一种洛神葵中取抗腐败菌的活性成分的制备方法及应用与流程

本发明涉及生物技术提取领域，尤其是涉及一种洛神葵中取抗腐败菌的活性成分的制备方法及应用。

背景技术：

以植物提取物作为活性成分配制的化妆品与传统化妆品相比，植物提取物制成的化妆品更容易被皮肤有效地吸收，也不会在体内产生沉积。这类化妆品针对性强，长时间使用也不会产生副作用。所以，植物提取物在化妆品行业的市场前景有不断增加的趋势。另外，植物提取物具有许多明显的优势:来源广、作用机理针对性强。特别是随着现代提取技术和分析技术的进步，其功效成分及相关作用机理已逐渐被人们发现并证实，在防晒、美白、抗衰老、杀菌等方面疗效显著，可以广泛地应用于各类化妆品中。

洛神花，木槿属的一种多年生植物作为一种商业植物生长在世界各地，洛神花花因富含维生素c、氨基酸、有机酸、黄酮类花青苷等大量营养成分而被广泛用于生产草药饮料、果冻、果酱和糕点等食品。现代药理和临床医学表明，洛神花具有清热解暑、调节免疫、降血压、降血脂等功效。除此之外，年来国内外的研究发现，它还具有抗氧化、抗肿瘤和抗菌等作用。因此洛神花具有较高的经济价值，可用于不同用途。

专利号cn201711391683.8，专利名称为“一种复合植物提取物及其在化妆品防腐剂的应用”，本发明公开了一种复合植物提取物化妆品防腐剂，由如下原料混合组成：洋蔷薇花提取物、野草莓叶提取物、樱桃叶提取物，三者的质量比为1-3：1-5：1-10。

其不足之处在于，上述为多种植物抗菌提取物，制备工艺复杂，需要多种抗菌提取物协同才能达到抗菌效果，抗菌效率低。

技术实现要素：

本发明是为了克服现有技术的制备工艺复杂、抗菌效率低及抗腐败菌种类有限的问题，提供一种洛神葵中取抗腐败菌的活性成分的制备方法及应用，洛神花中的活性物质进行提取，丰富了植物抗菌剂的种类，为化妆品产品尤其是口红提供优异的防腐抗菌性能，同时避免了传统防腐剂对皮肤的刺激，从而大幅度降低化妆品的使用过敏率，该提取方法简单有效，制备效率高。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种洛神葵中取抗腐败菌的活性成分的制备方法，包含如下步骤：

i、洛神花抗菌物质提取：将洛神花磨成粉末后用超声辅助萃取技术对其抗菌物质进行提取；

ii、抗菌活性筛选：用琼脂溶出法筛选神花粗提物抗菌活性，加入洛神花提取物，让其充分扩散至培养基中，36-38℃培养16-18h，将粗体物添加至含有菌株的培养基，培养观察并测量抑菌圈直径的大小。

作为优选，步骤i所述的提取方法为醇提或水提。

作为优选，所述醇提包括以下步骤：

（1）、粉末与乙醇混合，二者质量混合比例为1:5-20，超声处理10-40分钟，然后在130-160rpm，36-38℃下孵育20-30h；

（2）、过滤，再次旋转蒸发过滤，除去乙醇；

（3）、浓缩物在40-50℃烘箱中除去多余乙醇，通过添加10-30％的二甲基亚砜，测定提取物的含量，使得提取物最终浓度10-30％。

作为优选，步骤（2）中旋转蒸发过滤温度为40-50℃。

作为优选，所述水提包括以下步骤：

a、粉末与水混合，超声处理10-40分钟，水浴10-40分钟，然后在130-160rpm，孵育20-30小时；

b、过滤，再在50-60℃条件下除水；

c、在提取液中加入水，得到最终浓度的抗腐败菌提取液。

作为优选，步骤a中粉末与水混合比例为1:5-20。

作为优选，步骤a中所述水浴温度为90-92°c。

作为优选，步骤a中孵育温度为36-38℃。

作为优选，步骤c中抗腐败菌提取液的最终浓度为10-30％。

所述一种从洛神葵中提取抗腐败菌的活性成分在化妆品中的应用。

醇提和水提都能从洛神花中提取出抗腐败菌的活性成分，且提取纯度高，洛神花中的提取物作为活性成分添加在口红中可以有效防止因微生物的污染而引起的变质；相比于现有的大量使用人工合成化学防腐剂相比有了很大突破，洛神花提取物更加天然；相比于合成的抗腐败物质，从洛神花中提取的活性物质更加天然，更有保障，避免了传统防腐剂对皮肤刺激及过敏现象。

因此，本发明具有如下有益效果：

（1）洛神花中的活性物质进行提取，将提取物作为活性成分添加在口红中可以有效防止因微生物的污染而引起的变质，同时洛神花中色素的应用也可以增加口红的色泽。

（2）相比于现有的大量使用人工合成化学防腐剂相比有了很大突破，洛神花提取物更加天然，丰富了植物抗菌剂的种类；

（3）相比于合成的抗腐败物质，从洛神花中提取的活性物质更加天然，更有保障，同时避免了传统防腐剂对皮肤的刺激和敏率现象的发生；

（4）并且该提取工艺的流程简单，可控性好，提取效率高，易于实际大规模工业化量产，制得的抗菌提取物收率高，纯度高。

附图说明

图1是洛神葵中取抗腐败菌的活性成分在大肠杆菌上的抑菌圈图。

图2是洛神葵中取抗腐败菌的活性成分在金黄色葡萄球菌上的抑菌圈图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步的描述。

实施例1

一种洛神葵中取抗腐败菌的活性成分的制备方法，包含如下步骤：

i、洛神花抗菌物质提取：将洛神花磨成粉末后用超声辅助萃取技术对其抗菌物质进行醇提；

所述醇提包括以下步骤：

（1）、将1g粉末与10g乙醇混合，声处理25分钟，然后在145rpm，37℃下孵育25h；

（2）、过滤，再次旋转蒸发过滤，旋转蒸发过滤温度为45℃，除去乙醇；

（3）、浓缩物在45℃烘箱中除去多余乙醇，通过添加20％的二甲基亚砜，测定提取物的含量，使得提取物最终浓度20％。

ii、抗菌活性筛选：用琼脂溶出法筛选神花粗提物抗菌活性，加入洛神花提取物，让其充分扩散至培养基中，37℃培养13h，将粗体物分别添加至含有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌株的培养基，培养观察并测量抑菌圈直径的大小。

结果：洛神花提取物对大肠杆菌的抑菌范围是21.1±1.3mm，对金黄色葡萄球菌的抑制范围是21.5±2.1mm，铜绿假单胞菌的抑制范围时23.4±1.4mm。

实施例2

与实施例1的区别在于，所述醇提包括以下步骤：

（1）、将1g粉末与5g乙醇混合，超声处理10分钟，然后在130rpm，36℃下孵育20h；

（2）、过滤，再次旋转蒸发过滤，旋转蒸发过滤温度为40℃，除去乙醇；

（3）、浓缩物在40℃烘箱中除去多余乙醇，通过添加10％的二甲基亚砜，测定提取物的含量，使得提取物最终浓度10％。

ii、抗菌活性筛选：用琼脂溶出法筛选神花粗提物抗菌活性，加入洛神花提取物，让其充分扩散至培养基中，36℃培养16h，将粗体物分别添加至含有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌株的培养基，培养观察并测量抑菌圈直径的大小。

结果：洛神花提取物对大肠杆菌的抑菌范围是21.8±1.4mm，对金黄色葡萄球菌的抑制范围是21.0±1.9mm，铜绿假单胞菌的抑制范围时22.9±1.4mm。

实施例3

与实施例1的区别在于，所述醇提包括以下步骤：

（1）、将1g粉末与20g乙醇混合，超声处理40分钟，然后在160rpm，38℃下孵育30h；

（2）、过滤，再次旋转蒸发过滤，旋转蒸发过滤温度为50℃，除去乙醇；

（3）、浓缩物在50℃烘箱中除去多余乙醇，通过添加30％的二甲基亚砜，测定提取物的含量，使得提取物最终浓度30％。

ii、抗菌活性筛选：用琼脂溶出法筛选神花粗提物抗菌活性，加入洛神花提取物，让其充分扩散至培养基中，36℃培养16h，将粗体物分别添加至含有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌株的培养基，培养观察并测量抑菌圈直径的大小。

结果：洛神花提取物对大肠杆菌的抑菌范围是20.8±1.3mm，对金黄色葡萄球菌的抑制范围是21.8±1.6mm，铜绿假单胞菌的抑制范围时23.2±1.2mm。

实施例4

与实施例1的区别在于，一种洛神葵中取抗腐败菌的活性成分的制备方法，包含如下步骤：i、洛神花抗菌物质提取：将洛神花磨成粉末后用超声辅助萃取技术对其抗菌物质进行水提；

所述水提包括以下步骤：

a、将1g粉末与12g水混合，超声处理20分钟，91°c水浴30分钟，然后在150rpm，37℃孵育25小时；

b、过滤，再在55℃条件下除水；

c、在提取液中加入水，得到最终浓度的抗腐败菌提取液，抗腐败菌提取液的最终浓度为15％。

ii、抗菌活性筛选：用琼脂溶出法筛选神花粗提物抗菌活性，加入洛神花提取物，让其充分扩散至培养基中，37℃培养17h，将粗体物分别添加至含有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌株的培养基，培养观察并测量抑菌圈直径的大小。

结果：洛神花提取物对大肠杆菌的抑菌范围是22.8±1.3mm，对金黄色葡萄球菌的抑制范围是21.6±1.7mm，铜绿假单胞菌的抑制范围时22.4±1.2mm。

实施例5

与实施例4的区别在于，所述水提包括以下步骤：

a、将1g粉末与5g水混合，超声处理10分钟，90°c水浴10分钟，然后在130rpm，36℃孵育20小时；

b、过滤，再在50℃条件下除水；

c、在提取液中加入水，得到最终浓度的抗腐败菌提取液，抗腐败菌提取液的最终浓度为10％。

ii、抗菌活性筛选：用琼脂溶出法筛选神花粗提物抗菌活性，加入洛神花提取物，让其充分扩散至培养基中，36、℃培养16h，将粗体物分别添加至含有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌株的培养基，培养观察并测量抑菌圈直径的大小。

结果：洛神花提取物对大肠杆菌的抑菌范围是22.4±1.6mm，对金黄色葡萄球菌的抑制范围是21.7±1.2mm，铜绿假单胞菌的抑制范围时22.2±1.6mm。

实施例6

与实施例4的区别在于，所述水提包括以下步骤：

a、将1g粉末与20g水混合，超声处理40分钟，92°c水浴40分钟，然后在160rpm，38℃孵育30小时；

b、过滤，再在60℃条件下除水；

c、在提取液中加入水，得到最终浓度的抗腐败菌提取液，抗腐败菌提取液的最终浓度为30％。

ii、抗菌活性筛选：用琼脂溶出法筛选神花粗提物抗菌活性，加入洛神花提取物，让其充分扩散至培养基中，38℃培养18h，将粗体物分别添加至含有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌株的培养基，培养观察并测量抑菌圈直径的大小。

结果：洛神花提取物对大肠杆菌的抑菌范围是23.2±1.2mm，对金黄色葡萄球菌的抑制范围是21.4±1.5mm，铜绿假单胞菌的抑制范围时22.4±1.8mm。

图1和图2中1位洛神花提取物，0为阴性对照（蒸馏水）；观察抑菌区域，测量抑菌直径，洛神葵中取抗腐败菌的活性成分在大肠杆菌上的抑菌圈的抑菌圈直径为21.1±1.3mm，洛神葵中取抗腐败菌的活性成分在金黄色葡萄球菌上的抑菌圈直径21.5±2.1mm，说明洛神葵中取抗腐败菌的活性成分具有较好的抗菌效果。

洛神葵提取物的抑菌作用机制是通过抑制细胞壁的合成、干扰细胞膜的合成、抑制蛋白质和核酸的合成；植物提取物对膜电位的破坏、细胞质ph值的降低、钾的渗漏和atp生成的停止也是被提出的抑菌作用机制之一。

用洛神花提取物处理过的细胞胞质ph有明显的下降，而胞质ph的改变也表明细菌细胞膜的损坏。而破坏细菌细胞的膜电位也可能是因为洛神花提取物导致的钾离子的选择性的外流。用洛神花的提取物处理过的细菌细胞会导致细胞质ph值降低至酸性水平以及细胞膜的超级化。细胞质ph神花提取物抗菌活性高的关键是提取物中含有高总酚类化合物。细胞质ph值的下降和超极化则是洛神花提取物对微生物产生杀菌作用的可能机制之一。

因此，从洛神葵中提取抗腐败菌的活性成分能够在化妆品中得到很好的应用，具有较好的防腐败作用，对口红防腐的同时会增加口红的色泽，且对皮肤的具有较好的舒缓作用。

由上述实施例1-6相关的数据可知，只有在本发明权利要求范围内的方案，才能够在各方面均能满足上述要求，得出最优化的方案，得到最优的活性的抗腐败菌的活性成分。而对于配比的改动、原料的替换/加减，或者加料顺序的改变，均会带来相应的负面影响。

本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。