甘草水提液在治疗海洛因肾组织损伤中的用途的制作方法

本发明涉及一种中药水提液，尤其涉及一种抗海洛因肾组织损伤的甘草水提液。

背景技术：

海洛因即二乙酰吗啡，是阿片类药物中滥用最广泛、依赖性最强的药物，极易透过血脑屏障与中枢神经系统和周围组织中的阿片受体结合，具有较强的镇痛作用，并对中枢神经有强烈的激动作用，如果长期使用或使用不当，会产生心理与生理依赖及严重的药物依赖，过度兴奋中枢神经系统，干扰机体抗氧化系统的平衡和相关特异蛋白的正常表达，对机体组织结构有病理性损伤，严重影响机体神经、呼吸、免疫、循环等器官系统的结构，并会导致吸食者产生焦躁不安、沮丧、颓废、抑郁、心烦、自闭等心理问题。因此，研究中草药对动物或人体的保护作用，研发对机体无毒副作用和抗药物损伤的中药制剂，对于医学事业的发展具有重要意义。

现阶段国内外普遍使用美沙酮、可乐定等药来消除兴奋剂成瘾或戒断症状，但这些药物本身存在着一定的成瘾性和耐药性问题。研究显示目前还没有特殊疗效的抗海洛肾组织损伤的中药物，因此选取毒副作用小、依赖性小及耐药性小的中药，对于减少或降低兴奋性药物对机体组织器官造成的损伤具有重要意义。

技术实现要素：

本发明提供一种抗海洛因肾组织损伤的甘草水提液，以达到抗海洛因损伤，保护组织细胞，促进组织细胞修复的目的。

本发明的甘草水提液在抗海洛因肾组织损伤中的用途就是甘草水提液作为治疗海洛因肾组织损伤中的应用，该甘草水提液的浓度为含生药量0.2~0.4g/ml。

本发明研究发现，甘草水提液能使体重、肾重及肾指数增加，能降低血浆肌酐、尿酸含量，能提高细胞na⁺-k⁺atp、ca²⁺-mg²⁺atp酶活性，能降低肾组织乳酸脱氢酶（ldh）活性和mda含量，能保护细胞膜、维持细胞内外离子平衡，可提高肾组织过氧化氢酶活力，能增强肾组织水通道蛋白（aqp2）的表达，能有效减少海洛因引起的肾组织细胞损伤，减轻和修复海洛因造成的损害，对海洛因所致的肾组织损伤有良好的保护作用。

本发明生产制备工艺简单，无污染，投资少，药物价廉，取材方便。具有疗效高，无毒副作用，服用方便等特点，适宜疗养院、医院及家庭使用。

附图说明

图1为甘草水提液对海洛因肾组织损伤和aqp2蛋白表达的影响；图中：

a．空白对照组10d肾皮质，he染色；

b．海洛因组15d肾皮质，毛细血管球严重固缩，肾小管肿胀，坏死，细胞核降解；

c．甘草组10d肾皮质，肾脏近曲小管和远曲小管较完整；

d．甘草组15d肾皮质，肾近曲小管有轻微肿胀；

e．空白对照组15d肾皮质，aqp2蛋白在近端小管和远端小管呈强阳性表达；

f．海洛因组10d肾皮质，aqp2蛋白在肾近曲小管和远曲小管有表达；

g．甘草组15d肾皮质，aqp2蛋白在近端小管和远端小管呈强阳性表达；

h．甘草组15d肾髓质，aqp2在集合管呈强阳性表达；

dt．远曲小管；pt．近曲小管；rc．肾小球；标尺=30μm。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明。

药液制备

甘草水提液制备方法为：取甘草原药材100g，加水1l浸泡1h后煮沸30min，滤过药汁，药渣再加水煎煮30min滤过药汁，合并两次药液，再用旋转蒸发仪将该煎剂浓缩制成0.2~0.4g/ml的生药水煎液。

甘草水提液对海洛因肾组织损伤的保护作用

选出生8d龄昆明小鼠90只(兰州大学医学动物中心)，实验前适应性饲养7d，然后随机分为空白对照组、实验对照（海洛因）组和甘草（海洛因+甘草）组，实验对照组和甘草组在l-5、6-10、11-15d用递增剂量(2、3、4g/l)腹腔注射海洛因溶液15d，每次注射0.2ml，每天两次(9:20am，16:20pm)，注射海洛因半小时后甘草组灌胃0.2ml/10g体重(1ml含生药0.2g)的甘草水提液，海洛因组灌胃等量的生理盐水，空白对照组腹腔注射和灌胃等量的生理盐水；在实验5d、10d和15d时，处死各组小鼠，用电子天平称量小鼠体重和肾重的变化，计算肾指数的变化，用比色法和v-5000可见分光光度计检测血浆尿酸（ua）和肌酐（cr）与肾组织丙二醛（mda）含量及过氧化氢酶（cat）、na⁺-k⁺atp酶、ca²⁺-mg²⁺atp酶、乳酸脱氢酶（ldh）活性的变化，用石蜡包埋法和he染色法观察小鼠肾组织结构的病理变化，用免疫组织化学法检测肾组织水通道蛋白（aqp2）表达量的变化，用image-proplus6.0图像分析软件检测水通道蛋白（aqp2）在肾组织中阳性反应产物的平均光密度，实验数据用spss13.0进行统计分析，结果以平均值±标准差(mean±sd)表示，研究甘草水提液对海洛因致肾组织损伤的影响。研究发现实验对照（海洛因）组小鼠体重、肾重均降低（p＜0.05，p＜0.01），血浆ua和cr含量明显升高（p＜0.05，p＜0.01），肾组织mda含量升高，肾组织过氧化氢酶、na⁺-k⁺atp酶、ca²⁺-mg²⁺atp酶活性极显著降低(p<0.01)，乳酸脱氢酶（ldh）活性显著升高（p＜0.05，p＜0.01），肾组织病理性损伤明显，肾小体毛细血管球固缩、肾小体轮廓模糊，细胞核染色加深，出现降解和明显的凋亡，肾小管扩张，上皮细胞变性、甚至空泡化、降解，aqp2蛋白阳性表达的平均光密度值明显减少，染色变浅（p＜0.05，p＜0.01）。而甘草（海洛因+甘草）组小鼠体重、肾重又增加（p＜0.05，p＜0.01），血浆ua和cr含量均又降低（p＜0.05，p＜0.01），肾组织过氧化氢酶、na⁺-k⁺atp酶、ca²⁺-mg²⁺atp酶活性又极显著升高（p＜0.05，p＜0.01），肾组织乳酸脱氢酶（ldh）活性和mda含量又降低（p＜0.05，p＜0.01），甘草组小鼠肾皮质和髓质损伤都有不同程度的减轻和修复，肾小管和集合管管腔较规整，细胞膜完整，细胞核清晰可见，aqp2蛋白阳性表达的平均光密度值明显增加，染色加深(p<0.01或p<0.05)。结果见图1，表1~5。

表1小鼠体重、肾重和肾指数的变化

表2血浆尿酸、肌酐含量的变化

表3肾组织过氧化氢酶、乳酸脱氢酶、na⁺-k⁺atp酶、ca²⁺-mg²⁺atp酶活性和丙二醛含量的变化

*p＜0.05，**p＜0.01与空白对照组比较；^#p＜0.05，^##p＜0.01与实验对照组比较。

表4肾组织aqp2蛋白表达的变化

表5肾小球直径的变化

综上所述，甘草水提液能使小鼠体重、肾重及肾指数增加（表1），能降低血浆肌酐、尿酸含量（表2），能提高细胞na⁺-k⁺atp、ca²⁺-mg²⁺atp酶活性，降低肾组织乳酸脱氢酶（ldh）活性和mda含量，能保护细胞膜、维持细胞内外离子平衡，可提高肾组织过氧化氢酶活力（表3），能增强肾组织aqp2蛋白的表达（表4），能有效减少海洛因引起的肾组织细胞损伤，减轻和修复海洛因造成的损害（图1，表5），对海洛因所致的肾组织损伤有良好的保护作用。且使用安全，无依赖性，无明显毒副作用。