源化bap049克隆的排序。还显示了这些样品中mab的浓度。图8a-8b描绘了通过选择的人源化bap049克隆阻断配体与pd-1的结合。pd-l1-ig和pd-l2-ig与pd-1结合的阻断如图8a所示。pd-l2-ig与pd-1结合的阻断如图8b所示。评估bap049-hum01、bap049-hum05、bap049-hum08、bap049-hum09、bap049-hum10、和bap049-hum11。分析中还包括在轻链可变区位置102处具有tyr的鼠mabbap049和嵌合mab。图9a-9b描绘了十六种人源化bap049克隆和bap049嵌合体(bap049-chi)的重链可变结构域序列的比对。在图9a中，显示了所有序列(按出现顺序分别为seqidno:22、38、38、38、38、38、38、38、38、38、50、50、50、50、82、82和86)。在图9b中，仅显示与小鼠序列不同的氨基酸序列(按出现顺序分别为seqidno:22、38、38、38、38、38、38、38、38、38、50、50、50、50、82、82和86)。图10a-10b描绘了十六种人源化bap049克隆和bap049嵌合体(bap049-chi)的轻链可变结构域序列的比对。在图10a中，显示了所有序列(按出现顺序分别为seqidno:24、66、66、66、66、70、70、70、58、62、78、74、46、46、42、54和54)。在图10b中，仅显示与小鼠序列不同的氨基酸序列(按出现顺序分别为seqidno:24、66、66、66、66、70、70、70、58、62、78、74、46、46、42、54和54)。图11是概述本文公开的联合疗法所靶向的抗原加工和呈递、效应细胞应答和免疫抑制途径的示意图。图12描绘了在接受相同剂量的示例性抗pd-1抗体分子时针对不同重量患者的预测c谷(cmin)浓度。图13描绘了观察到的对比模型预测的(基于群体或个体的)cmin浓度。图14描绘了用于分析药代动力学的模型的累积、时间进程和受试者内变异性。图15a、15b和15c描绘了化合物a在各种krasmtnsclc模型中的单一药剂活性。图16描绘了化合物a在nrasmt黑素瘤模型中的单一药剂活性。表的说明表1总结了鼠、嵌合和人源化抗pd-1抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。所述抗体分子包括鼠mabbap049，嵌合mabbap049-chi和bap049-chi-y，以及人源化mabbap049-hum01至bap049-hum16和bap049-克隆-a至bap049-克隆-e。该表中显示了重链和轻链cdr的氨基酸和核苷酸序列、重链和轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列、以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。表2描绘了人源化mabbap049-hum01至bap049-hum16和bap049-克隆-a至bap049-克隆-e的重链和轻链框架区的氨基酸和核苷酸序列。表3描绘了人igg重链和人κ轻链的恒定区氨基酸序列。表4描绘了人源化mabbap049-克隆-a至bap049-克隆-e的重链和轻链前导序列的氨基酸序列。表5描绘了基于平剂量给药(flatdosing)计划表的示例性pk参数。具体实施方式c-raf激酶抑制剂craf已被证明是许多癌症(包括nsclc)中突变kras驱动发展的关键介导者，并且在brafi治疗后介导反常活化中起着重要作用。因此，化合物a(c-raf抑制剂)可用于治疗(例如，减少、抑制或延迟进展中的一项或多项)增殖性疾病，尤其是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，例如nras突变型黑素瘤、kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)、braf突变型nsclc、kras和braf突变型nsclc、kras突变型卵巢癌、braf突变型卵巢癌以及kras和braf突变型卵巢癌，和复发性或难治性brafv600突变型黑素瘤(例如，所述黑素瘤在brafi/meki联合疗法失败后复发或对于brafi/meki联合疗法来说是难治的)。如本文所用，术语“raf抑制剂”是指b-raf蛋白激酶(本文也称为b-raf、braf或b-raf)和c-raf蛋白激酶(本文也称为c-raf、c-raf或craf)的三磷酸腺苷(atp)竞争性抑制剂，其选择性地靶向、降低或抑制丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶b-raf或c-raf中的至少一种的活性。raf抑制剂可以抑制raf单体和raf二聚体两者。在本文所述方法、治疗、组合和组合物的优选实施例中，该c-raf抑制剂是化合物a或其药学上可接受的盐。化合物a具有以下结构：本发明的c-raf激酶抑制剂，即化合物a，公开于wo2014/151616中，该文献通过引用以其全文并入本文，如实例1156。化合物a(compounda)也称为n-(3-(2-(2-羟基乙氧基)-6-吗啉并吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺。化合物a(compounda)(本文中也称为“化合物a(compounda)”)是braf(本文中也称为b-raf或b-raf)和c-raf(本文中也称为c-raf或craf)蛋白激酶的三磷酸腺苷(atp)竞争性抑制剂。贯穿本披露，化合物a也称为c-raf(或craf)抑制剂或c-raf/c-raf激酶抑制剂。在基于细胞的测定中，化合物a在如下细胞系中证明了抗增殖活性，所述细胞系含有活化mapk信号传导的多种突变。例如，化合物a抑制黑素瘤模型的增殖，包括对这些模型进行a-375(brafv600e)和a-375工程化以表达brafi/meki抗性等位基因、mel-juso(nrasq61l)、和ipc-298(nrasq61l)、以及非小细胞肺癌细胞系calu-6(krasq61k)(其ic50值范围为0.2μm-1.2μm)。在若干kras突变型模型(包括nsclc衍生的calu-6(krasq61k)和nci-h358(krasg12c)以及卵巢hey-a8(krasg12d、brafg464e)异种移植物)和nras突变型模型(包括sk-mel-30黑素瘤模型)中用化合物a体内治疗产生肿瘤消退。在所有情况下，如通过缺乏显著的体重减轻判断的，抗肿瘤作用是剂量依赖性的并且耐受性良好。总体而言，以良好耐受的剂量观察到的化合物a的体外和体内mapk-途径抑制和抗增殖活性表明，化合物a可能在肿瘤(该肿瘤在mapk途径中具有活化损伤)患者中具有抗肿瘤活性。基于化合物a的作用机制、关于c-raf在mapk途径调节中的重要性的临床前数据和已发表文献，化合物a，作为单一药剂或与结合程序性死亡1(pd-1)的抗体分子(例如人源化抗体分子，尤其如下所述的示例性抗体分子)组合，可用于治疗患具有mapk途径改变的晚期实体瘤的成年患者，并且具体地是kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)和nras突变型黑素瘤。化合物a或其药学上可接受的盐可口服给予。在一个实施例中，将化合物a或其药学上可接受的盐以约50mg-1200mg(例如每天)的剂量给予。可以将化合物a或其药学上可接受的盐以约50mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg或约1200mg的单位剂量给予。单位剂量的化合物a或其药学上可接受的盐可以每天一次、或每天两次、或每天三次、或每天四次给予，其中实际给予剂量和给予时间由多个标准确定，如患者年龄、体重和性别；待治疗的癌症的程度和严重性；以及治疗医师的判断。优选地，将单位剂量的化合物a每天给予一次。在另一个优选的实施例中，将单位剂量的化合物a每天给予两次。具体地，可以将化合物a以100mg(每天一次(qd))、200mg(每天一次)、300mg(每天一次)、400mg(每天一次)、800mg(每天一次)、或1200mg(每天一次(qd))的剂量给予。也可以将化合物a以200mg(每天两次)或400mg(每天两次)的剂量给予。本文引用的剂量可以适用于作为单一疗法(单一药剂)或作为联合疗法的一部分的化合物a的给予，例如，作为本文所述的本发明组合的一部分。当将本文中的剂量描述为“约”指定量时，实际剂量可以从所述量变化高达5％-7％：这种“约”的使用承认，给定剂型中的精确量可能由于各种原因而与预期量略有不同，但不会实质上影响所给予化合物的体内作用。单位剂量的c-raf抑制剂可以每天一次、或每天两次、或每天三次、或每天四次给予，其中实际给予剂量和给予时间由多个标准确定，如患者年龄、体重和性别；待治疗的癌症的程度和严重性；以及治疗医师的判断。由于mapk信号传导级联在免疫防御中具有重要作用，因此预期使用化合物a的raf靶向疗法可调节对肿瘤的免疫应答。因此，本发明还提供了一种药物，该药物包含化合物a和抗体(a)结合程序性死亡1(pd-1)的至少一种抗体分子(例如，人源化抗体分子)，尤其如下所述的示例性抗体分子，用于同时、分开或顺序给予。该组合可用于治疗增殖性疾病，特别是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，例如kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)、nras突变型黑素瘤、kras和/或braf突变型nsclc、kras和/或braf突变型卵巢癌以及对brafi/meki联合治疗具有抗性的braf突变型黑素瘤。例如，预期kras突变nsclc中靶向疗法和免疫疗法的组合可以导致与免疫疗法的长期益处相关的靶向疗法的早期和强大的抗肿瘤反应。还预期本发明的组合在nras突变型黑素瘤中可能是有益的(具有潜在的协同活性)，该nras突变型黑素瘤是对免疫疗法具有高度易感性的侵袭性疾病。pd-1的抗体分子在一个实施例中，该pd-1抑制剂是抗pd-1抗体分子，如题为“pd-1的抗体分子及其用途”的ussn14/604,415和wo/2015/112900中所述，两者均通过引用以其全文并入。在一个实施例中，该抗pd-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个抗原结合区(例如可变区或其抗原结合片段)，包括来自重链的三个互补决定区(cdr)和来自轻链的三个cdr，例如选自以下中任何一项的抗体：bap049-hum01、bap049-hum02、bap049-hum03、bap049-hum04、bap049-hum05、bap049-hum06、bap049-hum07、bap049-hum08、bap049-hum09、bap049-hum10、bap049-hum11、bap049-hum12、bap049-hum13、bap049-hum14、bap049-hum15、bap049-hum16、bap049-克隆-a、bap049-克隆-b、bap049-克隆-c、bap049-克隆-d、或bap049-克隆-e；或如表1所述，或由表1中核苷酸序列所编码的；或者与前述序列中任何一项基本相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。例如，该抗pd-1抗体分子可包括根据kabat等人所述的vhcdr1、或根据chothia等人所述的vh高变环1、或其组合，例如如表1中所示。在一个实施例中，vhcdr1的kabat和chothiacdr的组合包含氨基酸序列gytfttywmh(seqidno:224)，或与其基本相同的氨基酸序列(例如，具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代))。该抗pd-1抗体分子可进一步包括例如根据kabat等人所述的vhcdr2-3和根据kabat等人所述的vlcdr1-3，例如如表1中所示。因此，在一些实施例中，框架区基于根据kabat等人定义的cdr和根据chothia等人定义的高变环的组合来定义。例如，该抗pd-1抗体分子可包括基于根据chothia等人的vh高变环1定义的vhfr1和基于根据kabat等人的vhcdr1-2定义的vhfr2，例如如表1中所示。该抗pd-1抗体分子可进一步包括例如基于根据kabat等人的vhcdr2-3定义的vhfr3-4和基于根据kabat等人的vlcdr1-3定义的vlfr1-4。在本发明的组合中结合程序性死亡1(pd-1)的优选抗体分子(例如人源化抗体分子)是作为bap049-克隆-e的示例性抗体分子，并且优选的氨基酸序列描述于本文的表1中(vh：seqidno:38；vl：seqidno:70)。本发明进一步涉及药物组合，该药物组合包含(a)结合程序性死亡1(pd-1)的至少一种抗体分子(例如，人源化抗体分子)，尤其本文所述的示例性抗体分子，和(b)c-raf抑制剂(如化合物a)或其药学上可接受的盐，用于同时、分开或顺序给予，用于治疗增殖性疾病，特别是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，如kras突变型肿瘤，并且具体地是kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)，以及nras突变型肿瘤，并且具体地是nras突变型黑素瘤。在一个实施例中，本发明的特征在于治疗(例如，抑制、减轻或改善)受试者中的障碍，例如过度增殖性病症或障碍(例如，癌症)的方法。该方法包括与c-raf抑制剂组合以约300mg至400mg的剂量向该受试者给予抗pd-1抗体分子，例如本文所述的优选的抗pd-1抗体分子，每三周一次或每四周一次。例如，在某些实施例中，将该优选的抗pd-1抗体分子以约300mg的剂量给予，每三周一次。例如，在其他实施例中，将该优选的抗pd-1抗体分子以约400mg的剂量给予，每四周一次。在一些实施例中，该增殖性障碍是具有如本文所述的功能获得性kras突变的kras突变型肿瘤，并且具体地是kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)。在一些实施例中，该增殖性障碍是具有如本文所述的功能获得性nras突变的nras突变型肿瘤，并且具体地是nras突变型黑素瘤。在一些实施例中，该增殖性障碍是具有如本文所述的功能获得性kras突变的kras突变型肿瘤，并且具体地是kras突变型黑素瘤。在一些实施例中，该增殖性障碍是具有如本文所述的功能获得性nras突变的nras突变型肿瘤，并且具体地是nras突变型卵巢癌。在一些实施例中，该增殖性障碍是具有如本文所述的功能获得性kras突变的kras突变型肿瘤，并且具体地是kras突变型卵巢癌。在一些实施例中，将该抗pd-1抗体分子通过注射(例如，皮下或静脉内)以约200mg至500mg，例如约250mg至450mg、约300mg至400mg、约250mg至350mg、约350mg至450mg、或约300mg、或约400mg的剂量(例如平剂量)给予。该给药计划表(例如，平剂量给药计划表)可以从例如每周一次到每2、3、4、5或6周一次变化。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子(例如示例性抗体分子)以从约300mg至400mg的剂量给予，每三周一次或每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以约300mg的剂量给予，每三周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以约400mg的剂量给予，每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子(例如示例性抗体分子)以从约300mg的剂量给予，每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子(例如示例性抗体分子)以从约400mg的剂量给予，每三周一次。在另一个方面，本发明的特征在于降低过度增殖性(例如癌症)细胞的活性(例如生长、存活、或生存能力，或者全部)的方法。该方法包括使细胞与抗pd-1抗体分子(例如本文所述的抗pd-1抗体分子)接触。该方法可以例如作为治疗方案的一部分与c-raf受体酪氨酸激酶抑制剂组合在受试者中进行，例如剂量为约300mg至400mg的抗pd-1抗体分子，每三周一次或每四周一次。在某些实施例中，该剂量为约300mg的抗pd-1抗体分子，每三周一次。在其他实施例中，该剂量为约400mg的抗pd-1抗体分子，每四周一次。在另一个方面，本发明的特征在于包括抗pd-1抗体分子(例如如本文所述的抗pd-1抗体分子)的组合物(例如一种或多种组合物或剂型)。本文还描述了包括抗pd-1抗体分子(例如如本文所述的抗pd-1抗体分子)的配制品，例如剂量配制品和试剂盒，例如治疗试剂盒。在某些实施例中，该组合物或配制品包含300mg或400mg的抗pd-1抗体分子(例如，如本文所述的抗pd-1抗体分子)。在一些实施例中，将该组合物或配制品每三周给予或使用一次或者每四周给予或使用一次。将这种组合物与c-raf抑制剂或其药学上可接受的盐组合使用，用于同时、分开或顺序给予，通常用于治疗nsclc，并且特别是用于治疗展现至少一种kras突变(尤其功能获得性突变，如本文所述的那些)的nsclc患者。将这种组合物与c-raf抑制剂或其药学上可接受的盐组合使用，用于同时、分开或顺序给予，通常用于治疗黑素瘤，并且特别是用于治疗展现至少一种nras突变(尤其诸如本文所述的那些等的突变)的黑素瘤患者。在另一个方面，本发明提供了抗pd-1抗体，用于在治疗nsclc中使用，其中给予或制备该抗pd-1抗体用于与c-raf抑制剂分开、同时或顺序给予。还提供了c-raf抑制剂，用于在治疗nsclc中使用，其中给予或制备该c-raf抑制剂用于与抗pd-1抗体分开、同时或顺序给予。在另一个方面，本发明提供了抗pd-1抗体，用于在治疗黑素瘤中使用，其中给予或制备该抗pd-1抗体用于与c-raf抑制剂分开、同时或顺序给予。还提供了c-raf抑制剂，用于在治疗黑素瘤中使用，其中给予或制备该c-raf抑制剂用于与抗pd-1抗体分开、同时或顺序给予。典型地，该抗pd-1抗体被静脉给予，并且因此与c-raf抑制剂分开或顺序给予，优选口服给予。本文描述了c-raf抑制剂和抗pd-1抗体给予的合适方法、途径、剂量和频率。本文公开的组合可以以单一组合物一起给予或者以两种或更多种不同组合物(例如，如本文所述的组合物或剂型)分开给予。治疗剂的给予可以是任何顺序。第一药剂和另外的药剂(例如第二、第三药剂)可以通过相同的给药途径或通过不同的给药途径给予。本文所述的药物组合，特别是本发明的药物组合，可以是自由组合产品，即两种或更多种活性成分的组合，例如化合物a和本文所述的示例性抗体分子(抗体b)，其作为两种或更多种不同的剂型同时、分开或顺序给予。自由组合产品可以是：(a)一起包装在单一包装或试剂盒中的两种或更多种单独的药物产品，或(b)根据其标签分开包装的药物产品，仅用于与其他单独指定的药物一起使用，其中每种药物都需要达到预期的用途、指示或效果。本发明还提供了一种组合制剂，其包含(a)一个或多个剂量单位的c-raf抑制剂(化合物a)或其药学上可接受的盐，和(b)一个或多个剂量单位的如本文所述的抗pd-1抗体，以及至少一种药学上可接受的载体。在另外的实施例中，本发明特别涉及治疗具有一种或多种丝裂原活化蛋白激酶(mapk)途径改变的癌症的方法。在一个实施例中，本发明涉及本发明组合用于制备用于治疗增殖性疾病(特别是癌症)的药物用途。在一个实施例中，本发明的组合用于制备用于治疗癌症的药物。在另外的实施例中，本发明涉及化合物a作为单一药剂的用途以及本发明组合用于制备用于治疗以mapk途径中的功能获得突变为特征的癌症的药物的用途。在另外的实施例中，本发明涉及化合物a作为单一药剂的用途以及本发明组合用于制备用于治疗以mapk途径中的功能获得突变为特征的癌症的药物的用途。这些肿瘤在下面进一步描述。在另外的实施例中，本发明涉及化合物a作为单一药剂用于在具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤(如kras突变型肿瘤、nras突变型肿瘤和某些braf突变型肿瘤)的治疗中使用。在另外的实施例中，本发明涉及本发明的药物组合，用于在具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤(如kras突变型肿瘤和nras突变型肿瘤)的治疗中使用。这些肿瘤在下面进一步描述。具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤mapk改变通常被认为是可能在癌发生的早期阶段获得的强驱动突变，并且不随时间变化。本发明为患具有一种或多种mapk改变的实体瘤的患者提供了有用的治疗选择。这些改变的实例列于下表中。可以通过使用本领域容易获得的商业试剂盒和方法来确定此类患者肿瘤的突变状态。表：mapk途径的基因。因此，本发明为患有实体瘤(具有如上表中所述的一种或多种mapk改变)的患者提供了治疗选择。kras突变型肿瘤术语“kras突变型”肿瘤或癌症包括展现突变的kras蛋白(特别是功能获得性kras突变)的任何肿瘤；尤其任何g12x、g13x、q61x或a146xkras突变型，其中x是除在该位置天然存在的氨基酸之外的任何氨基酸。例如，g12v突变意味着甘氨酸在密码子12处被缬氨酸取代。肿瘤中的kras突变的实例包括q61k、g12v、g12c和a146t。因此，kras突变型nsclc包括q61k、g12v、g12c和a146tnsclc。癌症可能处于早期、中期或晚期阶段。非小细胞肺癌(nsclc)nsclc是最常见的肺癌类型(大致85％)，其中近似70％的患者在诊断时呈现出疾病晚期(iiib期或iv期)。最近，pd-1/pd-l1相互作用的两种抑制剂已被批准用于nsclc(派姆单抗(pembrolizumab)和纳武单抗(nivolumab))。然而，至今可获得的结果表明许多用单一药剂pd-1抑制剂治疗的患者不能从治疗中充分受益。kras突变型nsclc仍然是癌症治疗的难以捉摸的靶标。约30％的nsclc含有活化kras突变，并且这些突变与对egfrtki的抗性相关(paow,wangty,rielygj等人(2005)krasmutationsandprimaryresistanceoflungadenocarcinomastogefitiniborerlotinib.[kras突变和肺腺癌对吉非替尼或厄洛替尼的原发性耐药]plosmed[公共科学图书馆医学]；2(1):e17)。已证明直接抑制kras是具有挑战性的。已经在高达3％的nsclc中观察到braf突变，并且还已经将其描述为egfr突变阳性nsclc中的抗性机制(paikpk,arcilame,faram等人(2011)clinicalcharacteristicsofpatientswithlungadenocarcinomasharboringbrafmutations[具有braf突变的肺腺癌患者的临床特征].jclinoncol[临床肿瘤学杂志].5月20日；29(15):2046-51)。因此，本发明提供化合物a，或其药学上可接受的盐，用于在kras突变型nsclc的治疗中和/或braf突变型nsclc的治疗中使用。本发明还提供了化合物a，或其药学可接受的盐，用于在kras和braf突变型nsclc(即kras和braf均突变的nsclc)的治疗中使用。本发明还提供了本文所述的药物组合，例如包含如下的药物组合：(a)化合物a或其药学上可接受的盐，和(b)能够结合人类程序性死亡-1(pd-1)的分离的抗体分子，该分离的抗体分子包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，该重链可变区(vh)包含bap049-克隆-b或bap049-克隆-e的如表1中所述的hcdr1、hcdr2和hcdr3氨基酸序列，该轻链可变区(vl)包含bap049-克隆-b或bap049-克隆-e的如下表1中所述的lcdr1、lcdr2和lcdr3氨基酸序列，用于治疗kras突变型nsclc。卵巢癌卵巢癌是最致命的妇科癌症，并且是由具有可变预后的不同组织学和分子亚型的集合组成的异质性疾病。上皮亚型包含90％的卵巢癌。上皮性卵巢癌中最常见的组织学亚型是浆液性癌，占上皮性卵巢癌的60％至70％。两层分级系统将浆液性癌分为低级浆液性(lgs)和高级浆液性(hgs)，其具有不同的分子特性、免疫组织化学曲线、流行病学特征和临床表现。lgs癌占浆液性上皮性卵巢癌的10％，并且具有kras(高达40％)或braf突变(2％-6％)的卵巢癌主要是lgs癌。lgs癌不仅对一线药剂具有化学耐药性，而且在复发性疾病情况下也是如此。预期化合物a可用于治疗患kras和/或braf突变型卵巢癌的患者。因此，本发明提供化合物a，或其药学上可接受的盐，用于在kras突变型卵巢癌的治疗中和/或braf突变型卵巢癌的治疗中使用。本发明还提供了化合物a，或其药学可接受的盐，用于在kras和braf突变型卵巢癌(即kras和braf均突变的卵巢癌)的治疗中使用。nras突变型肿瘤术语“nras突变型”肿瘤或癌症包括展现突变的nras蛋白(特别是功能获得性nras突变)的任何肿瘤；尤其任何g12x、g13x或q61xnras突变型，其中x是除在该位置天然存在的氨基酸之外的任何氨基酸。例如，g12v突变意味着甘氨酸在密码子12处被缬氨酸取代。肿瘤中nras突变的实例包括g12c、g12r、g12s、g12a、g12d、g12v、g13r、g13c、g13a、g13d、g13v、q61e、q61k、q61l、q61p、q61r、q61h。因此，nras突变型黑素瘤包含g12c、g12r、g12s、g12a、g12d、g12v、g13r、g13c、g13a、g13d、g13v、q61e、q61k、q61l、q61p、q61r、q61h黑素瘤。癌症可能处于早期、中期或晚期阶段。黑素瘤mapk途径在黑素瘤的发展和进展中起主要作用。braf突变发生在40％-60％的黑素瘤患者中并且nras突变发生在15％-20％的黑素瘤患者中。据报道，brafv600e和brafv600k突变型患者占所有brafv600突变型转移性黑素瘤患者的93％-98％。这些突变组成性地活化mapk途径中的braf和下游信号转导，发出癌细胞增殖和存活的信号。目前，brafv600突变型黑素瘤患者的现有靶向治疗选择包含包括brafi(例如达拉非尼)和meki(曲美替尼)作为单一药剂或将其组合的疗法。通过靶向抑制braf或其下游效应子mek阻断mapk信号传导与改善的pfs(无进展存活)和os(总存活)相关；然而，通常在治疗几个月后患者会经历疾病进展。尽管存在多种抗性途径，但主要机制导致在抑制剂存在下mapk信号传导途径的再活化。因此，重要的是在brafi和/或meki治疗中复发后确定黑素瘤患者的适当靶向疗法。发现在具有brafv600e突变的黑素瘤中有效的brafi(包括维莫非尼、达拉非尼和依那可尼(encorafenib))在ras突变型癌症中无效。密码子12、13和61中的nras错义突变出现在13％-25％的所有黑素瘤中，并且通常与braf和其他驱动突变相互排斥。这些肿瘤表现出侵袭性行为，在初次诊断时肝脏和脑转移率很高，并且因此预后不良。对护理化学疗法标准的反应非常有限，并且到目前为止，还没有针对nras突变黑素瘤患者专门批准的靶向疗法，尽管3期研究表明mek抑制剂贝美替尼(binimetinib)与用达卡巴嗪的护理化学疗法标准相比有一些益处，例如总体应答率提高了15％(对比7％)(dummerr,schadendorfd,asciertopa等人(2017)binimetinibversusdacarbazineinpatientswithadvancednras-mutantmelanoma(nemo):amulticentre,open-label,randomised,phase3trial.[晚期nras突变型黑素瘤(nemo)患者中贝美替尼对比达卡巴嗪：一项多中心、开放标签、随机3期试验]lancetoncol[柳叶刀肿瘤学]2017；18:435-45)。402名患者以2:1的方式随机分配。已经观察到中值pfs为2.8(95％ci：2.8-3.6)对比1.5(1.5-1.7)，hr0.62(0.47-0.80)，支持贝美替尼。然而，怀疑与研究药物相关的不良事件导致的停药率很高(20％对比5％)，并且pfs中的益处并没有转化为总体存活率的改善(11.0(95％ci：8.9-13.6)个月对比10.1(7.0-16.5)个月)。因此，仍然需要针对患有nras突变黑素瘤的患者的治疗选择。因此，本发明提供化合物a或其药学上可接受的盐，用于治疗brafi/meki(例如，达拉非尼和曲美替尼，作为单一药剂或进行组合；例如贝美替尼)疗法失败后复发的和/或难治性brafv600突变黑素瘤。本发明还提供了化合物a，或其药学上可接受的盐，用于在nras突变黑素瘤的治疗中使用。本发明还提供了本文所述的药物组合，例如包含如下的药物组合：(a)化合物a或其药学上可接受的盐，和(b)能够结合人类程序性死亡-1(pd-1)的分离的抗体分子，该分离的抗体分子包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，该重链可变区(vh)包含bap049-克隆-b或bap049-克隆-e的如表1中所述的hcdr1、hcdr2和hcdr3氨基酸序列，该轻链可变区(vl)包含bap049-克隆-b或bap049-克隆-e的如下表1中所述的lcdr1、lcdr2和lcdr3氨基酸序列，用于治疗nras突变黑素瘤。本文所述的药物组合在已经接受过先前的免疫疗法或初次接受免疫疗法的患有nras突变黑素瘤的患者中可能是有益的。联合疗法的用途本文公开的组合可以导致以下中的一项或多项：抗原呈递的增加、效应细胞功能(例如t细胞增殖、ifn-γ分泌或细胞溶解功能中的一种或多种)的增加、调节性t细胞功能的抑制、对多种细胞类型(如调节性t细胞、效应t细胞和nk细胞)活性的影响、肿瘤浸润淋巴细胞的增加、t细胞受体介导的增殖的增加和癌细胞的免疫逃避的减少。在一个实施例中，组合中pd-1抑制剂的使用抑制、降低或中和pd-1的一种或多种活性，导致免疫检查点的阻断或减少。因此，这类组合可用于治疗或预防希望增强受试者免疫应答的障碍。因此，在另一方面，提供了调节受试者中的免疫应答的方法。该方法包括向该受试者给予本文公开的组合(例如包含治疗有效量的抗pd-1抗体分子和治疗有效量的化合物a或其药学上可接受的盐的组合)，使得该受试者中的免疫反应受到调节。在一个实施例中，该抗体分子增强、刺激或增加受试者中的免疫应答。受试者可以是哺乳动物，例如灵长类动物，优选更高等灵长类动物，例如人(例如患有或有风险患有本文所述障碍的患者)。在一个实施例中，该受试者需要增强免疫应答。在一个实施例中，该受试者患有或有风险患有本文所述障碍，例如，如本文所述的癌症或传染性障碍。在某些实施例中，该受试者是免疫受损的或处于免疫受损的风险中。例如，该受试者正在经历或已经历化学治疗和/或放射疗法。可替代地，或以组合形式，该受试者由于感染而免疫受损或处于免疫受损的风险中。在一个方面，提供了一种治疗(例如减少、抑制或延迟进展中的一种或多种)受试者中增殖性疾病的方法，该增殖性疾病是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，如kras突变型肿瘤，并且具体地是kras突变型nsclc(非小细胞肺癌)。在另一个方面，提供了一种治疗(例如减少、抑制或延迟进展中的一种或多种)受试者中增殖性疾病的方法，该增殖性疾病是具有丝裂原活化蛋白激酶(mapk)改变的实体瘤，如nras突变型肿瘤，并且具体地是nras突变型黑素瘤。该方法包括向该受试者给予本文公开的组合(例如包含治疗有效量的抗pd-1抗体分子和治疗有效量的化合物a或其药学上可接受的盐的组合)。本文所述的组合可以以全身方式(例如口服、肠胃外、皮下、静脉内、直肠、肌肉内、腹膜内、鼻内、透皮、或通过吸入或腔内装置)、局部方式或通过应用于粘膜(如鼻子、喉咙和支气管)向该受试者给予。本文公开的治疗剂的剂量和治疗方案可由技术人员确定。在某些实施例中，将该抗pd-1抗体分子通过注射(例如皮下或静脉内)以约1mg/kg至30mg/kg，例如约5mg/kg至25mg/kg、约10mg/kg至20mg/kg、约1至5mg/kg、或约3mg/kg的剂量给予。该给药计划表可以从例如每周一次至每2、3、或4周一次变化。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约10mg/kg至20mg/kg的剂量给予，每两周一次。在一些实施例中，将该抗pd-1抗体分子通过注射(例如，皮下或静脉内)以约200mg至500mg，例如约250mg至450mg、约300mg至400mg、约250mg至350mg、约350mg至450mg、或约300mg、或约400mg的剂量(例如平剂量)给予。该给药计划表(例如，平剂量给药计划表)可以从例如每周一次到每2、3、4、5或6周一次变化。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约300mg至400mg的剂量给予，每三周一次或每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约300mg的剂量给予，每三周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约400mg的剂量给予，每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约300mg的剂量给予，每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约400mg的剂量给予，每三周一次。化合物a的总日剂量可以以单一剂量(即每天一次)或每日两次给予。例如，可以将化合物a以1200mg的剂量给予，每天一次，或者以400mg的剂量给予，每天两次。可以将作为化合物a的c-raf抑制剂以约100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg的剂量给予，每天一次，并且将该优选的抗pd-1抗体分子以约400mg的剂量给予，每三周一次。可以将作为化合物a的c-raf抑制剂以以约100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg的剂量给予，每天一次，并且将该抗pd-1抗体分子以约400mg的剂量给予，每四周一次。具体地，化合物a可以以100mg、200mg、400mg、800mg或1200mg的剂量给予，每天一次(qd)；或者以200mg的剂量给予，每天两次；或者以400mg的剂量给予，每天两次。本文引用的剂量可以适用于作为单一疗法或作为联合疗法的一部分的化合物a的给予，例如，作为本文所述的本发明组合的一部分。在优选的实施例中，可以将该示例性抗pd-1分子以400mg(每四周一次)剂量给予并且可以将化合物a以100mg、200mg、400mg、800mg或1200mg的总剂量给予，每天一次(qd)；或者以200mg的剂量给予，每天两次；或者以400mg的剂量给予，每天两次。另外的联合疗法本文描述的方法和组合可以与其他药剂或治疗方式组合使用。在一个实施例中，本文所述的方法包括以有效治疗或预防障碍的量向该受试者给予包含如本文所述的抗pd-1抗体分子的组合，其与药剂或治疗程序或方式组合。该抗pd-1抗体分子和药剂或治疗程序或方式可以以任何顺序同时或顺序给予。可以使用抗pd-1抗体分子和其他治疗剂、程序或方式(例如，如本文所述)的任何组合和顺序。该抗体分子和/或其他治疗剂、程序或方式可以在活性障碍期间，或在缓解期或活性较低的疾病期间给予。该抗体分子可以在其他治疗之前、与治疗同时、治疗后或在障碍缓解期给予。在某些实施例中，将本文所述的方法和组合物与其他抗体分子、化学疗法、其他抗癌疗法(例如靶向抗癌疗法、基因疗法、病毒疗法、rna疗法骨髓移植、纳米疗法或溶瘤细胞药物)、细胞毒性剂、基于免疫的疗法(例如细胞因子或基于细胞的免疫疗法)、外科手术(例如乳房肿瘤切除术或乳房切除术)或放射程序、或前述中任何的组合中的一种或多种组合给予。另外的疗法可以呈辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施例中，另外的疗法是酶抑制剂(例如，小分子酶抑制剂)或转移抑制剂。可以组合给予的示例性细胞毒性剂包括抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、烷化剂、蒽环类药物、长春花生物碱、嵌入剂、能够干扰信号转导途径的试剂、促进细胞凋亡的试剂、蛋白酶体抑制剂和辐射(例如局部或全身辐射(例如γ辐射))。在其他实施例中，另外的疗法是手术或放射，或其组合。在其他实施例中，另外的疗法是靶向pi3k/akt/mtor途径、hsp90抑制剂或微管蛋白抑制剂中的一种或多种的疗法。可替代地，或与前述组合组合，本文所述的方法和组合物可与以下中的一种或多种组合给予：免疫调节剂(例如共刺激分子的活化剂或抑制分子的抑制剂，例如免疫检查点分子)；疫苗，例如治疗性癌症疫苗；或其他形式的细胞免疫疗法。在一个实施例中，将本文公开的组合，例如包含抗pd-1抗体分子的组合，与化学疗法组合使用以治疗肺癌，例如非小细胞肺癌。在一个实施例中，将抗pd-1抗体分子与标准肺(例如nsclc)化学疗法(例如铂双重疗法(platinumdoublettherapy))一起使用，以治疗肺癌。癌症可能处于早期、中期或晚期阶段。在一个实施例中，将本文公开的组合(例如包含抗pd-1抗体分子的组合)与化学疗法组合使用以治疗皮肤癌，例如黑素瘤。在一个实施例中，将抗pd-1抗体分子与标准皮肤(例如黑素瘤)化学疗法(例如铂双重疗法)一起使用，以治疗皮肤癌。癌症可能处于早期、中期或晚期阶段。可以使用抗pd-1抗体分子和其他治疗剂、程序或方式(例如，如本文所述)的任何组合和顺序。该抗体分子和/或其他治疗剂、程序或方式可以在活性障碍期间，或在缓解期或活性较低的疾病期间给予。该抗体分子可以在其他治疗之前、与治疗同时、治疗后或在障碍缓解期给予。本文至少部分地公开了以高亲和力和特异性结合程序性死亡1(pd-1)的抗体分子(例如人源化抗体分子)。还提供了编码抗体分子的核酸分子、表达载体、宿主细胞和制备这些抗体分子的方法。还提供了包含这些抗体分子的药物组合物和剂量配制品。本文公开的抗pd-1抗体分子可以(单独或与其他药剂或治疗方式组合)用于治疗、预防和/或诊断障碍，如癌症(例如实体和软组织肿瘤)。因此，本文公开了用于检测pd-1的组合物和方法，以及使用该抗pd-1抗体分子治疗包括癌症在内的各种障碍的方法。在某些实施例中，该抗pd-1抗体分子以平坦或固定剂量给予或使用。另外的术语在下面和整个申请中定义。如本文所用，冠词“一个/种(a和an)”是指一个/种或多于一个/种(例如，至少一个/种)该冠词的语法宾语。除非上下文另有明确说明，否则术语“或”在本文中用于表示术语“和/或”并且可与术语“和/或”互换使用。“约”和“近似”通常表示在给定测量的性质或精度的情况下测量的量的可接受的误差度。示例性误差度在给定值或值范围的20％内，典型地在10％内，并且更典型地，在5％内。“组合”或“与......组合”并不旨在暗示必须同时给予这些治疗剂(therapyagent或therapeuticagent)和/或配制这些治疗剂用于一起递送，尽管这些递送方法在本文所述的范围内。组合中的治疗剂可以与一种或多种其他另外的疗法或治疗剂同时、在其之前或之后给予。治疗剂或治疗方案可以以任何顺序给予。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和/或计划表给予。还应理解，该组合中使用的另外的治疗剂可以以单一组合物一起给予或以不同组合物分开给予。通常，预期组合中使用的其他治疗剂的以不超过它们单独使用时的水平使用。在一些实施例中，组合中使用的水平将低于单独使用的水平。在实施例中，另外的治疗剂以治疗剂量或低于治疗剂量给予。在某些实施例中，当第二治疗剂与第一治疗剂(例如抗pd-1抗体)组合给予时，实现抑制(例如，生长抑制)所需的第二治疗剂的浓度比单独给予第二治疗剂时低。在某些实施例中，当第一治疗剂与第二治疗剂组合给予时，实现抑制(例如，生长抑制)所需的第一治疗剂的浓度比单独给予第一治疗剂时低。在某些实施例中，在联合疗法中，实现抑制(例如，生长抑制)所需的第二治疗剂的浓度比作为单一疗法的第二治疗剂的治疗剂量低，例如低10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、或80％-90％。在某些实施例中，在联合疗法中，实现抑制(例如，生长抑制)所需的第一治疗剂的浓度比作为单一疗法的第一治疗剂的治疗剂量低，例如低10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、或80％-90％。术语“抑制”、“抑制剂”或“拮抗剂”包括给定分子(例如免疫检查点抑制剂)的某些参数(例如活性)的降低。例如，该术语包括至少5％、10％、20％、30％、40％或更多的活性(例如pd-1或pd-l1活性)的抑制。因此，抑制不必是100％。术语“活化”、“活化剂”或“激动剂”包括给定分子(例如共刺激分子)的某些参数(例如活性)的增加。例如，该术语包括至少5％、10％、25％、50％、75％或更多的活性(例如共刺激活性)的增加。术语“癌症”是指以异常细胞的快速和不受控制的生长为特征的疾病。癌细胞可以局部或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其他部位。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括恶化前以及恶性癌症和肿瘤。如本文所用，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指由给予一种或多种疗法导致的障碍(例如增殖性障碍)的进展、严重性和/或持续时间的减少或缓解，或者障碍的一种或多种症状(优选地，一种或多种可辨别的症状)的缓解。在具体的实施例中，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指改善增殖性障碍的至少一种可测量的物理参数，如肿瘤的生长，这不一定是患者可辨别的。在其他实施例中，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指通过例如稳定可辨别的症状来物理地，或通过例如稳定物理参数来生理地，或通过两者，抑制增殖性障碍的进展。在其他实施例中，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指减少或稳定肿瘤大小或癌细胞计数。如本文所用，术语“分离的”是指从其原始或天然环境(例如其天然存在的天然环境)中移除的材料。例如，不分离存在于活动物中的天然存在的多核苷酸或多肽，而是分离通过人为干预从天然系统中的一些或所有共存材料中分出的相同多核苷酸或多肽。此类多核苷酸可以是载体的一部分和/或此类多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，并且仍然是分离的，因为这种载体或组合物不是其天然存在的环境的一部分。下面进一步详细描述了本发明的各个方面。另外的定义在整个申请书中陈述。抗体分子在一个实施例中，该抗体分子结合哺乳动物(例如人)pd-1。例如，该抗体分子特异性结合pd-1上的表位，例如线性或构象表位(例如如本文所述的表位)。如本文所用，术语“抗体分子”是指包含至少一种免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”包括，例如，单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白fc区的全长抗体)。在实施例中，抗体分子包含全长抗体或全长免疫球蛋白链。在实施例中，抗体分子包含全长抗体或全长免疫球蛋白链的抗原结合或功能性片段。在实施例中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性并且所述多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在实施例中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不超过两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在实施例中，抗体分子是单特异性抗体分子并结合单一表位。例如，具有多个免疫球蛋白可变结构域序列的单特异性抗体分子，每个免疫球蛋白可变结构域序列结合相同的表位。在实施例中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性并且所述多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在实施例中，第一和第二表位在相同的抗原(例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施例中，第一和第二表位重叠。在实施例中，第一和第二表位不重叠。在实施例中，第一和第二表位在不同的抗原(例如不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施例中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在实施例中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。在实施例中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不超过两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在实施例中，第一和第二表位在相同的抗原(例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施例中，第一和第二表位重叠。在实施例中，第一和第二表位不重叠。在实施例中，第一和第二表位在不同的抗原(例如不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体和对第二表位具有结合特异性的半抗体。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的scfv或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scfv或其片段。在实施例中，该第一表位位于pd-1上，并且该第二表位位于tim-3、lag-3、ceacam(例如ceacam-1和/或ceacam-5)、pd-l1或pd-l2上。在实施例中，抗体分子包含双抗体和单链分子，以及抗体(例如fab、f(ab')2和fv)的抗原结合片段。例如，抗体分子可包括重(h)链可变结构域序列(本文中缩写为vh)和轻(l)链可变结构域序列(本文缩写为vl)。在实施例中，抗体分子包含重链和轻链(在本文中称为半抗体)或由其组成。在另一个实例中，抗体分子包括两个重(h)链可变结构域序列和两个轻(l)链可变结构域序列，从而形成两个抗原结合位点，如fab、fab'、f(ab')2、fc、fd、fd'、fv、单链抗体(例如scfv)、单可变结构域抗体、双抗体(dab)(二价和双特异性的)和嵌合(例如人源化)抗体，这可以通过修饰完整抗体或使用重组dna技术从头合成的抗体产生。这些功能性抗体片段保留了与其各自的抗原或受体选择性结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何类别的抗体，包括但不限于igg、iga、igm、igd和ige，以及来自任何亚类的抗体(例如igg1、igg2、igg3和igg4)。抗体分子的制备可以是单克隆或多克隆的。抗体分子也可以是人、人源化、cdr移植或体外产生的抗体。抗体可具有选自例如igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。抗体还可以具有选自例如κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白”(ig)与本文的术语“抗体”可互换使用。抗体分子的抗原结合片段的实例包括：(i)fab片段，其是由vl、vh、cl和ch1结构域组成的单价片段；(ii)f(ab')2片段，其是包含两个在绞链区由二硫桥键连接的fab片段的二价片段；(iii)由vh和ch1结构域组成的fd片段；(iv)由抗体的单臂的vl和vh结构域组成的fv片段；(v)由vh结构域组成的双抗体(dab)片段；(vi)骆驼科(camelid)或骆驼化(camelized)可变结构域；(vii)单链fv(scfv)(参见例如bird等人(1988)science[科学]242:423-426；和huston等人(1988)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]85:5879-5883)；(viii)单一结构域抗体。这些抗体片段是使用本领域的技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式针对效用来筛选这些片段。术语“抗体”包括完整分子及其功能片段。可以改变(例如突变)抗体的恒定区以修饰该抗体的性质(例如，以增加或减少以下中的一种或多种：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能)。vh和vl区可以细分为被称为“互补决定区”(cdr)的高变区，其间插入被称为“框架区”(fr或fw)的更保守的区域。框架区和cdr的程度已经通过许多方法精确定义(参见kabat,e.a.等人(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest[免疫兴趣蛋白质序列],第五版,美国卫生与公众服务部(u.s.departmentofhealthandhumanservices),nih公开号91-3242；chothia,c.等人(1987)j.mol.biol.[具有免疫学重要性的蛋白序列]196:901-917；和由oxfordmolecular的abm抗体建模软件使用的abm定义)。通常参见例如proteinsequenceandstructureanalysisofantibodyvariabledomains.[抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析]在antibodyengineeringlabmanual[抗体工程化实验室手册]中(编辑：duebel,s.和kontermann,r.,施普林格出版社(springer-verlag),海德尔堡)。如本文所用的术语“互补决定区”和“cdr”是指赋予抗原特异性和结合亲和力的抗体可变区内的氨基酸序列。通常，每个重链可变区中存在三个cdr(hcdr1、hcdr2、hcdr3)，并且每个轻链可变区中存在三个cdr(lcdr1、lcdr2、lcdr3)。给定cdr的精确氨基酸序列边界可以使用许多众所周知的方案中的任何一种来确定，这些方案包括由以下文献描述的那些：kabat等人(1991),"sequencesofproteinsofimmunologicalinterest"[具有免疫学重要性的蛋白序列]，第5版，美国国立卫生研究院，公共卫生事业部，马里兰州贝塞斯达市(“kabat”编号方案)；al-lazikani等人,(1997)jmb273,927-948(“chothia”编号方案)。如本文所用，根据“chothia”编号方案定义的cdr有时也称为“高变环”。例如，根据kabat，将重链可变结构域(vh)中的cdr氨基酸残基编号为31-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)和95-102(hcdr3)；并将轻链可变结构域(vl)中的cdr氨基酸残基编号为24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)。根据chothia，将vh中的cdr氨基酸编号为26-32(hcdr1)、52-56(hcdr2)和95-102(hcdr3)；并将vl中的氨基酸残基编号为26-32(lcdr1)、50-52(lcdr2)和91-96(lcdr3)。通过结合kabat和chothia的cdr定义，cdr由人vh中的氨基酸残基26-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)和95-102(hcdr3)和人vl中的氨基酸残基24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)组成。通常，除非特别指出，否则该抗pd-1抗体分子可包括例如如表1中所述的一种或多种kabatcdr和/或chothia高变环的任何组合。在一个实施例中，以下定义用于表1中描述的抗pd-1抗体分子：hcdr1，根据kabat和chothia二人的组合cdr定义以及hccdr2-3和lccdr1-3，根据kabat的cdr定义。根据所有定义，每个vh和vl典型地包括三个cdr和四个fr，从氨基末端到羧基末端按照以下顺序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”是指可以形成免疫球蛋白可变结构域的结构的氨基酸序列。例如，该序列可包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可以包括或可以不包括一个、两个或更多个n-或c-末端氨基酸，或者可以包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。术语“抗原结合位点”是指抗体分子的一部分，其包含形成与pd-1多肽或其表位结合的界面的决定簇。关于蛋白质(或蛋白质模拟物)，抗原结合位点典型地包括形成与pd-1多肽结合的界面的一个或多个环(具有至少四个氨基酸或氨基酸模拟物)。典型地，抗体分子的抗原结合位点包括至少一个或两个cdr和/或高变环，或更典型地至少三个、四个、五个或六个cdr和/或高变环。如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单分子组合物的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物展现出对具体表位的单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或不使用杂交瘤技术的方法(例如重组方法)制备。人源化或cdr-移植的抗体的至少一个或两个但通常所有三个(重和/或轻免疫球蛋白链的)接受者cdr被供体cdr替换。抗体可以被至少一部分非人cdr替换，或者仅一些cdr可以被非人cdr替换。仅需要替换人源化抗体与pd-1结合所需的cdr的数量。优选地，供体是啮齿动物抗体，例如大鼠或小鼠抗体，并且接受者将是人框架或人共有框架。典型地，提供cdr的非人类免疫球蛋白称为“供体”，并且提供框架的免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施例中，供体免疫球蛋白是非人类(例如啮齿动物)。受体框架是天然存在的(例如人类)框架或共有框架，或与其具有约85％或更高、优选90％、95％、99％或更高同一性的序列。示例性pd-1抑制剂pd-1是cd28/ctla-4家族成员，其在例如活化的cd4+和cd8+t细胞、tregs、和b细胞上表达。它负调节效应t细胞信号传导和功能。pd-1在肿瘤浸润性t细胞上被诱导，并且可导致功能性衰竭或功能障碍(keir等人(2008)annu.rev.immunol.[免疫学年评]26:677-704；pardoll等人(2012)natrevcancer[癌症自然评论]12(4):252-64)。pd-1在与其两种配体(程序性死亡-配体1(pd-l1)或程序性死亡-配体2(pd-l2))之一结合时递送共抑制信号。pd-l1在许多细胞类型(包括t细胞、天然杀伤(nk)细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc)、b细胞、上皮细胞、血管内皮细胞)以及许多类型的肿瘤上表达。pd-l1在鼠和人肿瘤上的高表达与多种癌症中的不良临床结果相关(keir等人(2008)annu.rev.immunol.[免疫学年评]26:677-704；pardoll等人(2012)natrevcancer[癌症自然评论]12(4):252-64)。pd-l2在树突细胞、巨噬细胞和一些肿瘤上表达。已经针对癌症免疫疗法在临床前和临床上验证了阻断pd-1途径。临床前和临床研究都证明，抗pd-1阻断可以恢复效应t细胞的活性，并产生强大的抗肿瘤反应。例如，阻断pd-1途径可以恢复衰竭/功能失调的效应t细胞功能(例如，增殖、ifn-γ分泌或细胞溶解功能)和/或抑制treg细胞功能(keir等人(2008)annu.rev.immunol.[免疫学年评]26:677-704；pardoll等人(2012)natrevcancer[癌症自然评论]12(4):252-64)。pd-1途径的阻断可以用抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或pd-1、pd-l1和/或pd-l2的寡肽实现。如本文所用，术语“程序性死亡1”或“pd-1”包括同种型，哺乳动物例如人pd-1，人pd-1的物种同源物，和包含至少一个与pd-1的共同表位的类似物。pd-1的氨基酸序列(例如人pd-1)是本领域已知的，例如shinoharat等人(1994)genomics[基因组学]23(3):704-6；fingerlr等人gene[基因](1997)197(1-2):177-87。本文所述的抗pd-1抗体分子可以根据本文描述的方法单独使用或与本文所述的一种或多种另外的药剂组合使用。在某些实施例中，本文所述的组合包括pd-1抑制剂，例如，如本文所述的抗pd-1抗体分子(例如，人源化抗体分子)。在一个实施例中，该抗pd-1抗体分子包括：(a)重链可变区(vh)，该重链可变区(vh)包含seqidno:4的hcdr1氨基酸序列、seqidno:5的hcdr2氨基酸序列和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及轻链可变区(vl)，该轻链可变区(vl)包含seqidno:13的lcdr1氨基酸序列、seqidno:14的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:33的lcdr3氨基酸序列；(b)vh，该vh包含选自seqidno:1的hcdr1氨基酸序列、seqidno:2的hcdr2氨基酸序列、和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及vl，该vl包含seqidno:10的lcdr1氨基酸序列、seqidno:11的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:32的lcdr3氨基酸序列；(c)vh，该vh包含seqidno:4的hcdr1氨基酸序列、seqidno:5的hcdr2氨基酸序列和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及vl，该vl包含seqidno:13的lcdr1氨基酸序列、seqidno:14的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:33的lcdr3氨基酸序列；或(d)vh，该vh包含seqidno:1的hcdr1氨基酸序列、seqidno:2的hcdr2氨基酸序列、和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及vl，该vl包含seqidno:10的lcdr1氨基酸序列、seqidno:11的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:32的lcdr3氨基酸序列。2.如权利要求1所述的药物组合，其中该抗pd-1抗体分子包含：(a)重链可变区(vh)，该重链可变区(vh)包含seqidno:4的hcdr1氨基酸序列、seqidno:5的hcdr2氨基酸序列和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及轻链可变区(vl)，该轻链可变区(vl)包含seqidno:13的lcdr1氨基酸序列、seqidno:14的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:33的lcdr3氨基酸序列；(b)vh，该vh包含seqidno:1的hcdr1氨基酸序列、seqidno:2的hcdr2氨基酸序列、和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及vl，该vl包含seqidno:10的lcdr1氨基酸序列、seqidno:11的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:32的lcdr3氨基酸序列；(c)vh，该vh包含seqidno:224的hcdr1氨基酸序列、seqidno:5的hcdr2氨基酸序列和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及vl，该vl包含seqidno:13的lcdr1氨基酸序列、seqidno:14的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:33的lcdr3氨基酸序列；或(d)vh，该vh包含seqidno:224的hcdr1氨基酸序列、seqidno:2的hcdr2氨基酸序列、和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及vl，该vl包含seqidno:10的lcdr1氨基酸序列、seqidno:11的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:32的lcdr3氨基酸序列。在某些实施例中，该抗pd-1抗体分子包含：(i)重链可变区(vh)，该重链可变区(vh)包含选自seqidno:1、seqidno:4或seqidno:224的hcdr1氨基酸序列；seqidno:2的hcdr2氨基酸序列；和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及(ii)轻链可变区(vl)，该轻链可变区(vl)包含seqidno:10的lcdr1氨基酸序列、seqidno:11的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:32的lcdr3氨基酸序列。在其他实施例中，该抗pd-1抗体分子包含：(i)重链可变区(vh)，该重链可变区(vh)包含选自seqidno:1、seqidno:4或seqidno:224的hcdr1氨基酸序列；seqidno:5的hcdr2氨基酸序列和seqidno:3的hcdr3氨基酸序列；以及(ii)轻链可变区(vl)，该轻链可变区(vl)包含seqidno:13的lcdr1氨基酸序列、seqidno:14的lcdr2氨基酸序列、和seqidno:33的lcdr3氨基酸序列。在前述抗体分子的实施例中，该hcdr1包含seqidno:1的氨基酸序列。在其他实施例中，该hcdr1包含seqidno:4的氨基酸序列。在又其他实施例中，该hcdr1包含seqidno:224的氨基酸序列。在实施例中，前述抗体分子具有包含至少一个框架(fw)区的重链可变区，该框架区包含seqidno:147、151、153、157、160、162、166、或169中任何一项的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的氨基酸序列，或者与seqidno:147、151、153、157、160、162、166、或169中任何一项的氨基酸序列相比具有不超过两个氨基酸取代、插入或缺失。在其他实施例中，前述抗体分子具有包含至少一个框架区的重链可变区，该框架区包含seqidno:147、151、153、157、160、162、166、或169中任何一项的氨基酸序列。在又其他实施例中，前述抗体分子具有包含至少两个、三个或四个框架区的重链可变区，该框架区包含seqidno:147、151、153、157、160、162、166、或169中任何一项的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含seqidno:147或151的vhfw1氨基酸序列，seqidno:153、157或160的vhfw2氨基酸序列，和seqidno:162或166的vhfw3氨基酸序列，并且任选地，还包含seqidno:169的vhfw4氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子具有包含至少一个框架区的轻链可变区，该框架区包含seqidno:174、177、181、183、185、187、191、194、196、200、202、205、或208中任何一项的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的氨基酸序列，或者与seqidno:174、177、181、183、185、187、191、194、196、200、202、205、或208中任何一项的氨基酸序列相比具有不超过两个氨基酸取代、插入或缺失。在其他实施例中，前述抗体分子具有包含至少一个框架区的轻链可变区，该框架区包含seqidno:174、177、181、183、185、187、191、194、196、200、202、205、或208中任何一项的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子具有包含至少两个、三个或四个框架区的轻链可变区，该框架区包含seqidno:174、177、181、183、185、187、191、194、196、200、202、205、或208中任何一项的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含seqidno:174、177、181、183或185的vlfw1氨基酸序列，seqidno:187、191或194的vlfw2氨基酸序列，和seqidno:196、200、202或205的vlfw3氨基酸序列，并且任选地，还包含seqidno:208的vlfw4氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含与seqidno:38、50、82或86中任何一项至少85％同一的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含seqidno:38、50、82、或86的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含与seqidno:42、46、54、58、62、66、70、74或78中任何一项至少85％同一的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:42、46、54、58、62、66、70、74、或78的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含seqidno:38的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:91的氨基酸序列的重链。在其他实施例中，前述抗体分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含seqidno:50的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:52或seqidno:102的氨基酸序列的重链。在其他实施例中，前述抗体分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含seqidno:82的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:84的氨基酸序列的重链。在其他实施例中，前述抗体分子包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含seqidno:86的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:88的氨基酸序列的重链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:42的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:44的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:46的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:48的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:54的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:56的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:58的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:60的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:62的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体包含含有seqidno:64的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:66的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:68的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:70的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:72的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:74的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:76的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含seqidno:78的氨基酸序列。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:80的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:42的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:66的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:70的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:50的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:70的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:46的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:50的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:46的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:50的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:54的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:54的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:58的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:62的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:50的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:66的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:74的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:78的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:82的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:70的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:82的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:66的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:86的氨基酸序列的重链可变结构域和含有seqidno:66的氨基酸序列的轻链可变结构域。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:91的氨基酸序列的重链和含有seqidno:44的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:91的氨基酸序列的重链和含有seqidno:56的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:91的氨基酸序列的重链和含有seqidno:68的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:91的氨基酸序列的重链和含有seqidno:72的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:102的氨基酸序列的重链和含有seqidno:72的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:44的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:48的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:52的氨基酸序列的重链和含有seqidno:48的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:52的氨基酸序列的重链和含有seqidno:56的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:56的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:60的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:64的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:52的氨基酸序列的重链和含有seqidno:68的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:68的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:52的氨基酸序列的重链和含有seqidno:72的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:72的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:76的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:40的氨基酸序列的重链和含有seqidno:80的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:84的氨基酸序列的重链和含有seqidno:72的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体包含含有seqidno:84的氨基酸序列的重链和含有seqidno:68的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子包含含有seqidno:88的氨基酸序列的重链和含有seqidno:68的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，前述抗体分子选自fab、f(ab')2、fv或单链fv片段(scfv)。在其他实施例中，前述抗体分子包含选自igg1、igg2、igg3和igg4的重链恒定区。在其他实施例中，前述抗体分子包含选自κ或λ轻链恒定区的轻链恒定区。在其他实施例中，前述抗体分子包含人igg4重链恒定区(其在seqidno:212或214的位置228(根据eu编号)或位置108处具有突变)和κ轻链恒定区。在其他实施例中，前述抗体分子包含人igg4重链恒定区(其在seqidno:212或214的位置228(根据eu编号)或位置108处具有丝氨酸至脯氨酸突变)和κ轻链恒定区。在其他实施例中，前述抗体分子包含人igg1重链恒定区(其在seqidno:216的位置297(根据eu编号)或位置180处具有天冬酰胺至丙氨酸突变)和κ轻链恒定区。在其他实施例中，前述抗体分子包含人igg1重链恒定区(其在seqidno:217的位置265(根据eu编号)或位置148处具有天冬氨酸盐至丙氨酸突变，以及在seqidno:217的位置329(根据eu编号)或位置212处具有脯氨酸至丙氨酸突变)和κ轻链恒定区。在其他实施例中，前述抗体分子包含人igg1重链恒定区(其在seqidno:218的位置234(根据eu编号)或位置117处具有亮氨酸至丙氨酸突变，以及在seqidno:218的位置235(根据eu编号)或位置118处具有亮氨酸至丙氨酸突变)和κ轻链恒定区。在其他实施例中，前述抗体分子能够结合人pd-1，其中解离常数(kd)小于约0.2nm。在一些实施例中，前述抗体分子结合人pd-1，其中kd小于约0.2nm、0.15nm、0.1nm、0.05nm、或0.02nm，例如约0.13nm至0.03nm，例如约0.077nm至0.088nm，例如约0.083nm，例如如通过biacore方法测量的。在其他实施例中，前述抗体分子结合食蟹猴pd-1，其中kd小于约0.2nm、0.15nm、0.1nm、0.05nm、或0.02nm，例如约0.11nm至0.08nm，例如约0.093nm，例如如通过biacore方法测量的。在某些实施例中，前述抗体分子结合人pd-1和食蟹猴pd-1两者，其中kd是相似的，例如在nm范围内，例如如通过biacore方法测量的。在一些实施例中，前述抗体分子结合人pd-1-ig融合蛋白，其中kd小于约0.1nm、0.075nm、0.05nm、0.025nm、或0.01nm，例如约0.04nm，例如如通过elisa测量的。在一些实施例中，前述抗体分子结合表达人pd-1的jurkat细胞(例如人pd-1转染的jurkat细胞)，其中kd小于约0.1nm、0.075nm、0.05nm、0.025nm、或0.01nm，例如约0.06nm，例如如通过facs分析测量的。在一些实施例中，前述抗体分子结合食蟹猴t细胞，其中kd小于约1nm、0.75nm、0.5nm、0.25nm、或0.1nm，例如约0.4nm，例如如通过facs分析测量的。在一些实施例中，前述抗体分子结合表达食蟹猴pd-1的细胞(例如用食蟹猴pd-1转染的细胞)，其中kd小于约1nm、0.75nm、0.5nm、0.25nm、或0.01nm，例如约0.6nm，例如如通过facs分析测量的。在某些实施例中，前述抗体分子不具有与小鼠或大鼠pd-1的交叉反应性。在其他实施例中，前述抗体具有与恒河猴pd-1的交叉反应性。例如，可以使用表达pd-1的细胞(例如表达人pd-1的300.19细胞)通过biacore方法或结合测定来测量交叉反应性。在其他实施例中，前述抗体分子结合pd-1的细胞外ig样结构域。在其他实施例中，前述抗体分子能够减少pd-1与pd-l1、pd-l2或两者，或者与表达pd-l1、pd-l2或两者的细胞的结合。在一些实施例中，前述抗体分子减少(例如阻断)pd-l1与表达pd-1的细胞(例如表达人pd-1的300.19细胞)的结合，其中ic50小于约1.5nm、1nm、0.8nm、0.6nm、0.4nm、0.2nm、或0.1nm，例如在约0.79nm和约1.09nm之间，例如约0.94nm，或约0.78nm或更小，例如约0.3nm。在一些实施例中，前述抗体减少(例如阻断)pd-l2与表达pd-1的细胞(例如表达人pd-1的300.19细胞)的结合，其中ic50小于约2nm、1.5nm、1nm、0.5nm、或0.2nm，例如在约1.05nm和约1.55nm之间，或约1.3nm或更小，例如约0.9nm。在其他实施例中，前述抗体分子能够增强抗原特异性t细胞应答。在实施例中，该抗体分子是单特异性抗体分子或双特异性抗体分子。在实施例中，该抗体分子对pd-1具有第一结合特异性，并且对tim-3、lag-3、ceacam(例如ceacam-1、ceacam-3和/或ceacam-5)、pd-l1或pd-l2具有第二结合特异性。在实施例中，该抗体分子包含抗体的抗原结合片段，例如半抗体或半抗体的抗原结合片段。在一些实施例中，与使用同种型对照(例如igg4)时il-2的表达相比，前述抗体分子将来自葡萄球菌肠毒素b(seb)(例如，以25μg/ml)活化的细胞的il-2表达增加至少约2、3、4、5倍，例如约2至3倍，例如约2至2.6倍，例如约2.3倍，例如，如在sebt细胞活化测定或人全血离体测定中所测量的。在一些实施例中，与使用同种型对照(例如igg4)时ifn-γ的表达相比，前述抗体分子将来自抗cd3(例如以0.1μg/ml)刺激的t细胞的ifn-γ表达增加至少约2、3、4、5倍，例如约1.2至3.4倍，例如约2.3倍，例如，如在ifn-γ活性测定中所测量的。在一些实施例中，与使用同种型对照(例如igg4)时ifn-γ的表达相比，前述抗体分子将来自seb(例如以3pg/ml)活化的t细胞的ifn-γ表达增加至少约2、3、4、5倍，例如约0.5至4.5倍，例如约2.5倍，例如，如在ifn-γ活性测定中所测量的。在一些实施例中，与使用同种型对照(例如igg4)时ifn-γ的表达相比，前述抗体分子将来自用cmv肽活化的t细胞的ifn-γ表达增加至少约2、3、4、5倍，例如约2至3.6倍，例如约2.8倍，例如，如在ifn-γ活性测定中所测量的。在一些实施例中，与使用同种型对照(例如igg4)时cd8+t细胞的增殖相比，上述抗体分子使用cmv肽活化的cd8+t细胞的增殖增加至少约1、2、3、4、5倍，例如约1.5倍，例如如由通过至少n(例如n＝2或4)个细胞分裂的cd8+t细胞的百分比来测量的。在某些实施例中，前述抗体分子的cmax在约100μg/ml和约500μg/ml之间、在约150μg/ml和约450μg/ml之间、在约250μg/ml和约350μg/ml之间、或在约200μg/ml和约400μg/ml之间，例如约292.5μg/ml，例如如在猴中所测量的。在某些实施例中，前述抗体分子的t1/2在约250小时和约650小时之间、在约300小时和约600小时之间、在约350小时和约550小时之间、或在约400小时和约500小时之间，例如约465.5小时，例如如在猴中所测量的。在一些实施例中，前述抗体分子结合pd-1，其中kd低于5x10-4、1x10-4、5x10-5、或1x10-5s-1，例如约2.13x10-4s-1，例如如通过biacore方法测量的。在一些实施例中，前述抗体分子结合pd-1，其中ka快于1x104、5x104、1x105、或5x105m-1s-1，例如约2.78x105m-1s-1，例如如通过biacore方法测量的。在一些实施例中，前述抗pd-1抗体分子结合pd-1的c链、cc'环、c'链和fg环内的一个或多个残基。pd-1的结构域结构描述于例如以下文献中：cheng等人,"structureandinteractionsofthehumanprogrammedcelldeath1receptor[人类程序性细胞死亡1受体的结构和相互作用]"j.biol.chem.[生物化学杂志]2013,288:11771-11785。如cheng等人中所述，c链包含残基f43-m50，cc'环包含s51-n54，c'链包含残基q55-f62，并且fg环包含残基l108-i114(根据chang等人(同上)所述的氨基酸编号)。因此，在一些实施例中，如本文所述的抗pd-1抗体结合pd-1的f43-m50、s51-n54、q55-f62和l108-i114的一个或多个范围中的至少一个残基。在一些实施例中，如本文所述的抗pd-1抗体结合pd-1的f43-m50、s51-n54、q55-f62和l108-i114的两个、三个或所有四个范围中的至少一个残基。在一些实施例中，该抗pd-1抗体结合pd-1中的残基，该残基也是pd-l1和pd-l2之一或二者的结合位点的一部分。在另一个方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其编码上述抗体分子、其载体和宿主细胞中的任一项。还提供了编码任何前述抗体分子的抗体重链可变区或轻链可变区或两者的分离的核酸。在一个实施例中，分离的核酸编码重链cdr1-3，其中所述核酸包含seqidno:108-112、223、122-126、133-137或144-146的核苷酸序列。在另一个实施例中，分离的核酸编码轻链cdr1-3，其中所述核酸包含seqidno:113-120、127-132或138-143的核苷酸序列。在其他实施例中，前述核酸进一步包含编码重链可变结构域的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与seqidno:39、51、83、87、90、95或101中的任一项具有至少85％同一性。在其他实施例中，前述核酸进一步包含编码重链可变结构域的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含seqidno:39、51、83、87、90、95或101中的任一项。在其他实施例中，前述核酸进一步包含编码重链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与seqidno:41、53、85、89、92、96或103中的任一项具有至少85％同一性。在其他实施例中，前述核酸进一步包含编码重链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含seqidno:41、53、85、89、92、96或103中的任一项。在其他实施例中，前述核酸进一步包含编码轻链可变结构域的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与seqidno:45、49、57、61、65、69、73、77、81、94、98、100、105或107中的任一项具有至少85％同一性。在其他实施例中，前述核酸进一步包含编码轻链可变结构域的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含seqidno:45、49、57、61、65、69、73、77、81、94、98、100、105或107中的任一项。在其他实施例中，前述核酸进一步包含编码轻链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与seqidno:45、49、57、61、65、69、73、77、81、94、98、100、105或107中的任一项具有至少85％同一性。在其他实施例中，前述核酸进一步包含编码轻链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含seqidno:45、49、57、61、65、69、73、77、81、94、98、100、105或107中的任一项。在某些实施例中，提供了包含前述核酸的一种或多种表达载体和宿主细胞。还提供了产生抗体分子或其片段的方法，该方法包括在适于基因表达的条件下培养如本文所述的宿主细胞。在一个方面，本发明的特征在于提供本文所述的抗体分子的方法。该方法包括：提供pd-1抗原(例如包含至少一部分pd-1表位的抗原)；获得特异性结合pd-1多肽的抗体分子；并评估该抗体分子是否特异性结合pd-1多肽，或评估该抗体分子调节(例如抑制)pd-1活性的功效。该方法可以进一步包括将该抗体分子向受试者(例如人或非人动物)给予。在另一个方面，本发明提供了组合物，例如药物组合物，其包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂和至少一种治疗剂(例如本文所述的抗pd-1抗体分子)。在一个实施例中，该组合物(例如药物组合物)包括抗体分子和一种或多种试剂(例如，如本文所述的治疗剂或其他抗体分子)的组合。在一个实施例中，将该抗体分子与标记物或治疗剂缀合。药物组合物和试剂盒在另一个方面，本发明提供了组合物，例如药学上可接受的组合物，其包括与药学上可接受的载体一起配制的本文所述的抗体分子。如本文所用的，“药学上可接受的运载体”包括生理学上相容的任何和所有溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等。载体可适用于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、直肠、脊柱或表皮给予(例如通过注射或输注)。本发明的组合物可以呈多种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)，分散体或悬浮液，脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的给药方式和治疗应用。典型的优选组合物呈可注射或可输注溶液的形式。优选的给药方式是肠胃外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)给予。在优选的实施例中，抗体通过静脉内输注或注射给予。在另一个优选的实施例中，抗体通过肌肉内或皮下注射给予。如本文所用的短语“肠胃外给予(parenteraladministration和administeredparenterally)”意指除了肠道和局部给予以外的给予方式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬脑膜外以及胸骨内注射和输注。治疗组合物在制造和贮藏条件下典型地应该是无菌和稳定的。该组合物可以被配制成溶液、微乳、分散体、脂质体、或适合于高抗体浓度的其他有序结构。可以通过以下各项来制备无菌可注射溶液：将活性化合物(即抗体或抗体部分)以所需的量，根据需要，与一种以上列举的成分或这些成分的组合并入适当的溶剂中，然后进行过滤灭菌。总体上，通过将有效化合物掺入无菌载体来制备分散体，该无菌载体含有基础分散介质以及来自以上列举的所需其他成分。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这些方法产生活性成分的粉末以及来自其以前的无菌过滤溶液的任何另外的所希望的成分。可以例如通过使用涂层(如卵磷脂)、通过在分散液的情况下维持所需颗粒大小以及通过使用表面活性剂来维持适当的溶液流动性。可以通过在组合物中包含延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸盐和明胶)来实现可注射组合物的吸收延长。抗体分子可以通过本领域已知的多种方法给予，但是对于许多治疗应用，优选的给予途径/方式是静脉内注射或输注。例如，抗体分子可以通过静脉内输注以超过20mg/min，例如20mg/min-40mg/min，并且典型地大于或等于40mg/min的速率给予，以达到约35mg/m2至440mg/m2，典型地约70mg/m2至310mg/m2并且更典型地约110mg/m2至130mg/m2的剂量。在实施例中，抗体分子可以通过静脉内输注以小于10mg/min的速率给予；优选小于或等于5mg/min，以达到约1mg/m2至100mg/m2，优选约5mg/m2至50mg/m2，约7mg/m2至25mg/m2并且更优选约10mg/m2的剂量。如本领域技术人员将理解的，给予途经和/或方式将随所希望的结果而变化。在某些实施例中，活性化合物可与将保护该化合物避免快速释放的载体一起制备，如控释配制品，包括植入物、经皮贴片和微胶囊化递送系统。可以使用可生物降解、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯类、以及聚乳酸。许多用于制备此类配制品的方法是获得专利权的或是本领域的技术人员通常已知的。参见例如sustainedandcontrolledreleasedrugdeliverysystems[缓控释药物递送系统],j.r.robinson编辑,马塞尔穧德克尔公司(marceldekker,inc.),纽约,1978。在某些实施例中，抗体分子可以口服给予，例如，与惰性稀释剂或可同化的可食用载体一起。化合物(和其他成分，如果希望的话)也可以包封在硬壳或软壳明胶胶囊中，压制成片剂，或直接掺入受试者的饮食中。对于口服治疗给药，化合物可与赋形剂混合并以可摄入的片剂、口含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂等形式使用。为了通过除肠胃外给药以外的其他方式给予本发明化合物，可能需要用材料包被该化合物或将该化合物与材料共同给予以防止其失活。治疗组合物还可以用本领域已知的医疗装置给予。调节剂量方案以提供最佳的希望反应(例如，治疗反应)。例如，如由治疗情况的紧急状态所指示的，可以给予单次推注，可以随着时间的过去给予若干个分次剂量，或可以按比例地减少或增加剂量。特别有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物以便给药和剂量统一。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为用于待被治疗的受试者的单元剂量的物理上离散的单位；每个单位含有经计算与所要求的药物载体联合产生所希望的治疗效果的预定量的活性化合物。本发明剂量单位形式的规格是通过以下指定并且直接取决于以下：(a)活性化合物的独特特征和有待实现的具体治疗效果，以及(b)在混配这种活性化合物用于治疗个体的敏感性的领域中的固有限制。治疗或预防有效量的抗体分子的示例性、非限制性范围是0.1mg/kg-30mg/kg，更优选1mg/kg-25mg/kg。抗pd-1抗体的剂量和治疗方案可由技术人员确定。在某些实施例中，将该抗pd-1抗体分子通过注射(例如皮下或静脉内)以约1mg/kg至40mg/kg，例如1mg/kg至30mg/kg，例如约5mg/kg至25mg/kg、约10mg/kg至20mg/kg、约1至5mg/kg、1mg/kg至10mg/kg、5mg/kg至15mg/kg、10mg/kg至20mg/kg、15mg/kg至25mg/kg、或约3mg/kg的剂量给予。该给药计划表可以从例如每周一次至每2、3、或4周一次变化。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约10mg/kg至20mg/kg的剂量给予，每两周一次。作为另一个实例，治疗或预防有效量的抗体分子的示例性、非限制性范围是200mg-500mg，更优选300mg/kg-400mg/kg。抗pd-1抗体的剂量和治疗方案可由技术人员确定。在某些实施例中，将该抗pd-1抗体分子通过注射(例如，皮下或静脉内)以约200mg至500mg，例如约250mg至450mg、约300mg至400mg、约250mg至350mg、约350mg至450mg、或约300mg、或约400mg的剂量(例如平剂量)给予。该给药计划表(例如，平剂量给药计划表)可以从例如每周一次到每2、3、4、5或6周一次变化。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约300mg至400mg的剂量给予，每三周一次或每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约300mg的剂量给予，每三周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约400mg的剂量给予，每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约300mg的剂量给予，每四周一次。在一个实施例中，将该抗pd-1抗体分子以从约400mg的剂量给予，每三周一次。虽然不希望受理论束缚，但在一些实施例中，平坦或固定剂量可以对患者有益，例如，以节省药物供应和减少药房错误。在一些实施例中，抗pd-1抗体分子的清除率(cl)为从约6ml/h至16ml/h，例如约7ml/h至15ml/h，约8ml/h至14ml/h，约9ml/h至12ml/h，或约10ml/h至11ml/h，例如约8.9ml/h、10.9ml/h、或13.2ml/h。在一些实施例中，抗pd-1抗体分子的cl重量指数为从约0.4至0.7，约0.5至0.6，或0.7或更小，例如0.6或更小，或约0.54。在一些实施例中，抗pd-1抗体分子的稳态分布体积(vss)为从约5v至10v，例如约6v至9v、约7v至8v或约6.5v至7.5v，例如约7.2v。在一些实施例中，抗pd-1抗体分子的半衰期为从约10天至30天，例如约15天至25天、约17天至22天、约19天至24天、或约18天至22天，例如约20天。在一些实施例中，抗pd-1抗体分子的cmin(例如针对80kg患者)为至少约0.4μg/ml，例如至少约3.6μg/ml，例如从约20μg/ml至50μg/ml，例如约22μg/ml至42μg/ml、约26μg/ml至47μg/ml、约22μg/ml至26μg/ml、约42μg/ml至47μg/ml、约25μg/ml至35μg/ml、约32μg/ml至38μg/ml，例如约31μg/ml或约35μg/ml。在一个实施例中，在以约400mg的剂量(每四周一次)接受抗pd-1抗体分子的患者中测定cmin。在另一个实施例中，在以约300mg的剂量(每三周一次)接受抗pd-1抗体分子的患者中测定cmin。在某些实施例中，与抗pd-1抗体分子的ec50相比，cmin高至少约50倍，例如至少约60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、或100倍，例如至少高约77倍，例如如基于seb离体测定中的il-2变化所确定的。在其他实施例中，与抗pd-1抗体分子的ec90相比，cmin高至少5倍，例如至少6倍、7倍、8倍、9倍、或10倍，例如至少高约8.6倍，例如如基于seb离体测定中的il-2变化所确定的。该抗体分子可以通过静脉内输注以超过20mg/min，例如20mg/min-40mg/min，并且典型地大于或等于40mg/min的速率给予，以达到约35mg/m2至440mg/m2，典型地约70mg/m2至310mg/m2，并且更典型地约110mg/m2至130mg/m2的剂量。在实施例中，约110mg/m2至130mg/m2的输注速率达到约3mg/kg的水平。在其他实施例中，该抗体分子可以以小于10mg/min，例如小于或等于5mg/min的速率通过静脉输注给予以达到约1mg/m2至100mg/m2，例如约5mg/m2至50mg/m2、约7mg/m2至25mg/m2，或约10mg/m2的剂量。在一些实施例中，该抗体在约30min的时间内输注。应注意，剂量值可随待缓解的病症的类型和严重程度而变化。应进一步理解，对于任何特定受试者，应根据个体需要和给予或监督组合物给予的人的专业判断随时间调整特定剂量方案，并且本文所述的剂量范围仅是示例性的，并不旨在限制所要求保护的组合物的范围或实践。本发明的药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或抗体部分。“治疗有效量”是指以必要的剂量和在必要的时间段内有效实现所需治疗结果的量。治疗有效量的经修饰抗体或抗体片段可根据诸如疾病状态、年龄、性别和个体体重等因素以及抗体或抗体部分在个体中引发所希望反应的能力而变化。治疗有效量也是其中治疗有益效果超过经修饰抗体或抗体片段的任何毒性或有害作用的量。“治疗有效剂量”优选抑制可测量的参数，例如相对于未治疗的受试者，肿瘤生长速率抑制至少约20％，更优选至少约40％、甚至更优选至少约60％，并且仍更优选至少约80％。可以在预测人肿瘤功效的动物模型系统中评估化合物抑制可测量参数(例如癌症)的能力。可替代地，组合物的这种性质可以通过检查化合物抑制的能力来评估，这种抑制在体外通过本领域技术人员已知的测定进行。“预防有效量”是指以必要的剂量和在必要的时间段内有效于实现所希望预防结果的量。典型地，由于预防剂量是在疾病之前或疾病的早期阶段在受试者中使用，预防有效量将小于治疗有效量。包含本文所述抗体分子的试剂盒也在本发明的范围内。该试剂盒可包括一种或多种其他要素，包括：使用说明书；其他试剂，例如标记物、治疗剂、或用于螯合或以其他方式偶联抗体与标记物或治疗剂或辐射防护组合物的试剂；用于制备用于给予的抗体的装置或其他材料；药学上可接受的载体；和用于对受试者给予的装置或其他材料。联合疗法的用途组合，例如本文公开的抗pd-1抗体分子，具有体外和体内诊断、以及治疗和预防用途。例如，可以将这些分子向在体外或离体培养的细胞或者人类受试者给予，以治疗、预防和/或诊断多种障碍，如癌症和感染性障碍。因此，在一个方面，本发明提供了修饰受试者中免疫应答的方法，该方法包括向该受试者给予本文所述的组合，从而修饰该受试者中的免疫应答。在一个实施例中，免疫应答被增强、刺激或上调。如本文所用，术语“受试者”是具有以pd-1功能异常为特征的障碍或病症的人类患者。表1.鼠、嵌合和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。所述抗体分子包括鼠mabbap049，嵌合mabbap049-chi和bap049-chi-y，以及人源化mabbap049-hum01至bap049-hum16和bap049-克隆-a至bap049-克隆-e。显示了重链和轻链cdr、重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。表2.人源化mabbap049-hum01至bap049-hum16和bap049-克隆-a至bap049-克隆-e的重链和轻链框架区的氨基酸和核苷酸序列表3.人igg重链和人κ轻链的恒定区氨基酸序列表4.人源化mabbap049-克隆-a至bap049-克隆-e的重链和轻链前导序列的氨基酸序列bap049-克隆-ahcmewswvflfflsvttgvhs(seqidno:219)lcmsvptqvlgllllwltdarc(seqidno:220)bap049-克隆-bhcmawvwtlpflmaaaqsvqa(seqidno:221)lcmsvltqvlallllwltgtrc(seqidno:222)bap049-克隆-chcmewswvflfflsvttgvhs(seqidno:219)lcmsvptqvlgllllwltdarc(seqidno:220)bap049-克隆-dhcmewswvflfflsvttgvhs(seqidno:219)lcmsvptqvlgllllwltdarc(seqidno:220)bap049-克隆-ehcmawvwtlpflmaaaqsvqa(seqidno:221)lcmsvltqvlallllwltgtrc(seqidno:222)实例以下实例用于帮助理解本发明，但并不旨在且也不应解释为以任何方式限制其范围。实例1：平剂量给药计划表的药代动力学分析基于药代动力学(pk)建模，预期利用平剂量以适当的cmin浓度提供对患者的暴露。超过99.5％的患者将高于ec50，并且超过93％的患者将高于ec90。示例性抗pd-1抗体分子(使用300mg，每三周一次(q3w)或400mg，每四周一次(q4w))的预测稳态平均cmin预期平均高于20ug/ml(最高体重，150kg)。表5.基于平剂量给药计划表的示例性pk参数用任一剂量/方案(300mgq3w或400mgq4w)观察到的示例性抗pd-1抗体分子的预期平均稳态cmin浓度将比ec50(0.42ug/ml)高至少77倍并比ec90高约8.6倍。离体效力基于seb离体测定中的il-2变化。对于300mgq3w或400mgq4w，预期不到10％的患者达到cmin浓度低于3.6ug/ml。对于300mgq3w或400mgq4w，预期不到0.5％的患者达到cmin浓度低于0.4ug/ml。图12显示了在接受相同剂量的示例性抗pd-1抗体分子时针对不同重量患者的预测c谷(cmin)浓度。将基于体重的给药与固定剂量进行比较(3.75mg/kgq3w对比300mgq3w和5mg/kgq4w对比400mgq4w)。图12支持示例性抗pd-1抗体分子的平剂量给药。进一步验证pk模型。如图13所示，观察到的对比模型预测的浓度位于一致的线上。图14显示该模型捕获累积、时间进程和受试者内变异性。实例2：n-(3-(2-(2-羟基乙氧基)-6-吗啉并吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)异烟酰胺化合物a(compounda)是具有以下结构的吗啉取代的联芳基化合物化合物a是公开的pct申请wo2014/151616中的实例1156，该文献的内容通过引用并入。化合物a、化合物a的药学上可接受的盐和包含化合物a的药物组合物的制备也在该pct申请中公开，例如参见第739-741页。化合物a是b-raf和c-raf两者的ii型抑制剂。化合物b-rafic-50(μm)c-rafflic-50(μm)化合物a0.000730.00020化合物a是一种有效的选择性抑制剂，其靶向braf和craf激酶两者，在生化测定中具有亚nmic50值。已证明化合物a在多种mapk途径驱动的人癌细胞系和体内肿瘤异种移植物中有效，所述体内肿瘤异种移植物包括在kras、nras和braf癌基因中具有活化损伤的模型。实例3：化合物a在kras突变型nsclc模型中的抗肿瘤活性h358模型：将携带肿瘤的scid米色雌性nci-h358小鼠(每组n＝8)在肿瘤细胞接种后14天随机分成3组，其中平均肿瘤体积范围为259.44-262.47mm3。在治疗过程中，向动物给予口服剂量30mg/kg或200mg/kg的媒介物或化合物a，连续14天，给药体积为10ml/kg动物体重。通过数字卡尺每周测量3次肿瘤体积，并在整个治疗过程记录所有动物的体重。calu6模型：将携带肿瘤的calu6雌性裸小鼠(每组n＝6)在肿瘤植入后第17天随机分入治疗组，此时平均肿瘤体积为180mm3。用化合物a治疗在第17天开始并持续16天。给药体积为10ml/kg。在随机化时收集肿瘤体积，并且在之后研究持续时间内每周收集两次。h727模型：将携带肿瘤的nci-h358雌性裸小鼠(每组n＝8)随机分成2组，其中平均肿瘤体积范围为275.74mm3。在治疗过程中，向动物给予口服剂量100mg/kg的媒介物或化合物a，连续14天，给药体积为10ml/kg动物体重。通过数字卡尺每周测量3次肿瘤体积，并在整个治疗过程记录所有动物的体重。如图15a、15b和15c所示，化合物a在krasmtnsclc模型中显示单一药剂活性。在基于细胞的测定中，化合物a在细胞系中证明了抗增殖活性，所述细胞系含有活化mapk信号传导的多种突变。例如，化合物a抑制非小细胞肺癌细胞系calu-6(krasq61k)、结肠直肠细胞系hct116(krasg13d)的增殖，其中ic50值范围为0.2μm-1.2μm。在体内用化合物a治疗在若干人kras突变型模型(包括nsclc衍生的calu-6(krasq61k)和nci-h358(krasg12c)异种移植物以及卵巢hey-a8(krasg12d、brafg464e)异种移植物)中产生肿瘤消退。在所有情况下，如通过缺乏显著的体重减轻判断的，抗肿瘤作用是剂量依赖性的并且耐受性良好。当植入裸小鼠和裸大鼠时，calu-6模型对化合物a敏感，其中在小鼠中在剂量为100mg/kg、200mg/kg和300mg/kg(每天一次(qd))时观察到消退并且在大鼠中在75mg/kg和150mg/kg(qd)时观察到消退。在小鼠和大鼠中分别在30mg/kgqd和35mg/kgqd时观察到该模型中的肿瘤停滞。在小鼠第二人nsclc模型nci-h358中200mg/kgqd剂量和在小鼠人卵巢hey-a8异种移植物中低至30mg/kgqd的剂量也实现了消退。此外，来自calu-6异种移植物中的剂量分级功效研究的数据证明，在不同给药水平下，每天一次(qd)给予化合物a和每天两次(bid)分次给予化合物a显示出相似水平的抗肿瘤活性。这些结果支持在临床中探索qd或bid剂量方案。总体而言，在耐受良好的剂量下观察到的化合物a的体外和体内mapk-途径抑制和抗增殖活性表明化合物a可能在患具有mapk途径中活化损伤的肿瘤的患者中具有抗肿瘤活性，并且具体地可能因此可用作单一药剂或与抗pd-1抗体分子组合用于治疗具有kras突变的nsclc患者。实例4：nras突变型黑素瘤模型中化合物a的抗肿瘤活性化合物a的抗肿瘤功效和耐受性在nras突变型黑素瘤异种移植物裸小鼠模型中确定。将50％matrigeltm中的5×106个skmel30细胞(nrasq61k黑素瘤细胞)皮下植入雌性裸鼠的右侧腹中。在移植后第12天将小鼠随机分入治疗组，此时平均肿瘤体积为约200mm3。将小鼠分组(n＝9)并用媒介物或化合物a以25mg/kgbid和100mg/kgbid(每天两次)治疗。治疗在第12天开始并持续至移植后第21天。在随机化时收集肿瘤体积和体重，并且在研究持续时间内每周收集两次。通过用卡尺测量并使用改进的椭圆体公式计算肿瘤体积，其中肿瘤体积(tv)(mm3)＝[((lxw2)x3.14159))/6]，其中l是肿瘤的最长轴并且w垂直于l。监测小鼠的肿瘤生长、体重和身体状况。监测动物健康和行为，每周两次。每天监测小鼠的一般健康状况。通过评估移植后第21天(治疗9天)的％t/c或％消退来确定抗肿瘤活性。用两种剂量(25mg/kg和100mg/kgbid)的化合物a治疗导致消退(分别为48％和59％消退)。所有剂量都具有良好的耐受性，没有显著的体重减轻，并且没有观察到毒性或死亡的迹象(图16显示了化合物a在小鼠skmel30异种移植物中的功效和耐受性)。相对于媒介物对照，绘制肿瘤体积(a)或从初始(b)治疗组的体重变化百分比。实例5：在患具有mapk途径改变的实体瘤(包括晚期实体瘤)的成年患者中的化合物a的i期剂量发现研究化合物a单一药剂根据临床前安全性、耐受性数据、临床前研究中获得的pk/pd数据以及探索性人类有效剂量范围预测，本研究中化合物a单一药剂的推荐起始剂量和方案为口服100mgqd。剂量递增的临时剂量可以在下表中找到。表6化合物a的示例性剂量水平迄今为止，已在该研究中以100mgqd、200mgqd、300mgqd、400mgqd、800mgqd和200mgbid的剂量水平治疗患者。在剂量扩增部分中，化合物a单一药剂组中的患者用化合物a以基于剂量递增数据选择的推荐剂量和方案进行治疗。在试验中包括的所有适应症中，预期该剂量对成人患者是安全的和耐受的。单一药剂组由3个不同的组组成：kras和/或braf突变型nsclc患者，kras和/或braf突变型卵巢癌患者，和患具有一种或多种mapk途径改变的其他实体瘤(可能是晚期)的患者，如患brafi/meki联合疗法失败后复发的/难治性黑素瘤以及nras突变型黑素瘤的患者。化合物a单一药剂：·第1组：证实患kras和/或braf突变nsclc的患者·第2组：证实患kras和/或braf突变卵巢癌的患者·第3组：除了第1组和第2组中定义的那些之外，患具有记录的一种或多种mapk途径改变的晚期实体瘤的患者。这些包括但不限于：·患brafi/meki联合疗法失败后复发的/难治性brafv600突变黑素瘤的患者·患nras突变黑素瘤的患者。该首次人体试验的临床方案是化合物a的每日连续一次给药计划表。已经证明qd方案在临床前研究中是有效和耐受的。在calu6异种移植物中，使用qd或分次的bid方案实现了相似的功效水平，表明功效与总体暴露有关。预测的人pk和预测的半衰期(约9h)也表明qd给药可以实现有效的暴露。从临床试验获得的初步结果进一步证实了这一点。根据实体瘤反应评估标准(recist)，显示用1200mgqd的化合物a治疗的患非小细胞肺癌(nsclc)的受试者导致-35％的部分反应。还设想了化合物a的bid给药(例如200mg，每天两次或400mg，每天两次)。实例6：在患实体瘤和具有mapk途径改变的晚期实体瘤的成人患者中，化合物a的i期剂量发现研究以及在患具有kras突变的nsclc的患者和患nras突变型黑素瘤的患者中，与示例性抗体分子(抗体b)组合的化合物a的i期剂量发现研究。在该研究中测试的示例性抗体分子(bap049-克隆-e，也称为抗体b)是人源化抗程序性死亡-1(pd-1)igg4单克隆抗体(mab)，其阻断程序性细胞死亡配体-1(pd-l1)和程序性细胞死亡配体-2(pd-l2)与pd-1的结合。它以高亲和力结合pd-1并抑制其生物活性。该抗体分子的氨基酸序列描述于本文表1中(vh：seqidno:38；vl：seqidno:70)。临床前毒理学研究的结果表明它具有良好的安全曲线。其药效学活性也已在体内得到证明。化合物a与抗体b组合一旦确定了化合物a单一药剂的推荐剂量和方案，与抗体b组合的化合物a的剂量递增将开始。化合物a的起始剂量是先前测试的剂量，其低于推荐的单一药剂剂量。该剂量的选择将由化合物a单一药剂的当前可获得功效、安全性、pk和/或pd数据所支持，以最小化对潜在毒性药物水平的暴露，同时限制可能接受非活性剂量的患者数量。化合物a的方案将与针对单一药剂化合物a所选择的方案相同。如果在单一药剂扩增部分期间将探索化合物a单一药剂的两种方案，则将基于包括安全性和暴露的所有可用数据选择一种优选方案用于该组合。可以基于新出现的数据来决定在后期阶段转换联用组中的化合物a剂量方案。抗体b将以400mgq4wi.v.(静脉内)(其是单一药剂rde(推荐扩增剂量))的平剂量给予。对于联合治疗方案，抗体b也可以300mgi.v.q3w给予，这可能更方便。在剂量扩增部分中，基于剂量递增数据，联用组中的患者将以推荐剂量和药物组合方案进行治疗。kras突变型nsclc和nras突变型黑素瘤患者将被编入本次研究的联用组。还设想在kras突变nsclc患者的治疗组中，接受过先前的pd-1/pd-l1抑制剂疗法的患者和初次接受pd-1-或pd-l1指导的疗法的患者将受益于该联合疗法，并且在nras突变黑素瘤的治疗组中，先前用免疫疗法(包括例如易普利姆玛或先前的pd-1/pd-l1抑制剂)治疗的患者和初次接受免疫疗法的患者将从该联合疗法中受益。通过引用并入包括附图和表的其他实施例和实例在国际专利申请公开号wo2015/112900和题为“pd-1的抗体分子及其用途”的美国专利申请公开号us2015/0210769中公开，以上文献通过引用以其全文并入。本文提及的所有公开物、专利和登录号均通过引用以其全文特此并入，如同每个单独的出版物或专利被明确且单独地表明通过引用而并入。等效形式虽然已经讨论了本发明的特定实施例，但上述说明是说明性而非限制性的。在综述本说明书和以下权利要求书之后，本发明的许多修改对于本领域的技术人员将是显而易见的。应当通过参考权利要求书及其等同物的全范围以及说明书连同此类变化来确定本发明的全范围。当前第1页12