抗PD-1抗体联合IL-15蛋白复合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途的制作方法

抗pd-1抗体或其抗原结合片段和il-15复合物联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
背景技术：
：白细胞介素15(il-15)是grabstein等人于1994年发现的一种约为12-14kd的细胞因子，可在机体正常的免疫应答中发挥作用，如促进t细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞的增殖。il-15需通过与其受体结合发挥生物学活性。il-15受体由三个受体亚基组成：il-15受体α(il-15rα)、il-2受体β(il-2rβ)和γc。il-15rα内含一个sushi结构域，能与il-15结合，并且是使结合后的il-15发挥生物学功能所必需的。近年发现，il-15与其受体il-15rα形成复合物后，可显著增强il-15的生物学活性。由于il-15在肿瘤免疫治疗领域的良好预期，国内外有不少公司或研究机构在从事il-15免疫治疗方面的相关研究，比如cn100334112c(上海海欣生物技术有限公司)专利所涉及的il-15-higg4fc同源二聚体蛋白用于抗微生物感染的治疗；cn103370339b公开了一种il-15n72d:il-15rαsu/fc融合蛋白复合物，其il-15多肽包含n72d突变，该突变体较原始il-15显示减少的对il-15βγc受体结合活性；wo2016095642a公开了一种il-15蛋白复合物，由il-15多肽和il-15rα/fc组成，其在il-15和il-15rα之间引入二硫键，能够提高分子稳定性及生物活性，同时也能够简化制备工艺。pd-1抑制剂是当前备受瞩目的新一类肿瘤免疫治疗药物，目前有多家跨国制药公司在研发针对pd-1/pd-l1信号通路的单克隆抗体，wo2017054646a公开了一种抗pd-1单克隆抗体的序列和制备方法，该抗体已处于临床ⅲ期，安全性良好，已报到的临床研究结果已经显示出其具有一定的抗肿瘤作用([j].journalofclinicaloncology35(2017):e15572-e15572)。联合用药是影响药物作用的重要因素之一。两种或两种以上药物联合应用时,既可以产生协同作用,也可以产生拮抗作用。目前抗pd-1抗体已在临床上和多种药物联用治疗肿瘤，但仍然存在着肿瘤缓解率不高等问题，抗pd-1抗体和il-15蛋白复合物是否能够成功应用于临床仍值得深入研究。技术实现要素：本发明提供一种抗pd-1抗体和il-15或其蛋白复合物联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途，其中所述肿瘤优选黑色素瘤、皮肤癌、淋巴瘤、肾细胞癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、血癌、b细胞瘤、多发性骨髓瘤、b细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性随性白血病、皮肤t细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤、尿路上皮/膀胱癌、肺癌、食道癌、头颈癌、b细胞非霍奇金氏淋巴瘤和鳞状细胞头颈癌。在本发明一个优选的实施方案中，其中所述抗pd-1抗体或其抗原结合片段选自：amp-224、gls-010、ibi-308、regn-2810、pdr-001、bgb-a317、pidilizumab、pf-06801591、genolimzumab、ca-170、medi-0680、js-001、tsr-042、camrelizumab、pembrolizumab、lzm-009、ak-103和nivolumab。在本发明一个优选的实施方案中，其中所述抗pd-1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含分别如seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3所述的pd-1抗体的重链可变区包含分别如seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3。其中，前面所述的各cdr序列如下表所示：名称序列编号hcdr1symmsseqidno：1hcdr2tisgggantyypdsvkgseqidno：2hcdr3qlyyfdyseqidno：3lcdr1lasqtigtwltseqidno：4lcdr2tatsladseqidno：5lcdr3qqvysipwtseqidno：6优选的，所述的抗pd-1抗体或其抗原结合片段为抗pd-1人源化抗体。优选的，人源化抗体轻链可变区序列为如seqidno:10所示的序列或其变体；所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为a43s的氨基酸变化。所述人源化抗体重链可变区序列为如seqidno:9所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为g44r的氨基酸变化。前述的人源化抗体重、轻链的可变区序列如下所示：重链可变区evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssymmswvrqapgkglewvatisgggantyypdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarqlyyfdywgqgttvtvssseqidno：9轻链可变区diqmtqspsslsasvgdrvtitclasqtigtwltwyqqkpgkapklliytatsladgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqvysipwtfgggtkveikseqidno：10优选的，人源化抗体轻链序列为如seqidno:8所示的序列或其变体；所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为a43s的氨基酸变化。所述人源化抗体重链序列为如seqidno:7所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为g44r的氨基酸变化。在本发明一个优选的实施方案中，人源化抗体轻链序列为如seqidno:8所示的序列，重链序列为如seqidno:7所示的序列。前述的人源化抗体重、轻链的序列如下所示：重链evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssymmswvrqapgkglewvatisgggantyypdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarqlyyfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgkseqidno：7轻链diqmtqspsslsasvgdrvtitclasqtigtwltwyqqkpgkapklliytatsladgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqvysipwtfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecseqidno：8在本发明一个优选的实施方案中，其中所述il-15蛋白复合物由可溶性融合蛋白(i)和可溶性融合蛋白(π)组成；其中可溶性融合蛋白(i)包含il-15多肽或其功能性片段；可溶性融合蛋白(π)包含il-15rα多肽或其功能性片段；可溶性融合蛋白(i)或可溶性融合蛋白(π)上具有一个或多个氨基酸位点突变成cys，与对应的可溶性融合蛋白(π)或可溶性融合蛋白(i)氨基酸位点上突变成的cys配对形成二硫键。在本发明一个优选的实施方案中，其中可溶性融合蛋白(π)还包含fc片段或其突变体；优选地，可溶性融合蛋白(π)由il-15rα多肽或其功能性片段连接在fc片段的n端组成；更优选地，所述的fc片段为seqidno：11。epkssdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkseqidno：11在本发明一个优选的实施方案中，其中所述的可溶性融合蛋白(i)的序列为seqidno：12。nwvnvisdlkkiedliqsmhidatlytesdvhpsckvtamkcfllelqviscesgdasihdtvenliilannslssngnvtesgckeceeleeknikeflqsfvhivqmfintsseqidno：12在本发明一个优选的实施方案中，其中所述il-15蛋白复合物的氨基酸cys突变位点发生在il-15多肽或其功能性片段上的l45、q48、v49、l52、e53、c88或e89上，优选发生在l52、e53或e89上，更优选l52。在本发明一个优选的实施方案中，其中所述il-15蛋白复合物氨基酸cys突变位点发生在il-15rα多肽或其功能性片段上的k34、l42、a37、g38或s40上，优选发生在a37、g38或s40上，更优选s40。在本发明一个优选的实施方案中，其中可溶性融合蛋白(π)的序列选自seqidno：13、seqidno：14、seqidno：15或seqidno：16，优选seqidno：13或seqidno：14。itcpppmsvehadiwvksyslysreryicnsgfkrkagtcsltecvlnkatnvahwttpslkcirdpalvhqrpappstvttagvtpqpeslspsgkepaasspssnntaattaaivpgsqlmpskspstgtteisshesshgtpsqttaknweltasashqppgvypqghsdttggggsggggsepkssdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkseqidno：13epkssdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkggggsggggsitcpppmsvehadiwvksyslysreryicnsgfkrkagtcsltecvlnkatnvahwttpslkcirdpalvhqrpappstvttagvtpqpeslspsgkepaasspssnntaattaaivpgsqlmpskspstgtteisshesshgtpsqttaknweltasashqppgvypqghsdttseqidno：14itcpppmsvehadiwvksyslysreryicnsgfkrkagtcsltecvlnkatnvahwttpslkcirdpalvhqrggggsggggsepkssdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkseqidno：15epkssdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkggggsggggsitcpppmsvehadiwvksyslysreryicnsgfkrkagtcsltecvlnkatnvahwttpslkcirdpalvhqrseqidno：16在本发明一个优选的实施方案中，所述il-15蛋白复合物选自如下可溶性融合蛋白(i)和可溶性融合蛋白(π)的组合：在本发明一个优选的实施方案中，其中所述结直肠癌接受过手术治疗。在本发明一个优选的实施方案中，其中所述结直肠癌接受过5-氟尿嘧啶、亚叶酸钙、卡培他滨、伊立替康、奥沙利铂、贝伐单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、阿柏西普和瑞格菲尼中一种或多种组合治疗。在本发明一个优选的实施方案中，所述的抗pd-1抗体或其抗原结合片段剂量选自1-10mg/kg，优选自1mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg，最优选3mg/kg。在本发明一个优选的实施方案中，所述的抗pd-1抗体或其抗原结合片段剂量选自50-600mg，优选自60mg、100mg、200mg、400mg、600mg，最优选200mg。在本发明一个优选的实施方案中，其中所述的il-15或其蛋白复合物剂量选自1-100ug/kg，优选自1ug/kg、2ug/kg、3ug/kg、4ug/kg、5ug/kg、6ug/kg、7ug/kg、8ug/kg、9ug/kg、10ug/kg、11ug/kg、12ug/kg、13ug/kg、14ug/kg、15ug/kg、16ug/kg、17ug/kg、18ug/kg、19ug/kg、20ug/kg、21ug/kg、22ug/kg、23ug/kg、24ug/kg、25ug/kg、26ug/kg、27ug/kg、28ug/kg、29ug/kg、30ug/kg、31ug/kg、32ug/kg、33ug/kg、34ug/kg、35ug/kg、36ug/kg、37ug/kg、38ug/kg、39ug/kg、40ug/kg、41ug/kg、42ug/kg、43ug/kg、44ug/kg、45ug/kg、46ug/kg、47ug/kg、48ug/kg、49ug/kg、50ug/kg、55ug/kg、60ug/kg、65ug/kg、70ug/kg、75ug/kg、80ug/kg、85ug/kg、90ug/kg、95ug/kg、100ug/kg。在本发明优选的实施方案中，所述的抗pd-1抗体或其抗原结合片段以注射的方式给药，例如皮下或静脉注射，注射前需将抗pd-1抗体或其抗原结合片段配制成可注射的形式。特别优选的抗pd-1抗体或其抗原结合片段的可注射形式是注射液或冻干粉针，其包含抗pd-1抗体或其抗原结合片段、缓冲剂、稳定剂，任选地还含有表面活性剂。缓冲剂可选自醋酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、以及磷酸盐中的一种或几种。稳定剂可选自糖或氨基酸，优选二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖。表面活性剂选自聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，优选所述聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯为聚山梨酯20、40、60或80，最优选聚山梨酯20。最为优选的抗pd-1抗体或其抗原结合片段的可注射形式包含抗pd-1抗体或其抗原结合片段、醋酸盐缓冲剂、海藻糖和聚山梨酯20。在本发明还提供了一种治疗的办法，包括向患者施用前述的有效量的抗pd-1抗体或其抗原结合片段和il-15或其蛋白复合物。本发明还提供了一种药物套组，或者一种药物包装盒，其中含有前述的有效量的抗pd-1抗体或其抗原结合片段和il-15或其蛋白复合物。本发明还提供了一种药物组合物，包含前述的有效量的抗pd-1抗体或其抗原结合片段和il-15或其蛋白复合物，以及一种或多种可药用的赋型剂、稀释剂或载体。发明详述一、术语为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本文件中的它处另有明确定义，否则本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。术语“人源化抗体(humanizedantibody)”，也称为cdr移植抗体(cdr-graftedantibody)，是指将小鼠的cdr序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的抗体可变抗体反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共dna数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系dna序列可以在“vbase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在kabat，e.a.等人，1991sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版中找到。在本发明一个优选的实施方案中，所述的pd-1人源化抗体小鼠的cdr序列选自seqidno:1，2，3，4，5，6。术语“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的fab片段，fab‘片段，f(ab’)2片段，以及与人pd-1结合的fv片段sfv片段；包含本发明所述抗体的选自seqidno:1至seqidno:6中的一个或多个cdr区。fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，fv抗体还包含在vh和vl结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(singlechainantibody)或单链fv(sfv)。本发明的术语“与pd-1结合”，指能与人pd-1相互作用。本发明的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本发明抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。本发明所述的“蛋白复合物”或“复合蛋白”是指两个不同的单体蛋白质结合而成的蛋白。本发明中组成蛋白复合物的“单体蛋白质”(即可溶性融合蛋白(i)、可溶性融合蛋白(π))可以是融合蛋白或非融合蛋白。本发明所述的“融合蛋白”是指，通过用基因重组方法、化学方法或其它适当方法将两个或多个基因的编码区连接，在同一调控序列控制下表达基因重组所得的蛋白质产物。在本发明的一些实施方案中，可溶性融合蛋白(i)为il-15或其变体与生物活性多肽如fc片段融合或非融合表达得到的单体蛋白质；可溶性融合蛋白(π)为il-15rα或其变体与生物活性多肽如fc片段融合或非融合表达得到的单体蛋白质。本发明的融合蛋白中，两个或多个基因的编码区之间可由编码肽接头的序列于一个或数个位置融合。肽接头也可用于构建本发明的融合蛋白。本发明所述的il-15或功能性片段可以是任何il-15(白介素15)或其突变体，如人il-15或非人哺乳动物il-15或非哺乳动物il-15。示例性非人哺乳动物如猪、兔、猴、猩猩、鼠等，非哺乳动物如鸡等。优选为人的il-15及其功能性片段。人白介素15成熟分子见数据库uniprotkb，登录号p40933，49-162aa。“il-15功能性片段”指通过一个或多个氨基酸替换、增加或者缺失突变获得的对il-15生物功能有影响或其他性质发生改变的突变体，通过这类氨基酸变化可以增加或者降低il-15与其受体il-15rα或il-15rβ之间的相互作用能力；或者增加或者降低il-15生物学活性比如其刺激免疫细胞增殖活性；或者通过氨基酸突变在il-15和其受体之间建立共价键或者使共价连接更加稳定等。如il-15(l52c)，即在52位上亮基酸l被半胱氨酸c替换，通过该位点和il-15rα对应某个氨基酸突替换成c并与之形成二硫键。本发明所述的il-15rα或功能性片段可以是任何物种的il-15rα或者其功能性片段，如人il-15rα或非人哺乳动物il-15rα或非哺乳动物il-15rα。示例性非人哺乳动物如猪、兔、猴、猩猩、鼠等，非哺乳动物如鸡等。优选人的il-15rα，更优选的是人的il-15rα胞外区部分，简称il-15rαecd，见数据库uniprotkb，登录号q13261，31-205aa。术语“il-15rα功能性片段”，优选il-15rα胞外域片段的缩短形式，即通过一个或多个氨基酸替换、插入或者缺失突变所得的包含sushi结构域的具有人白介素15受体α活性的分子，如il-15rα-sushi+。术语“fc片段”指的是人免疫球蛋白链恒定区，特别是免疫球蛋白重链恒定区的羧基端或其中的一部分，无抗原结合活性，是抗体分子与效应分子和细胞相互作用的部位。例如，免疫球蛋白fc区可包括重链ch1、ch2、ch3、ch4的两个或更多结构域与免疫球蛋白铰链区的组合。根据重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分为不同的种类，主要有5类免疫球蛋白：iga、igd、ige、igg和igm。其中一些还可进一步分成亚类(同种型)，如igg-1、igg-2、igg-3、igg-4；iga-1和iga-2以及不同的基因型。“fc片段”优选包括至少一个免疫球蛋白绞链区，以及igg的ch2和ch3区。更优选包括igg1的一个ch2结构域，一个ch3结构域和一个免疫球蛋白绞链区，铰链区起始氨基酸位置可以变动。本发明中所述的“联合”是一种给药方式，是指在一定时间期限内给予至少一种剂量的抗pd-1抗体或其抗原结合片段和至少一种剂量的il-15复合物，其中两种物质都显示药理学作用。所述的时间期限可以是一个给药周期内，优选4周内，3周内，2周内，1周内，或24小时以内。可以同时或依次给予抗pd-1抗体或其抗原结合片段和il-15复合物。这种期限包括这样的治疗，其中通过相同给药途径或不同给药途径给予给予抗pd-1抗体或其抗原结合片段和il-15复合物。附图说明图1.il-15融合蛋白和pd-1单独或联合给药对小鼠肿瘤体积的影响。图2.il-15融合蛋白和pd-1单独或联合给药对小鼠体重的影响。具体实施方式以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。1、实验目的：本实验在人pd-1转基因小鼠皮下接种小鼠mc38系结肠癌细胞建立肿瘤模型，通过肿瘤的体积及小鼠体重来评价联合用药对抗肿瘤作用及其安全性。联合药物治疗是腹腔给予一定剂量的抗pd-1抗体，同时静脉注射一定剂量的il-15融合蛋白。2、实验材料和方法：2.1实验动物和材料：人pd-1转基因小鼠：42只，由cephrim公司动物中心繁殖，原始的3对人pd-1转基因小鼠购自英国的isis公司，spf级饲养。溶媒：5％葡萄糖，pbs人igg：来自血清(sigma-aldrich)，产品编号：i4506-50mg抗pd-1抗体：其重、轻链的序列如本发明中seqidno：7和seqidno：8，冻干粉，注射用水溶解后，再用5％葡萄糖稀释，最终浓度为0.3mg/ml，批号p1636。il-15融合蛋白：由江苏恒瑞医药提供，序列如编号3所述，其由可溶性融合蛋白(i)(seqidno：12)和可溶性融合蛋白(π)(seqidno:15)组成，注射用水溶解后，再用pbs稀释，最终浓度为25μg/ml，批号p1640。mc38细胞：dmem培养基，10％胎牛血清，37℃，5％co2培养。选择用于植入的细胞符合以下四个标准：1)快速生长；2)传代次数少；3)接种前一天更换培养基和4)具有高生存力。2.2实验方法：在接种当天收获mc38细胞，将细胞(5x105)接种于42只人pd-1转基因小鼠(雌雄都有)右肋部皮下，待小鼠平均肿瘤体积达到100mm3左右时，选取32只，随机分成4组，每组8只。分组后根据方案给予腹腔注射(ip)抗pd-1抗体，及静脉注射(iv)il-15融合蛋白。每周两次测量肿瘤体积，称体重，记录数据，肿瘤体积变化率见图1，小鼠体重变化率见图2。2.3实验分组及给药方案表1：实验分组及给药方案分组剂量给药方案给药方式组1对照(higg和溶媒)3mg/kgq2d×7ip组2pd-13mg/kgq2d×7ip组3il-15融合蛋白5μg/只qw×3iv组4pd-1+il-15融合蛋白3mg/kg+5μg/只q2d×7+qw×3ip+iv注：q2d×7：两天一次，给药7次；qw×3：一周一次，给药3次；3、数据表达和统计学处理各组动物的体重、肿瘤体积及瘤重，数据用平均值±标准差(mean±sem)表示，t-test对数据进行统计学分析。肿瘤体积计算公式：体积＝0.5236×长×短×高4、实验结果表2.肿瘤体积(mm3)**p<0.01vs.组1；#p<0.05vs组3。结论：与对照组相比，pd-1和il-15联合给药肿瘤体积抑制率显著上升，小鼠体重变化基本相同。序列表<110>江苏恒瑞医药股份有限公司苏州盛迪亚生物医药有限公司<120>抗pd-1抗体联合il-15蛋白复合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途<160>16<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>5<212>prt<213>鼠源(musmusculus)<400>1sertyrmetmetser15<210>2<211>17<212>prt<213>鼠源(musmusculus)<400>2thrileserglyglyglyalaasnthrtyrtyrproaspservallys151015gly<210>3<211>7<212>prt<213>鼠源(musmusculus)<400>3glnleutyrtyrpheasptyr15<210>4<211>11<212>prt<213>鼠源(musmusculus)<400>4leualaserglnthrileglythrtrpleuthr1510<210>5<211>7<212>prt<213>鼠源(musmusculus)<400>5thralathrserleualaasp15<210>6<211>9<212>prt<213>鼠源(musmusculus)<400>6glnglnvaltyrserileprotrpthr15<210>7<211>443<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<220><221>peptide<222>(1)..(443)<223>重链序列<400>7gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr202530metmetsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alathrileserglyglyglyalaasnthrtyrtyrproaspserval505560lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr65707580leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargglnleutyrtyrpheasptyrtrpglyglnglythrthrval100105110thrvalserseralaserthrlysglyproservalpheproleuala115120125procysserargserthrsergluserthralaalaleuglycysleu130135140vallysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasnsergly145150155160alaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleuglnserser165170175glyleutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleu180185190glythrlysthrtyrthrcysasnvalasphislysproserasnthr195200205lysvalasplysargvalgluserlystyrglyproprocyspropro210215220cysproalaproglupheleuglyglyproservalpheleuphepro225230235240prolysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthr245250255cysvalvalvalaspvalserglngluaspprogluvalglnpheasn260265270trptyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarg275280285glugluglnpheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrval290295300leuhisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalser305310315320asnlysglyleuproserserileglulysthrileserlysalalys325330335glyglnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserglnglu340345350glumetthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphe355360365tyrproseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnproglu370375380asnasntyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphe385390395400pheleutyrserargleuthrvalasplysserargtrpglnglugly405410415asnvalphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyr420425430thrglnlysserleuserleuserleuglylys435440<210>8<211>214<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<220><221>peptide<222>(1)..(214)<223>轻链序列<400>8aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysleualaserglnthrileglythrtrp202530leuthrtrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrthralathrserleualaaspglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnvaltyrserileprotrp859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>9<211>116<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<220><221>peptide<222>(1)..(116)<223>重链可变区<400>9gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr202530metmetsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alathrileserglyglyglyalaasnthrtyrtyrproaspserval505560lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr65707580leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargglnleutyrtyrpheasptyrtrpglyglnglythrthrval100105110thrvalserser115<210>10<211>107<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<220><221>peptide<222>(1)..(10)<223>轻链可变区<400>10aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysleualaserglnthrileglythrtrp202530leuthrtrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrthralathrserleualaaspglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnvaltyrserileprotrp859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelys100105<210>11<211>232<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>11gluprolysserserasplysthrhisthrcysproprocysproala151015progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro202530lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval354045valaspvalserhisgluaspprogluvallysphe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