含重组蛋白的药物组合物的制备的制作方法

本发明涉及蛋白质领域，具体涉及一种含重组蛋白的药物组合物的制备方法及生产设备，尤其是含抗体或凝血多肽的组合物的制备方法及生产设备。

背景技术：

蛋白的不稳定性包括化学不稳定性和物理不稳定性。化学不稳定性包括形成或破坏共价键，产生新的化学实体。相反，物理不稳定性指的是化学成分并不发生改变，而蛋白的物理状态发生改变，例如变性、聚集、沉淀以及吸附作用等。其中蛋白质聚集已成为蛋白质稳定性领域中辩论度最高、研究范围最广的主题之一。

血液凝结现象包含涉及凝血因子的级联反应，凝血因子用从ⅰ至ⅹⅲ的数字表示，除了参与凝血反应最后一步的因子ⅹⅲ外，其他因子以与它们编号相反的顺序参与凝血，每种因子都以无活性的前体形式和用字母a表示的活化形式存在。血液凝结涉及两种途径：内源性途径和外源性途径。其中内源性途径包括血液循环中存在的因子，且凝血过程从血管内开始。外源性途径涉及的凝血因子并非全部存在于血液中，还涉及在血管损伤中释放的组织因子。外源性途径涉及因子ⅶ(fⅶ)的干预，活化的因子ⅶa是参与血凝机制的因子之一，具有约50kda的分子量。fⅶa能与组织因子结合，引发后续凝血因子的活化，产生凝血级联反应。即使在不存在因子ⅷ或ⅸ的情况下，fⅶa也能在局部发挥作用。

丹麦诺和诺德公司开发的novosevenrt为重组人凝血因子viia，在结构上类似于人血浆衍生的因子viia。其已获批用于a型/b型血友病患者、先天性vii因子缺乏患者及血小板功能不全患者的出血事件和围手术期管理，以及用于获得性血友病患者的出血事件和围手术期管理。

作为一种蛋白类药物，fⅶa在溶液态时，稳定性较差，容易在外界因素的作用下发生物理化学变化，影响药品的有效性和安全性。由诺和诺德公司开发和生产的novosevenrt是通过冷冻干燥的方式保持产品的长期稳定性。然而，在制剂生产时，在除菌过滤及灌装的过程中，管罐与料液接触的界面稳定性、气泡的产生与破碎、传输过程中的剪切力等，都可能造成蛋白的聚集，产生亚可见及可见的微粒，增加治疗过程中不良免疫原性反应的可能性。

以pd-1抑制剂nivolumab(纳武利尤抗体)为代表的igg4抗体药物在制剂生产时也存在类似的蛋白聚集的稳定性问题。这可能是因为igg4抗体在结构上区别于其他亚型的抗体，导致其在搅拌和高温条件下的聚集速率较快而且其在与不锈钢储液罐、eva等材质的储液袋接触时也会形成较多的亚可见微粒。

传统的车间生产配制过滤采用不锈钢管罐系统，将原液在不锈钢罐中混合，经压缩空气加压将原液经两级0.22μm孔径滤器除菌过滤压至不锈钢储液罐中，罐体之间使用不锈钢管道连接。除菌过滤后的料液储存在不锈钢罐中，采用压缩空气加压传输料液至不锈钢缓冲罐后，用蠕动泵进行灌装。采用这种系统，不锈钢管罐中的金属离子可能催化蛋白氧化，使蛋白变得不稳定；料液与管罐接触的固液界面作用也可能会导致蛋白质不稳定，产生聚集；而使用压缩空气加压会导致气泡的大量产生，气泡的产生与破碎会导致气液界面大大增加，气液界面作用同样可能会破坏蛋白结构导致蛋白聚集。使用该传统技术进行生产，一旦过滤后料液中蛋白发生聚集产生亚可见及可见的微粒，分装至西林瓶再进行冻干，会导致冻干后制剂成品中微粒增多。微粒注入人体，可能产生免疫原性反应，甚至堵塞血管，对使用者可能产生危害。

目前一次性过滤灌装系统被越来越多地用于生物药的生产中，该技术使用高分子聚合物材质的储液袋代替了不锈钢罐，用硅胶软管代替了不锈钢管道，使用蠕动泵传输料液代替了压缩空气。这种技术相对于传统技术，降低了不锈钢影响的风险，减少了气泡的产生。然而，针对某些稳定性较差，受疏水作用力影响较大的蛋白(例如fⅶa、igg4抗体)，与内表面疏水的储液袋接触仍然可能产生聚集，这样的料液直接灌装至西林瓶冻干，会导致成品可见微粒较多。

研究发现，fⅶa及igg4抗体的原液在经过除菌过滤后微粒很少，符合中国药典标准，但在经过不锈钢储液管罐(或储液袋)并灌装至西林瓶后，料液的微粒明显增多。急需一种新的制剂生产设备和工艺可以降低fⅶa及igg4抗体等稳定性较差的蛋白在灌装后的微粒含量，提高其质量及安全性。

重组蛋白的制剂生产中都是将灌装用蠕动泵与灌装针直接相连。我们尝试了在储液袋(4)与分液器(5)之间或者分液器(5)与灌装用蠕动泵(6)之间加装一个滤器，以实现在灌装之前的再次过滤，然而以上两种改进都没有根本地解决灌装后产品的可见微粒问题。

技术实现要素：

本发明的目的包括提供一种重组蛋白组合物的生产设备和制备方法。

一方面，本发明提供了一种重组蛋白组合物的生产设备。具体地，本发明是在一次性过滤灌装系统的基础上进行了改进：在分液器(5)后所连接的灌装用蠕动泵(6)之后分别加装一个后端滤器(7)，即每个灌装用蠕动泵(6)分别依次连接一个后端滤器(7)，一个灌装针头(8)。

在一些方案中，所述生产设备包括以下元件：原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵、和/或灌装针等。其中原液储液袋或原液冻融袋用于储存重组蛋白组合物的原液，其为高分子聚合物材质，蠕动泵用于提供过滤或灌装的动力，滤器用于过滤重组蛋白组合物的料液，中间储液袋是用于储存过滤后的重组蛋白组合物料液，分液器用于对重组蛋白组合物或重组蛋白药物进行分液，灌装针用于将重组蛋白组合物料液灌装于西林瓶中。

在一些具体实施方式中，所述各元件之间由管道连接，例如可以由硬材质的管道或软材质的管道连接，优选由硅胶软管连接。

在一些方案中，所述生产设备包括隔离器，所述隔离器的内部为一个无菌环境。

在一些方案中，所述生产设备包括相连通的元件，具体地，包括原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，2个或2个以上的前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或灌装针等。在一些方案中，所述原液储液袋或原液冻融袋依次与前端蠕动泵、2个前端滤器和中间储液袋连接，中间储液袋与之后的分液器连接，分液器再依次与灌装用蠕动泵和灌装针相连。在一些具体实施方案中，灌装针之后连接西林瓶，以实现蛋白质组合物料液的灌装。在一个具体实施方案中，分液器位于中间储液袋的下方，形成高度差，以实现利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中。在一些具体实施方案中，1个前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或灌装针位于隔离器中。

在一些方案中，所述生产设备包括相连通的元件，具体地，包括1个或多个原液储液袋或原液冻融袋，1个或多个前端蠕动泵，2个或多个前端滤器，1个或多个中间储液袋，1个或多个分液器，1个或多个灌装用蠕动泵，和/或，1个或1个以上的灌装针等。

在一些方案中，每一套生产设备至少由1个原液储液袋或原液冻融袋，1个前端蠕动泵，2个串联的前端滤器，1个中间储液袋，1个分液器，n个并联的灌装用蠕动泵构成，每个灌装用蠕动泵再分别连接一个灌装针。其中，n为1-24的整数，例如可以是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24。

在一些具体实施方式中，所述原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或灌装针每两个元件之间或两端还可以插入或增加其他元件，其中，增加的元件与原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，或灌装针之间通过管道和/或元件连通。管道可以是硬材质的管道或软材质的管道，优选硅胶软管。所述插入或增加的其他元件可以是滤器。

在一些方案中，原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或灌装针每两个元件之间，或其两端还可以增加或插入滤器，所述滤器与其两端的元件通过管道连接。管道可以是硬材质的管道或软材质的管道，优选硅胶软管。

在一些具体实施方案中，所述原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，串联的前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或，灌装针依次串联。在一些具体实施方式中，所述原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或，灌装针的每两个元件之间或两端还可以插入或增加其他元件，其中，增加的元件与原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，或灌装针之间通过管道或元件连通。在一些具体实施方式中，所述各元件之间由管道连接，例如可以由硬材质的管道或软材质的管道连接，优选由硅胶软管连接。在一些具体实施方式中，所述原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，和/或灌装针的每两个元件之间或两端还可以增加或插入滤器，所述滤器与其两端的元件通过管道连接。在一些具体实施方式中，灌装针将蛋白组合物灌注至西林瓶。在一些具体实施方案中，所述其中1个前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，灌装针和/或西林瓶位于一个隔离器中。

在一些方案中，每一套生产设备由1个原液储液袋或原液冻融袋，1个前端蠕动泵，2个串联的前端滤器，1个中间储液袋，1个分液器，1-12个灌装用蠕动泵，和/或，1-12个灌装针等元件连接构成。在一些具体实施方案中，所述原液储液袋或原液冻融袋，前端蠕动泵，2个前端滤器，中间储液袋，分液器依次串联，分液器与1-12个灌装用蠕动泵串联，且多个灌装用蠕动泵之间为并联，每个灌装用蠕动泵后依次串联1个后端滤器和1个灌装针。在一些具体实施方式中，所述各元件之间由管道连接，例如可以由硬材质的管道或软材质的管道连接，优选由硅胶软管连接。在一些具体实施方式中，灌装针将蛋白组合物灌注至西林瓶(9)。在一些具体实施方案中，所述其中1个前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，后端滤器，灌装针和/或西林瓶位于一个隔离器中。

在一些方案中，前端蠕动泵与储液袋之间的前端滤器孔径为0.1μm-1μm，在一些方案中，所述滤器孔径为0.1μm、0.22μm、0.45μm，在一个特定的方案中，所述滤器孔径为0.22μm。

在一些方案中，灌装用蠕动泵与灌装针头之间后端滤器孔径为0.1μm-1μm。在一些方案中，所述滤器孔径为0.1μm、0.22μm、0.45μm。在一个特定的方案中，所述滤器孔径为0.22μm。

在一些方案中，灌装用蠕动泵与灌装针头之间后端滤器为孔径组合滤器，其中每个孔径分别为0.1μm-1μm。在一些方案中，组合孔径的每个孔径分别为0.1μm、0.22μm、0.45μm，在一些具体的方案中，组合孔径的至少一个孔径为0.22μm。

在一些方案中，本发明提供了一种重组蛋白组合物的生产设备，所述生产设备包括一次性过滤灌装系统。在一些具体实施方式中，所述一次性过滤灌装系统包含一次性储液袋或者一次性冻融袋。在一些具体实施方式中，所述储液袋或冻融袋用于储存重组蛋白组合物，为高分子聚合物材质。在一些具体实施方式中，所述一次性过滤灌装系统包含连接各相邻元件的一次性管道，所述管道优选为硅胶软管。在一些方案中，所述一次性过滤灌装系统还包括完整制备重组蛋白组合物的所有其它必需元件和/或管道。

在一些方案中，所述重组蛋白选自凝血因子，优选重组人凝血因子，更优选重组人凝血因子viia，凝血因子viiia，或凝血因子ixa，最优选重组人凝血因子viia。

在一些方案中，所述重组蛋白为抗体，优选为igg抗体，更优选为igg4抗体，最优选为纳武利尤单抗。

在一些方案中，本发明提供了一种重组蛋白组合物的生产设备，其包括以下元件：1个储存重组蛋白组合物原液的储液袋或冻融袋(1)，所述储液袋或冻融袋依次与1个前端蠕动泵(2)，2个串联的孔径0.22μm的前端滤器((3)和(3’))，1个中间储液袋(4)，1个分液器(5)，6个灌装用蠕动泵(6)，6个孔径0.22μm的后端滤器(7)，6个灌装针(8)，6个西林瓶(9)连接。其中所述1个前端滤器，中间储液袋，分液器，6个灌装用蠕动泵，6个后端滤器，6个西林瓶位于一个隔离器(10)内。

在一个方面，本发明提供一种重组蛋白组合物的制备方法。在另一个方面，本发明提供一种重组蛋白组合物或重组蛋白药物的灌装方法。在一些方案中，本发明是在一次性过滤灌装制备方法的基础上进行了改进。

在一个方面，本发明提供制备，灌装，包装，和/或生产重组蛋白组合物的方法。在一些方案中，所述方法包括灌装重组蛋白组合物。在一些具体实施方式中，所述灌装重组蛋白组合物包括：i)使用滤器过滤重组蛋白组合物，ii)使用灌装针将所述组合物灌装入西林瓶。在一些具体实施方式中，所述滤器为后端滤器，其直接与灌装针通过管道连接。在一些具体实施方式中，利用本发明的设备进行重组蛋白组合物的制备。在一些具体实施方式中，所述重组蛋白选自凝血因子或igg4抗体，优选为重组人凝血因子viia或纳武利尤单抗。

在一些方案中，本发明提供重组蛋白组合物的制备方法，所述方法包括在灌装前过滤重组蛋白组合物。在一些具体实施方案中，所述方案包括使用分液器对重组蛋白组合物或重组蛋白药物进行分液。其中，分液器后所连接的每个灌装用蠕动泵之后分别连接一个后端滤器，使灌装用蠕动泵分别依次连接一个滤器、一个灌装针头和一个西林瓶。

在一些方案中，本发明提供的重组蛋白组合物制备方法包括以下步骤：1.将装于储液袋或冻融袋(1)的重组蛋白组合物原液，使用前端蠕动泵(2)提供过滤动力，经2个前端滤器((3)和(3’))二级过滤至隔离器中的中间储液袋中(4)；2.将分液器(5)置于中间储液袋(4)的下方，形成高度差，利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中。分液器中重组蛋白组合物料液依次经过灌装用蠕动泵(6)、后端滤器(7)及灌装针头(8)，进入西林瓶(9)中。其中，所述其中1个前端滤器，中间储液袋，分液器，灌装用蠕动泵，后端滤器，灌装针和/或西林瓶位于一个隔离器(10)中。

在一些具体实施方案中，所述分液器后所连接的灌装用蠕动泵和/或灌装针的数量为n，n为1-24的整数，例如可以是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24。在一些具体实施方案中，所述n个灌装用蠕动泵和/或灌装针之间为并联。在一些具体实施方案中，n为1-12的整数，例如可以是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12。在一个特定实施方案中，n＝6。

在一些方案中，前端蠕动泵与储液袋之间的前端滤器孔径为0.1μm-1μm，在一些方案中，该前端滤器孔径为0.1μm、0.22μm、0.45μm，在一个特定的方案中，该前端滤器孔径为0.22μm。

在一些方案中，灌装用蠕动泵与灌装针头之间后端滤器孔径为0.1μm-1μm。在一些方案中，所述滤器孔径为0.1μm、0.22μm、0.45μm。在一个特定的方案中，所述滤器孔径为0.22μm。

在一些方案中，灌装用蠕动泵与灌装针头之间后端滤器为孔径组合滤器，其中每个孔径分别为0.1μm-1μm。在一些方案中，组合孔径的每个孔径分别为0.1μm、0.22μm、0.45μm，在一些具体的方案中，组合孔径的至少一个孔径为0.22μm。

在一些方案中，所述重组蛋白选自凝血因子，优选重组人凝血因子，更优选重组人凝血因子viia，凝血因子viiia，或凝血因子ixa，最优选重组人凝血因子viia。

在一些方案中，所述重组蛋白为抗体，优选为igg抗体，更优选为igg4抗体，最优选为纳武利尤单抗。

本发明提供了一种含重组人凝血因子ⅶa或igg4抗体的组合物的生产设备，其包括以下元件：

1.储存含重组人凝血因子ⅶa的组合物原液的储液袋或含igg4抗体的组合物原液的冻融袋，所述储液袋或冻融袋依次与蠕动泵(可称为前端蠕动泵)、两个串联的孔径0.22μm的滤器(称为前端滤器)和位于隔离器内的中间储液袋连接，各个元件之间分别使用硅胶软管连接。

2.一个分液器通过硅胶软管连接于中间储液袋的下方，形成高度差，以实现利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中。

3.在分液器后通过硅胶软管连接六个灌装用蠕动泵，然后每个蠕动泵分别连接一个孔径0.22μm的滤器、一个灌装针头，在灌装针头后设置一个西林瓶，这样分液器中料液可以依次经过蠕动泵、滤器及灌装针头，进入西林瓶中。

本发明提供了一种含重组人凝血因子ⅶa组合物的生产设备，其包括以下元件：

1.储存含重组人凝血因子ⅶa的组合物原液的储液袋，所述储液袋依次与蠕动泵(可称为前端蠕动泵)、两个串联的孔径0.22μm的滤器(称为前端滤器)和位于隔离器内的中间储液袋连接，各个元件之间分别使用硅胶软管连接。

2.一个分液器通过硅胶软管连接于中间储液袋的下方，形成高度差，以实现利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中。

3.在分液器后通过硅胶软管连接六个灌装用蠕动泵，然后每个蠕动泵分别连接一个孔径0.22μm的滤器、一个灌装针头，在灌装针头后设置一个西林瓶，这样分液器中料液可以依次经过蠕动泵、滤器及灌装针头，进入西林瓶中。

本发明提供了一种含igg4抗体的组合物的生产设备，其包括以下元件：

1.储存含igg4抗体的组合物原液的冻融袋，所述冻融袋依次与蠕动泵(可称为前端蠕动泵)、两个串联的孔径0.22μm的滤器(称为前端滤器)和位于隔离器内的中间储液袋连接，各个元件之间分别使用硅胶软管连接。

2.一个分液器通过硅胶软管连接于中间储液袋的下方，形成高度差，以实现利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中。

3.在分液器后通过硅胶软管连接六个灌装用蠕动泵，然后每个蠕动泵分别连接一个孔径0.22μm的滤器、一个灌装针头，在灌装针头后设置一个西林瓶，这样分液器中料液可以依次经过蠕动泵、滤器及灌装针头，进入西林瓶中。

本发明提供了一种含重组人凝血因子ⅶa或igg4抗体的组合物的制备方法，其包括以下步骤：

1.将装于储液袋的重组人凝血因子ⅶa组合物原液或装于冻融袋的igg4抗体组合物原液，使用蠕动泵(可称为前端蠕动泵)提供过滤动力，经两个串联的孔径0.22μm的滤器二级过滤至位于隔离器内的中间储液袋中，各元件之间使用硅胶软管连接。

2.将分液器置于中间储液袋的下方，形成高度差，利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中，各元件使用硅胶软管连接。

3.在分液器后使用硅胶软管连接六个灌装用蠕动泵，然后每个蠕动泵依次连接一个孔径0.22μm的滤器、一个灌装针头和一个西林瓶，分液器中料液依次经过蠕动泵、滤器及灌装针头，进入西林瓶中。

本发明提供了一种含重组人凝血因子ⅶa的组合物的制备方法，其包括以下步骤：

1.将装于储液袋的重组人凝血因子ⅶa组合物原液，使用蠕动泵(可称为前端蠕动泵)提供过滤动力，经两个串联的孔径0.22μm的滤器二级过滤至位于隔离器内的中间储液袋中，各元件之间使用硅胶软管连接。

2.将分液器置于中间储液袋的下方，形成高度差，利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中，各元件使用硅胶软管连接。

3.在分液器后使用硅胶软管连接六个灌装用蠕动泵，然后每个蠕动泵依次连接一个孔径0.22μm的滤器、一个灌装针头和一个西林瓶，分液器中料液依次经过蠕动泵、滤器及灌装针头，进入西林瓶中。

本发明提供了一种含igg4抗体的组合物的制备方法，其包括以下步骤：

1.将装于冻融袋的igg4抗体组合物原液，使用蠕动泵(可称为前端蠕动泵)提供过滤动力，经两个串联的孔径0.22μm的滤器二级过滤至位于隔离器内的中间储液袋中，各元件之间使用硅胶软管连接。

2.将分液器置于中间储液袋的下方，形成高度差，利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中，各元件使用硅胶软管连接。

3.在分液器后使用硅胶软管连接六个灌装用蠕动泵，然后每个蠕动泵依次连接一个孔径0.22μm的滤器、一个灌装针头和一个西林瓶，分液器中料液依次经过蠕动泵、滤器及灌装针头，进入西林瓶中。

本发明解决了使用传统不锈钢管罐系统或者一次性过滤灌装系统时所灌装出的重组蛋白组合物料液可能存在可见微粒的问题。我们吃惊地发现采用本发明的生产设备和制备方法取得了预料不到的技术效果。具体地，在使用传统不锈钢管罐系统时，灌装出的产品有大量可见微粒，使用一次性过滤灌装系统灌装出的产品也有少量或非常少量可见微粒，而使用本发明的方法和设备灌装出的产品则无可见微粒，满足中国药典的要求。

除非另有说明，为本申请的目的，本说明书和权利要求书中所用的下列术语应具有下述含义。

“重组蛋白”：是指应用了重组dna技术或者重组rna技术从而获得的蛋白质。

“凝血因子”：是指参与血液凝固过程的各种蛋白质组分，包括凝血因子i,ii,iii,iv,v,vii,viii,ix,x,xi,xii,xiii。

“重组人凝血因子”：是以重组dna技术生产的人凝血因子。

“抗体”：以其最广义使用，特别涵盖完整的单克隆抗体、多克隆抗体、至少由两种完整抗体所形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、以及抗体片段，只要它们具有所需的生物学活性。

igg抗体：根据重链的不同，ig分为igg、iga、igm、igd和ige五类，其中igg抗体是指重链为γ链的ig。其中igg又分为igg1-igg4四个亚类。

单抗：又称单克隆抗体，是指抗单一抗原表位的特异性抗体。

附图说明

图1为本发明的生产设备的示意图。

具体实施方式

实施例1

使用不锈钢管罐系统制备重组人凝血因子ⅶa的组合物，包括：

(1)将装于储液袋的10l重组人凝血因子ⅶa原液，使用不锈钢管罐系统，用压缩空气提供动力，经2个孔径0.22μm滤器过滤至不锈钢储液罐，并传输至隔离器中的缓冲罐中。

(2)缓冲罐中料液在重力作用下传输至分液器中。

(3)分液器连接6个蠕动泵，开启蠕动泵，料液经过蠕动泵及灌装针头，进入西林瓶中，按1mg/瓶进行灌装。灌装期间检查装量，装量波动范围为±2％。

(4)将西林瓶加塞，传输至冷冻干燥机中进行冻干，冻干结束后轧盖出箱，目检，包装得到成品。

(5)取5瓶制剂成品，分别将1ml重组人凝血因子ⅶa专用溶剂缓慢注入西林瓶中，缓慢旋转使完全溶解，按《中国药典》(2015年版)通则0904可见异物检查法的灯检法进行可见异物检查。

灯检法具体操作：取规定量供试品，除去容器标签，擦净容器外壁，将供试品置遮光板边缘处，在明视距离(指供试品至人眼的清晰观测距离，通常为25cm)，手持容器颈部，轻轻旋转和翻转容器(但应避免产生气泡)，使药液中可能存在的可见异物悬浮，分别在黑色和白色背景下目视检查，重复观察，总检查时限为20秒。供试品溶液中有大量气泡产生影响观察时，需静置足够时间至气泡消失后检查。对于注射液，除另有规定外，取供试品20支(瓶)，按上述方法检查。对于注射用无菌制剂，除另外规定外，取供试品5支(瓶)，用适宜的溶剂和适当的方法使药粉完全溶解后，按上述方法检查。

结果判定：根据可见微粒的污染情况，对测试的制剂进行了半定量分类：

a＝无可见微粒

b＝非常少量可见微粒(每支(瓶)中微细可见异物小于等于3个)

c＝少量可见微粒(每支(瓶)中微细可见异物大于3个且小于等于10个)

d＝大量可见微粒(每支(瓶)中微细可见异物大于10个且小于等于50个)

e＝非常大量可见微粒(每支(瓶)中微细可见异物大于50个)

注：微细可见异物是指点状物、2mm以下的短纤维和块状物等，或者生物制品中的半透明的小于约1mm的细小重组蛋白絮状物或重组蛋白颗粒等

5瓶重构后成品微粒情况均为d级，有大量可见微粒，不符合《中国药典》(2015年版)的要求。

实施例2

使用一次性过滤灌装系统制备重组人凝血因子ⅶa的组合物，包括：

(1)将装于储液袋的10l重组人凝血因子ⅶa原液，使用蠕动泵提供动力，经2个孔径0.22μm滤器过滤至置于隔离器内的20l中间储液袋中，中间使用硅胶软管连接。

(2)隔离器内储液袋与分液器之间使用硅胶软管相连，储液袋中料液在重力作用下传输至分液器中。

(3)分液器连接6个蠕动泵，开启蠕动泵，料液经过蠕动泵及灌装针头，进入西林瓶中，按1mg/瓶进行灌装。灌装期间检查装量，装量波动范围为±2％。

(4)将西林瓶加塞，传输至冷冻干燥机中进行冻干，冻干结束后轧盖出箱，目检，包装得到成品。

(5)取5瓶制剂成品，分别将1ml重组人凝血因子ⅶa专用溶剂缓慢注入西林瓶中，缓慢旋转使完全溶解，按《中国药典》(2015年版)通则0904可见异物检查法的灯检法进行可见异物检查。

5瓶重构后成品微粒情况均为c级，有少量可见微粒，不符合《中国药典》(2015年版)的要求。

实施例3

使用本发明方案制备重组人凝血因子ⅶa的组合物，包括：

(1)将装于储液袋的10l重组人凝血因子ⅶa原液，使用蠕动泵提供过滤动力，经2个孔径0.22μm滤器二级过滤至置于隔离器中的20l中间储液袋中，中间使用硅胶软管连接。

(2)将分液器置于中间储液袋的下方，形成高度差，利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中，中间使用硅胶软管连接。

(3)在分液器后使用硅胶软管连接六个灌装用蠕动泵，然后每个蠕动泵依次连接一个孔径0.22μm的滤器、一个灌装针头和一个西林瓶，分液器中料液依次经过蠕动泵、滤器及灌装针头，进入西林瓶中。按1mg/瓶进行灌装。灌装期间检查装量，装量波动范围为±2％。

(4)将各个西林瓶加塞，传输至冷冻干燥机中进行冻干，冻干结束后轧盖出箱，目检，包装得到成品。

(5)取5瓶制剂成品，分别将1ml重组人凝血因子ⅶa专用溶剂缓慢注入西林瓶中，缓慢旋转使完全溶解，按《中国药典》(2015年版)通则0904可见异物检查法的灯检法进行可见异物检查。

5瓶重构后成品微粒情况均为a级，无可见微粒，符合《中国药典》(2015年版)的要求。

实施例4

使用以下生产设备制备重组人凝血因子ⅶa的组合物

在实施例2所述的一次性过滤灌装系统的基础上进行改造，即在中间储液袋与分液器之间或者在分液器与灌装用蠕动泵之间加装一个滤器。

使用该设备过滤灌装重组人凝血因子ⅶa的组合物，同样按1mg/瓶进行灌装，进入西林瓶。灌装期间检查装量，装量波动范围为±2％。然后进行之后的加塞，冻干，可见异物检查等步骤。

结果发现用此两种设备灌装得到的组合物含有少量可见微粒，无法达到《中国药典》(2015年版)的要求。

实施例5

使用不锈钢管罐系统制备纳武利尤抗体的组合物，包括：

(1)将装于冻融袋的10l纳武利尤抗体原液，使用不锈钢管罐系统，用压缩空气提供动力，经2个孔径0.22μm滤器过滤至不锈钢储液罐，并传输至隔离器缓冲罐中。

(2)缓冲罐中料液在重力作用下传输至分液器中。

(3)分液器连接6个蠕动泵，开启蠕动泵，料液经过蠕动泵及灌装针头，进入西林瓶中，按4ml/瓶进行灌装。灌装期间检查装量，装量波动范围为±2％。

(4)将西林瓶加塞、轧盖、目检、包装得到成品。

(5)取20瓶制剂成品，按《中国药典》(2015年版)通则0904可见异物检查法的灯检法进行可见异物检查。

20瓶制剂成品微粒情况均为d级，有大量可见微粒，不符合《中国药典》(2015年版)的要求。

实施例6

使用一次性过滤灌装系统制备纳武利尤抗体的组合物，包括：

(1)装于冻融袋的10l纳武利尤抗体原液，使用蠕动泵提供动力，经2个孔径0.22μm滤器过滤至置于隔离器内的20l中间储液袋中，中间使用硅胶软管连接。

(2)隔离器内中间储液袋与分液器之间使用硅胶软管相连，储液袋中料液在重力作用下传输至分液器中。

(3)分液器连接6个蠕动泵，开启蠕动泵，料液经过蠕动泵及灌装针头，进入西林瓶中，按4ml/瓶进行灌装。灌装期间检查装量，装量波动范围为±2％。

(4)将西林瓶加塞、轧盖、目检、包装得到成品。

(5)取20瓶制剂成品，按《中国药典》(2015年版)通则0904可见异物检查法的灯检法进行可见异物检查。

20瓶制剂成品微粒情况均为b级，有非常少量可见微粒，符合《中国药典》(2015年版)的要求。

实施例7

使用本发明方案制备纳武利尤抗体的组合物，包括：

(1)将装于冻融袋的10l纳武利尤抗体原液，使用蠕动泵提供过滤动力，经2个孔径0.22μm滤器二级过滤至置于隔离器中的20l中间储液袋中，中间使用硅胶软管连接。

(2)将分液器置于中间储液袋的下方，形成高度差，利用重力作用将储液袋中的料液传输至分液器中，中间使用硅胶软管连接。

(3)在分液器后使用硅胶软管连接六个灌装用蠕动泵，然后每个蠕动泵依次连接一个孔径0.22μm的滤器、一个灌装针头和一个西林瓶，分液器中料液依次经过蠕动泵、滤器及灌装针头，进入西林瓶中。按4ml/瓶进行灌装。灌装期间检查装量，装量波动范围为±2％。

(4)将西林瓶加塞、轧盖、目检、包装得到成品。

(5)取20瓶制剂成品，按《中国药典》(2015年版)通则0904可见异物检查法的灯检法进行可见异物检查。

20瓶制剂成品微粒情况均为a级，无可见微粒，符合《中国药典》(2015年版)的要求。

根据本发明所公开的内容，虽然根据优选实施方案对本发明的组合物和方法进行了描述，但对本领域技术人员而言，在不背离本发明的概念、精神和范围的情况下，可对在此所述的组合物和/或方法以及所述方法的步骤或步骤的顺序进行改变。

本文所引用的所有文献的公开内容通过引用结合于此，引用程度为，他们提供示例性的、程序上和其他的细节补充本文所述内容。