本发明本质上涉及化妆品组合物，特别是具有抗衰老效果的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物包含狭叶豆蔻(aframomumangustifolium)或唤妍草(longoza)植物的种子的绿色提取物作为活性成分。本发明还涉及狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子的绿色提取物作为化妆品试剂、特别是用于特别具有抗衰老效果的化妆品组合物的制造的用途。在下文的说明书和权利要求中，为简化起见将使用术语“唤妍草”，但显然它也意为狭叶豆蔻植物。此外，绿色提取物意为用提供提取物的生态和化妆品相容性的溶剂提取的提取物，所述溶剂例如包含多元醇(特别是二醇，并且更特别地选自丙二醇、丁二醇、戊二醇)或由多元醇(特别是二醇，并且更特别地选自丙二醇、丁二醇、戊二醇)组成的极性溶剂。根据特定的实施方式，由于以下原因，该提取物也是绿色的：由唤妍草种子组成的可再生植物资源的使用；不存在废溶剂，特别是不存在诸如己烷或庚烷的有机溶剂；在化妆品中使用的替代绿色溶剂的使用，所述绿色溶剂包含多元醇(特别是二醇，更特别地选自丙二醇、丁二醇、戊二醇)或由多元醇(特别是二醇，更特别地选自丙二醇、丁二醇、戊二醇)组成；提取方法涉及极少的步骤且能耗低，特别是通过进行第一次冷提取以及在约55℃的中等温度下的第二次提取；以及该方法应避免带来色彩冲击，保持工业可行性，并且不增加唤妍草中含有的萜烯的百分比，以避免毒理学风险。
背景技术：
：e.m.gaydou等发表在revuedescorpsgras，1983年1月第1期，第21-25页中的文章对从马达加斯加的一些植物(包括狭叶豆蔻植物)种子中提取的油的脂肪酸组成进行了研究(见表1，续2，第24页)。它是通过非极性溶剂(特别是使用己烷)的方式提取的植物种子的提取物(见第24页，“实验部分”，第1段)。此外，专利andre等，lvmhrecherche，us7,381,436b2描述了一种化妆品组合物，该化妆品组合物包含用极性溶剂提取的狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子的提取物，所述极性溶剂实际上包含体积比为70/30的乙醇/水的水醇混合物。该文献描述了通过刺激胶原蛋白(特别是存在于真皮-表皮接合处或jde的胶原蛋白vii)的合成和/或通过对耐酸纤维和/或中期弹性纤维的作用而产生的抗衰老效果；并且还保护皮肤免受由于光化辐射(特别是由于紫外线)的作用而引起的衰老。此外，文献us2010/0055217nizard，lvmhrecherche与上述andre专利相似，描述了唤妍草的水醇提取物，但该提取物与lipochroman-6一起使用以获得协同效果。另外，cellmetab，2016年2月9日，23(2)：303-314中wiley等的文章描述了研究结果，表明线粒体功能障碍随年龄而增加，这导致具有不同分泌表型的线粒体老化。发明目的本发明旨在解决以下技术问题：提供用于从狭叶豆蔻或唤妍草植物中寻找新的提取物或活性成分作为化妆品试剂的解决方案，与以前已知的包含狭叶豆蔻或唤妍草植物的水醇提取物的化妆品抗衰老试剂相比，所述化妆品试剂具有良好的抗衰老效果或改善的抗衰老效果，和/或在用于化妆目的(特别是对皮肤)的局部施用的情况下具有非常好的相容性和/或没有或实质上没有副作用或刺激性作用。本发明还旨在借助于来自狭叶豆蔻或唤妍草植物的新的提取物或活性成分来解决上述技术问题，所述提取物或活性成分能够减缓或预防导致线粒体老化和皮肤过早衰老的线粒体功能障碍。同样，本发明还旨在通过提供用于获得活性成分的方法来解决上述技术问题，通过避免对环境有害的溶剂的使用，所述方法是环境友好的，需要很少的能量，并且允许制备足够的量以用于工业规模、特别是化妆品规模。技术实现要素：本发明提供了以上提出的技术问题的解决方案，该方案能够以简单、廉价的方式用于工业规模、特别是化妆品规模。根据第一方面，本发明提供了化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物包含处于化妆品上可接受的赋形剂中的提取物作为活性成分，所述提取物被称为绿色提取物，是用生态友好且化妆品上可接受的极性溶剂由狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子制备，所述极性溶剂包含极性溶剂多元醇、特别是二醇或由极性溶剂多元醇、特别是二醇组成。根据第二方面，本发明还涉及狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子的提取物(称为绿色提取物)作为化妆品试剂用于化妆品组合物的制造的用途，所述提取物是用环境友好且化妆品上可接受的极性溶剂制备，所述极性溶剂包含极性溶剂多元醇(特别是二醇)或由极性溶剂多元醇(特别是二醇)组成。根据本发明的特定实施方式，使用唤妍草的绿色提取物作为具有抗衰老效果的化妆品试剂。根据本发明的有利的可替代的实施方式，将唤妍草植物的种子的绿色提取物用于抗皱效果，特别是用于减少、消除或减缓皱纹的出现，其作用是保持或恢复皮肤的结构，特别是通过刺激线粒体合成atp合成酶6的作用。因此，本发明提供了保护、修复和恢复线粒体活性的效果，所述效果防止了线粒体老化，从而产生抗衰老效果、特别是抗皱效果。本发明还保护皮肤免受由于光化辐射的作用(特别是由于紫外线)引起的衰老。根据第三方面，本发明涉及用于提取狭叶豆蔻或唤妍草种子的新方法。在本发明的上下文中，用生态友好且化妆品上可接受的极性溶剂、特别是包含多元醇(特别是二醇)或由多元醇(特别是二醇)组成的极性溶剂来对狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子进行提取，从而获得“绿色”提取物。对于本发明的每个方面，使用的多元醇可具有化学通式ho-r-oh，其中，r可代表具有n的烃基-(ch2)n，所述烃基具有2-16个碳原子、特别是3-8个碳原子。根据本发明的特定实施方式，使用的多元醇是在工业上可广泛获得且廉价的普通二醇，例如丙二醇、丁二醇或1,3-丁二醇、戊二醇以及它们的混合物。在又一可替代的实施方式中，将种子研磨成细粉末。该粉末的颗粒有利地具有0.01mm-1mm的直径。在另一可替代的实施方式中，可进行数次连续的提取，直至待提取的材料被多元醇(特别是二醇)溶剂耗尽。根据可替代的实施方式，用多元醇(特别是二醇)在所谓的“冷”室温下进行一次提取，并且在约55℃的温度下进行第二次提取。根据本发明的特定实施方式，提取方法包括用由100％多元醇(特别是二醇)组成的极性溶剂对经研磨的干种子进行提取的至少一个步骤。根据可替代的实施方式，植物/溶剂的m/v比可为1/1.75。根据另一可替代的实施方式，在适当的提取之前，通过例如在多元醇(特别是二醇)中在室温下软浸渍例如12-15小时将经研磨的种子浸透，从而增加了感兴趣的分子的可及性和可用性。根据又一可替代的实施方式，在浸渍后，进行第一过滤以获得第一滤液以及经研磨的种子的饼，然后在中等温度(例如约55℃)下将饼进行数小时(例如大约3小时)的提取，然后例如在孔隙度为20μm-25μm的过滤器上进行过滤以获得第二滤液。根据特定的替代方式，将得到的两种滤液合并，并且可再次在例如0.5μm-0.1μm的灭菌过滤器或非灭菌过滤器上过滤。可用多元醇(特别是二醇)或其它生物相容且化妆品上可接受的溶剂调节所得溶液，以得到约1wt％的干提取物。根据该提取方法的特定的实施方式，多元醇(特别是二醇)中的提取物本身可构成根据本发明的活性成分或试剂。根据另一特定的替代方式，可将提取溶剂实质上完全蒸发以获得干提取物，所述干提取物既可用作例如上述活性成分，也可再次溶于环境友好且化妆品上可接受的溶剂(例如多元醇，特别是二醇，或醇或水醇混合物)中以获得上述活性成分的另一替代物。根据本发明的另一有利的替代方式，用于重新溶解的溶剂为二醇。如上所述，根据本发明的特定实施方式，使用工业上可广泛获得且廉价的普通二醇，例如丙二醇、丁二醇或1,3-丁二醇、戊二醇以及它们的混合物。特定的可替代的实施方式使用丁二醇。在本发明的上下文中，无论掺入水相还是脂肪相，获得的提取物易于用作化妆品试剂并且易于与待制备的化妆品组合物的其它成分混合。根据第五方面，本发明还涉及化妆护理方法，其特征在于，所述化妆护理方法包括将化妆品上有效的量的如先前所定义的狭叶豆蔻或唤妍草植物种子的提取物(称为绿色提取物)局部施用于有需要的人的皮肤。根据本发明的有利的实施方式，该化妆护理方法用于将上述狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子提取物施用于需要抗衰老护理的皮肤区域，特别是用于对抗由线粒体功能障碍引起的衰老的影响。出乎意料地发现，本发明的二醇绿色提取物对于能量代谢具有显著作用。三磷酸腺苷(atp)合酶是线粒体嵴中发现的一种酶复合物。该酶的作用是由通过呼吸链维持的二磷酸腺苷二磷酸(adp)和电化学梯度以及无机磷酸盐(ip)来合成atp，以获得adp+ip＝atp。adp和ip是对细胞的生命所必需的真正的分子马达。atp是转化为化学能和机械能的化学能的唯一形式。因此，特别地，通过对atp合酶亚基6的刺激作用，本发明出乎意料地具有保持或恢复皮肤结构的作用，保护、修复和恢复皮肤的弹性和/或紧致度的效果。本发明还具有抗衰老效果(其更具体地旨在抗皱效果)，以减少、消除或减缓皱纹的出现。在本发明的任一方面中，以干提取物或物质表示，所述绿色提取物以基于组合物的总重量的0.001wt％-5wt％、特别是0.01wt％-1wt％的浓度存在。实施例通过下面的描述，本发明的其它目的、特征和优势对于本领域技术人员将变得清晰，该描述包含通过示例的方式提供的本发明的数个实施方式，并且其绝不限制本发明的范围。在下面的实施例中，除非另有说明，所有百分数均以重量计，温度为室温即25℃，或以摄氏度给出，压力为大气压。根据本发明的实施例1根据本发明的用二醇(例如丁二醇)提取的狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子的绿色提取物的实验室制备的实施例从200g来自多种商品批号的唤妍草植物种子进行以下提取程序：a)首先，将市售的干种子研磨至例如0.01mm-1mm的平均粉末尺寸；b)然后，在静态室温下，将粉末在350ml丁二醇中或以1/1.75的种子/溶剂比(w/v)浸渍过夜约12小时；c)浸渍后，例如在孔隙度为20μm-25μm的过滤器上进行第一过滤，通过获得具有约20g/l干滤渣的不透明的橙红色溶液或浸渍液，以获得第一滤液以及经研磨的种子的饼，然后d)在中等温度下(例如约55℃)，另外用350ml丁二醇对饼进行数小时(例如约3小时)时间的提取，然后e)进行第二过滤(例如在20μm-25μm孔隙度的过滤器上进行)，以获得第二滤液，获得具有约5g/l干滤渣的不透明的橙色溶液；f)根据特定的替代方式，将获得的两种滤液或提取物合并，并且可通过例如0.5μm-0.1μm的灭菌过滤器重新过滤。滤液为透明的橙黄色溶液，可对其进行活性成分测定以及薄层色谱和微生物学分析；g)可用丁二醇或其它生物相容和化妆品上可接受的溶剂对所得滤液或提取溶液进行调节，以得到10g/l的干物质含量或约1wt％的干物质；根据特定的实施方式，该丁二醇提取物本身构成根据本发明的狭叶豆蔻或唤妍草种子的绿色提取物，所述提取物(1克提取物)可用作化妆品试剂或用作用于以下实施例中示出的化妆品组合物的制造的活性成分；该丁二醇溶液含有1wt％的干提取物；h)为将该干提取物掺入根据本发明的化妆品组合物中，也可在制造所述组合物时化妆品上可接受的溶剂中(特别是在水、乙醇、1,3-丁二醇或这些溶剂的混合物中)制备该干提取物的新鲜溶液；因此，该实施方式使得能够以期望的浓度制备狭叶豆蔻或唤妍草植物的绿色干提取物的溶液；i)最后，可对上述提取物的多种溶液进行包装，以待将其用于期望的化妆品组合物的制造；在这种情况下，建议在包装在适当体积的瓶中之前，先在0.22μm孔径的过滤器上进行灭菌过滤，然后在冷藏室(例如在4℃下)中存储。平均而言，从1kg的经研磨的唤妍草或狭叶豆蔻种子中，以1wt％的干物质获得了约3kg-3.5kg的处于丁二醇中的提取物，相当于30g-35g的干提取物。获得的质量提取产率平均为35％，计算如下：质量产率＝最终提取物中含有的干提取物质量×100/开始时引入的经研磨的种子质量。根据本发明的实施例2按照本发明用二醇(例如丁二醇)提取的狭叶豆蔻或唤妍草的种子的绿色提取物的工业中试规模的制备实施例。1)中试规模测试将中试规模测试设计为根据下面描述的中试规模测试1、2和3标记的3批种子g1、g2和g3以及适当的过滤系统，对每次中试规模测试10kg的来自马达加斯加的狭叶豆蔻种子进行加工。2)在中试规模测试中根据本发明的提取程序用由100％丁二醇组成的极性溶剂从狭叶豆蔻干种子制备根据本发明的提取物，所述干种子通过首先在室温下于丁二醇中温和浸渍12-15小时将植物浸透，事先按常规方式以1/1.75的植物/溶剂比(m/v)进行研磨，以使感兴趣的分子更具可及性和可用性。进行第一过滤步骤以获得滤液1。在55℃下对饼进行第二提取3小时，然后在孔隙度为20μm-25μm的过滤器上进行过滤，以获得滤液2。将得到的两种滤液1和滤液2合并，并在0.5μm-0.1μm的过滤器上再次过滤。用丁二醇将所得溶液调节为1％干提取物。结果是澄清的橙黄色二醇溶液。将通过3个中试规模测试获得的3批g1、g2和g3的3种提取物命名为e1、e2和e3。平均而言，10kg的经研磨的种子产生约30kg-35kg的1％dm的处于丁二醇中的提取物(相当于300g-350g干提取物)。获得的质量提取产率平均为35％。计算如下：质量产率＝最终提取物中含有的干提取物质量×100/开始时引入的经研磨的种子质量。3)提取物的物理化学分析3-1)同等干重(dm)：0.96％-1％(9.6g/l-10.0g/l)ph在6.6范围内；同等颜色：7.8-7.9(gardner)实验值87.8–88.9；-3.3--2.5；67.7-69.3。3–2)总多酚：欧洲药典方法2.8.14测试剂量为每份样品0.05g。在可见光中750nm处进行读数。没食子酸当量浓度(g/l)获得0.012g/l-0.016g/l的含量。可观察到，使用e2和e3种子提取物的提取物含量略高。4)总糖的测定蒽酮-硫酸测定方法。在620nm处获得读数。葡萄糖当量含量(％)使用e2和e3种子提取物的提取物含量略高。根据本发明的实施例2的程序(该程序用丁二醇从狭叶豆蔻或唤妍草的种子中获得绿色提取物)与根据us7,381,436的实施例1的程序(该程序从狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子中获得70/30(以体积计)的醇/水提取物)之间的对比实施例33-1)为进行该对比测试，使用了以下两个样本：a)对比批次(称为sx000hh)：马达加斯加狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子，所述种子经过us7,381,436的实施例1中描述的提取程序，该提取程序使用70/30(以体积计)的乙醇/水的水醇混合物作为提取溶剂，并且提取物称为提取物批次sx000hh。b)根据以上本发明实施例2的绿色提取物e2。3-2)实施例2的唤妍草(狭叶豆蔻)的绿色提取物e2通过线粒体对atp合酶亚基6的合成作用对正常人角化细胞(nhk)的抗衰老效果的确定1.简介使用taqman低密度阵列(tlda)技术，评价了与根据先前专利us7,381,436b2的实施例1的乙醇/水(70/30体积)水醇提取物相比，对实施例1的唤妍草(狭叶豆蔻)丁二醇绿色提取物的转录作用的研究。使用该技术，响应于对正常人角化细胞的处理，对编码特定蛋白质的96个基因表达的调节进行了研究。处理24小时后，对细胞单层进行裂解以回收rna。对这些rna进行量化并且归一化以进行逆转录。然后，将所获得的cdna制备用于在nhf、nhk和nhmtlda微流体卡上进行96“时间生物学谱(chronobiologyprofile)”基因分析。2.材料与方法2.1.测试的活性试剂和活性试剂对照的制备根据本发明的活性试剂1：根据以上实施例2的马达加斯加唤妍草种子的100％丁二醇提取物greene2。对比活性试剂2：根据us7,381,436b2实施例1和以上实施例3-1a)的马达加斯加唤妍草种子的etoh/h2o70/30v/v混合物的提取物。对于活性试剂1和活性试剂2，测试的最终浓度为0.0125wt％。2.2.细胞处理该研究是对来自31岁女性供体(代码1477)的腹部整形术的正常人角化细胞进行的。首先，在12孔板中将第4代(p4)的细胞以每孔125000个细胞的密度接种在完全epilife培养基(补充hkgs)中。然后将细胞用0.0125％的perledemadagascargreen以及0.0125％的perledemadagascar以及它们各自的赋形剂对照(bg100％和etoh/h2o70/30v/v)处理。处理4小时后，回收细胞以提取总rna。2.3.taqman低密度阵列(tlda)技术2.3.1.使用microlabstar(hamilton)提取总rna除去细胞培养基，加入250μlrlt裂解缓冲液，所述裂解缓冲液在nucleospinrna示踪试剂盒(产品代码740709，批号1412/001，macherey–nagel)中提供。用细胞刮棒刮下细胞，然后将细胞裂解液回收至1.2ml深孔中(由nucleospinrna试剂盒提供)，根据先前开发的方案(ns_96rna_khn或ns_96rna_fhn.dws)提取总rna。使用与microlabstar偶联的酶标仪spectrostarnano(bmglabtech)测定获得的总rna溶液并检查其质量。该设备连接至控制机器人平台的计算机并且具有用于分析结果的特定软件(mars软件)。该技术需要384孔微孔板(384micro–clear板黑色lobase，产品代码：788876，批号：1305055greiner)、阳性对照(rna250，产品代码：am7155，批号：1301028(nhf)，批号：1208025(nhk)，批号：1208026(nhm)，thermofisher)以验证通过机器人进行的移液以及由spectrostarnano读数器生成的值。2.3.2.互补dna的合成使用的逆转录(rt)试剂盒为高容量逆转录试剂盒(产品代码：4368813，批号：00288647；thermofisher)，并且根据提供的方案进行使用：将500ng总rna在水中稀释至最终体积25μl，然后在25μl如下所示的预先制备的25μl高容量逆转录试剂盒2x反应混合物的存在下，在25℃下孵育10分钟，然后在37℃下孵育2小时。在trobot(biométra)中进行不同的孵育。表2：用于1个反应的高容量逆转录试剂盒2x反应混合物的制备试剂rt缓冲液dntp随机引物探针rnaseout酶rth2o体积5μl2μl5μl0.5μl2.5μl10μl2.3.3.pcr–taqman低密度阵列将15μl的每种rt与60μl的水混合，然后添加75μl的taqman基因表达预混液(taqmangeneexpressionmastermix，产品代码：4369016，批次：1507235；thermofisher)。均质化后，将100μl沉积在96基因时间生物学谱微流体卡(批号b1885(nhf)、批号b1884(nhk)和批号b1942(nhm))上，将其离心，然后密封。将与沉积在板上的基因的谱相对应的cd加载至sds2.4软件中，从而使得能够指定每个基因在卡上的位置。在pcr开始之前，对待用于结果的归一化的对照基因(在软件中称为“内源”基因)进行了标示。根据abiprism7900ht序列检测系统中appliedbiosystems提供的方案进行pcr。qpcr步骤是如下的40个循环：在50℃下2分钟、在94.5℃下10分钟、然后在97℃下30分钟以及在59.7℃下1分钟。2.3.4.结果的统计分析如果其效率在90％-110％之间，可利用实时定量pcr。在rt-pcr/tlda方法中，使用δct(即相对定量(rq))的比较方法进行定量。该方法使用rqmanager软件确定卡上每个基因的ct，所述软件考虑了每个基因的背景噪声。将该ct归一化至在卡上平行研究的管家基因(在我们的研究中是β-2-微球蛋白)的ct。该基因在细胞中不变，其变化反映了实验(总rna测定、移液、逆转录步骤、微流体卡中的沉积物、卡的质量、设备中的pcr)的变化性。用此rqmanager软件，我们获得了rq(相对定量)值，该值对应于与我们的对照相比的表达的幅度水平(比对照大或小x倍)。后者可为未经处理的对照或赋形剂。通过以下计算获得rq(未经处理的值等于1)：rq＝2–δδct＝2–(δct处理–δct未处理)δct处理＝ct处理的靶基因–ct处理的管家基因δct未处理＝ct未处理的靶基因–ct未处理的管家基因为使该方法可靠，必须使感兴趣的基因和管家基因的扩增效率相同。在板的常规使用之前，在开发过程中对此进行了验证。使用学生t检验评价转录活性的统计学显著变化。每个条件以三重复进行(相同条件下的3个未处理和3个处理)。首先通过比较两个数据矩阵来应用fisher的f检验。当值大于α＝0.05时，学生t检验的方差为2，当fisherf检验小于α＝0.05时，则方差等于3。所选择的转录变化为对应于低于α＝0.05的学生t检验的变化。表3：颜色编码表将预期的效果(+表示增加，-表示抑制)考虑在内的标准允许对结果进行首次解释：-如果获得的效果按预期的方向进行，则如上所述应用灰度代码-如果获得的结果与预期的效果相反，则不应用灰度代码，但结果仍然明显，因为它是显著的结果。所有这些数据使我们能够注意到彼此相关的提取物，因为excel宏指示在预期方向上调节的基因的数目/总共调节的基因的数目。在筛选的情况下，可使用该分数作为选择标准。与us7,381,436b2实施例1的乙醇/水70/30vol/vol水醇混合物前的唤妍草相比，根据本发明的实施例2的唤妍草绿色丁二醇提取物e2在4小时后对正常人角化细胞(nhk)的作用有关的结果。表4：唤妍草绿色e2和唤妍草对正常人角化细胞的作用根据本发明的实施例2的唤妍草绿色e2以出乎意料的方式以+2.697的系数增加了通过nhk线粒体进行的atp合酶亚基6的合成。综上所述，由于对nhk进行了上述测试，可证明根据本发明的唤妍草的丁二醇绿色提取物对线粒体功能障碍的显著的修复效果，它可对抗线粒体细胞的老化，从而对抗皮肤衰老。因此，本发明可作为化妆品试剂用于制备局部使用的化妆品组合物，以保持线粒体并对抗皮肤衰老。化妆品组合物制剂的各种实施例在下面以举例说明的方式给出，并且因此决不限制本发明的范围。根据本发明的实施例4用于改善面部紧致度的化妆品凝胶该凝胶可每天一次施用于面部，持续数周以改善面部皮肤(尤其是在有皱纹的区域)的紧致度，从而在该治疗结束时观察到恢复柔性并具有清晰的使皮肤恢复活力的效果并使这些皱纹减弱或消失。根据本发明的实施例5处于乳剂形式的抗皱日霜根据本发明的实施例6抗皱滋补洗剂根据本发明的实施例7用于面部的紫外线防护化妆粉根据本发明的实施例8抗皱治疗粉底当前第1页12