一种抗猪流行性腹泻、猪瘟、伪狂犬和传染性胃肠炎的四联卵黄抗体可溶性粉及其制备方法与流程

本发明属于免疫学与抗体制备
技术领域：
，具体地说，涉及一种抗猪流行性腹泻、猪瘟、伪狂犬和传染性胃肠炎的四联卵黄抗体可溶性粉及其制备方法。
背景技术：
：猪瘟俗称“烂肠瘟”，是猪瘟病毒引起的一种急性、发热、接触性传染传染病。各种年龄的猪都可感染，一年四季均可发生。具有高度传染性和致死性。是威胁养猪业的主要传染病之一。猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的一种传染病。伪狂犬病毒能够感染各种年龄猪，哺乳仔猪最为敏感。种猪感染伪狂犬病毒后引起母猪发情障碍、流产、产死胎、木乃伊胎和弱仔；伪狂犬病毒先天感染或早期感染引起哺乳仔猪的神经症状和高死亡率；对育肥猪伪狂犬病毒是呼吸系统免疫综合征的重要病原，引起生长育肥猪的呼吸系统症状和生长迟缓；猪场一旦呈现伪狂犬病阳性必将造成巨大的经济损失。猪传染性胃肠炎和流行性腹泻是猪的一种高度接触性肠道疾病。分别由传染性胃肠炎病毒和流行性腹泻病毒引起的，以呕吐，严重腹泻和脱水为特征的高度接触性肠道传染病。当前对猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎尚无有效的治疗药物，接种疫苗预防是控制上述疾病发生的重要手段，但当前由于免疫抑制、饲料霉变、各种应激、免疫不规范、疫苗质量参差不齐、免疫强度和免疫密度不够等原因，导致猪群长期隐性带毒和持续潜伏感染，时刻威胁猪群健康。当漏免或免疫失败的猪个体或猪场感染上述四种病毒后临床上主要采用抗病毒药物对症治疗和抗生素类药物来预防并发症的发生，但当新生仔猪未能从母乳中得到足够量的母源抗体时一旦感染上述四种病毒由于发病急，致死率高等原因导致上述治疗方法的治疗效果并不理想。因此急需开发一种能够针对上述四种猪常见传染病的特异、特效，治疗效果迅速的治疗制剂，并可适用于新生仔猪的疾病治疗。技术实现要素：为了解决现有技术中存在的问题，本发明旨在提供一种抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联卵黄抗体可溶性粉及其制备方法，可有效的预防和治疗上述四种传染病，同时具有常温条件下稳定性好，保质期长，运输和保存方便的优点。为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：本发明提供了一种抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联卵黄抗体可溶性粉，其以干糊精和麦芽糊精作为载体，以抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联卵黄抗体作为活性成分。进一步地，所述四联卵黄抗体可溶性粉的制备方法包括如下步骤：(1)制备抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联卵黄抗体溶液；(2)向步骤(1)所得的四联卵黄抗体溶液中添加黄腐酸、蔗糖、山梨酸钾和叠氮钠，获得四联卵黄抗体组合溶液；(3)将步骤(2)所得的四联卵黄抗体组合溶液喷在所述载体上。进一步地，所述步骤(2)中，所述黄腐酸、蔗糖、山梨酸钾和叠氮钠的添加质量相对于所述四联卵黄抗体溶液的体积比分别为：3-5％、15-20％、0.01-0.03％和0.01-0.02％；优选为体积比分别为：5％、15％、0.02％和0.02％。进一步地，所述步骤(3)中，所述四联卵黄抗体组合溶液与所述载体的质量比为1:4-1:5。进一步地，所述载体中，干糊精和麦芽糊精的质量比为2:1-1:2，优选为1:1。更进一步地，所述步骤(1)包括如下步骤：s1、以猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎疫苗免疫产蛋高峰青年鸡，而后取该鸡群产的高免鸡蛋；s2、分离所述高免鸡蛋的蛋黄，用泊洛沙姆沉淀法去除油脂，收集含卵黄抗体的上清液；s3、取s2获得的上清液经过浓缩分离超滤系统进行超滤浓缩，即得。作为优选，s1中的免疫策略为：利用猪瘟弱毒疫苗、猪伪狂犬弱毒疫苗和猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎二联弱毒疫苗各免疫3次，再利用猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎二联灭活疫苗免疫2次。本发明还进一步提供一种抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联卵黄抗体可溶性粉的制备方法，包括如下步骤：(1)制备抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联卵黄抗体溶液；(2)向步骤(1)所得的四联卵黄抗体溶液中添加黄腐酸、蔗糖、山梨酸钾和叠氮钠，获得四联卵黄抗体组合溶液；(3)将步骤(2)所得的四联卵黄抗体组合溶液喷在所述载体上。进一步地，所述黄腐酸、蔗糖、山梨酸钾和叠氮钠的添加质量相对于所述四联卵黄抗体溶液的体积比分别为：3-5％、15-20％、0.01-0.03％和0.01-0.02％；优选为体积比分别为：5％、15％、0.02％和0.02％；和/或，所述四联卵黄抗体组合溶液与所述载体的质量比为1:4-1:5；和/或，所述载体中，干糊精和麦芽糊精的质量比为2:1-1:2，优选为1:1。更为优选，所述步骤(1)包括如下步骤：s1、以猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎疫苗免疫产蛋高峰青年鸡，而后取该鸡群产的高免鸡蛋；优选免疫策略为：利用猪瘟弱毒疫苗、猪伪狂犬弱毒疫苗和猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎二联弱毒疫苗各免疫3次，再利用猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎二联灭活疫苗免疫2次；s2、分离所述高免鸡蛋的蛋黄，用泊洛沙姆沉淀法去除油脂，收集含卵黄抗体的上清液；s3、取s2获得的上清液经过浓缩分离超滤系统进行超滤浓缩，即得。可选的，s1所用的疫苗猪瘟活疫苗、猪伪狂犬病活疫苗均购自山东绿都生物科技有限公司；猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联活疫苗购自大北农；猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联灭活疫苗购自武汉科前生物股份有限公司。优选的，s2具体为：将分离的蛋黄和去离子水搅拌至完全混合，得到蛋黄水溶液；加入泊洛沙姆溶液，使混合溶液中泊洛沙姆浓度不超过1.0w/v％-1.2w/v％，搅拌后静置沉淀蛋黄油脂，分离提取上清液；将上清液过滤去除杂质后，再次加入泊洛沙姆溶液，使混合溶液中泊洛沙姆浓度为0.5w/v％，搅拌后静置再次分离沉淀蛋黄中残余油脂，得到粗提分离的卵黄抗体溶液，即为含卵黄抗体的上清液。进一步地，第一次加入泊洛沙姆溶液后静置的环境温度不超过10℃，静置时间不低于8小时。更为优选的，s2利用泊洛沙姆沉淀法去除油脂，收集含卵黄抗体的上清液具体包括以下步骤：a)用去离子水配制10％(w/v)泊洛沙姆溶液，例如将1千克泊洛沙姆加入到10升去离子水中搅拌溶解；b)将分离的蛋黄和去离子水按1∶6的比例混合后用力搅拌使蛋黄和水完全混合，得到蛋黄水溶液；c)向步骤b)中获得的蛋黄水溶液中加入步骤a)配制的10％(w/v)泊洛沙姆溶液，使混合溶液中泊洛沙姆浓度为1％(w/v)，用力搅拌，获得蛋黄和泊洛沙姆水溶液a；在4℃-10℃下静置8-12小时，沉淀蛋黄油脂，分离提取上清液；d)将步骤c)获得的上清液经过四层医用纱布过滤去除杂质，获得卵黄抗体溶液；e)向步骤d)获得的卵黄抗体溶液中加入10％(w/v)泊洛沙姆溶液，使混合溶液中泊洛沙姆浓度为0.5％(w/v)，用力搅拌充分混匀，获得蛋黄和泊洛沙姆水溶液b；在4℃-10℃下静置2-4小时，再次分离沉淀蛋黄中残余油脂；具体操作可为：用厨纸粘去最上一层油脂后按照步骤d)方法过滤溶液，即得粗提分离的卵黄抗体溶液。优选的，s3为取s2获得的上清液加入到超滤浓缩分离系统的储液罐内，使用截留分子量20000da的超滤膜，在运行压力0.05-0.15mpa和浓缩回流液流速控制在15-20m3/h的条件下进行超滤浓缩分离，即获得精制的四联卵黄抗体水溶液。以上技术方案中抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联抗体溶液制备完成后还应对产物进行特异抗体效价测定，例如使用elisa方法，分别用猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎试剂盒测定其效价。应当理解，在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，得到各具体的技术方案。本发明的有益效果在于：利用本发明方法制备的抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联卵黄抗体可溶性粉，是一种针对猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎具有特异性、治疗效果好、疗效迅速的一种制剂，能够有效防治猪上述四种传染病。本发明以干糊精和麦芽糊精为载体，将添加有黄腐酸、蔗糖、山梨酸钾和叠氮钠的抗猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的四联卵黄抗体喷洒到载体表面，制成高纯度，高稳定性，高疗效，且易于保存的可溶性粉剂，相对于液体卵黄抗体具有运输方便，保存环境温度要求不高的优势，只需要置于通风、阴凉空间即可；相对于卵黄抗体冻干粉，无需冷冻抽干设备，成本低廉，适合于大规模生产；相对于抗生素和抗病毒药物，本发明产品具有无残留，无副作用等优点适合于大规模推广使用。附图说明图1为本发明实验例1中常温放置不同时间段抗体效价变化。具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步的解释说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例中所用的疫苗猪瘟活疫苗、猪伪狂犬病活疫苗均购自山东绿都生物科技有限公司；猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联活疫苗购自大北农；猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联灭活疫苗购自武汉科前生物股份有限公司。实施例1本实施例用于说明制备猪瘟、伪狂犬、流行性腹泻和传染性胃肠炎四联高免鸡蛋，具体方法如下：(1)选择健康未免疫产蛋高峰青年鸡隔离饲养，加强饲料营养和环境卫生以免病原感染；(2)用猪瘟、猪伪狂犬、猪流行性腹泻和猪胃肠炎疫苗免疫步骤(1)中处理好的青年高产蛋鸡，具体步骤为：第一次：免疫猪流行性腹泻-传染性胃肠炎二联弱毒疫苗和二联灭活疫苗以及猪瘟活疫苗，注射量按1/5猪剂量免疫鸡(即20头份猪疫苗免疫100只鸡)，注射途径为猪流行性腹泻-传染性胃肠炎二联灭活疫苗颈部皮下注射，猪流行性腹泻-传染性胃肠炎二联弱毒疫苗和猪瘟弱毒疫苗进行大腿肌肉注射；第二次：2周后免疫猪流行性腹泻-传染性胃肠炎二联弱毒疫苗、猪瘟弱毒疫苗和伪狂犬弱毒疫苗分别按1/5猪的剂量注射大腿肌肉；第三次：2周后每只鸡按1/5猪剂量大腿肌肉注射猪瘟和猪伪狂弱毒疫苗；第四次：再隔2周后猪流行性腹泻-传染性胃肠炎二联灭活疫苗颈部皮下注射1/5猪剂量，同时同样按1/5猪剂量大腿肌肉注射猪伪狂犬弱毒疫苗。(3)免疫高产青年蛋鸡后，收集得到高免鸡蛋。实施例2本实施例用于说明利用实施例1得到的高免鸡蛋，制备四联卵黄抗体溶液，具体方法如下：(1)分离高免鸡蛋蛋黄：在实施例1所述每种疫苗二次免疫后1周开始每隔7天抽样检测鸡蛋蛋黄中对应疫苗中抗原产生的特异性抗体效价，同时以未免鸡蛋蛋黄作对照。当未免疫鸡蛋蛋黄od450值小于0.2，并且免疫疫苗鸡蛋卵黄抗体特异抗体od450/未免疫鸡蛋蛋黄od450比值大于5.0以上时收集分离蛋黄，所述分离蛋黄的具体方法为：将实施例1得到的高免鸡蛋放置密闭容器或房屋内，过氧乙酸熏蒸消毒30分钟后送入蛋黄分离机中进行蛋黄分离；(2)制备精制卵黄抗体：将步骤(1)所分离的蛋黄中以1：6比例加入去离子水，(该比例下去离子水的量还包括后续操作中加入的泊洛沙姆溶液的体积)进行剧烈搅拌使蛋黄与水充分混匀获得蛋黄水溶液；获得的蛋黄水溶液中加10％泊洛沙姆溶液，保证蛋黄溶液和泊洛沙姆混合溶液中泊洛沙姆浓度1％(w/v)，立即搅拌充分混匀，所述10％(w/v)泊洛沙姆溶液，称取1千克泊洛沙姆，向其中加入10升去离子水后搅拌充分溶解即得；将获得的泊洛沙姆蛋黄水溶液在4-8℃静置8-12小时后，先用厨纸粘去上面一层油脂和浮沫后，而后上清经过4层医用纱布过滤，在过滤好的蛋黄水溶液中加入10％(w/v)泊洛沙姆水溶液，保证蛋黄和泊洛沙姆混合溶液中泊洛沙姆浓度0.5％(w/v)，充分混匀后在4-8℃静置2-4小时后粘去上层油脂，将上清溶液经过4层医用纱布过滤；将经过两次泊洛沙姆沉淀法去除油脂的卵黄抗体水溶液使用截留分子量20000da的超滤膜，在运行压力0.05-0.15mpa和浓缩回流液流速控制在15-20m3/h的条件下进行超滤浓缩分离，获得四联卵黄抗体溶液。实施例3本实施例用于说明四联卵黄抗体组合溶液的制备。向实施例2获得的四联卵黄抗体溶液中加入5％(w/v)的黄腐酸，15％(w/v)的蔗糖，0.02％(w/v)的山梨酸钾和0.02％(w/v)的叠氮钠，充分搅拌，即得。实施例4本实施例用于说明以干糊精和麦芽糊精为载体的四联卵黄抗体可溶性粉的制备，包括如下步骤：(1)按1∶1(重量比)的比例将干糊精和麦芽糊精加入到喷雾干燥设备内，调整进风口温度70-80℃，出风口温度50-60℃，预热混合糊精10min；(2)按照1:4(重量比)的比例将实施例3中获得的四联卵黄抗体组合溶液通过蠕动泵，以150-250ml/min的流速喷雾到混合糊精上，喷雾干燥设备进行50-60℃干燥60-70min，粉碎，过筛即得。对比例1本对比例与实施例4的区别在于：所使用的四联卵黄抗体组合溶液为：向实施例2获得的四联卵黄抗体溶液中加入5％(w/v)黄腐酸，15％(w/v)蔗糖，0.02％(w/v)山梨酸钾，充分搅拌，即得。对比例2本对比例与实施例4的区别在于：所使用的四联卵黄抗体组合溶液为：向实施例2获得的四联卵黄抗体溶液中加入5％(w/v)黄腐酸，15％(w/v)蔗糖，0.02％(w/v)叠氮钠，充分搅拌，即得。对比例3本对比例与实施例4的区别在于：所使用的四联卵黄抗体组合溶液为：向实施例2获得的四联卵黄抗体溶液中加入15％(w/v)蔗糖，0.02％(w/v)山梨酸钾，0.02％(w/v)叠氮钠，充分搅拌，即得。对比例4本对比例与实施例4的区别在于：所使用的四联卵黄抗体组合溶液为：向实施例2获得的四联卵黄抗体溶液中加入5％(w/v)黄腐酸，0.02％(w/v)山梨酸钾，0.02％(w/v)叠氮钠，充分搅拌，即得。对比例5本对比例与实施例4的区别在于：将实施例3中获得的四联卵黄抗体组合溶液，替换为实施例2获得的四联卵黄抗体溶液，不再添加其他组分。实验例1本实验例用于说明对实施例4和对比例1-5的产品性能和质量检测结果。(1)被检材料：实施例4(试验组)和对比例1-5(依次对应组别：对比组1-5)制备的四联卵黄抗体可溶性粉。(2)试验方法：将步骤(1)中所述产品放置常温(20-25℃)，18个月，分别在第1月，2月，3月，6月，9月，12月，15月，18月后的时间点上称取样本加入去离子水配制成30％(w/v)抗体溶液(s)，同时将同一批生产的未经任何处理的卵黄抗体溶液用去离子水稀释成6％(v/v)卵黄溶液作为对照(c)，用elisa方法检测抗体效价。抗体效价保留率：以od450s/od450c×100％来计算。(3)试验结果：常温保存试验结果：以抗体效价保留率作为纵坐标，以取样时间作为横坐标做出不同别抗体效价衰减图，结果见图1。在图1中显示，当可溶性粉(干粉)常温保存到18个月时试验组抗体效价保留85％以上，消减最慢，其次消减速度由慢到快依次为对比组3、对比组2、对比组4、对比组1和对比组5。从试验结果可以看出当实施例4采用的配方稳定性最佳。质量标准：(1)性状：淡黄色或黄色均匀粉末；(2)溶解性：易溶于水；(3)支原体检测：按《中国兽药店》进行，无支原体生长；(4)外源病毒检测：按《中国兽药店》进行，无外源病毒污染；(5)霉菌检测：按《中国兽药店》进行，符合标准；(6)保质期：根据常温检测抗体效价结果，常温至少能存放18个月。(7)安全性检验：选用7日龄spf鸡，10只，每只鸡按45克/公斤体重(3倍使用量)，连用3天，观察21天，精神正常，采食和饮水正常，应全部键活。实验例2本实验例记载了对实施例4和对比例1-5的产品对猪瘟病的疗效分析试验。本实施例中所检测产品为实施例4(试验组)和对比例1-5(依次对应组别：对比组1-5)制备的四联卵黄抗体可溶性粉。实验动物选用7日龄健康仔猪80头。试验方法：选择7日龄洁净级广西巴马小型猪，隔离饲养观察1周后，随机分成8组，每组10头，隔离饲养。8组分别为空白对照组，不给任何产品；攻毒组，试验组和对比组每头猪肌肉注射稀释后猪瘟病毒液后24小时攻毒组给3-5毫升生理盐水，试验组灌服3-5毫升用生理盐水溶解的实施例4制备产品，对比组1-5依次灌服3-5毫升用生理盐水溶解的对比例1-5制备产品，试验组和对比组1-5中所用干粉产品按15克/公斤体重使用，连续灌服3天，观察7天，结果见表1。疗效评估标准：治愈：精神正常，采食饮水正常，粪便正常，无任何症状。有效：精神萎靡，采食量未完全恢复，临床症状减轻。无效：精神萎靡，抽搐，体温高烧不退，采食严重下降或不进食最终导致死亡。表1不同组别疗效情况组别发病数(头)治愈数(头)有效数(头)治愈率(％)试验组87188攻毒组101110对比组1103230对比组2106360对比组3106460对比组4105350对比组5102220空白对照0///从表1可以看出，试验组对猪瘟治愈率能达到88％，对比组1-5对猪瘟治愈率在20-60％范围内，统计分析表明试验组对猪瘟的疗效显著高于对比组1-5(p﹤0.01)。实验例3本实验例记载了对实施例4和对比例1-5的产品对猪伪狂犬病的疗效分析试验。本实施例中所检测产品为实施例4(试验组)和对比例1-5(依次对应组别：对比组1-5)制备的四联卵黄抗体可溶性粉。实验动物选用7日龄健康仔猪80头。试验方法：选择7日龄洁净级广西巴马小型猪，隔离饲养观察1周后，随机分成8组，每组10头，隔离饲养。8组分别为空白对照组，不给任何产品；攻毒组，试验组和对比组每头猪肌肉注射稀释后猪伪狂犬病毒液后24小时攻毒组给3-5毫升生理盐水，试验组灌服3-5毫升用生理盐水溶解的实施例4制备产品，对比组1-5依次灌服3-5毫升用生理盐水溶解的对比例1-5制备产品，试验组和对比组1-5中所用干粉产品按15克/公斤体重使用，连续灌服3天，观察7天，结果见表2。疗效评估标准：治愈：精神正常，采食饮水正常，体温正常，无任何症状。有效：精神不振，采食量逐渐增加，体温有所下降，无昏厥，呕吐停止。无效：精神萎靡，昏厥，高热不退，不吃料，呕吐不止，死亡。表2不同组别疗效情况从表2可以看出，试验组对猪伪狂犬病的治愈率能达到90％，比对组1-5对猪伪狂犬病的治愈率在30-70％范围内。统计分析表明试验组对猪伪狂犬病的疗效显著高于对比组1-5(p﹤0.01)。实验例4本实验例记载了对实施例4和对比例1-5的产品对猪流行性腹泻的疗效分析试验。本实施例中所检测产品为实施例4(试验组)和对比例1-5(依次对应组别：对比组1-5)制备的四联卵黄抗体可溶性粉。实验动物选用7日龄健康仔猪80头。试验方法：选择7日龄洁净级广西巴马小型猪，隔离饲养观察1周后，随机分成8组，每组10头，隔离饲养。8组分别为空白对照组，不给任何产品；攻毒组，试验组和对比组每头猪肌肉注射稀释后猪流行性腹泻病毒液后24小时攻毒组给3-5毫升生理盐水，试验组灌服3-5毫升用生理盐水溶解的实施例4制备产品，对比组1-5依次灌服3-5毫升用生理盐水溶解的对比例1-5制备产品，试验组和对比组1-5中所用干粉产品按15克/公斤体重使用，连续灌服3天，观察7天，结果见表3。疗效评估标准：治愈：精神正常，采食饮水正常，体温正常，粪便正常，无任何症状。有效：精神不振，采食量逐渐增加，腹泻和呕吐症状有所好转。无效：精神萎靡，体温升高，拉水样恶臭粪便，不吃料，呕吐不止，死亡。表3不同组别疗效情况从表3可以看出，试验组对猪流行性腹泻的治愈率达到90％，对比组1-5对猪流行性腹泻的治愈率在20-70％。统计分析表明试验组对猪流行性腹泻病疗效显著高于对比组1-5(p﹤0.01)。实验例5本实验例记载了对实施例4和对比例1-5的产品对猪传染性胃肠炎的疗效分析试验。本实施例中所检测产品为实施例4(试验组)和对比例1-5(依次对应组别：对比组1-5)制备的四联卵黄抗体可溶性粉。实验动物选用7日龄健康仔猪80头。试验方法：选择7日龄洁净级广西巴马小型猪，隔离饲养观察1周后，随机分成8组，每组10头，隔离饲养。8组分别为空白对照组，不给任何产品；攻毒组，试验组和对比组每头猪肌肉注射稀释后猪传染性胃肠炎病毒液后24小时攻毒组给3-5毫升生理盐水，试验组灌服3-5毫升用生理盐水溶解的实施例4制备产品，对比组1-5依次灌服3-5毫升用生理盐水溶解的对比例1-5制备产品，试验组和对比组1-5中所用干粉产品按15克/公斤体重使用，连续灌服3天，观察7天，结果见表4。疗效评估标准：治愈：精神正常，采食饮水正常，体温正常，粪便正常，无任何症状。有效：精神不振，采食量逐渐增加，腹泻和呕吐症状明显好转，体温趋于正常。无效：精神萎靡，体温升高，拉稀和呕吐不止，不采食，死亡。表4不同组别疗效情况从表4可以看出，试验组对猪传染性胃肠炎的治愈率达到89％，对比组1-5对猪流行性腹泻的治愈率在30-70％。统计分析表明试验组对猪流行性腹泻病疗效显著高于对比组1-5(p﹤0.01)。根据实验例2-5的实验结果表明，本发明实施例4制备的四联卵黄抗体可溶性粉对猪瘟，猪伪狂犬，猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎有显著的疗效，即本发明中将黄腐酸，山梨酸钾，蔗糖和叠氮钠配合使用到卵黄抗体中显著提高其疗效和稳定性。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页12